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1 ISSN Japanese Society for Laboratory Animal Resources No. 31 JAN Tel Fax 研 究 最 前 線 ノックアウトマウスを 用 いた 転 写 因 子 の 生 理 機 能 解 析 疾 患 モデル 動 物 開 発 エピソード13 ポリオウイルスレセプタートランスジェニックマウス 実 験 動 物 技 術 者 認 定 制 度 はどう 変 わるの? Q&A

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3 絵 山 本 容 子 画 家 犬 を 中 心 とした 作 品 づくりで 40 年 近 くな る 犬 を 擬 人 化 した 作 品 で 国 内 国 外 に 多 くのファンをもつ 1981 年 より( 社 )ジャパンケンネルクラブ 会 報 家 庭 犬 の 表 紙 画 を 担 当 1986 年 アメリカンドッグアソシエーション 特 別 賞 を 受 賞 1992 年 農 林 水 産 大 臣 賞 を 受 賞 年 以 後 東 京 大 阪 を 中 心 に 個 展 展 示 会 を 開 催 目 次 ノーベル 賞 とノックアウトマウス 4 研 究 最 前 線 ノックアウトマウスを 用 いた 転 写 因 子 の 生 理 機 能 解 析 6 疾 患 モデル 動 物 開 発 エピソード 13 ポリオウイルスレセプタートランスジェニックマウス 10 トピックス メタボリックシンドロームと 脂 肪 肝 に 対 する 考 えかた 14 シリーズ 連 載 1 動 物 塚 考 動 物 の 墓 と 慰 霊 碑 18 海 外 散 歩 イギリス MRC Harwell Mammalian Genetics Unit 訪 問 記 23 トピックス わが 国 のマウス ラット 動 物 実 験 施 設 の 微 生 物 汚 染 の 現 状 ~ 2006 年 のマウスとラットの 微 生 物 モニタリングにおける 陽 性 率 特 に SPF と SPF 以 外 との 比 較 29 ラボテック 実 験 動 物 としてのシバヤギ 32 実 験 動 物 技 術 者 認 定 制 度 はどう 変 わるの? Q&A 36 実 験 動 物 技 術 者 受 験 資 格 特 例 認 定 校 一 覧 39 平 成 19 年 度 の 実 験 動 物 指 技 術 導 員 の 認 定 40 海 外 技 術 情 報 41 学 会 の 動 き 43 技 術 者 協 会 の 動 き 43 ほんのひとりごと 44 平 成 19 年 度 実 験 動 物 技 術 者 資 格 認 定 試 験 結 果 45 協 会 だより 45 KAZE 46 Experimental Animals Covance R. P, Inc 代 理 店 Japan Laboratory Animals, Inc. 取 扱 品 目 各 種 実 験 動 物 の 受 託 飼 育 非 GLP の 受 託 試 験 SPF クリーン 各 種 実 験 動 物 動 物 用 医 薬 品 一 般 販 売 輸 入 動 物 (Covance Harlan Vanny):ビーグル 犬 モングレル 犬 サル 類 遺 伝 子 操 作 マウス etc. その 他 実 験 動 物 獣 血 液 血 清 臓 器 床 敷 飼 料 飼 育 器 具 器 材 株 式 会 社 日 本 医 科 学 動 物 資 材 研 究 所 東 京 都 練 馬 区 春 日 町 6 丁 目 10 番 40 号 TEL(03) FAX(03) LABIO 21 JAN

4 Nobel prize ノーベル 賞 とノックアウトマウス 熊 本 大 学 発 生 医 学 研 究 センター 教 授 山 村 研 一 少 し 遅 すぎる 感 があったが 2007 年 度 のノーベル 医 学 生 理 学 賞 がノックアウトマウス 関 連 技 術 を 開 発 した 英 国 のMartin Evans 博 士 米 国 のOliver Smithies 博 士 とMario Capecchi 博 士 の3 氏 に 贈 られた 実 際 に 相 同 組 換 え 法 によって 始 めてノックアウトマウ スが 作 製 されたのは 1989 年 で あるが その 後 有 用 性 は 実 証 され 続 けており 2000 年 程 度 には 受 賞 してもおかしくない 状 況 であっ た 噂 では 候 補 者 が 多 すぎたため といわれているが ふたを 開 けて みれば 下 馬 評 通 り3 人 が 受 賞 者 になった Martin Evans 博 士 は 胚 盤 胞 からES 細 胞 の 樹 立 に 成 功 した 人 で 1981 年 7 月 にNatureに 論 文 が 発 表 されている Evans 博 士 に は 一 度 お 会 いしているが いか にも 英 国 の 名 門 ケンブリッジ 大 学 の 教 授 という 風 格 で 大 学 の 歴 史 を 感 じさせる 雰 囲 気 が 濃 厚 に 漂 っていた ES 細 胞 の 樹 立 に 至 る 歴 史 的 経 緯 を 説 明 すると その 端 緒 となる 成 果 は 1974 年 の 米 国 のBrinster 博 士 らによる 奇 形 癌 腫 由 来 のEC 細 胞 を 用 いたキメ ラマウス 作 製 に 遡 ることができ る 1975 年 にMintz 博 士 が 再 試 に 成 功 したが 生 殖 細 胞 には 伝 わらず またEC 細 胞 が 途 絶 え たということもあり EC 細 胞 を 用 いての 変 異 マウス 作 製 は 夢 と 終 わった Evans 博 士 らと 同 年 の 1981 年 12 月 に 米 国 のGail Martin 博 士 もPro. Natl. Acad. Sci. USA にES 細 胞 の 樹 立 の 論 文 を 発 表 して いる 興 味 深 いのは ES 細 胞 の 命 名 である 当 初 開 発 者 のEvansと Kaufmanの 頭 文 字 をとってEK 細 胞 と 命 名 していたが MartinらはES 細 胞 (embryonic stem cell) と 名 付 け 結 局 これが 生 き 残 った Martin 博 士 が 受 賞 者 の 一 人 とし て 名 を 連 ねることができなかった が ESの 名 前 が 残 ることで 一 矢 を 報 いたということであろうか Oliver Smithies 博 士 は 体 細 胞 で 相 同 組 み 換 えを 行 うことに 最 初 に 成 功 した 人 で 論 文 は1985 年 9 月 にNatureに 発 表 されてい る 技 術 開 発 が 得 意 な 人 で 実 は デンプンゲル 電 気 泳 動 法 を 発 明 し た 人 でもある 奥 様 が 日 本 人 で 研 究 者 でもあるので 夫 婦 とも 熊 本 でのシンポジムに 招 待 し 来 ていた だいたこともあるが 非 常 に 気 さ くな 人 で 政 治 の 世 界 とは 無 縁 な 実 験 が 大 好 きな 純 然 たる 研 究 者 である Mario Capecchi 博 士 は ES 細 胞 を 用 いた 相 同 組 換 え 法 なかで も1988 年 11 月 にNatureに 発 表 さ れたpositive-negative selection 法 の 開 発 者 として 有 名 である すで に1980 年 ごろから 相 同 組 み 換 え の 研 究 を 始 め その11 月 にCell にDNAの 顕 微 注 入 で 細 胞 をトラ ンスフォームできるという 論 文 を 発 表 している しかし 研 究 費 の 申 請 をしても 不 可 能 だからという 理 由 で 採 択 してもらえなかったと いう それでも 信 念 を 曲 げず 研 究 を 続 けついに 成 功 した 時 審 査 員 から 我 々の 忠 告 を 聞 かなくて よかったですねというコメントを 4 LABIO 21 JAN. 2008

5 Knockout Mouse もらったという 外 貌 は 一 見 難 し く 見 える 人 であるが 内 実 はそう ではなく 非 常 に 親 切 で 人 格 的 にも 優 れた 人 である ユタ 大 学 の 研 究 室 に 尋 ねたときのES 細 胞 に 相 同 組 み 換 えベクターを 導 入 する ときの 電 気 穿 孔 のスイッチは 自 分 で 入 れるという 話 は 今 でも 覚 えて いる 普 通 だと 馬 鹿 にしがちだが 私 にも 経 験 があるからである マ ウス 受 精 卵 の 前 核 にDNA 溶 液 を 顕 微 注 入 するとき ゲノム 中 に 組 み 込 まれろという 気 合 いという か 念 力 というか そうすると 不 思 議 に 効 率 が 上 がることを 経 験 し たからである 最 後 に 相 同 組 換 えに 関 する 特 許 の 話 を 紹 介 したい 意 外 なこと に 相 同 組 み 換 えの 基 本 特 許 を 持 っているのは Le Mouellie 博 士 とBrulet 博 士 が 発 明 者 と 名 を 連 ねるフランスのパスツール 研 究 所 であり そこからのベンチャー 企 業 であるセレクティス 社 が 実 施 権 を 持 っている ヨーロッパ 米 国 日 本 で 特 許 が 成 立 している Capecchi 博 士 の 特 許 は positivenegative selection 法 だけであり 米 国 だけで 成 立 している 相 同 組 換 え 法 を 用 いている 限 り ノック アウトマウスの 受 託 生 産 であれそ れを 用 いての 創 薬 であれ 民 間 企 業 は 特 許 を 侵 害 していることにな る なお 日 本 で 唯 一 ライセンス を 受 けているのは トランスジェ ニック 社 である LABIO 21 JAN

6 研 究 最 前 線 ノックアウトマウスを 用 いた 転 写 因 子 の 生 理 機 能 解 析 理 化 学 研 究 所 筑 波 研 究 所 石 井 分 子 遺 伝 学 研 究 室 主 任 研 究 員 石 井 俊 輔 はじめに 私 達 は 発 生 分 化 や 多 くの 疾 患 のメカニズムを 明 らかにするた めに 遺 伝 子 の 発 現 制 御 の 理 解 が 最 も 重 要 なステップの 一 つであろ うと 考 え 転 写 制 御 因 子 について 解 析 している この 研 究 分 野 にお いても 転 写 因 子 の 生 理 機 能 を 理 解 するために 遺 伝 子 ノックアウ トマウスの 手 法 は 不 可 欠 なものと なっている 本 稿 では 私 達 のノ ックアウトマウスの 作 成 解 析 に よって 明 らかとなってきた 転 写 因 子 の 生 理 機 能 の 一 端 をご 紹 介 し たい ATF-2 の 生 理 機 能 ATF-2は 私 達 が 同 定 した 転 写 因 子 であり( 文 献 1) p38/jnk などのストレス 応 答 性 キナーゼに よって リン 酸 化 され 活 性 化 さ れる DNA 結 合 ドメインをコー ドするエキソンをneoによって 置 換 することによって ATF-2の null 変 異 体 を 作 製 した 私 達 の 作 製 した null 変 異 マウスはすべて 出 生 直 後 に 呼 吸 不 全 のため 死 亡 し た( 図 1 左 上 )( 文 献 2) 肺 には 胎 便 がつまっており こ のマウスはヒトの 胎 便 吸 引 症 候 群 (MAS: Meconium Aspiration Syndrome) の マ ウ ス モ デ ル と なることが 示 された( 図 1 左 下 右 ) 解 析 の 結 果 胎 盤 の Trophoblast 細 胞 層 の 発 達 が 未 熟 なためガス 交 換 が 不 十 分 となり 胎 児 が 低 酸 素 状 態 になり 早 期 に 呼 吸 を 開 始 してしまうことが 図 1.ATF-2 変 異 マウスの 胎 便 吸 引 症 候 群 様 の 症 状 6 LABIO 21 JAN. 2008

7 図 2.ATF-2へテロ 変 異 マウスにおける 乳 がんの 発 症 示 さ れ た 実 際 に ATF-2 null の 胎 仔 では 低 酸 素 で 誘 導 される いくつかの 遺 伝 子 の 発 現 が 上 昇 していた さらにATF-2 null 変 異 マウスにおいて 発 現 が 低 下 し ている 遺 伝 子 をスクリーニング した 結 果 PDGF 受 容 体 遺 伝 子 の 発 現 が 低 下 していた そして PDGF 受 容 体 遺 伝 子 のプロモー ター 領 域 にはATF-2が 直 接 結 合 し 転 写 を 活 性 化 することが 示 さ れた このように 変 異 マウス ではATF-2の 標 的 遺 伝 子 である PDGF 受 容 体 の 発 現 が 低 下 するた め PDGFによって 増 殖 が 維 持 さ れるTrophoblast 細 胞 の 増 殖 が 阻 害 されることが 明 らかにされた このようにATF-2 変 異 マウスの 解 析 により 胎 便 吸 引 症 候 群 のメ カニズムの 一 端 が 分 かってきた 一 方 ATF-2ヘテロ 変 異 マウ スは 一 見 正 常 で 長 期 飼 育 が 可 能 であるが 生 後 1 年 を 経 過 した 頃 から 高 頻 度 に 乳 がんを 発 症 す ることを 見 出 した( 図 2)( 文 献 3 ) また がん 抑 制 遺 伝 子 p53のヘ テロ 変 異 体 と 組 み 合 わせると よ り 早 期 に 乳 がんを 発 症 することも 示 された( 文 献 4) ATF-2 欠 損 細 胞 を 用 いた 解 析 の 結 果 低 酸 素 ストレスで 発 現 が 誘 導 される Gadd45αなどの 一 群 の 遺 伝 子 と ヒト 乳 がんの 抑 制 因 子 として 同 定 されていたMaspinが ATF-2 標 的 遺 伝 子 として 同 定 された これ らの 標 的 遺 伝 子 産 物 は アポトー シス 誘 導 に 関 与 することが 知 られ ている 正 常 細 胞 とATF-2ノッ クアウト 細 胞 の 増 殖 を 比 較 する と 正 常 細 胞 では 増 殖 が 飽 和 状 態 に 達 すると Maspiの 発 現 が 誘 導 され 増 殖 が 停 止 するのに 対 し ノックアウト 細 胞 では Maspiの 発 現 が 誘 導 されず 細 胞 密 度 が 高 くなることが 示 された このよ うに ATF-2の 発 現 レベルが 低 下 すると Maspinの 発 現 が 低 下 し 細 胞 増 殖 が 亢 進 する 結 果 細 胞 ががん 化 する さらに 乳 がんの ような 固 形 がん 組 織 は 低 酸 素 状 態 になることが 知 られているが ATF-2レベルが 低 いと Gadd45 αのようなアポトーシス 誘 導 因 子 が 誘 導 されず アポトーシスによ るがん 細 胞 の 除 去 機 構 が 働 かず 乳 がん 発 症 に 至 ると 考 えられた また 種 々のヒト 乳 がん 組 織 でも ATF-2 発 現 レベルが 低 下 してい ることが 明 らかにされた このよ うに ATF-2が 有 力 な 乳 がん 抑 制 因 子 であることが 初 めて 示 さ れた LABIO 21 JAN

8 研 究 最 前 線 図 3.Shn-2 変 異 マウスにおけるT 細 胞 分 化 の 異 常 Shn-2 の 生 理 機 能 Schnurri (Shn) ファミリー 転 写 因 子 は 私 達 を 含 む 複 数 のグルー プによって 同 定 された 転 写 因 子 で あり 2セットのメタルフィン ガー 構 造 を 含 む 約 300 kdaの 大 き なタンパク 質 である( 文 献 5) 動 物 のShnファミリーは1 3の 3つのメンバーを 含 むが Shn-2 の 生 理 機 能 を 明 らかにするた め 変 異 マウスを 作 製 し 解 析 し た Shn-2 変 異 マウスでは Singlepositive (SP) T 細 胞 が 顕 著 に 減 少 し て お り Double-positive (DP) からSP 細 胞 への 分 化 段 階 に 異 常 があった( 図 3)( 文 献 6) この 段 階 では 自 己 のMHCに 拘 束 されたT 細 胞 受 容 体 を 発 現 するT 細 胞 のみが 成 熟 するいわ ゆるPositive selectionと 共 に 自 己 を 攻 撃 する 可 能 性 のあるT 細 胞 を 除 去 する Negative selection が 起 きる 一 連 の 解 析 から Shn-2 変 異 マ ウ ス で はPositive selectionが 異 常 であることが 分 かった ショウジョウバエ Shn は TGF- β/bmp/activine の ホ モログ dpp のシグナル 伝 達 経 路 の 下 流 で 機 能 する 動 物 細 胞 に おける TGF- β/bmp/activine シ グナル 経 路 では 転 写 因 子 Smad が 重 要 な 役 割 を 果 すが Shnは Smadと 直 接 結 合 することが 示 さ れた これらの 結 果 と 一 緒 に 考 えると 私 達 の 結 果 は T 細 胞 の 分 化 にTGF-β/BMP/activineシ グナルが 関 与 することを 示 唆 し ている また Shn-2 変 異 マウスには 白 色 脂 肪 組 織 の 形 成 不 全 が 観 察 さ れ た( 図 4)( 文 献 7) MEFs (Mouse Embryonic Fibrobalsts) を 試 験 管 内 で 脂 肪 細 胞 に 分 化 させ る 系 においても Shn-2 変 異 細 胞 は 脂 肪 細 胞 への 分 化 効 率 が 低 い ことが 認 められた 特 にBMP 依 存 的 な 脂 肪 細 胞 分 化 が 低 下 して いた アレイ 解 析 の 結 果 Shn-2 変 異 細 胞 ではPPARγ2 遺 伝 子 の 発 現 が 顕 著 に 低 下 していた PPARγ2は 脂 肪 細 胞 分 化 を 制 御 する 鍵 として 有 名 な 転 写 因 子 であ り Shn-2 変 異 細 胞 において こ の 因 子 を 強 制 発 現 させると 脂 肪 細 胞 への 分 化 能 は 回 復 した Shn-2がPPARγ2 遺 伝 子 発 現 を 8 LABIO 21 JAN. 2008

9 ノックアウトマウスを 用 いた 転 写 因 子 の 生 理 機 能 解 析 制 御 するメカニズムを 解 析 した 結 果 Shn-2はBMP 刺 激 によって 細 胞 質 から 核 内 へ 移 行 し PPAR γ2 遺 伝 子 プロモーター 上 で Smad1/4やC/EBPαなどの 他 の 転 写 因 子 と 複 合 体 を 形 成 し これ らの 転 写 因 子 による 協 調 的 な 転 写 活 性 化 に 関 与 することが 明 らか にされた このように Shn-2は BMP 依 存 的 な 脂 肪 細 胞 分 化 を 制 御 する 転 写 因 子 であることが 示 さ れた おわりに 以 上 のように ノックアウトマ ウスを 用 いた 研 究 は 遺 伝 子 産 物 の 生 理 機 能 を 理 解 するためには 極 めて 有 効 な 手 法 であり 今 後 の さらなる 改 良 によって より 簡 便 に 使 用 できるようになることが 望 まれる 参 考 文 献 1. Maekawa, T., Sakura, H., Kanei-Ishii, C., Sudo, T., Yoshimura, T., Fujisawa, J., Yoshida, M. & Ishii, S. Leucine zipper structure of the protein CRE-BP1 binding to the cyclic AMP response element in brain. EMBO J. 8, (1989). 2. Maekawa T, Bernier F, Sato M, Nomura S, Singh M, Inoue Y, Tokunaga T, Imai H, Yokoyama M, Reimold A, Glimcher LH & Ishii S. Mouse ATF-2 null mutants display features of severe type of meconium aspiration syndrome. J. Biol. Chem. 274, (1999). 3. Maekawa T, Shinagawa T, Sano Y, Sakuma T, Nomura S, Nagasaki K, Miki Y, Saito- Ohara F, Inazawa J, Kohno T, Yokota J & Ishii S. Reduced levels of ATF-2 predispose mice to mammary tumors. Mol. Cell. Biol. 27, (2007). 4. Maekawa T, Sano Y, Shinagawa T, Sakuma T, Nomura S, Licht JD & Ishii S. ATF-2 controls transcription of Maspin and GADD45 g genes independently from p53 to suppress mammary tumors. Oncogene in press (2007). 5. Maekawa T, Sakura H, Sudo T & Ishii S. Putative metal finger structure of the human immunodeficiency virus type 1 enhancer binding protein HIV-EP1. J. Biol. Chem. 264, (1989). 6. Takagi T, Harada J & Ishii S. Murine Schnurri-2 is required for positive selection of thymocytes. Nature Immunol. 2, (2001). 7. Jin W, Takagi T, Kanesashi S, Kurahashi T, Nomura T, Harada J & Ishii S. Schnurri-2 controls BMP-dependent adipogenesis via interaction with Smad proteins. Dev. Cell 10, (2006). 図 4.Shn-2 変 異 マウスにおける 白 色 脂 肪 組 織 の 形 成 不 全 LABIO 21 JAN

10 13 ポリオウイルスレセプタートランスジェニックマウス ( 財 ) 東 京 都 医 学 研 究 機 構 東 京 都 神 経 科 学 総 合 研 究 所 副 参 事 研 究 員 小 池 智 ポリオウイルスの 種 特 異 性 と 動 物 実 験 モデル ポリオウイルスはピコルナウイ ルス 科 エンテロウイルス 属 に 分 類 されるヒトに 急 性 灰 白 髄 炎 ( 小 児 麻 痺 )を 引 き 起 こすウイルスであ る ポリオウイルスはヒトに 経 口 的 に 感 染 し 消 化 管 の 粘 膜 近 傍 のリンパ 節 で 増 殖 したのちウイル ス 血 症 を 引 き 起 こし 中 枢 神 経 系 まで 到 達 して 脊 髄 前 角 の 運 動 神 経 細 胞 に 感 染 して 四 肢 のマヒなどを 引 き 起 こすとされている (1, 2) ヒト 以 外 にはチンパンジーでも 効 率 よく 経 口 感 染 することが 知 られ ている カニクイザルやアカゲザ ルなどの 旧 世 界 ザルでは 経 口 感 染 の 効 率 はあまり 高 くないが ウイ ルスを 直 接 静 脈 内 あるいは 脳 内 な どに 接 種 すると 感 染 が 成 立 してヒ トの 急 性 灰 白 髄 炎 と 類 似 の 症 状 を 示 す しかし 宿 主 域 は 霊 長 類 に 限 られ 実 験 的 に 強 引 に 馴 化 させた 特 殊 な 株 を 除 いてはマウスなどに は 感 染 することはない 従 ってポ リオの 実 験 動 物 は 事 実 上 旧 世 界 ザ ルのみであり ポリオ 経 口 生 ワク チンの 毒 力 の 判 定 などに 用 いられ てきた 遺 伝 子 工 学 の 発 展 にとも ない 種 特 異 性 の 壁 を 超 えた 新 たな 小 動 物 実 験 モデルがつくられてい る 本 稿 ではポリオウイルスレセ プタートランスジェニックマウス の 開 発 の 歴 史 と 最 近 の 知 見 を 概 説 する ポリオウイルスレセプタートランス ジェニックマウスの 作 出 ポリオウイルスが 初 めて 分 離 さ れたのは1908 年 で 小 児 麻 痺 で 死 亡 した 患 者 の 脊 髄 の 乳 剤 をサ ルに 接 種 することにより 小 児 麻 痺 の 症 状 が 再 現 できたことによ る (3) 霊 長 類 以 外 の 動 物 では 再 現 ができないことから 宿 主 域 は 霊 長 類 に 限 られることが 判 明 した 1950 年 代 よりポリオウイルスの 宿 主 域 が 霊 長 類 に 限 られるのは 細 胞 表 面 に 存 在 するウイルス 受 容 体 の 問 題 であると 考 えられていた 培 養 細 胞 内 にポリオウイルスのゲ ノムRNAをトランスフェクショ ンによって 通 常 の 感 染 経 路 を 迂 回 して 導 入 するとマウス 細 胞 であっ ても 細 胞 内 でウイルスは 増 殖 する ことができる したがって 特 異 性 を 決 定 しているのはウイルスの 細 胞 表 面 への 吸 着 や 細 胞 内 への 侵 入 の 段 階 であると 考 えられた (4, 5) そこでポリオウイルスレセプター (PVR) 遺 伝 子 が 単 離 する 試 みが 1980 年 代 末 から 当 時 東 京 都 臨 床 研 にいた 我 々のグループとコロン ビア 大 学 のRacanielloのグループ によってなされた レセプターを 持 たないマウス 細 胞 にヒトゲノム DNAをトランスフェクションし て 導 入 したライブラリーを 作 成 す る これはヒトゲノムの 一 部 分 が 導 入 された 細 胞 の 集 団 で 個 々の 細 胞 のクローンには 別 々の 遺 伝 子 が 導 入 されている このとき 偶 然 PVRが 導 入 された 細 胞 はウイル ス 感 受 性 を 獲 得 するので 感 受 性 を 獲 得 した 細 胞 をクローニングし た 後 そこに 含 まれるヒト 由 来 の DNA 配 列 を 同 定 することにより レセプター 遺 伝 子 を 単 離 すること ができたのである (6, 7) 培 養 細 胞 で 種 特 異 性 の 壁 を 破 る ことに 成 功 したので より 複 雑 であるマウス 個 体 に 対 してもヒ トPVRの 付 与 によりウイルス 感 受 性 を 獲 得 できるのではないかと いう 期 待 が 生 まれた 両 グループ はPVR 遺 伝 子 を 含 むヒトゲノム DNA 断 片 をトランスジーンとし てトランスジェニック(tg)マウ スを 作 成 した (8, 9) ヒトPVR 遺 伝 子 のプロモーターを 用 いて 発 現 した 遺 伝 子 はヒト 体 内 での 発 現 と 10 LABIO 21 JAN. 2008

11 ポリオウイルスレセプタートランスジェニックマウス 全 く 同 じパターンで 発 現 するとい う 訳 にはいかずいくつかの 点 が 異 なっていたが およそヒトに 近 い と 思 われる 状 態 で 発 現 した ポリ オウイルスには3つの 血 清 型 (1 2 3 型 )が 存 在 するがいずれの 型 のウイルス 株 を 脳 内 接 種 した 場 合 もヒトのポリオと 類 似 の 症 状 を 発 症 した マウスの 中 枢 神 経 系 特 に 運 動 神 経 細 胞 にポリオウイルス 抗 原 が 検 出 され この 細 胞 の 破 壊 により 小 児 麻 痺 の 特 徴 である 弛 緩 性 のマヒが 観 察 されたのである さらにさまざまなウイルス 投 与 経 路 を 試 すと 腹 腔 内 筋 肉 内 接 種 などでは 発 症 するが 経 口 感 染 の 効 率 は 高 くなく ヒトよりもサルに 近 い 動 物 モデルであると 考 えられ た ウイルス 株 の 毒 力 の 評 価 Sabinによって 開 発 された 経 口 生 ワクチン 株 とSalkによって 開 発 された 不 活 化 ワクチンが 使 用 さ れ ポリオ 根 絶 計 画 が 進 行 してい る 現 在 先 進 国 では 小 児 麻 痺 の 発 生 はなく 一 部 の 国 で 小 規 模 な 流 行 が 見 られるのみである 経 口 生 ワクチンは 野 生 株 を 馴 化 させて 弱 毒 化 したものであるが 生 きてい るウイルスであるが 故 に 不 注 意 に 製 造 すると 強 毒 復 帰 が 起 こる 可 能 性 がある そのため 製 造 されたワ クチン 株 はサルに 接 種 して 毒 性 の ないことを 確 認 する 試 験 を 経 た 後 に 使 用 されている またポリオ 流 行 国 で 患 者 から 分 離 されたポリオ ウイルス 株 の 毒 力 を 調 べることは 流 行 している 株 に 関 する 情 報 を 得 る 上 で 重 要 なことであった 毒 力 試 験 は 神 経 系 でのウイルスの 増 殖 能 力 を 評 価 するものであるため 生 きた 動 物 で 試 験 を 行 うことが 必 要 である 大 型 動 物 であり 高 い 知 能 をもった 霊 長 類 を 実 験 に 使 用 することはさまざまな 意 味 で 望 ま しいこととは 言 えないためマウス モデルがサルに 代 わる 動 物 モデル となりうるかが 試 された 強 毒 株 弱 毒 株 並 びに 両 者 の 中 間 の 毒 力 を 持 つキメラウイルス 株 などを 用 いてサルにおける 神 経 毒 力 とマウ スにおける 神 経 毒 力 の 間 に 相 関 が あるかどうか またtgマウスに ワクチン 株 を 接 種 した 場 合 どのよ うな 毒 力 判 定 基 準 を 設 けたらサル と 同 等 の 試 験 となりうるかなどが 検 討 された マウスとサルの 間 で 厳 密 な 一 致 が 見 られたわけではな いが 大 方 両 者 の 間 で 相 関 が 見 ら れた (10) またマウスに 脊 髄 内 接 種 を 行 うことにより 弱 毒 ワクチン 株 レベルの 毒 力 の 微 妙 な 違 いを 判 定 できることも 判 明 した (11) 現 在 では 現 行 のSabinワクチン 株 の 検 定 にサルの 代 わりにtgマウス モデルを 使 用 することも 認 められ ている ポリオの 発 症 機 序 ワクチンができて 野 生 株 の 流 行 による 発 症 は 制 御 できるようにな ったとはいえ ウイルスが 個 体 の 中 でどのように 神 経 までたどり 着 きそこで 特 異 的 に 増 殖 するかとい う 機 構 は 解 明 された 訳 ではない むしろワクチン 開 発 成 功 によりサ ルやチンパンジーを 用 いて 行 われ ていた 研 究 は 行 われなくなったの である 多 くのヒトの 感 染 症 研 究 はそのような 傾 向 があり ワクチ ンで 制 圧 された 病 気 の 発 症 機 序 は 最 新 の 技 術 で 研 究 されずにいる tgマウスができたことによりこ のような 問 題 について 全 く 違 った 方 法 論 でアプローチすることが 可 能 になった 遺 伝 子 改 変 技 術 が 使 えるマウスではヒトやサルではで きない 条 件 を 作 りだすことができる 例 えばポリオウイルスはどのよ うにして 中 枢 神 経 系 まで 到 達 する ことができるか 小 動 物 であれば 実 験 は 技 術 的 に 容 易 になる 神 経 系 は 通 常 血 液 脳 関 門 により 自 由 な 物 質 の 出 入 りができなくなってい る 従 ってポリオウイルスも 簡 単 に 中 枢 神 経 系 の 実 質 には 到 達 でき ないはずである ところが 放 射 性 同 位 元 素 で 標 識 したポリオウイル LABIO 21 JAN

12 13 スをマウスに 静 脈 内 接 種 をすると ウイルスは 血 液 脳 関 門 を 通 り 抜 けて 神 経 実 質 に 到 達 することが 判 明 した これはPVRを 発 現 して いないマウスでも 見 られることか らポリオウイルスはPVRを 使 用 することなく 血 液 脳 関 門 を 通 過 する 能 力 があることが 示 されてい る (12) この 機 構 の 詳 細 は 未 だ 明 らかにされていない また 不 活 化 ワクチンが 開 発 され た 間 もないころに 起 こった 事 故 な どからポリオウイルスは 筋 肉 から 神 経 の 軸 索 を 伝 って 中 枢 に 侵 入 す ることがあると 指 摘 されていた PVR tgマウスを 用 いてこの 機 構 が 解 明 されている PVRには 細 胞 質 ドメイン 内 に 細 胞 性 ダイニ ンの 軽 鎖 と 結 合 する 領 域 が 存 在 す る そのため 神 経 終 末 で 捕 獲 され たポリオウイルスはPVRと 結 合 したまま 逆 行 性 の 軸 索 輸 送 によっ て 中 枢 まで 運 ばれることが 可 能 で あることが 判 明 した (13, 14) さらにポリオウイルスがなぜ 神 経 系 で 特 異 的 に 増 殖 できるのかも 解 明 された 一 般 的 にウイルス 自 身 には 少 数 の 遺 伝 子 がコードされ ているだけなので 感 染 した 際 に は 宿 主 側 の 因 子 を 利 用 しなければ 複 製 することができない ポリオ ウイルスは 非 神 経 系 組 織 において 増 殖 できないのはウイルスの 複 製 の 過 程 で 必 要 とされる 宿 主 因 子 が 不 足 しているためではないかと 考 えられていた ところがPVR-tg マウスを1 型 インターフェロン (IFN)レセプターノックアウト マウスと 交 配 したところ ウイル スは 通 常 では 増 殖 できない 肝 臓 膵 臓 脾 臓 などの 組 織 でも 増 殖 で きるようになった すなわちポリ オウイルスは 潜 在 的 には 本 来 の 標 的 となる 神 経 系 以 外 でも 増 殖 は 可 能 であるが 強 いIFN 応 答 を 示 す 非 神 経 系 組 織 においてはその 応 答 のためにウイルスが 効 率 よく 増 殖 できずにいることがわかった (15) 逆 に 神 経 系 組 織 は 非 神 経 系 組 織 に 比 べてIFN 応 答 が 鈍 いこ とも 明 らかになったのである こ の 原 理 はポリオウイルスのみなら ず 多 くの 急 性 神 経 ウイルスに 当 て はまる 原 理 である 可 能 性 がある 終 わりに ポリオウイルスの 根 絶 が 近 づ き ポリオウイルスそのものに 対 する 緊 急 の 脅 威 はなくなってきて いる しかしながらワクチンで 発 生 を 制 御 されている 感 染 症 でもそ の 発 症 機 序 などはきちんと 解 明 さ れていないものも 多 い ポリオウ イルスレセプター tgマウスはヒ トの 感 染 症 を 小 動 物 モデルを 用 い て 解 析 するモデルケースである ポリオウイルスのモデルはウイル スレセプターの 導 入 だけで 比 較 的 ヒトに 近 いモデル 動 物 が 作 成 でき た 新 規 のモデル 作 成 にあたりウ イルスによっては 種 特 異 性 などの 問 題 がより 複 雑 で 複 数 の 遺 伝 子 の 導 入 などが 必 要 とされるかも 知 れない しかし マウスモデルは 様 々なノックアウトマウスとの 交 配 も 可 能 なので このようなアプ ローチによって 今 後 ますます 新 し い 事 実 が 発 見 されることが 期 待 さ れる 文 献 1. Bodian,D.: Emerging concept of poliomyelitis infection. Science (1955) 2. Sabin, A. B.: Pathogenesis of poliomyelitis; reappraisal in the light of new data. Science (1956) 3. Landsteiner,K., Popper,E.: Mickroscopische Präparate von einem Menschlichen und Zwei Affenrückernmarken. Wien Klin. Wochenschr (1908) 4. Holland, J. J., et al.: The mammalian cell-virus relationship. IV. Infection of naturally insusceptible cells with enterovirus ribonucleic acid. J. Exp. Med (1959) 5. Holland, J. J.: Receptor affinities as major determinants of enterovirus tissue tropisms in humans. Virology (1961) 12 LABIO 21 JAN. 2008

13 ポリオウイルスレセプタートランスジェニックマウス 6. Mendelsohn, C., et al.: Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequences, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily. Cell (1989) 7. Koike, S., et al.: The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms. EMBO J (1990) 8. Ren, R. B., et al.: Transgenic mice expressing a human poliovirus receptor: a new model for poliomyelitis. Cell (1990) 9. Koike, S., et al.: Transgenic mice susceptible to poliovirus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1991) 10. Horie, H. et al.: Trangenic mice carrying human poliovirus receptor as a new animal model for study of poliovirus neurovirulence. J. Virol (1994) 11. Abe, S. et al.: Neurovirulence test for oral live poliovaccines using poliovirus-sensitive transgenic mice. Virology (1995) 12. Yang, W. X., et al.: Efficient delivery of circulating poliovirus to the central nervous system independently of poliovirus receptor. Virology (1997) 13. Ohka, S., et al.: Retrograde transport of intact poliovirus through the axon via the fast transport system. Virology (1998) 14. Ohka, S., et al.: Receptor (CD155)- dependent endocytosis of poliovirus and retrograde axonal transport of the endosome. J. Virol (2004) 15. Ida-Hosonuma, M., et al.: The alpha/beta interferon response controls tissue tropism and pathogenicity of poliovirus. J. Virol (2005) Standard Protocol Organized Company LABIO 21 JAN

14 メタボリックシンドロームと 脂 肪 肝 に 対 する 考 えかた 血 液 流 動 性 の 検 討 を 加 えて 東 京 女 子 医 科 大 学 教 授 戸 塚 ロイヤルクリニック 所 長 栗 原 毅 緒 言 重 大 である 本 来 われわれ 消 化 器 病 医 がメタボリックシンドロー 定 装 置 MC-FANを 紹 介 したう えで 脂 肪 肝 とメタボリックシン 予 防 医 療 の 時 代 の 幕 開 けであ る それを 裏 付 けるように メタ ボリックシンドロームという 概 念 が 確 立 され 臨 床 の 場 で 活 用 され ようとしている 私 は 消 化 器 病 学 特 に 肝 臓 病 を 専 門 にしている が 肝 臓 が 糖 代 謝 とならび 脂 質 代 謝 においても 重 要 な 役 割 を 担 って いることを 肝 に 銘 じながら 日 常 診 療 にあたっている メタボリッ クシンドロームの 治 療 標 的 臓 器 と して 最 大 なものは 肝 臓 であるから だ 特 に 脂 肪 肝 は メタボリッ クシンドロームの 一 部 分 症 である のみならず インスリン 抵 抗 性 を 根 幹 とした 代 謝 異 常 全 般 において 中 心 的 役 割 を 担 う 病 態 と 考 えられ る 最 近 内 臓 脂 肪 は 胃 がん 大 腸 がん さらに 肝 臓 がんなどを 招 くらしいという 報 告 がされた 日 本 人 の3 大 死 因 に2 位 の 心 臓 病 3 位 の 脳 卒 中 のみならず 1 位 のが んとの 関 連 性 もあるとなると 事 は ム 研 究 においてリーダーシップを 取 るべきであろう 内 臓 脂 肪 が 俄 然 注 目 されだし た そのきっかけは 単 なる 脂 肪 細 胞 と 思 われて 全 く 関 心 が 寄 せら れていなかったのにアディポサイ トカインと 称 される 生 理 活 性 物 質 が 分 泌 されることが 判 明 したこと による この 物 質 は 血 液 中 の 糖 質 中 性 脂 肪 さらに 血 圧 の 調 節 に 深 く 関 わっているが どうも 発 が んにも 影 響 を 及 ぼしていそうであ る メタボリックシンドロームは ライフスタイルの 問 題 点 を 改 善 さ えすれば 意 外 と 簡 単 に 脱 却 するこ とが 可 能 である さて 種 々の 疾 患 や ライフスタイルでいとも 簡 単 に 血 液 流 動 性 が 変 化 してしま う 特 に 脂 肪 肝 では ほぼ 全 例 で 血 液 流 動 性 が 低 下 する 現 象 が 観 察 される 本 稿 では まず 擬 似 毛 細 血 管 モデルである 血 液 流 動 性 測 ドロームとの 関 連 性 につき 考 えて みたい また 今 までに 分 かって いる 種 々の 病 態 での 検 討 結 果 も 付 け 加 える 1.MC FAN とは 血 液 流 動 性 測 定 装 置 であるMC FAN(Micro Channel array Flow Analyzer: エムシーファン) の 特 徴 的 な 血 液 画 像 ( 血 液 サラサ ラ ドロドロ 画 像 )が 一 般 にも 広 く 知 られるようになった DVD 画 像 を 受 診 者 と 共 覧 することで 意 識 改 革 を 図 ることも 可 能 である 今 後 メタボリックシンドローム あるいは 脂 肪 肝 対 策 として 急 速 に 普 及 することが 期 待 される 最 近 操 作 性 が 簡 便 化 した 機 種 が 開 発 され 基 準 値 の 設 定 が 行 なわれ つつある 1) われわれは 血 液 流 動 性 の 良 し 悪 しを サラサラ 血 液 ドロドロ 血 液 と 表 現 した 医 学 的 には 適 14 LABIO 21 JAN. 2008

15 TOPICS 切 とは 言 い 難 いが 受 診 者 に 対 し て 視 覚 に 訴 える 場 合 には 都 合 の いい 表 現 法 と 思 える 2) MC FANは 菊 池 らが 半 導 体 技 術 を 駆 使 して1990 年 頃 完 成 さ せた 3) シリコン 基 板 に 幅 7μm, 長 さ30μmの 溝 を 彫 り これに ガラス 基 板 を 接 着 させることで 溝 を 擬 似 毛 細 血 管 にすること こ れが 基 本 的 な 原 理 である ここ に 採 血 した 全 血 100μlを 流 し 通 過 時 間 を 計 測 また 顕 微 鏡 で 2,000 倍 に 拡 大 し ビデオおよび DVDに 録 画 しながら 通 過 状 態 を 観 察 する( 図 1) すなわち 毛 細 血 管 モデルに 血 液 を 流 し 流 れる 様 子 を 顕 微 鏡 で 拡 大 しながらモニターに 映 して 観 察 できる 血 液 流 動 性 測 定 装 置 であ る 採 血 した 血 液 を 毛 細 血 管 と 同 じ 細 さの 流 路 に 流 すことで 血 管 の 内 部 に 近 い 状 態 を 人 工 的 に 再 現 している 1990 年 代 初 めから 我 々を 含 め た 研 究 機 関 において 基 礎 研 究 が 開 始 され 4) 現 在 では 定 量 性 再 現 性 が 確 立 され 5, 6) 臨 床 の 場 で 使 用 されるに 至 った 2001 年 より 我 々 の 施 設 でMC FAN 外 来 ( 血 液 サラサラ 外 来 )を 設 け 臨 床 の 場 へ 導 入 し 7) 現 在 までに 約 9,000 例 で 実 施 している 特 に 脂 肪 肝 メタボリックシンドローム 患 者 に は 積 極 的 に 勧 めている 毛 細 血 管 の 径 は 平 均 7μmであ るのに 対 し 赤 血 球 径 は8μmで あり 変 形 しながら 毛 細 血 管 を 通 過 していく そのため 赤 血 球 の 変 形 能 (しなやかさの 程 度 )は 毛 細 血 管 における 血 流 速 度 ないし 血 流 量 を 規 定 する 重 要 な 因 子 とな る 白 血 球 は 赤 血 球 よりさらに 大 きい(10 ~ 25μm)ため 当 然 変 形 しないと 通 過 できない ま た 白 血 球 が 血 管 内 皮 細 胞 との 粘 着 能 が 亢 進 あるいは 低 下 している かということも 血 流 速 度 に 影 響 を 与 える 一 方 血 小 板 の 径 は2 ~ 3μmなので 抵 抗 なく 通 過 できる が 凝 集 しやすい 特 性 を 持 つため 速 やかに 毛 細 血 管 の 閉 塞 を 起 こ す すなわち 毛 細 血 管 の 血 流 速 度 血 流 量 は 赤 血 球 の 変 形 能 白 血 球 の 変 形 能 粘 着 能 血 小 板 の 凝 集 能 の 程 度 によってほぼ 決 定 され る 2. 病 態 での 流 動 性 の 特 徴 健 常 者 での 全 血 100μlの 通 過 時 間 の 平 均 値 は80.0±8.6 秒 であ り 8) 血 液 流 動 性 も 非 常 に 良 好 で ありサラサラ 血 液 であった 疾 患 別 で 検 討 すると 最 も 通 過 時 間 が 延 長 していたのは 脂 肪 肝 を 合 併 し ていたメタボリックシンドローム である 全 例 で 白 血 球 粘 着 能 血 小 板 凝 集 能 の 亢 進 を 認 め いわゆ る ドロドロ 血 液 の 典 型 と 考 え られる( 図 2) ところで 生 活 習 慣 病 の 代 表 ともいえる 脂 肪 肝 は 動 脈 硬 化 の 危 険 因 子 とわれわ れは 考 えた 9) 当 初 は あまり 現 実 性 のないと 受 け 入 れられなかっ たが 最 近 脂 肪 肝 の 重 要 性 が 認 図 1.MC-FANの 構 造 識 されるようになった LABIO 21 JAN

16 TOPICS さて 血 液 流 動 性 が 不 良 な 場 合 を ドロドロ 血 液 と 表 現 してい るが 病 態 ごとに 特 徴 的 な 流 動 性 を 示 す ドロドロ 血 液 の 状 態 が 観 察 される 高 血 圧 あるいはスト レス 喫 煙 紫 外 線 等 で 白 血 球 が 活 性 化 され 粘 着 性 が 亢 進 している 場 合 を ベタベタ 血 液 と 命 名 し た( 図 3) 糖 尿 病 では 微 小 循 環 障 害 が 合 併 症 の 原 因 と 成 り 得 る 赤 血 球 変 形 能 の 低 下 フィブ リノーゲンの 増 加 等 により ネバ ネバ 血 液 とした( 図 4) 高 ト リグリセライド 血 症 は 主 に 血 小 板 凝 能 が 亢 進 することにより ザラ ザラ 血 液 と 表 現 し( 図 5) 一 般 に 高 トリグリセライド 血 症 で は レムナント 粒 子 (RLP)コレ ステロールも 増 加 することが 多 い この 現 象 が 高 レムナント 血 症 により 惹 起 される 赤 血 球 の 溶 血 に 起 因 することを 走 査 電 顕 により 証 明 した すなわち レムナントが 赤 血 球 膜 を 脆 弱 にし 擬 似 毛 細 血 管 を 通 過 することで 生 じるずり 応 力 で 溶 血 が 起 き 赤 血 球 内 に 存 在 するアデノシン 二 リン 酸 (ADP) により 血 小 板 を 凝 集 させることわ れわれは 解 明 した 10) 3. 内 臓 脂 肪 型 肥 満 での 検 討 CTで 測 定 した 内 臓 脂 肪 蓄 積 面 積 とMC-FANでの 血 液 流 動 性 との 相 関 性 を 検 討 すると 見 事 に 相 関 することが 分 かった 11) 2005 年 10 月 か ら2006 年 7 月 ま で に 当 院 を 受 診 して 腹 部 CT 検 査 と MC-FANを 同 時 に 受 けた502 人 を 対 象 として 観 察 した 腹 部 CT 検 査 は 臍 部 断 面 を 撮 影 し 内 臓 脂 肪 面 積 を 脂 肪 分 布 測 定 ソフト で 計 測 した まず 内 臓 脂 肪 面 積 が100cm2 以 上 の 内 臓 脂 肪 型 肥 満 は 502 例 中 178 例 (35.5%)であ り 血 液 100mlの 通 過 時 間 は89. 9±21.3 秒 であった 内 臓 脂 肪 面 積 が100cm2 以 下 例 の81.5±16.0 秒 に 比 し 有 意 に 通 過 時 間 が 遅 延 し ていた(P<0.0001) 全 例 での 検 討 でも 内 臓 脂 肪 面 積 が 大 きくな るほどMC FANによる 通 過 時 間 が 遅 くなることも 確 認 された 内 臓 脂 肪 型 肥 満 が 絶 対 条 件 でこ れに 高 血 糖 高 トリグリセライド 血 症 高 血 圧 のうちの 二 つが 重 な った 場 合 をメタボリックシンドロ ームと 表 現 するわけである 前 述 した 如 くこれらの 状 態 では 単 独 でも 血 液 流 動 性 は 不 良 になる し たがって メタボリックシンドロ ームの 状 態 では さらに 悪 くなる ことが 容 易 に 想 像 できよう 脂 肪 肝 ではほぼ 全 例 通 過 時 間 が 遅 延 することを 観 察 報 告 してき た また 動 脈 硬 化 の 危 険 因 子 と なりうることも 強 調 してきた そ んな 経 緯 の 中 われわれは その 代 謝 経 路 病 態 からメタボリック シンドロームの 進 展 様 式 で 内 臓 脂 肪 の 蓄 積 よりさらに 上 流 に 脂 肪 肝 が 位 置 すると 考 えるようになっ た 脂 肪 肝 患 者 がたかが 1kgの 図 2. メタボリックシンドローム ドロドロ 血 液 図 3. 高 血 圧 ベタベタ 血 液 図 4. 糖 尿 病 ネバネバ 血 液 図 5. 高 脂 血 症 ザラザラ 血 液 16 LABIO 21 JAN. 2008

17 メタボリックシンドロームと 脂 肪 肝 に 対 する 考 えかた 血 液 流 動 性 の 検 討 を 加 えて 減 量 でもALTが 改 善 することを 臨 床 の 場 でしばしば 経 験 する すなわち 脂 肪 沈 着 は 腸 間 膜 周 囲 ( 内 臓 脂 肪 沈 着 )より 先 に 肝 臓 で 起 きていると 推 測 している ちなみにALTの 基 準 値 は45IL / l までとされるが HCV HBV な どのウイルス 感 染 症 が 無 い 場 合 ALTが20IL / l 以 上 であれば 肝 臓 に 脂 肪 沈 着 があると 考 えてい る 血 液 流 動 性 の 視 点 から 考 える と 脂 肪 肝 ですでに ドロドロ 血 液 であるので メタボリックシ ンドロームでは 必 然 的 に 血 液 流 動 性 が 不 良 である 4.MC FAN 測 定 の 意 義 受 診 者 自 身 の 意 識 改 革 に 活 用 で きることから 脂 肪 肝 やメタボリ ックシンドローム 対 策 に 非 常 に 有 用 視 されている これらの 疾 患 は 自 己 の 努 力 により 改 善 が 容 易 にも かかわらず 実 際 には 自 覚 が 持 て ない 検 査 値 を 中 心 とした 結 果 の 説 明 だけでは 改 善 を 得 られないこ とが 多 いのが 現 状 である そして 動 脈 硬 化 の 素 地 を 形 成 することに な る MC FANのDVD 画 像 を 共 覧 することは 自 覚 を 促 す 意 味 で 思 いのほか 有 効 な 手 段 である 21 世 紀 に 入 り 未 病 の 概 念 が 再 確 認 された はっきり 病 気 だとはいえないけれど まったく 健 康 かというとそうではない と いう 病 気 に 至 る 前 の 半 健 康 状 態 を 表 現 しており 年 前 の 中 国 最 古 の 医 学 書 黄 帝 内 経 で すでに 定 義 されている 未 病 は 生 活 習 慣 の 乱 れにより 生 じ 生 活 習 慣 病 の 入 り 口 に 位 置 する 未 病 とメタボリックシンドロームとは くしくも 同 じ 概 念 といえる そ こ で MC-FANで 未 病 の 拾 い 上 げをすることも 重 要 であ る 一 般 検 査 ではさほど 問 題 がな くても MC-FANで 血 液 流 動 性 が 不 良 な 例 が 未 病 の 範 疇 に 入 る と 考 えている 12) おわりに 脂 肪 肝 やメタボリックシンドロ ームは 日 常 生 活 での ゆがみ ひずみ の 警 告 として 捉 えたい 血 液 の 流 動 性 も 同 様 である 内 臓 脂 肪 の 蓄 積 だけでも ドロドロ 血 液 となる 真 に 健 康 である と いうことの 大 前 提 は 血 液 流 動 性 が 良 好 であることが 挙 げられる MC FANを 活 用 しながら 自 分 自 身 の 健 康 に 常 に 関 心 を 持 つ 生 活 を 送 りたいものである メタボ リックシンドロームを 根 幹 に 据 え た 特 定 健 診 が 開 始 される われわ れ 医 師 の 時 代 から 国 民 の 意 思 の 時 代 へと 大 きな 変 革 期 を 迎 える 参 考 文 献 1) 栗 原 毅 :Bloody7 に お け る 通 過 時 間 の 参 考 値 設 定 の 試 み 日 本 ヘ モレオジー 学 会 誌 9,9-10 (2006) 2) 栗 原 毅 他 : 血 液 サラサラ 度 総 合 臨 床 52, (2003) 3) Kikuchi Y, et al. : Optically accessible microchannels formed in a single-crystal silicon substrte for studies of blood rheology. Microvasc Res, 44, (1992) 4) 栗 原 毅 他 :ラット 脂 肪 肝 にお ける 血 液 レオロジ 学 的 検 討 日 消 病 会 誌, 94, (1997) 5) Kurihara T,et al. : Effect of eicosapentaenoic acid on blood rheoloy in rat with fatty liver.cur Ther Res, 58, (1997) 6) Kurihara T, et al.:effect of eicosapentaenoic acid on blood rheology in hyperlipidemic fatty liver patients.hemorhel and Related Res, 2, 1-8 (1999) 7) 栗 原 毅 他 : 血 液 レオロジー 測 定 装 置 MC FAN の 臨 床 応 用 の 試 み( 第 一 報 ) ヘモレオロジー 研 究 会 誌 4,43-52 (2001) 8) 川 上 明 美 他 :MC FANの 基 準 値 の 設 定 と 種 々の 因 子 の 影 響 に ついての 検 討 ヘモレオジー 研 究 会 誌 3,9-14 (2000) 9) 栗 原 毅 他 : 動 脈 硬 化 易 発 症 病 態 としての 脂 肪 肝 の 検 討 消 化 器 集 検 誌 35, (1997) 10) Kurihara T, et al.:impaired blood rheology by remnant-like lipoprotein particles : Studies in patients with fatty liver disease. Clin Hemorheology and Microcirculation, 24, (2001) 11) 栗 原 毅 他 : 内 臓 脂 肪 型 肥 満 の 視 点 に 立 った 血 液 流 動 性 の 検 討 第 13 回 日 本 ヘモレオロジー 学 会 抄 録 集 54(2006) 12) 栗 原 毅 他 : 肝 臓 の 未 病 のチェ ックポイントと 治 療 Pregress in Medicine, 22, (2002) LABIO 21 JAN

18 シリーズ 連 載 1 動 物 の 墓 と 慰 霊 碑 東 海 大 学 医 用 生 体 工 学 科 教 授 依 田 賢 太 郎 土 する( 山 梨 金 生 遺 跡 )が こ れは 何 らかの 儀 礼 が 行 われていた ものと 考 えられる 弥 生 時 代 の 遺 跡 ( 鳥 取 青 谷 上 寺 遺 跡 )からも 儀 礼 に 用 いられたと 考 えられる 猪 などの 頭 骨 が 出 土 している 猪 の 人 類 の 死 体 埋 葬 の 起 源 はネアン デルタール 人 にあり 人 間 は 死 体 を 単 なる 物 体 ではなく 特 別 なもの と 認 識 し 死 後 の 世 界 の 観 念 を 持 っていた 人 間 が 動 物 を 埋 葬 する 行 為 は 必 ずしも 一 般 的 ではない が 紀 元 前 10,000 年 頃 のイスラエ ルの 遺 跡 から 合 葬 された 人 と 子 犬 の 骨 が 出 土 している 日 本 では 9,000 年 前 の 縄 文 遺 跡 から 埋 葬 さ れた 犬 の 骨 が 出 土 しはじめ 以 後 おびただしい 数 の 埋 葬 縄 文 犬 の 骨 が 発 掘 されている 動 物 の 墓 は 特 定 の 動 物 個 体 を 埋 葬 したものであり 動 物 慰 霊 ( 供 養 ) 碑 は 不 特 定 多 数 の 動 物 のため に 碑 だけを 設 置 したものである が これらを 動 物 塚 と 呼 ぶことに する 動 物 塚 の 系 譜 動 物 塚 のルーツは 縄 文 時 代 にま で 遡 ることができる 縄 文 人 は 犬 を 家 畜 として 狩 猟 に 用 い 家 族 の 一 員 として 大 切 に 扱 った 死 後 は 人 間 と 同 様 に 土 壙 墓 に 屈 葬 するの が 一 般 的 であった 人 と 合 葬 され るケースもあった また 後 肢 を 骨 折 して 完 全 な 歩 行 は 困 難 であっ たにもかかわらず 天 寿 を 全 うした 老 犬 の 埋 葬 例 ( 岩 手 貝 鳥 貝 塚 ) があり 身 近 なものの 命 を 大 切 に していたことを 物 語 っている 縄 文 犬 の 墓 が 犬 塚 の 起 源 であり こ の 系 譜 に 属 する 動 物 塚 として 猫 塚 馬 塚 牛 塚 軍 馬 軍 犬 軍 鳩 慰 霊 碑 実 験 動 物 慰 霊 碑 ペットの 墓 など 人 間 のあらゆる 用 に 供 され た 動 物 のための 塚 がある 縄 文 人 は 猪 の 狩 猟 を 行 って 食 物 としたが 幼 獣 をキープして 成 獣 に 育 てた 後 食 用 に 供 するケースも あった 縄 文 遺 跡 からは 猪 の 成 獣 や 幼 獣 の 土 偶 が 出 土 するが 猪 の 幼 獣 が 丁 重 に 屈 葬 されている 例 ( 宮 城 田 柄 貝 塚 )があり 骨 が 出 土 している これらは 幼 獣 が 家 族 の 一 員 として 扱 われていたこと を 物 語 る また 縄 文 遺 跡 から 多 数 の 焼 けた 猪 の 幼 獣 の 下 顎 骨 が 出 墓 が 食 用 動 物 の 塚 の 起 源 であり この 系 譜 に 属 する 動 物 塚 として 熊 供 養 碑 鹿 供 養 碑 鳥 塚 鳥 獣 供 養 碑 牛 魂 碑 畜 産 碑 などがあ る 縄 文 遺 跡 から 規 則 的 に 配 列 され た 海 豚 の 骨 ( 石 川 真 脇 遺 跡 )や ベンガラで 色 付 けされ 放 射 状 に 配 列 された 海 豚 の 頭 骨 ( 北 海 道 東 釧 路 貝 塚 )が 出 土 しているが こ れらは 豊 漁 などの 儀 礼 と 関 連 があ るものと 考 えられる これらが 海 生 獣 や 魚 類 など 食 用 動 物 の 塚 の 起 源 と 考 えられる この 系 譜 に 属 す るものとして いるか 供 養 之 碑 くじら 供 養 碑 うなぎ 供 養 碑 ふ ぐ 供 養 碑 鰹 塚 鮟 鱇 塚 海 老 塚 などがある 縄 文 時 代 の 土 器 には 蛇 の 象 形 ( 山 梨 安 道 寺 遺 跡 )が 多 く 見 ら れるが これは 蛇 の 奇 妙 な 形 や 動 き 蝮 の 毒 や 脱 皮 という 不 可 思 議 な 現 象 などに 驚 異 の 念 をいだき 蛇 を 畏 怖 していたことを 示 してい ると 考 えられる このような 蛇 へ の 畏 怖 の 念 が 弥 生 時 代 以 降 の 蛇 信 仰 へと 発 展 し 神 ( 田 の 神 水 神 ) 18 LABIO 21 JAN. 2008

19 の 依 代 として 建 立 されたものが 土 着 の 蛇 塚 である この 系 譜 に 属 す る 動 物 塚 として 狐 塚 ( 田 の 神 ) 白 蛇 塚 ( 雨 神 ) 亀 塚 ( 海 神 )な どがある 以 上 のことは 縄 文 人 が 特 別 な 動 物 と 深 い 精 神 的 な 関 わりを 持 って いたことを 物 語 るが 現 存 してい る 動 物 塚 の 建 立 動 機 の 基 底 に 流 れ ている 心 情 の 源 泉 はこの 縄 文 人 の 精 神 性 と 同 一 のもと 考 えられる 日 本 は 四 面 を 海 に 囲 まれ 国 土 の 七 割 以 上 が 急 峻 な 山 地 であるとい う 地 理 的 条 件 と 比 較 的 温 暖 で 四 季 を 通 じて 降 雨 量 が 多 いという 気 象 条 件 から 食 物 としての 天 然 物 に 恵 まれていた 縄 文 人 は 陸 生 獣 海 生 獣 魚 類 植 物 をバランス 良 く 摂 取 して 豊 かな 食 生 活 をしてい たが 採 集 狩 猟 漁 猟 は 気 象 条 件 に 左 右 され 台 風 大 水 豪 雪 日 照 り 地 震 噴 火 火 事 事 故 病 気 死 などの 災 いは 人 間 の 力 で はどうにもならない 自 然 現 象 であ った 彼 等 の 最 も 恐 れたのはこの ような 災 いをもたらす 自 然 そのも のであったに 違 いない 彼 らは 自 然 と 一 体 となって 生 活 し 自 然 の 豊 かな 恵 みに 感 謝 するとともに 自 然 を 畏 怖 していた この 自 然 に 対 する 恐 れと 感 謝 が 動 物 の 埋 葬 や 動 物 祭 祀 あるいは 土 偶 の 製 作 と 関 連 しているものと 考 えられる 宗 教 や 国 家 の 成 立 する 遥 か 以 前 の 縄 文 人 が 現 実 の 生 活 の 中 で 自 然 との 相 互 作 用 によって 培 った 動 物 に 対 する 心 情 つまり 縄 文 人 の 自 然 に 対 するオソレ( 恐 れ 畏 れ)に まつわる 不 安 が 動 物 塚 建 立 の 動 機 の 一 つになっているものと 考 えら れる もう 一 つの 動 機 は 身 近 な 動 物 を 家 族 の 一 員 と 考 える 傾 向 が 極 めて 強 いことであり 人 も 動 物 も 同 じような 運 命 を 負 っていると 考 えて 大 切 に 扱 うことである 縄 文 時 代 の 墓 は 集 落 の 中 の 住 居 近 くに 設 けられたことから 縄 文 人 のケガレ( 不 浄 罪 穢 れ) 意 識 は 希 薄 であったと 考 えられる 弥 生 時 代 以 降 になると 集 落 の 外 に 墓 地 が 設 けられるようになるので ケガレ 意 識 が 有 ったかも 知 れな い 文 献 的 にケガレが 明 記 されて いるのは 古 事 記 (712 年 ) 日 本 書 紀 (720 年 )に 記 されてい るイザナギノミコトが 死 んだイザ ナミノミコトを 追 って 黄 泉 國 へ 行 き 穢 れた 記 事 である これが 穢 れの 最 初 の 記 録 であり 穢 れを 清 めるために 行 った 行 為 が 禊 ぎ 祓 い である 延 喜 式 (927 年 )では 人 死 産 六 畜 死 六 畜 産 および 食 宍 の 五 つを 穢 れと 定 めている なお 六 畜 とは 牛 馬 羊 犬 鶏 豕 をさす ちなみに 禊 につ いては 中 国 に 記 録 がある( 例 え ば 道 教 経 典 黄 素 四 十 四 方 経 ) が 穢 れや 禊 を 法 制 化 しているの は 日 本 独 特 のものである 弥 生 時 代 以 降 には 縄 文 のオソレに 加 えて ケガレ 意 識 が 動 物 塚 建 立 の 動 機 と なる 各 種 の 禁 忌 や 儀 礼 によりケ ガレを 清 め 祟 り 災 厄 神 罰 な どを 防 ぎ 幸 運 を 呼 び 込 もうとす るものである この 日 本 古 来 のオ ソレとケガレの 意 識 に 仏 教 の 殺 生 戒 や 慈 悲 思 想 が 習 合 し 平 安 時 代 からは 神 の 怒 りや 怨 霊 の 祟 りを 鎮 めるための 陰 陽 道 や 神 仏 混 淆 の 修 験 道 などが 習 合 して 動 物 塚 建 立 の 動 機 は 複 雑 になる さらに 道 教 の 神 仙 思 想 や 儒 教 の 祖 霊 信 仰 も 複 雑 に 絡 んでいる 文 献 的 には 播 磨 國 風 土 記 に 犬 墓 建 立 の 記 事 があり 大 鏡 には 犬 の 霊 や 法 事 の 記 事 が 有 る また 飼 い 猫 が 死 んだために 宮 中 の 行 事 が 中 止 に なった 記 録 が 残 されている 動 物 塚 は 生 きた 人 間 のためのものであ り 人 と 死 んだ 動 物 との 介 在 所 と しての 機 能 を 果 たしていると 言 え よう 日 本 人 は 縄 文 の 昔 から 現 代 まで 動 物 塚 をつくり 続 けてきたの である 動 物 塚 の 種 類 動 物 塚 の 系 譜 から 理 解 できるよ うに 動 物 塚 は 三 つカテゴリーに 分 けられる すなわち 1) 人 に 使 LABIO 21 JAN

20 シリーズ 連 載 1 動 物 の 墓 と 慰 霊 碑 われた 動 物 2) 食 用 動 物 3) 神 格 化 された 動 物 のために 建 立 さ れている 日 本 各 地 に 現 存 する 動 物 塚 200 個 所 ( 墓 50 慰 霊 碑 150) を 調 査 し その 墓 碑 銘 や 碑 文 から 動 物 塚 建 立 の 動 機 によって 動 物 塚 を 分 類 すると10 種 に 細 分 でき る 以 下 にそれぞれ 具 体 例 を 挙 げ て 説 明 する 1 神 仏 の 祭 地 あるいは 守 り( 山 の 神 田 の 神 海 神 などの 眷 属 使 命 ) 狐 塚 ( 常 滑 市 晩 台 ) 蛇 之 塚 ( 横 浜 市 旭 区 白 根 ) 亀 塚 大 明 神 ( 御 前 崎 市 御 前 崎 中 原 ) 2 動 物 間 の 愛 情 を 人 への 教 訓 とし て 示 す 孝 行 犬 之 墓 ( 三 島 市 芝 本 町 円 明 寺 ) 孝 行 猿 の 墓 ( 伊 那 市 市 之 瀬 柏 木 ) 3 人 に 対 する 忠 義 への 報 恩 猫 塚 ( 東 京 都 墨 田 区 両 国 回 向 院 ) 狼 塚 ( 山 梨 県 富 士 河 口 湖 町 善 応 寺 ) 4 人 の 使 役 への 報 恩 ( 輸 送 農 耕 軍 事 展 示 スポーツ) 牛 塔 ( 大 津 市 逢 坂 長 安 寺 ) 日 支 事 変 殉 難 軍 馬 之 碑 ( 北 九 州 市 門 司 区 正 蓮 寺 ) ラッコ 慰 霊 碑 ( 豊 橋 市 大 岩 町 豊 橋 総 合 動 植 物 公 園 ) ライスシャワー の 墓 ( 登 別 市 上 鷲 別 町 ユート ピア 牧 場 ) 5 犠 牲 動 物 の 供 養 慰 霊 ( 事 故 実 験 殺 処 分 ) 蝦 蟇 塚 ( 東 京 都 新 宿 区 四 谷 笹 寺 ) 狸 塚 ( 相 生 市 能 下 ) 虫 塚 ( 橿 原 市 久 米 町 久 米 寺 ) 6 食 用 動 物 の 供 養 慰 霊 鯨 三 十 三 本 供 養 塔 ( 熊 野 市 二 木 島 ) 熊 供 養 碑 ( 山 形 県 小 国 町 小 玉 川 ) うなぎ 供 養 碑 ( 柳 川 市 坂 本 町 日 吉 神 社 ) ふぐ 供 養 碑 ( 東 京 都 台 東 区 上 野 公 園 弁 天 堂 ) 7 伝 説 鶴 塚 ( 富 士 吉 田 市 下 吉 田 福 源 寺 ) 鵺 塚 ( 大 阪 市 都 島 区 都 島 本 通 ) 8 平 和 運 動 などのモニュメント 鮪 塚 ( 東 京 都 中 央 区 築 地 中 央 卸 売 市 場 ) 9 ペットの 供 養 慰 霊 愛 犬 トビーの 墓 ( 熱 海 市 上 宿 町 ) 山 猫 めをと 塚 ( 東 京 都 台 東 区 谷 中 永 久 寺 ) 10その 他 せみ 塚 ( 山 形 市 山 寺 立 石 寺 ) 蛙 塚 ( 京 都 府 井 手 町 井 手 ) 墓 に 埋 葬 された 動 物 の 種 類 とし ては ウシ ウマ イヌ ネコ サル オオカミ タヌキ ネズミ クジラ ハクチョウ ツル ガン スズメ ウグイス ウミガメ カニ ヘビ コイなどがあり 慰 霊 ( 供 養 ) された 動 物 の 種 類 としては ウシ ウマ ブタ ヤギ クマ イノシシ ゾウ サル キツネ ネズミ カモ ハト ニワトリ カエル クジラ イルカ フグ アンコウ カツオ マグロ アユ コイ オットセイ トド ラッコ エビ シロアリ クロカメムシ ハチなどがある 安 土 桃 山 時 代 より 以 前 に 建 立 さ れた 動 物 塚 の 多 くが 静 岡 以 西 に 残 っているが これは 都 が 奈 良 京 都 にあったことと 関 係 があるもの と 考 えられる 身 分 の 高 い 人 々は 古 代 から 人 墓 を 建 立 してきたが 一 般 人 が 墓 を 建 立 するようになっ たのは 戦 国 時 代 以 降 のことであ る それも 共 同 墓 地 が 主 体 で 個 人 の 墓 が 建 立 されるようになった のは 江 戸 時 代 以 降 であるから 古 い 時 代 の 動 物 塚 は 身 分 の 高 い 人 々 が 中 心 になって 建 立 したものと 考 えられる 江 戸 時 代 に 建 立 された 鯨 海 豚 海 亀 熊 鹿 猪 馬 牛 などの 塚 が 多 く 現 存 し 昭 和 に なると 実 験 動 物 食 用 動 物 展 示 用 動 物 ペットなどの 塚 が 多 く 建 立 されるようになった 動 物 塚 の 形 式 動 物 塚 の 形 式 としては 土 を 盛 った 土 塚 ( 木 を 植 えることがあ る) 五 輪 塔 宝 塔 宝 篋 印 塔 石 柱 板 ( 石 金 属 ) 像 ( 石 金 属 ) 加 工 度 の 少 ない 自 然 石 な 20 LABIO 21 JAN. 2008

21 どがあり 動物塚に固有の形式と 形式の人墓と動物塚の写真を対比 摂取し あるがままの自然と一体 いうものはなく 同時代の人間の して例示した となって生活してきた そのため 墓や慰霊碑の形式をそのまま踏襲 日本人は縄文の昔から身近な家 人と動物の間に厳しい区別を設け しているのが特徴である 日本の 畜を家族の一員のように考え 扱 ることなく 動物を殺すことに対 典型的な人墓の形式としては 縄 ってきた また 野生動物とも適 して強い抵抗感を堅持し 動物を 文時代の土壙墓 配石墓 弥生時 度な距離を保って共生してきた 殺す時には申し訳ないという気持 代の支石墓 方形周溝墓 古代の 動物塚の形式が 縄文時代から現 ちを抱いてきたのである 前方後円墳 円墳 古代から中世 代まで同時代の人墓の形式と同じ 各種の動物塚の所在地 写真 にかけての五輪塔 宝塔 中世か であることは 日本人の人と動物 塚にまつわる物語などについては らの宝篋印塔 板碑 近世からの との連続的動物観を実証している 拙著 どうぶつのお墓をなぜつく 石柱墓が代表的なものであり 他 と言えよう 日本人は食物として るか 社会評論社 を参照頂き に 卵塔 自然石 石像などがあ 天然の植物 獣 魚介類に恵まれ たい る 図 1 図 10 に そ れ ぞ れ 同 じ 四季を通じてバランス良い食物を 図１ 土壙墓 人墓 左 犬の墓 右 千葉市 縄文時代 図２ 土塚 円墳 新羅三郎義光の墓 左 聖武天皇の牛墓 右 甲賀市 奈良時代 図３ 五輪塔 佐藤信継の墓 左 源義経の愛馬 太夫黒の墓 右 高松市 平安時代 図４ 宝篋印塔 和泉式部の墓 左 猿塚 右 胎内市 平安時代 LABIO 21 JAN

22 シリーズ連載 ① 動物の墓と慰霊碑 図５ 宝塔 慈円の供養塔 左 鶴塚 右 高島市 鎌倉時代 図６ 石柱 上野英三郎の墓 左 猫塚 右 墨田区 江戸時代 図７ 石板 山脇一門解剖供養碑 左 くぢら塚 右 三浦市 江戸時代 図８ 石像 紙治 小春の墓 左 犬猫供養塔 右 墨田区 昭和時代 図９ 自然石 人墓 左 鴨之塚 右 中央区 昭和時代 図 10 洋型墓 人墓 左 ペットの墓 右 大津市 平成時代 22 LABIO 21 JAN. 2008

23 独 立 法 人 理 化 学 研 究 所 ゲノム 科 学 総 合 研 究 センター 上 級 研 究 員 桝 屋 啓 志 MRC Harwell Mammalian Genetics Unit について Medical Research Council (MRC)は 人 類 の 健 康 の 向 上 を 目 的 とした 英 国 の 公 的 機 関 で 大 学 や 医 療 機 関 への 予 算 提 供 を 行 なう 他 英 国 内 に29の 研 究 ユニット と3つの 研 究 所 大 学 と 共 同 で 運 営 する15のセンターを 持 つ MRC Harwellは1947 年 に 放 射 線 生 物 学 の 研 究 ユニットとして 英 国 オックスフォードシャー 州 に 設 立 され 以 後 ヒト 疾 患 とりわけ 癌 治 療 研 究 に 重 要 な 役 割 をはたす マウス 遺 伝 学 のパイオニア 的 役 割 を 担 ってきた 施 設 である この ユニットは 1995 年 にRadiation and Genome Stability Unitと Mammalian Genetics Unitに 分 割 されている 私 は 今 年 (2007 年 ) 8 月 の 約 1ヶ 月 間 共 同 研 究 のた めに Mammalian Genetics Unit でバイオインフォマティクス 研 究 を 行 なっているJohn Hancock のラボに 滞 在 した 本 稿 では Harwellでの 生 活 イギリスの 研 究 ス タ イ ル ま た Mary Lyon Centre の 見 学 についてレポート したいと 思 う Harwell について MRC Harwellは ロ ン ド ン から 電 車 で 約 1 時 間 のDidcot 写 真 1 ラザフォードアップルトン 研 究 所 内 で 建 設 中 の Diamond シンクロトロン という 町 から 車 で15 分 ほどの 造 物 で 近 くを 通 るとその 大 きさ Harwell Science and Innovation に 圧 倒 される この 他 にラザフォ Campus 内 にある ここは 英 国 ードアップルトン 研 究 所 では 世 原 子 力 エネルギー 機 構 (United 界 で 最 も 強 力 なパルス ニュート Kingdom Atomic Energy ロン 加 速 器 ISIS(エジプト 神 話 の Authority: UKAEA), Science and 女 神 の 名 から 命 名 )があり これ Technology Facilities Council を 利 用 した 理 研 ミュオン 施 設 が (STFC) Health Protection ある 今 回 の 滞 在 では この 施 設 Agency (HPA) が 所 有 する260ヘ の 中 田 欣 成 氏 松 田 恭 幸 先 任 研 究 クタールの 敷 地 内 に 英 国 の 国 員 に 滞 在 施 設 や 現 地 での 生 活 で 非 家 および 国 際 プロジェクトを 含 常 にお 世 話 になった む100 近 い 研 究 施 設 が 集 まって MRC Harwellは このラザフ い る Harwell campusをgoogle ォードアップルトン 研 究 所 から mapの 衛 星 画 像 で 見 るとひとき 100mほどのところにある 今 回 わ 目 立 つのが STFC が 運 営 す は 中 田 氏 にお 願 いして Harwell るラザフォードアップルトン 研 campus 内 でMRC Harwellか ら 究 所 内 で 建 設 中 のDiamond シン すぐ 近 くの 宿 泊 施 設 を 確 保 するこ クロトロンだ この 巨 大 なシン とができた 以 前 Mammalian クロトロン 施 設 はサッカーグラ Genetics Unit でポスドクをして ウンドが5つ 入 るほどの 大 きさ おられた 東 京 農 業 大 学 の 吉 川 欣 の 円 形 ( 平 たいドーム 型 )の 建 亮 助 教 授 や 中 田 氏 の 情 報 から LABIO 21 JAN

24 写 真 2 MRC Harwell MRC Harwell 周 辺 では 週 末 に 食 事 をとれる 場 所 がなく 近 くの 町 へのバスの 本 数 もかなり 限 られ ているとのことだったので 国 際 免 許 を 取 得 した しかし 見 知 らぬ 土 地 しかも 外 国 での 車 の 運 転 に 自 信 の 持 てなかった 私 は 趣 味 でもある マウンテンバイクを 日 本 から 持 ち 込 むことにした Harwellキャンパスのホームペー ジから 自 転 車 ユーザーグループの ページにリンクがあり そこにい くつものお 勧 め 自 転 車 コースが 掲 載 されていたことが 後 押 しとなっ て 決 心 した あまり 知 られていないが 海 外 への 自 転 車 の 輸 送 は 意 外 と 簡 単 で ある 各 航 空 会 社 は 大 型 のスポー ツ 用 品 を 無 料 の 預 け 荷 物 として 輸 送 する 枠 を 用 意 しており きちん と 梱 包 すれば 自 転 車 も 問 題 なく 運 んでくれる(ただし やはり 扱 い は 少 々 荒 っぽいようである) 自 転 車 屋 でメーカーから 販 売 店 への 輸 送 に 使 われる 段 ボールを 分 けて いただいて 梱 包 を 行 なった 段 ボ ールは そのままでは 乗 用 車 に 載 せるのが 難 しい 大 きさだと 思 われ たので 自 転 車 はある 程 度 分 解 し て 箱 を 少 々 小 型 にした おかげで 行 き 帰 りの 車 で 困 ることは 無 かっ たが 手 荷 物 スーツケース 自 転 車 の3つを 一 人 で 運 ぶのはさす がに 大 変 だった 幸 い イギリス では 電 車 の 各 駅 に 空 港 にあるよ うなトロイリー( 荷 物 を 運 ぶカー ト)があったのでそれも 最 低 限 で 済 んだのだが そのようなわけで Harwellでの 生 活 は 平 日 は 歩 い てMRCに 通 い 昼 食 はHarwell 内 のちょっとした 売 店 で 夕 食 は ラザフォードアップルトン 研 究 所 の 食 堂 で 取 り 週 末 は 自 転 車 で 周 辺 の 村 の 散 策 または 最 寄 りの Didcot 駅 まで 自 転 車 で 出 て そ こから 電 車 でOxfordやロンドン に 観 光 という 具 合 であった Harwellキャンパスの 周 りは 北 側 は 林 Didcotのある 南 東 方 面 は 広 大 な 小 麦 畑 でまさに 何 も 無 い ところである しかし 自 転 車 で 散 策 してみると 5 10km 間 隔 くらいで 小 さな 村 がある ど の 村 も 中 心 に 小 さな 石 造 りの 教 会 があるのだが これが 見 た 目 から してかなり 古 い どの 教 会 も 入 り 口 に 説 明 書 きがあり それを 読 む と 建 造 が1500 年 代 (!)であ ったりして 国 の 文 化 財 保 存 の 対 象 になっているようであった と にかく それぞれの 村 の 歴 史 がと ても 古 く それが 普 通 の 事 である ことが 分 かる このような 村 々で は 家 屋 の 建 造 や 外 見 の 変 更 はか なり 制 限 されているそうで 教 会 だけでなくそれぞれの 家 が 昔 の 趣 を 残 している ロンドンから 電 車 で1 時 間 の 地 域 で 何 百 年 も 都 会 化 されず 昔 のままの 村 や 自 然 が 残 っていることは 日 本 人 の 私 には とても 不 思 議 だった また 小 さ な 村 でもどこかに 必 ずパブがあっ て 食 事 やビールを 飲 むことがで きる (MRCでも 来 客 があると 近 くの 村 のパブに 食 事 に 連 れて 行 くようだ )この パブ が 村 の コミュニティーの 中 で 重 要 な 役 割 を 担 っていることは 容 易 に 想 像 で きた 土 曜 日 にパブの 前 を 自 転 車 で 通 ると 地 元 の 人 らしきおじさ んたちがテラスで 陽 に 当 たりなが ら 黒 ビールを 飲 んでいる そうい うのを 見 ると つい 自 分 もふらっ と 立 ち 寄 ってビールを 飲 みたくな る イギリスでの 研 究 スタイル MRCに1ヶ 月 滞 在 して 驚 いた のは 日 々の 研 究 スタイルであ る 話 には 聞 いていたが 研 究 者 が5 時 にみんな 帰 宅 してしまうと 言 うは 本 当 と 言 うか 実 際 はもっ と 早 く これは 大 変 なカルチャー ショックだった 私 がお 世 話 にな ったのはバイオインフォマティク スのラボだったためということも あると 思 うが 4 時 を 過 ぎた 頃 か ら 一 人 また 一 人 と 帰 宅 しはじめ 5 時 にはほぼ 全 員 がいなくなって しまった 日 本 の 感 覚 なら 勤 務 時 間 は4 時 までなの?と 言 いたく なる さらに 驚 いたのは 金 曜 日 で さらに1 時 間 帰 宅 の 時 間 が 早 ま り 4 時 にはみんないなくなって しまうのだ 実 験 をやっている 研 究 者 はさすがにそうはいかないと 思 うのだが 私 が 滞 在 している 間 数 度 に 渡 って 守 衛 の 方 から 午 後 7 時 以 降 も 仕 事 をする 人 は 必 ず 事 前 に 守 衛 まで 連 絡 するように とのメールが 回 っていたので お 24 LABIO 21 JAN. 2008

25 そらく6 時 ころには 殆 どのスタッ フが 研 究 所 からいなくなっている のだと 思 われる このような 研 究 スタイルで 業 績 をどんどん 出 して いることが 不 思 議 ではあったが 勤 務 時 間 中 はかなり 集 中 している ようであった また 研 究 以 外 の 雑 用 も 日 本 に 比 べれば 少 ないよう だったし 全 体 のシステムも 効 率 化 されているようだった 例 えば 試 薬 等 の 物 品 の 購 入 も 研 究 所 全 体 でオンライン 化 されていて 手 続 き 等 は 最 低 限 になっているとのこ とだった 私 はと 言 えば 5 時 以 降 は 研 究 所 にいられないので 夕 食 を 取 ったあと 宿 泊 施 設 で 夜 ま で 仕 事 をしていた ちなみに ス ペイン 出 身 のポスドクの 話 では 彼 らも 母 国 では 午 後 10 時 まで 仕 事 をしていたとのことだった ヨ ーロッパでも 国 によりまちまちの ようである 写 真 3 Harwell の 隣 の 村 East Hendred の 古 い 教 会 Mary Lyon Centre 見 学 Mary Lyon Centre(MLC)は 英 国 のマウスFunctional genetics を 支 えるマウス 飼 育 および 表 現 型 解 析 のセンターとして2004 年 にMRC Harwell 内 に かのMary Lyon 先 生 ( 廊 下 で 何 度 かすれ 違 うことがあった)の 名 を 冠 して 設 立 された 施 設 である この 施 設 は マウス 供 給 維 持 管 理 の 他 に 遺 伝 子 改 変 サービス ENU ミュータジェネシス 基 礎 表 現 型 解 析 マウス 血 清 生 化 学 解 析 病 理 学 解 析 など 様 々なサ ービスをマウスを 解 析 するコミ ュニティーに 供 給 する 内 部 の 施 設 は 近 代 ( 未 来 ) 的 で ネッ トワークが 完 備 されており 各 マウスの 飼 育 状 況 と 表 現 型 の 解 析 結 果 が MLCの 開 発 した 動 物 管 理 データベースシステム(い わ ゆ るLaboratory Information Management System : LIMS)で ある AnonyMus によって 管 理 されている 各 研 究 者 は 研 究 室 から AnonyMusをチェックす ることで 自 分 のマウスの 状 況 を 確 認 できるようになっている マ イクロベント( 個 別 換 気 ) 方 式 のケージ 内 には マウスの 行 動 を 安 定 させると 考 えられている 紙 製 の 筒 が 置 かれていた ケー ジ 交 換 はドラフト 内 で 行 なうが AnonyMusへの 飼 育 状 況 登 録 も 同 時 に 行 なうため ドラフトには コンピュータのモニタと 操 作 用 の キーボード 等 が 据 え 付 けられてい る 印 象 的 だったのは 部 屋 の 構 成 で MLC 内 には 体 育 館 とまでは いかないが かなり 大 きめの 飼 育 室 が4つあり そこでマウスの 生 産 を 行 なっているようだった そ の 周 りに 日 本 の 飼 育 施 設 でよく 見 るくらいの 大 きさ(といっても 少 し 大 きめ)の 飼 育 室 が 並 んでおり 各 研 究 者 はそこに 解 析 装 置 を 設 置 して マウスの 供 給 を 受 けると 同 時 に その 解 析 を 行 なっている このような 構 造 は マイクロベン ト 方 式 のメリットを 最 大 化 し 特 殊 なドラフトやコンピュータ 機 器 を 必 要 とするマウスのデータベー ス 管 理 のコストを 最 小 化 している ように 見 える まさに これから の マウス 飼 育 / 解 析 施 設 である と 感 じた おわりに MRC Harwellの 滞 在 では マ ウス 表 現 型 の 解 析 手 法 のデータベ ース 化 を 行 なうための 第 1 歩 であ るデータ 記 述 のファイル 形 式 を 設 計 することができた これは ヨ ーロッパのコミュニティー ひい ては 世 界 での 標 準 データ 形 式 に なると 見 込 まれ 大 変 有 意 義 なイ ギリス 滞 在 となった この 場 を お 借 りして 共 同 研 究 を 進 める 上 でお 世 話 になった MRC MRC Harwell Mammalian Genetics UnitのSteve Brown John Hancock Ann-marie Mallon Andy Blake MLCを 案 内 してく れたPat Nolanまた 日 々の 生 活 の 面 でお 世 話 になった 理 研 RAL の 中 田 欣 成 氏 松 田 恭 幸 先 任 研 究 員 MRC Harwellポスドクの 李 玲 華 さん いろいろ 情 報 をいただ いた 東 京 農 業 大 学 の 吉 川 欣 亮 助 教 授 また MRC 滞 在 の 機 会 を 与 えて 下 さった 理 研 GSCの 若 菜 茂 晴 チームリーダー 城 石 俊 彦 プロ ジェクトディレクターに 深 く 感 謝 いたします LABIO 21 JAN

26 Part 1 わが 国 のマウス ラット 動 物 実 験 施 設 の 微 生 物 汚 染 の 現 状 ( 財 ) 実 験 動 物 中 央 研 究 所 ICLAS モニタリングセンター 部 長 : 高 倉 彰 はじめに 私 が 実 験 動 物 の 感 染 症 検 査 業 務 に 就 いた 今 から 約 30 年 前 動 物 実 験 関 係 者 の 感 染 症 コントロール に 対 する 意 識 は 今 に 比 べ それ 程 高 いものではなかった そのため 動 物 実 験 施 設 から 依 頼 されるマ ウス ラットの 検 査 においては Sendai virus (SV) Mycoplasma pulmonis (Mp)やmouse hepatitis virus(mhv)を 始 め 多 くの 微 生 物 が 陽 性 となった その 後 1980 年 代 のGLPの 導 入 微 生 物 モニ タリング 項 目 に 関 する 調 査 研 究 文 部 省 特 定 研 究 (1): 実 験 動 物 の 品 質 基 準 の 作 成 および 検 査 方 法 の 確 立 に 関 する 研 究 ( 研 究 代 表 者 野 村 達 次 ) の 実 施 や( 社 ) 日 本 実 験 動 物 協 会 から 日 動 協 メニュー が 提 示 されるなど 微 生 物 学 的 な 品 質 管 理 の 近 代 化 の 流 れが 起 き た その 過 程 の 中 で 高 い 感 染 防 御 機 能 を 持 つ 飼 育 装 置 の 開 発 実 用 化 が 進 むとともに 動 物 実 験 関 係 者 の 意 識 も 向 上 し 現 在 ではマ ウス ラットに 致 死 的 な 病 原 体 の 汚 染 率 は 激 減 した 一 方 において 緑 膿 菌 などの 日 和 見 病 原 体 は 依 然 高 い 汚 染 率 を 示 しており 今 後 は これら 病 原 体 の 免 疫 不 全 動 物 や 遺 伝 子 改 変 技 術 により 作 出 された 新 しい 疾 患 モデル 動 物 を 用 いた 動 物 実 験 への 影 響 の 検 討 など 新 しい 微 生 物 管 理 を 模 索 すべき 時 期 なの かも 知 れない そこで 本 誌 上 をお 借 りして わ が 国 のマウス ラット 動 物 実 験 施 設 における 微 生 物 汚 染 の 現 状 を 紹 介 するとともに 今 後 の 微 生 物 管 理 体 制 における 問 題 点 を 私 なりに 考 えてみたい わが 国 の 動 物 実 験 施 設 の 微 生 物 汚 染 の 現 状 表 1および2に ICLASモニタ リングセンターにおいて2006 年 に 実 施 したわが 国 のマウス ラッ ト 動 物 実 験 施 設 のおける 微 生 物 検 査 結 果 を 示 した 製 薬 会 社 と 大 学 研 究 所 の 結 果 を 分 けて 示 している 理 由 は 各 々の 実 験 目 的 施 設 管 理 法 が 異 なるためである まず 細 菌 ついて 見 てみると SV やMHVとともに 動 物 実 験 施 設 の 3 大 汚 染 微 生 物 といわれ 特 に 大 学 等 の 施 設 では30% 前 後 の 高 い 汚 染 率 を 示 していたMpは マ ウス 施 設 では 製 薬 会 社 大 学 研 究 所 とも1% 以 下 ラット 施 設 では 大 学 研 究 所 においても 3% 以 下 に 激 減 している それ に 対 し 病 原 性 が 弱 いPasturella pneumotropica (Pp)や 日 和 見 病 原 体 であるStaphylococcus aureus (Sa) やPseudomonas aeruginosa (Pa)が 高 い 検 出 率 を 示 している またHelicobacter hepaticus CAR バチルスやPneumocystis carinii (Pc)などの 新 興 病 原 体 も 検 出 され ている つぎにウイルスでは マウス 施 設 でSVとMHV ラット 施 設 で SDAVとSVが 検 出 されている しかしその 検 出 率 は 各 病 原 体 と も 低 値 であった 特 に10 年 前 ま ではマウス 動 物 実 験 施 設 で10 20%の 検 出 率 を 示 していたMHV 汚 染 も3% 以 下 に 激 減 している 一 方 寄 生 虫 の 汚 染 率 は ここ 数 年 増 加 傾 向 にある 特 に 消 化 管 内 原 虫 の 大 学 研 究 所 のマウスにお ける 汚 染 率 は10 数 年 前 は10% 以 下 であったのに 対 し 最 近 は15% 前 後 の 汚 染 率 で 推 移 している 以 上 のようにわが 国 のマウス ラット 動 物 実 験 施 設 においては マウス ラットに 致 死 的 あるいは 動 物 実 験 成 績 に 重 大 な 影 響 を 与 え る 病 原 性 の 強 い 病 原 体 による 汚 染 はほとんどなくなり 現 状 の 微 生 物 汚 染 の 主 体 は PpやPaなど 日 和 見 病 原 体 や 寄 生 虫 等 の 弱 病 原 性 26 LABIO 21 JAN. 2008

27 微 生 物 ということが 分 かる 現 状 の 微 生 物 汚 染 への 対 応 以 上 のように わが 国 のマウス ラット 動 物 実 験 施 設 では 病 原 性 の 強 い 微 生 物 による 汚 染 が 激 減 し ている しかしこれら 微 生 物 感 染 の 危 険 性 は 常 にあることを 念 頭 において 施 設 管 理 をしていくこと は 言 うまでもない つぎに 現 状 の 動 物 実 験 施 設 に おける 汚 染 微 生 物 の 主 体 である PpやPaなど 日 和 見 病 原 体 への 対 応 を 考 えてみたい まず 免 疫 学 的 に 正 常 動 物 な 動 物 にこれらは 微 生 物 の 感 染 が 起 きたとしても 発 病 する 恐 れはなく 実 験 成 績 への 影 響 もない したがって 感 染 が 起 きても 実 験 の 中 止 や 動 物 の 淘 汰 や 飼 育 室 の 消 毒 の 必 要 はなく 実 験 終 了 時 に 感 染 に 対 する 対 応 を 考 えれば 良 い しかし 免 疫 不 全 動 物 に 対 しての 対 応 は 異 なる たとえ ば PpやPaをscidやNOD-scid マウスに 実 験 的 に 感 染 させると 肺 炎 や 菌 血 症 を 発 症 し Ppは NOD-scidを 約 5 週 間 で 死 亡 させ る またPcがnudeマウスに 感 染 すると 約 3 ヶ 月 で 発 症 し 約 6 ヶ 月 で 肺 炎 にて 死 亡 する このよ うなことから これらは 免 疫 不 全 動 物 の 飼 育 環 境 から 排 除 すべきで あると 言 え 常 にモニタリングの 項 目 として 監 視 すべき 微 生 物 であ る 寄 生 虫 感 染 の 増 加 の 原 因 である が 原 因 のひとつとして 遺 伝 子 改 変 マウスの 出 現 とこれらマウスの 施 設 間 交 流 の 増 加 が 考 えられる 実 験 操 作 飼 育 のやり 易 さから 仕 方 ないことではあると 思 うが こ れら 動 物 の 作 出 が 寄 生 虫 の 汚 染 率 が 高 いConv. 由 来 のマウスを 用 い て 行 なわれることが 多 かったこ と そしてそれらが 各 施 設 におい て 使 用 されることが 多 くなり 汚 染 率 が 増 加 したと 考 えられる こ れら 寄 生 虫 の 多 くは 非 病 原 性 であ り 感 染 していても 実 験 成 績 に 大 きな 影 響 を 与 えることはない し かし 寄 生 虫 汚 染 施 設 と 非 汚 染 施 設 の 他 病 原 体 の 汚 染 率 を 比 較 してみ ると 汚 染 施 設 の 方 が 汚 染 項 目 数 が 多 く 汚 染 率 も 高 い 傾 向 にあ る このことは 寄 生 虫 は 施 設 の 汚 染 状 況 の 指 標 として 検 査 する 意 義 があることを 示 している 細 菌 :マウス 表 1.わが 国 の 動 物 実 験 施 設 の 微 生 物 モニタリング 成 績 :2006 年 陽 性 項 目 カテゴリー 製 薬 会 社 大 学 研 究 所 Pasteurella pneumotropica C 4/319* ( 1.3%) 135/1,522 ( 8.9%) Mycoplasama pulmonis B 4/673 ( 0.6%) 10/1,719 ( 0.6%) Helicobacter hepaticus C 7/160 ( 4.4%) 21/466 ( 4.5%) Pseudomonas aeruginosa D 10/76 (13.2%) 26/430 ( 6.0%) Staphylococcus aureus D 7/160 ( 4.4%) 30/143 (21.0%) Pnumocystis carinii (B) 6/50 (12.0%) 2/82 ( 2.4%) 細 菌 :ラット 陽 性 項 目 カテゴリー 製 薬 会 社 大 学 研 究 所 Pasteurella pneumotropica C 9/140* ( 6.4%) 8/144 ( 5.6%) Mycoplasama pulmonis B 6/384 ( 1.6%) 6/220 ( 2.7%) Clostridium piliforme C 1/384 ( 0.3%) 4/220 ( 1.8%) Pseudomonas aeruginosa D 1/30 ( 3.3%) 4/32 (12.5%) Staphylococcus aureus D 5/7 (71.4%) 8/11 (72.7%) CAR bacillus C 2/29 ( 6.9%) 1/220 ( 0.4%) Pnumocystis carinii (B) 1/14 ( 7.1%) LABIO 21 JAN

28 おわりに わが 国 の 動 物 実 験 施 設 の 微 生 物 汚 染 の 状 況 は マウス ラットを 死 亡 させる 恐 れがある 病 原 性 の 強 い 微 生 物 汚 染 は 減 少 している ことを 紹 介 した これらの 微 生 物 汚 染 が 減 少 したことは 3Rの ReductionやRefinementの 考 え にも 合 致 するものであり また 安 全 に 動 物 実 験 行 なう 環 境 が 整 備 さ れたということである ただ 現 状 のような 微 生 物 学 的 環 境 整 備 に 尽 力 された 先 輩 諸 氏 の 努 力 を 忘 れてはならないことを 敢 えて 記 し ておきたい つぎに 免 疫 不 全 動 物 には 病 原 性 があり 正 常 動 物 には 非 病 原 性 で ある 日 和 見 病 原 体 等 が 汚 染 微 生 物 の 主 体 である 現 状 への 対 応 とし て 従 来 の 画 一 的 な 検 査 項 目 によ る 施 設 の 微 生 物 管 理 を 対 免 疫 不 全 と 正 常 動 物 の 検 査 項 目 に 区 別 す る 必 要 があるのかも 知 れない つ まりこれら 微 生 物 を 免 疫 不 全 の 通 常 検 査 項 目 に 加 え 正 常 動 物 の 検 査 項 目 からは 除 外 した 管 理 体 制 に することである 最 後 に 近 年 の 実 験 動 物 を 取 り 巻 く 環 境 は 急 速 に 変 化 している たとえば 過 去 感 染 症 と 格 闘 した 先 輩 達 の 退 職 そして 理 工 学 系 など 従 来 実 験 動 物 とは 無 縁 であった 分 野 の 研 究 者 の 参 入 などがあげられ る このような 状 況 において 危 惧 されるのは 感 染 症 の 恐 ろしさを 知 らない 研 究 者 飼 育 管 理 者 が 増 加 することである 将 来 の 実 験 動 物 の 新 しいエネルギーとなる 彼 ら に 実 験 動 物 の 感 染 症 対 策 はどん な 時 代 においても 不 可 欠 であり 動 物 福 祉 の 面 においても 重 要 であ ることを 繰 り 返 し 伝 えていくが 不 可 欠 であると 考 える 次 第 であ る ウイルス:マウス 表 2.わが 国 の 動 物 実 験 施 設 の 微 生 物 モニタリング 成 績 :2006 年 陽 性 項 目 カテゴリー 製 薬 会 社 大 学 研 究 所 Sendai virus B 3/1,719 ( 0.2%) MHV B 19/673 ( 2.8%) 47/1,719 ( 2.7%) ウイルス:ラット 陽 性 項 目 カテゴリー 製 薬 会 社 大 学 研 究 所 SDA virus C 3/384 ( 0.8%) Sendai virus B 1/384 ( 0.3%) * 陽 性 施 設 数 / 検 査 施 設 数 寄 生 虫 他 :マウス 陽 性 項 目 カテゴリー 製 薬 会 社 大 学 研 究 所 ネズミ 大 腸 蟯 虫 C 37/1,333 ( 2.8%) ネズミ 盲 腸 蟯 虫 E 30/1,333 ( 2.3%) 消 化 管 内 原 虫 C, E 7/216 ( 3.2%) 206/1,333 (15.5%) 外 部 寄 生 虫 C 5/1,333 ( 0.4%) 寄 生 虫 他 :ラット 陽 性 項 目 カテゴリー 製 薬 会 社 大 学 研 究 所 ネズミ 盲 腸 蟯 虫 E 21/118 (11.2%) 消 化 管 内 原 虫 C, E 12/118 (10.2%) * 陽 性 施 設 数 / 検 査 施 設 数 28 LABIO 21 JAN. 2008

29 Part ~ 2006 年 のマウスとラットの 微 生 物 モニタリングにおける 陽 性 率 特 にSPFとSPF 以 外 との 比 較 岡 島 泰 夫 1) 齋 藤 學 1,2) 久 保 村 華 子 1) 1) 株 式 会 社 メルシャンクリンテック 環 境 検 査 センター 2)NPO 法 人 バイオメディカル サイエンス 研 究 会 背 景 目 的 著 者 らは 標 記 の 陽 性 率 を 要 望 に 1) 応 じ 施 設 へ 出 向 くか 或 は 誌 上 や 学 会 等 2~5) で 報 告 してきた 今 回 最 近 5 年 間 の 陽 性 率 を 集 計 し た 更 に SPFとSPF 以 外 別 に 陽 性 率 を 比 較 検 討 したので 報 告 する 材 料 方 法 2002 年 1 月 か ら2006 年 12 月 に かけて 全 国 から2,217 件 の 検 査 依 頼 を 受 けた 検 査 匹 数 の 合 計 はマウスが27,601 匹 ラットが 8,584 匹 であった 検 査 対 象 施 設 は 大 学 が 最 も 多 く 次 いで 製 薬 企 業 研 究 機 関 生 産 者 ヒトの 病 院 等 の 順 である 検 査 は 動 物 引 取 りが 主 体 で 中 には 糞 血 清 スワブ 等 の 搬 入 検 体 が 含 まれ ている 検 査 方 法 は 培 養 血 清 反 応 鏡 検 PCR 法 を 用 いた 必 要 に 応 じ16SrDNA 塩 基 配 列 に 基 づ く 系 統 分 類 DNA-DNA hybridization AFLP (Amplified fragment length polymorphism) 分 析 を 行 った SPFは 検 査 依 頼 動 物 リストにSPFと 明 記 された 動 物 である SPF 以 外 は 同 リストに Conventionalと 記 載 さ れ た 動 物 と SPFとの 明 記 がなかった 動 物 も 含 まれる 結 果 陽 性 率 はマウスでStaphylococcus aureusが 約 20% 弱 Entamoeba muris が10% 台 前 半 以 下 Pasteurella pneumotropica MHV Octomitus intestinalis Pseudomonas aeruginosa Mycoplasma spp.( 培 養 )が 一 桁 台 前 半 Pneumocystis carinii Helicobacter hepaticus Mycoplasma pulmonis( 血 清 ) Pinworms Tritrichomonas muris Myocoptes musculinusが1% 以 下 Clostridium piliforme HVJ が0.1% 以 下 の 順 であった ラッ ト で はS. aureusが70% 台 以 下 P. pneumotropicaが 一 桁 台 中 半 E. muris T. muris Pinworms P. aeruginosa Myco. spp.( 培 養 ) O. intestinalisが1 桁 台 前 半 M. pulmonis( 血 清 ) CAR bacillus C. piliformeが1% 以 下 SDAV HVJ が0.1% 以 下 の 順 であった 陽 性 率 についてSPFとSPF 以 外 を 比 較 すると マウスはM. musculinus Myco.( 培 養 血 清 ) P. cariniiだけがspf 以 外 のみで 陽 性 であった MHV H. hepaticus Pinworms P. pneumotropica T. murisはspfよ りSPF 以 外 が 比 較 値 で 約 3~30 倍 高 く 逆 にP. aeruginosa E. murisはspf 以 外 よ りSPFが 陽 性 率 で 約 2 倍 高 かった ラットではMyco.( 培 養 血 清 ) SDAV HVJだけがSPF 以 外 のみ で 陽 性 であった P. aeruginosa P. pneumotropica C. piliformeは SPFよりSPF 以 外 が 比 較 値 で1 倍 半 ~5 倍 高 く 逆 にE.muris O. intestinalis T. murisはspf 以 外 よ りSPFが 陽 性 率 で2~ 約 14 倍 高 か った ( 表 1 2 参 照 ) 総 括 考 察 陽 性 率 はS. aureus がマウスで 約 20% 弱 ラットで70% 台 と 共 に 最 高 で マウスよりラットで 格 段 に 高 かった 集 計 方 法 は 異 なる が 高 倉 (2000) 6) はラットで 日 動 協 (2005) 7) はマウスとラット で 同 様 の 記 載 をしている 陽 性 の 全 項 目 を 表 1 2に 集 約 した 匹 数 で 集 計 した 理 由 は 施 設 と いう 言 葉 が 依 頼 者 の 機 関 名 と 動 物 用 建 築 物 の 両 方 に 使 用 される 事 機 関 が 単 一 名 称 の 敷 地 内 にある 動 物 用 建 物 数 が 一 つとは 限 らず LABIO 21 JAN

30 表 1 マウスにおける 陽 性 項 目 と 陽 性 率 および 比 較 値 集 計 期 間 :2002 年 1 月 ~ 2006 年 12 月 動 物 の 区 分 SPFとSPF 以 外 SPF SPF 以 外 比 較 値 注 ) 検 査 匹 数 の 計 27,601 13,803 13,798 ( 倍 ) 陽 性 項 目 陽 性 数 / 検 査 数 陽 性 率 (%) 陽 性 数 / 検 査 数 陽 性 率 (%) 陽 性 数 / 検 査 数 陽 性 率 (%) Myocoptes musculinus 8/6, /2, /4, ***** Mycoplasma spp.( 培 養 ) 186/17, /7, /9, ***** Mycoplasma pulmonis( 血 清 ) 166/18, /9, /9, ***** Pneumocystis carinii 3/ / / ***** Mouse hepatitis virus(mhv) 456/19, /9, /10, Helicobacter hepaticus 105/11, /5, /6, Pinworms 152/19, /9, /9, Pasteurella pneumotropica 631/25, /12, /12, Tritrichomonas muris 124/19, /9, /9, Clostridium piliforme 4/18, /9, /9, Sendai virus(hvj) 2/18, /9, /9, Staphylococcus aureus 2,235/12, /5, ,308/7, Octomitus intestinalis 310/19, /9, /9, Pseudomonas aeruginosa 215/17, /8, /9, Entamoeba muris 2,378/19, ,626/9, /9, 注 )SPF 以 外 における 陽 性 率 SPF における 陽 性 率 の 値 : 陽 性 率 は SPF 以 外 が SPF の 何 倍 であるかを 示 す 表 2 ラットにおける 陽 性 項 目 と 陽 性 率 および 比 較 値 集 計 期 間 :2002 年 1 月 ~ 2006 年 12 月 動 物 の 区 分 SPFとSPF 以 外 SPF SPF 以 外 比 較 値 注 ) 検 査 匹 数 の 計 8,584 6,053 2,531 ( 倍 ) 陽 性 項 目 陽 性 数 / 検 査 数 陽 性 率 (%) 陽 性 数 / 検 査 数 陽 性 率 (%) 陽 性 数 / 検 査 数 陽 性 率 (%) Mycoplasma spp.( 培 養 ) 70/4, /2, /1, ***** Mycoplasma pulmonis( 血 清 ) 46/4, /3, /1, ***** Sialodacryoadenitis virus(sdav) 3/4, /3, /1, ***** Sendai virus(hvj) 3/5, /3, /1, ***** Pseudomonas aeruginosa 53/2, /1, /1, Pasteurella pneumotropica 415/8, /5, /2, Clostridium piliforme 17/4, /3, /1, Staphylococcus aureus 1,699/2, /1, /1, Pinworms 93/4, /3, /1, Entamoeba muris 105/4, /2, /1, Octomitus intestinalis 62/4, /2, /1, Tritrichomonas muris 92/4, /2, /1, CAR bacillus 1/ / / 注 )SPF 以 外 における 陽 性 率 SPF における 陽 性 率 の 値 : 陽 性 率 は SPF 以 外 が SPF の 何 倍 であるかを 示 す また 多 様 な 事 動 物 用 でない 別 の 建 物 内 にも 動 物 の 母 集 団 が 存 在 す る 事 微 生 物 統 御 上 ハードとソフ ト 別 で 母 集 団 が 複 数 になる 事 一 母 集 団 が 陽 性 でその 機 関 が 陽 性 集 計 される 場 合 該 当 機 関 内 の 他 の 母 集 団 も 結 果 において 陽 性 解 釈 な のか 如 何 なる 手 段 が 集 計 可 能 で 適 切 なのか 問 題 が 残 る 結 局 確 実 に 把 握 出 来 た 検 査 した 動 物 の 種 類 と 数 とリスト 上 の 記 載 を 用 いて 集 計 した マウスはM. musculinus Myco. ( 培 養 血 清 ) P. carinii が ラ ットはMyco.( 培 養 血 清 ) 30 LABIO 21 JAN. 2008