図 1. 細胞膜の構造と, 表面抗原 非表面抗原の区分.
表 1. 診断上重要となる主な悪性リンパ腫関連マーカー ( 非細胞表面マーカーには * を付す ) 全般 CD45 CD34 TdT * CD30 ALK1 EMA bcl2 * cyclind1 * MIB1(Ki-67) * T 細胞関連 CD1a CD2 CD3 CD5 CD7 Tcelreceptor CD4 CD8 granzymeb * TIA-1 * LCA: 白血球共通抗原造血前駆細胞リンパ球前駆細胞 ( 核 ) 活性化抗原 Hodgkin リンパ腫 未分化大細胞性リンパ腫キナーゼ上皮系抗原, 活性化抗原 ALCL 非胚中心 Bリンパ球,T リンパ球 ( 細胞質 ) 細胞周期関連蛋白 ( 核 ) mantlecel lymphoma 同上, 増殖マーカー ( 核 ) 胸腺 T リンパ球,Langerhans 組織球汎 T リンパ球系抗原同上同上同上同上 (αβ 型 /γδ 型 :T リンパ球系であることを確定する抗原 ) ヘルパー T リンパ球, 単球 ( 弱陽性 ) 細胞傷害性 T リンパ球細胞傷害蛋白 ( 細胞質 ) 同上 :T-celrestricted intracelular antigen-1( 細胞質 ) NK 細胞関連 CD56 CD16 CD57 B 細胞関連 CD10 CD19 CD20 CD22 CD79a * PAX5 * Immunoglobulin CD21 CD23 FMC7 CD 38 CD138 bcl6 * MUM1 * 汎 NK 抗原, 神経系細胞 (NCAM) 汎 NK 抗原, 好中球 NK 細胞, 神経系細胞の一部前駆 / 胚中心 Bリンパ球汎 Bリンパ球系抗原同上同上同上 ( 細胞質 ) 同上 ( 核 ) 同上 ( 重鎖 / 軽鎖 ) EBV 受容体, 濾胞樹状細胞 B-CLL/SLL, 濾胞樹状細胞非 B-CLL/SLL 系抗原形質細胞, 胸腺 Tリンパ球形質細胞胚中心 Bリンパ球 ( 核 ) 非胚中心 Bリンパ球 ( 核 ) 帰属等とは異なって, より密接している腫瘍や亜型がある場合は 内に示す
μ 図 2. 浮遊細胞 ( フローサイトメトリー ) と組織切片 ( 免疫組織化学 ) における, 抗体による抗原認識部位の違い. フローサイトメトリーでは検出目的の物質 (= マーカー = 抗原 ) に特異的な抗体に蛍光色素が直接標識されており, 免疫組織化学ではその次にビオチン標識した二次抗体, 最後にアビジン ビオチン ペルオキシダーゼ (POX) 複合体を反応性させる方法が一般的である.
表 2. 悪性リンパ腫のフローサイトメトリーで abnormalcelpopulation(acp) を見出す手がかり Immunophenotype-Ⅰ 免疫グロブリン軽鎖の発現による偏り (lightchainrestriction) の有無を見る. 反応性の正常 B リンパ球の場合は kappa 鎖と lambda 鎖の陽性細胞が混在している ( 図 4a) が, 大部分の B 細胞性リンパではいずれかに偏る ( 図 4b) ことから ACP が存在するものと判断できる. それを lightchainrestriction(lcr) といい, 一般的に kappa 鎖が lambda 鎖の 3 倍以上か lambda 鎖が kappa 鎖の 2 倍以上陽性の細胞が存在することをもって判断する. Immunophenotype-Ⅱ 正常細胞とは異なる抗原発現様式を示す群の有無を見出す方法 :(a) 汎 T 細胞系抗原 (CD2,CD3,CD5,CD7,TCRαβ 鎖 ) や汎 B 細胞系抗原 (CD19,CD20,CD22,CD79a) のうち,1 つないしそれ以上の抗原が発現していない場合,(b) 異系列の抗原が出現している場合. Immunophenotype-Ⅲ 末梢のリンパ装置では存在しないか極端に少ない細胞 (CD1a 陽性 T リンパ球,CD4 + CD8 + 細胞,γδT リンパ球, NK 細胞, 顆粒球や単球等 ) が, 特に大型細胞群において検体の全体の 10~ 20% を越えた場合,ACP であることが多い.
λ κ γδ αβα
λ λ κ κ 図 4.kappa 鎖 (FITC 標識抗体 : 横軸 ) と lambda 鎖 (phycoerythrin 標識抗体 : 縦軸 ) のフローサイトメトリーの結果 ( 二次元展開図 ). 反応性リンパ節 (a) では kappa + 細胞が若干多いものの基本的には両者が混在しているが,B 細胞性リンパ腫 (b) では明らかかつほぼ完全に kappa 鎖側にシフトしている [= 反応性パターンで存在する lambda 鎖群があるべきところ (= 水色の点線部 ) にドットの集中が無い ] ため abnormalcel population と判断できる. 図 5.CD2(FITC 標識抗体 : 横軸 ) と CD7(phycoerythrin 標識抗体 : 縦軸 ) のフローサイトメトリーの結果 ( 二次元展開図 ). 左 : 反応性リンパ節 (a) では CD2 と CD7 の双方に陽性を示す正常の反応性 T リンパ球が一つの集団として右上方の象限に存在する. 右 : 一方, ある種の T 細胞性リンパ腫では CD2 陽性 CD7 陰性という群が右下の象限に abnor malcelpopulation として観察される [= 反応性パターンで存在する CD2+ CD7+ 群があるべきところ (= 水色の点線部 ) にドットの集中が無い ] が, このような一群は反応性リンパ節では見られない.
γδ αβ 表 3. フローサイトメトリーの各チャートを読図する際のポイント 右上がり 45 度の像 ( 灰色部分 ) は非特異的な反応 ( 主に Fcreceptor 等による ) を意味している. 原則として に群は見られないので kappa 鎖と lambda 鎖を共に発現するリンパ腫であることを示すには慎重を要する. kappa 象限,lambda 象限にそれぞれ偏った群があれば lightchainrestriction を意味する. 他のチャートで B 細胞陽性群が優勢なのにもかかわらずその割合より kappa 象限と lambda 象限の和が著しく少ない時は, 免疫芽球 / 形質細胞が多いか B 細胞性腫瘍であることを意味する. 後者の場合は抗体の種類を ( 例えば polyclonal 抗体に ) 変えてみることも一法である. リンパ球増殖性病変においては CD45 陽性細胞が大部分を占めていることを確認する. 特に大型細胞群において CD45 陰性細胞が有意になったら非白血球系腫瘍を考える. 正常リンパ球より弱い蛍光強度を示す CD45 陽性群が出現している場合はリンパ芽球性リンパ腫, 大型細胞群で CD45 が陰性の場合は非白血球系病変の可能性がある. 反応性の場合,Bリンパ球は の様な群となり,CD45 象限には Bリンパ球以外が群をなす. CD22は CLL/SLL で弱陽性になることが多いとされているが, それ以外の B 細胞性リンパ腫でも減弱ないし陰性になることがある. B 細胞性リンパ腫 ( 特にリンパ芽球性 ) や顆粒球肉腫でそれぞれ CD13 と CD19 が aberant に発現する場合, 象限に細胞群がみられることになる. CD13 象限のみに陽性を示す群の sidescattergram のシグナルが低ければ (= 顆粒成分が少ないことを反映 ) 腫瘍性の可能性が高い. CD19 発現の有無にかかわらず,CD13 陽性群がある場合は,CD34,CD33,MPO の検索を追加して骨髄球系か否かを確認する. CD5 とCD20 が共陽性を示す群が 象限にみられるのはCLL/SLL,mantlecellymphoma,CD5 陽性のdifuselargeB-cellymphomaが主であり, いずれも多くの場合,CD5の発現( 蛍光 ) 強度はCD5 象限のTリンパ球のそれよりも若干弱い. この場合,FMC7 とCD23 を追加してCLL/SLL と鑑別する. かなり稀だが,CD20 陽性の T 細胞性リンパ腫の場合も 群に細胞群が生じる. CD20 の発現強度は時に二峰性を示すが, 反応性と腫瘍性の双方の場合があり, 前者の意義付けは不明である. 形質細胞( 正常では CD20 が陰性 ) がかなり多くなると,CD20 の陽性率は CD19 や CD22 のそれよりも有意に少なくなる. CD10 陽性の T 細胞性リンパ腫細胞群 ( 特に angioimmunoblastictcellymphoma の場合に生じる ) が 象限に無いかどうかチェックする. CD10 象限のみに陽性群をみるのは正常の胚中心 Bリンパ球か CD10 陽性 B 細胞性リンパ腫, ないし CD10 陽性 T 細胞性リンパ腫ながら CD2 が欠失した場合等であるが, 前 2 者については κ 鎖 λ 鎖の lightchainrestriction 等で確認する. 反応性の場合は のように Tリンパ球が一群となる. 蛍光強度がずれて 2 群に分離する現象は腫瘍性病変でみられ易いが, 反応性でも時に生じることがある. CD7 象限か TCRαβ 象限のいずれかに明瞭な偏りを示す細胞群があれば腫瘍性といえる. NK 細胞性のリンパ腫細胞の場合,CD56 象限ないし 象限に細胞群が生じる. ただ, 反応性の場合でも NK 細胞群 10~ 20% 程度混じることがあるので, 大型細胞群においてそれが優勢になれば腫瘍性の可能性がかなり高まる. 大型細胞群において CD56 象限のみに有意な群が偏った場合は,CD56 が陽性の B 細胞性リンパ腫か非造血器系腫瘍 ( 対照は小細胞性未分化癌や筋原性 / 神経原性肉腫等 ) を考えるが,CD45 や B 系抗原が陰性であれば後者となる. 免疫グロブリン軽鎖とは異なり,CD4ないしCD8のいずれか一方に極端に偏った群が出現しても, それのみで腫瘍性と断定することはできない. もちろんT 細胞性リンパ腫の表現型を反映していることもあり得る. CD4 とCD8 が共陽性を示す群を 象限に見た場合, 或いはT 系抗原が優勢なのにもかかわらずそれらが共陰性の場合,T-LBLか ATLL を考え, それぞれCD1a/CD34/TdT,HLA-DR/CD25 等を追加する. 汎 T 系抗原陽性細胞がかなり低率であるにもかかわらずCD4 弱陽性群が有意な場合は単球系の存在を考える. CD8 が極端に優勢の場合, 断定はできないものの EB virus 感染に伴う反応性変化,Hodgkin リンパ腫や癌との共存等も考えられるが一定していない. CD30,TCRγδ 陽性細胞が大型細胞群においてかなり優勢な群として出現するのは, それぞれ未分化大細胞性リンパ腫,γδT 細胞性リンパ腫の場合である. ホジキン細胞ではゲーティングを工夫すれば少数の CD30 陽性細胞が得られることがある. 反応性リンパ球増殖病変では細胞群が生じないか,minorpopulation をみるに過ぎない象限. CLL:chroniclymphocyticleukemia,SLL:smallymphocyticlymphoma,T-LBL:T-cellymphoblasticlymphoma, ATLL:adultT-celleukemia/lymphoma.
表 4. フローサイトメトリーの読図結果を示すための Pattern 分類 Pattern5/Neoplastic RightChainRestricted AberantorExpandedPopulation Myelo-Monocytic CD56 only Pattern4/ProbablyNeoplastic Pattern3/Atypical AtypicalT WhenCD1a-positivecelsandCD4 + CD8 + celsarepredominantbyflow cytometry,itis quitedificulttodistinguishthymomaorprecursort-lymphoblasticlymphomawithoutclear lackofpan-t-celantigen(s)ordefiniteaberancy.therefore,suchresultisclassifiedhere. Langerhanshistiocytosis,CD1a + andcd4 +,isalsoincluded. Pattern2/Reactivewith(a)PredominantComponent(s) Pattern1/Reactive Pattern0/Insuficientmaterialforanalysis