Japanese Journal of Transfusion Medicine, Vol. 38. No. 3 38 (3): 408-416, 1992 LEUKOCYTE DEPLETION OF HTLV-I CARRIER RED CELL CONCENTRATES BY FILTERS -The Viral Infectivity of Residual Leukocytes in the Filtered Red Cell Concentrates- Masatomo Kobayashi, Misako Yano, Ku-Won Kwon, Tsuneo A. Takahashi, Hisami Ikeda and Sadayoshi Sekiguchi Hokkaido Red Cross Blood Center Transfusion-associated infection of HTLV-I or CMV is mediated by the leukocytes in blood products. To know whether the leukocyte depletion by the filters could reduce or prevent the transmission of the viruses carried in leukocytes, we had filtered HTLV-I positive red cell concentrate (RCC)by Sepacell R-500 and examined the HTLV-I proviral DNA and infectivity of the residual leukocytes in the filtrates. We used the polymerase chain reaction (PCR)to detect proviral DNA with the primer for px region of HTLV-I. HTLV-I specific DNA was confirmed in 2 cases out of 5 filtered samples. To investigate HTLV-I infectivity in vitro of these residual leukocytes, we used the syncytium induction assay in which HTLV-I infected leukocytes from carrier donors were cocultivated with the human epidermoid cancer cells (ME-180). We filtered 7 HTLV-I positive RCCs. Only in one case of 7 filter-passed leukocytes, we detected HTLV-I proviral DNA but no significant increased syncytium formation was observed in any case. The morphological damage of the cellular organella in the residual leukocytes was observed. These findings indicate that, although leukocyte depletion is insufficient for complete removal of HTLV-I from seropositive blood, the filtration may contribute to the prevention of HTLV-I transmission by cell damage during filtration and subsequent reduction of cell to cell contact.

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日本 輸 血学 会 雑 誌 第38巻 第3号 411 表1フ *プ 3. 4x ラ イ マ ー: 1010 104 109 103 ィル タ-処 理 前 後 の 白 血 球 とPCR px 108 102 表2 107 106 105 101 100 10-1 図1HTLV-IPCR検 フ ィル タ-処 理 前 後 の syncytium 1) 106個 の リン パ 球 を 添 加 培 養 した 場 合 出感 度 形 成 比 とPCR #vs##p<0, 2) 105個 の リン パ 球 を 添 加 培 養 した 場 合 *ブ N. T.: No-12345 フ ィ ル タ-処 理 前 Not 001 プ イ マ ー; px tested 有 意 に 低 下 し て い た (p<0. 001). 一 方, PCR法 で は フ ィル タ ー処 理 前 の サ ン プ ル フ ィ ル タ-処 理 後 す べ て 陽 性 と な り, 処 理 後 は 検 体No. 7が 陽 性 を 示 し た. (4) フ ィル タ ー処 理 前 後 の リン パ球 サ ブ セ ッ ト 比 リ ン パ 球 の サ プ セ ッ ト比CD8+/CD3+, CEMMT-2 図2フ ィル タ ー処理 前 後 の 白血 球 中 の プ ロウ イル ス DNA検 出 (PCR法) CEM: 陰 性 コ ン ト ロ-ル, MT-2: 陽性 コン トロー CD3+は 濾 過 前 後 で ほ とん ど差 が み られ な か った (図3). CD4+/CD8+は フ ィ ル タ ー 処 理 細 胞 のinvitro感 あ ら た に7検 体 のHTLV-Iキ 染 性評価 比 と プ ロ ウ イ ル スDNAの 検 体NO. syncytium形 6, No. の 結 果 を 示 し た (表2). タ-処 成 存 在 を 同 時 に比 較 し 7の フ ィ ル タ ー 処 理 前 の 成 比 は そ れ ぞ れ7. 5, 27. 5で あ っ た の に 対 し, 処 理 後 は1-1, 1. 2ま で 低 下 し, 他 も 同 様 い ず れ の 場 合 も, 理 後 は 処 理 前 に 比 べ, syncytium形 Bリ 同 様 の 傾 向 で, Tリ ン パ球 に比 べ ン パ 球 が フ ィル タ ー に 捕 獲 さ れ や す い 結 果 が 得 ら れ た. ャ リ アRCCの 濾 過 を 行 い, 濾 過 前 後 の 白 血 球 のsyncytium形 た. フ ィル タ ー に よ りや や 除 か れ や す い 結 果 が 得 ら れ た. CD3+/sIg+も (3) フ ィル タ ー 処 理 前 に 比 べ 処 理 後 で 増 加 の 傾 向 に あ り, CD8+が ル CD4+/ し か し, い ず れ の場 合 も統 計 的 に有 意 な 差 は み ら れ な か っ た. (5) フ ィ ル タ ー 処 理 前 後 の 白血 球 生 存 率 健 常 人RCCの フ ィル タ ー 処 理 前 後 の 白 血 球 の 生 存 率 をFDA/EB法18) 養 後 の2回 検 討 し た. フ ィル タ ー 未 処 理 白 血 球 も, 成比 が 同 様 に 培 養 し た. に よ り処 理 直 後 と 一 晩 培 一 晩 培 養 の 場 合 の フ ィル フ ィル タ ー処 理 後 の もの と

412 Japanese 図3フ フィルタ-処 里前 フ ィル タ-処 理後 Journal of Transfusion Medicine, Vol. 38. No. 3 ィル タ ー 処 理 前 後 の リ ン パ 球 サ ブ セ ッ ト比 (健 常 人RCC) フィルタ-処理 直後 -晩培養後 #p<0-01 mean±s. 図4フ *p<0. フ ィル タ-処 理 前 フ ィル タ-処 理 後 05 D. (n=4) ィル タ-処 理 前 後 の 白 血 球 生 存 率 (健 常 人 RCC) 図5フ ィル タ ー処 理 前後 の リンパ球 の電 子 顕 微鏡 像 (健 常 人RCC) フ ィ ル タ ー 処 理 直 後 の 白 血 球 生 存 率 は, で87. 1±7 6%で あ っ た が, 処 理 後 は17-0±14. ま で 低 下 し た. 同 様 に, 62. 1±16-6%だ っ た も の が, と な っ た. 0% 一 晩 培 養 後 で も処 理 前 で い ず れ の 場 合 も フ ィ ル タ ー 処 理 後 は, (図4). フ ィ ル タ ー 未 処 理 リ ン パ 球, 理 リ ン パ 球, N: 核, C: NM: ン ド リア, CM: Bの 核 膜, B: フ ィル ター処 一部 拡 大 Ch: ク ロ マ チ ン, M: ミ トコ 細胞膜 後 は, 3. 0 105 3-5 106個 の 白血 球 が 回 収 され た (結 果 は表 示 せ ず) が, HTLV 1抗 原検 出前 に 細 胞 は す べ て 死 滅 し, 抗 原 陽 性 細 胞 が存 在 す る の フ ィ ル タ ー 処 理 前 後 の リ ン パ 球 のHTLV- か 否 か 確 認 不 能 で あ った. I抗 原 誘 導 フ ィル タ ー 処 理 前 の リ ン パ 球 で は0.3 5. HTLV-I抗 A: 処 理 後 は7 5±8-8% 処 理 前 に比 べ て有 意 に生 存 率 が 低 下 した (6) 処理前 原 陽 性 細 胞 が 検 出 さ れ た (表3). 2%の 処理 (7) フ ィル タ ー処 理 前 後 の 白血 球 の形 態 フ ィル タ ー 処 理 前 後 の細 胞 を 透 過 型 電 子 顕 微 鏡

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