Agilent BioHPLC HPLC/UHPLC /

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はじめに 液体クロマトグラフィーには 表面多孔質粒子の LC カラムが広く使用されています これらのカラムは全多孔質粒子カラムの同等製品と比べて 低圧で高効率です これは主に 物質移動距離がより短く カラムに充填されている粒子のサイズ分布がきわめて狭いためです カラムの効率が高いほど 分析を高速化で

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バイアル新規ユーザー様限定 ガラス製容器 -Si-O H シラノール -Si-O H -Si O -Si イオン的吸着 疎水的吸着シロキサン logp pka + N 塩基性化合物 疎水的吸着 水溶液 P P 製容器, 7,7

LC LC ACQUITY UPLC H-Class ACQUITY UPLC CSH C mm 1.7 µm : THF/ 2/8 A 1 mm / 4/6 THF 2 mg/ml THF/ 2 THF 2 ACQUITY UPLC CSH C 18

(DHA) µg/ml 2,3 4 DHA AOAC DHA C UVDHA 22 nm ph nm 5 AOAC UV UV HPLC Milli Q (Millipore Elix 1 ) Lab-Scan ( ) Fluka () o-

Agilent A-Line セーフティキャップ : 溶媒蒸発の抑制 技術概要 はじめに HPLC および UHPLC システムの移動相は 独特なキャップ付きの溶媒ボトルで通常提供されます ( 図 1) 溶媒ラインは移動相から始まり ボトルキャップを通った後 LC システムに接続されます 溶媒ボトル

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レイアウト 1

Agilent OpenLAB CDS ChemStation OpenLAB CDS ChemStation Lab Advisor Secure Workstation Data Store OpenLAB ECM OpenLAB C A P T U R E A N A L Y Z E S H

(BRIC) 2

2 Agilent OpenLAB CDS OpenLAB CDS OpenLAB CDS OpenLAB IT 2

サイズ排除クロマトグラフィー SIZE EXCLUSION CHROMATOGRAPHY New TSKgel UP-SW3000 高性能水系 SEC カラム 特長 主な対象物質 技術資料 微粒子充塡剤 2μm のため たんぱ く質 抗体 酵素などの生体高分子 の 迅 速分析 15 cm カラム 高

中面 2 Hot News Vol 可能性 拡がる Nexera コアシェル リンク 3.6μmのコアシェルを用いれば アセトニトリル 水系で背圧10MPa 程度でご使用頂けます 1.7μm 2.6μm 3.6μm UFLC Prominence メソッド移管性


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スライド 1

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(EQP) (DQ) (IQ) (OQ) OQ (RQ) IQ OQ IQ OQ (ACE) OQ EQP EQP Adobe (i) Q & A (ii) Agilent Compliance Engine (ACE) - 21 CFR Part11 (iii) EE 1.76 EQR 3 PDF

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すとき, モサプリドのピーク面積の相対標準偏差は 2.0% 以下である. * 表示量 溶出規格 規定時間 溶出率 10mg/g 45 分 70% 以上 * モサプリドクエン酸塩無水物として モサプリドクエン酸塩標準品 C 21 H 25 ClFN 3 O 3 C 6 H 8 O 7 :

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GPC/SEC... 3 GPC... 4 GPC... 5 Agilent PL-SP 260VS... 6 Agilent PL-GPC 220 GPC/SEC... 7 Agilent Cirrus GPC GPC GPC/SEC GPC Agilent PL

Q E Q T a k Q Q Q T Q =

Transcription:

Agilent BioHPLC HPLC/UHPLC /

HPLC/UHPLC ( Å Å ) BioHPLC MPa.. µm UHPLC Poroshell ( )

Agilent AdvanceBio RP-mAb : AdvanceBio RP-mAb Poroshell mab Agilent AdvanceBio :.7 µm C AdvanceBio Agilent Poroshell : Agilent ZORBAX RRHD Å. µm : MPa UHPLC Agilent ZORBAX Å. µm : HPLC. µm Agilent PLRP-S : ph HPLC PLRP-S : AdvanceBio RP-mAb mab AdvanceBio 7 Poroshell ZORBAX RRHD ZORBAX StableBond ph 7 PLRP-S /

HPLC LC HPLC/UHPLC 6 MPa ( Å) mab mab AdvanceBio RP-mAb Å mabs. µm SB-C C ZORBAX Å. µm RRHD SB-C RRHD SB-C RRHD SB-C RRHD -Diphenyl ZORBAX Å. µm SB-C SB-C SB-C SB-CN ZORBAX Å Extend-C Poroshell C mab ph USP L6 StableBond C Agilent 9 Infinity LC MPa High Definition. µm mm mm StableBond C StableBond C CN ph. ph Poroshell SB-C SB-C SB-C Extend-C AdvanceBio Poroshell HPLC Å Poroshell DNA PLRP-S PLRP-S Å Å Å Å / PLRP-S Å / PLRP-S Å PLRP-S Å DNA/ PLRP-S Å ZORBAX (AAA) OPA FMOC HPLC UHPLC

ADVANCEBIO RP-mAb mabs Agilent AdvanceBio RP-mAb QA/QC Poroshell AdvanceBio RP-mAb : LC ( Å) (. µm) mab : ( ) : Poroshell µm : SB-C C 6 AdvanceBio RP-mAb C 6 - -....6.7..9......6.7..9... x mm. µm A:. % TFA IPA (9:) B: IPA:ACN: A (7::). ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Variant IgG ( mg/ml) µl C UV nm. AdvanceBio RP-mAb C IgG Agilent AdvanceBio AdvanceBio RP-mAb C -....6.7..9.. 他社カラム C, Å,. µm -....6.7..9.. 他社カラム C, Å,.6 µm -....6.7..9.. 他社カラム C, Å,.6 µm -....6.7..9.. :. x mm. µm A:. % TFA IPA (9:) B: IPA:ACN: A (7::) : : : : :. ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Variant IgG ( mg/ml) µl C UV nm. AdvanceBio RP-mAb mab

mab AdvanceBio RP-mAb QC ( ) IgG AdvanceBio RP-mAb AdvanceBio RP-mAb Poroshell 6 - - AdvanceBio RP-mAb.7..9...... x mm. µm A:. % TFA IPA (9:) B: IPA:ACN: A (7::). ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Variant IgG ( mg/ml) µl C UV nm. AdvanceBio RP-mAb Poroshell AdvanceBio RP-mAb SB-C :. MPa...7...7.. x mm. µm A:. % TFA B: - ACN: A (::). ml/ % B 9 % B % B Creative Biolabs Fc/Fab Variant IgG ( mg/ml) µl 6 C UV nm.advancebio RP-mAb 6

ADVANCEBIO ペプチドマッピングカラム 解像度を低下させずにペプチドマッピング時間を短縮 Agilent AdvanceBio ペプチドマッピングカラムを使用すると 時間を短縮: 全多孔質 HPLC カラムの 倍の速度で高分 次構造のアミノ酸の修飾を迅速に分離し 同定することがで きます 全多孔質カラムのように 6 分も時間がかかることは ありません 離能の分離を実行します すべての機器の機能を向上: 内径.6. および. mm のカラムは 6 MPa まで使え UHPLC 装置を最大限に活用で これらの高度なバイオカラムは Åのポアサイズと.7 µm きます 従来の MPa の装置でも優れた性能を実現しま の表面多孔質粒子を特徴としており 次を目的に設計されて す います 柔軟性を向上: ギ酸移動相を使用することで MS の感度を 分析の信頼性を向上: AdvanceBio ペプチドマッピングカラ 向上します ム充填剤の各バッチは 厳密なペプチド混合物を使用した テストを実施しているため 適合性と再現性が確保されて おり 複雑なペプチドマップの主要ペプチドの同定が可能 です ペプチド混合物を使用した品質管理テスト バイオシミラー EPO のペプチドマップ カラム : カラム: AdvanceBio ペプチドマッピング. x mm.7 µm p/n 67-9 流量 :. ml/ 注入量 : µl ºC 検出 : nm グラジエント : A 水 (. % TFA) B ACN (. % TFA) 分 6 % B 6 分 6 9 % B 7 6 温度 : サンプル : Agilent ペプチドマッピング 標準混合物 ( ペプチドごと に.. µg/µl) p/n 9 流量:. ml/ 注入量: µl (. mg/ml) 温度: ºC 検出: nm グラジエント: A w n 6 9 % B 6 AdvanceBio ペプチドマッピング. x mm.7 µm p/n 67-9. 7.. ピーク番号 MW 77 成分 ブラジキニンフラグメント 7 6 ブラジキニン 6 アンギオテンシン II 67 ニューロテンシン 9 アンギオテンシン I 6 6 ACTH フラグメント 9 7 79 レニン 7. 図 6.AdvanceBio ペプチドマッピングカラムを使用することで容易に タンパク質を同定し すべての翻訳後修飾を特定できます PEPTIDE MAPPING STANDARDS Now Available p/n 9- メリチン 図. AdvanceBio ペプチドマッピング充填剤の全バッチにテスト用混合 物を使用しました この混合物には 分子量の範囲が 77 Da の 種類の親水性 疎水性 および塩基性ペプチドが含まれます すべて のカラムは低分子プローブを使用したテストにより効率も保証されて います x 6 Cpd :.: +ESI ECC Scan Frag=7.V EPOdigestd.d 6. 6...... Cpd :....... 6 6. 7 7.. 9 9. Counts vs. Acquisition Time ()...... 6 6. 7 7. 図 6a. EPO 消化物 MassHunter Workstation ソフトウェアにより LC/MS TOF の 9 % 配列範囲を達成 7

AdvanceBio AdvanceBio 7 AdvanceBio Norm Norm PEP79 Inj. (9 bar) Inj. ( bar) Inj. (97 bar) 6 7 RT ( ) RT ( ) RT ( ) RT ( ).9.6.9.9...7. PW PW PW PW.......9. B69 Norm Inj. (97 bar) Inj. ( bar) 6 7 RT ( ) RT ( ) RT ( ) RT ( ).6.9......7 PW PW PW PW.9..9..9..9. : AdvanceBio. x mm.7 µm p/n 67-9 :. ml/ : µl : C : nm : A (. % TFA) B ACN (. % TFA) 6 % B. 9 9 % B : Sigma HPLC -Gly-Tyr -Val-Tyr-Val -Met Enk - Angio II - Leu Enk 7.. x mm AdvanceBio

Agilent AdvanceBio.7 µm (>99.99 % SiO ) C AdvanceBio IgG LC/MS x 7..9.9...7.7.6.6........... : AdvanceBio. x mm.7 µm p/n 69- LC/MS (Agilent 6 Q-TOF) : L/ Vcap: V : V :. ml/ : µl : C : A (. % FA) B ACN (. % FA) % B % B 6 % B. 7 9 % B : Stratagene mab...... 6 6. 7 7.. 9 9....... 6 6. 7 7.. 9 9.. IgG (n=) 9

POROSHELL Agilent Poroshell MPa Agilent Poroshell Poroshell RP-HPLC Poroshell Å. µm Å. µm Poroshell µm UHPLC. µm. µm StableBond ph TFA Poroshell

. mm Å Poroshell 9. Poroshell. II.. RNase.. 6. 7.... Time () 9.. 6 7 : Poroshell SB-C. x 7 mm µm : A:. % TFA B:.7 % TFA ACN :. ml/ : 7 C : UV nm :. % B : MPa 重鎖 軽鎖 IgG の処理 : DTT 6 グリコシル化 グリコシル化なし IgG の処理 : DTT ペプチド-N-グリコシダーゼ F 6 IgG の処理 : DTT ペプチド-N-グリコシダーゼ F カルボキシペプチダーゼ-B 6. lgg : ( ) % B.... Poroshell SB-C. x 7 mm µm A:H O-ACN (9:) B:H O-ACN (:9) A B. % TFA ml/l PEG. ml/ 7 C UV nm

µm Poroshell.7 µm mm ( ) MPa HPLC Agilent Poroshell Poroshell Poroshell * 6 7 * * C. x mm.7 µm DAD: 7 6 6. A.. c. ( 66 kda) A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA) C UV nm 9 % B 6. ml/ 7. 6. 7. B-. Agilent.6.6 * 6 7 * 6 7 Poroshell SB-C. x 7 mm µm * Agilent Poroshell A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA) C DAD: UV nm 9 % B. ml/. Poroshell SB-C

Poroshell HPLC SB-C SB-C SB-C Extend-C c Poroshell SB- C Poroshell SB-C ( ) Poroshell SB-C C Poroshell SB-C µl µl Poroshell SB-C 7,6 9... 7 Poroshell SB-C. x 7 mm µm Poroshell SB-C. x 7 mm µm A:. % TFA/H O B:.7 % TFA/ACN. ml/ 7 C. % B UV nm Poroshell SB-C.... Poroshell SB-C C 6 c 6 9. II.. RNase A. B. 6. c 7.. 9. A () µl Poroshell SB-C. x 7 mm µm A:. % TFA /H O B:.7 % TFA/ACN. ml/ C. 6 % B % B µl ( ) UV nm µl 6 RT (). Agilent Poroshell SB-C

ph. Poroshell Poroshell Extend-C ph ph C SB-C...7...7. Extend C...7...7. SB-C...7...7. SB-C...7...7.. Poroshell. x 7 mm µm A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA).7 ml/ C % B. 6 % B.7 -... gly-tyr. mg/ml. Val-tyr-val. mg/ml. Met-. mg/ml. Leu-. mg/ml. II. mg/ml....6.7 Time (). 6 6. RNase A mg/ml 7. c mg/ml. mg/ml 9. mg/ml 7 9 Poroshell SB-C. x 7 mm µm /. µl P/N G-67 A:. % TFA HO B:.7 % TFA ACN ml/ % B. 7 C DAD /6 nm ref = / nm

ZORBAX RRHD Å. µm MPa ZORBAX RRHD SB-C C C -Diphenyl. µm 9 Infinity LC UHPLC ZORBAX StableBond (C C C) ph (TFA) ph ph C ma ZORBAX RRHD SB-C. x mm. µm mab A:H O:IPA (9:). % TFA B:IPA:ACN:H O (7::). % TFA. ml/ C 9 Infinity LC ( nm) : ( ) % B... 9. ma... C C C C C C - UHPLC 7 UV 6. Agilent ZORBAX RRHD SB-C

Å Pursuit XRs Å Pursuit ZORBAX Å. µm. µm RRHD. µm UHPLC ZORBAX RRHD :C. x mm 6. MPa 7 9 6 6...69.79.99.9.766.9 µl 7. Agilent ZORBAX RRHD SB-C -Diphenyl. x mm. µm..97.9.99 ZORBAX RRHD SB-C -Diphenyl. x mm. µm (IgG) (. mg/ml) A:. % TFA B: % n- % ACN 9.9 %. % TFA % B % B % B. ml/ 7 C UV C Diphenyl ZORBAX RRHD SB-C. x mm. µm.9 MPa 7 9 DAD: A: (. % TFA) B:ACN (. % TFA) % B. 6 % B. ml/ C nm. Agilent High Definition Å. µm ( ) 6

ZORBAX Å. µm ph 6 Agilent ZORBAX StableBond Å ZORBAX StableBond ph (TFA ) ph LC/MS ZORBAX StableBond StableBond C C C Extend-C StableBond ( 9 ) ph ZORBAX SB-C % k 残存フェニルヘプタン 9 7 6 ZORBAX SB-C 他社 C ZORBAX SB-C.6 x mm µm % B A:. % TFA B:. % TFA - % A % B. ml/ 6 C,,,,, 6, 7,, 移動相の量 9. ph TFA ( ) Agilent StableBond 7

AGILENT PLRP-S HPLC PLRP-S ph Å PLRP-S PLRP-S PLRP-S M NaOH / NaOH. (, MW). (, MW) M NaOH 通液前 カラムボリューム (M NaOH) 後.. II. I. PLRP-S Å PLRP-S Å : PLRP-S Å.6 x mm µm : : % B. ml/ : A:. % TFA B:. % TFA ACN : UV nm PLRP-S Å.6 x mm µm PLRP-S Å.6 x mm µm A:. % TFA B:. % TFA % 9 % ACN. ml/.agilent PLRP-S ph / 6 % B UV nm. Agilent PLRP-S Å PLRP-S Å PLRP-S Å

HPLC Agilent 6 Infinity LC Agilent 9 Infinity LC UHPLC Poroshell UHPLC % : ph ( ph ) M M UHPLC :6 MPa ZORBAX RRHD Å / LC LC/MS MPa ml/ UHPLC (ISET). µm Agilent 6 Infinity LC HPLC 6 MPa Hz HPLC % UHPLC Agilent 9 Infinity LC UHPLC UHPLC HPLC (..6 mm) LC LC/MS MPa ml/ UHPLC BlendAssist UHPLC 9

AdvanceBio RP-mAb ph C Å 9 C.. SB-C Å 9 C.. Diphenyl Å 9 C.. (mm) (µm) C. x. 79977-9 C. x 7. 79777-9 C. x. 7977-9 C. x. 7977-9 C.6 x. 79997-9 C.6 x. 7997-9 C.6 x. 7997-9 SB-C. x. 7977-96 SB-C. x 7. 7777-96 SB-C. x. 777-96 SB-C. x. 777-96 SB-C.6 x. 7997-96 SB-C.6 x. 797-96 SB-C.6 x. 797-96 Diphenyl. x. 79977-9 Diphenyl. x 7. 79777-9 Diphenyl. x. 7977-9 Diphenyl. x. 7977-9 Diphenyl.6 x. 79997-9 Diphenyl.6 x. 7997-9 Diphenyl.6 x. 7997-9 Poroshell ph SB-C C C Å 9 C.. Extend-C Å ph ph 6.. (mm) SB-C USP L SB-C USP L7. x 7 6-6. x 7 6-6 SB-C Extend-C USP L. x 7 667-9 667-96 667-99 977-9. x 7 667-9 667-96 667-99 977-9. x. 7-9 7-9 7-9 -9-9 -9. x 7-96 -96-96 -96

HPLC UHPLC ZORBAX Å ph SB-C Å 9 C.. SB-C Å C.. SB-C Å C.. SB-CN Å C.. Extend-C Å 6 C.. -Diphenyl Å C.. (mm) (µm) SB-C USP L SB-C USP L7 SB-CN USP L SB-C USP L6 Extend-C USP L -Diphenyl USP L. x 66-9 RR. x. 66-9 66-96 RR. x. 66-9 66-96. x 7-9. x 7-9 7-96 7-9 7-99. x. 7-9 7-96 7-99 7-9. x. 77-9 77-96 77-99 77-9 RR. x. 67-96 767-9 RR. x. 677-9 677-96 7677-9 RR. x. 67-9 67-96 767-9. x. 697-697-6 697-9. x. 697-6.6 x 99-9 99-96 99-9 99-99 7799-9.6 x 99-9 99-96 99-9 99-99 7799-9.6 x 69-9 69-96 69-9 69-99.6 x. 697-9 697-96 697-9 697-99 7697-9.6 x. 697-9 697-96 7697-9.6 x. 697-9 697-96 697-9 697-99 7697-9 9. x 99-99-6 99-99-9. x 7-9 -9.6 x. 9-9 9-9 9-9 9-9 9-9. x. -9-9 -9-9 -9 PrepHT. x 7 97-97-6 97-97-9 PrepHT. x 7 97-97-6 97-9 PrepHT. x 9-9 9-96 9-99 PrepHT. x 9-9 9-96 9-99 PrepHT. x 9-9 9-96 9-99 PrepHT -9-9 -9-9 PrepHT 7 x 7. -9-9 -9-9 -9-9 -9-9

ph PLRP-S HPLC (mm) (µm) PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L. x PL- PL-. x PL- PL-. x PL-.6 x PL- PL- PL-.6 x PL- PL-.6 x PL- PL-.6 x PL- PL- PL- PL-.6 x PL- PL-.6 x PL- PL-. x PL9-. x PL9- PL9- PL9-. x PL9- PL9- PL9-. x PL9- PL9-. x PL9- PL9-. x PL9- PL9- PL9- PL9-. x PL9- PL9-. x PL9- PL9-.6 x PL-7 PL-7-9.6 x - PL- PL-.6 x - PL- PL-.6 x PL- PL- PL- PL-.6 x PL- PL- PL-.6 x PL-7 PL-7.6 x - PL- PL-.6 x - PL-.6 x PL- PL- PL- PL-.6 x PL- PL- PL- PL- x PL- PL- x - PL-6 PL-6 99-9 99-96 x - PL-6 PL-6 99-9 99-96 x PL-6 PL-6 69-9 69-96 x PL-6 PL-6 697-9 697-96 x PL7-6 PL7-6 697-9 697-96 x PL7-7 PL7-7 x - PL7- PL7-697- 697-6 x - PL7- PL7-697-6 x PL7- PL7- PL7- PL7- x PL7- PL7-7-9 7-96 x - PL-6 PL-6 67-96 x - PL-6 PL-6 677-9 677-96 x PL-6 PL-6 67-9 67-96 x PL-6 PL-6 66-9 x PL-7 PL-7 x PL- PL- PL7- PL7- x PL- PL- -9-9 x PL- PL- PLRP-S x mm PL6- PL6- PL6- PL6-. x. mm PL-6 PL-6 PL-6 PL-6

PLRP-S HPLC (µm) PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L PLRP-S Å USP L kg PL-6K PL-6K PL-6K g PL-K PL-K PL-K kg PL-67 PL-67 g PL-7 PL-7 - kg PL-6 PL-6 697-96 g PL- PL- - kg PL-6 PL-6 g PL- PL- kg PL-6 PL-6 PL-6 PL-6 g PL- PL- PL- PL- kg PL-6 PL-6 AdvanceBio.6 x mm.7 µm 69-9. x mm.7 µm 69-. x mm.7 µm 67-9. x mm.7 µm 67-9. x mm.7 µm 67-9.6 mm Fast Guard* 7-9. mm Fast Guard* 7-9. mm Fast Guard* 7-9 *Fast Guards MPa 6 MPa MPa AdvanceBio RP-mAb ZORBAX RRHD Å. µm Poroshell ZORBAX Å. µm PLRP-S µm AdvanceBio.7 µm Agilent AdvanceBio : Agilent AdvanceBio AdvanceBio 6

: BioHPLC HPLC UHPLC Poroshell AdvanceBio RP-mAb LC ZORBAX RRHD. µm ( MPa ) UHPLC AdvanceBio BioHPLC Load & Lock Load & Lock PLRP-S / www.agilent.com/chem/jp : -77- Agilent Technologies, Inc. Printed in Japan November 9, 99-6JAJP

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