秋田応用微生物研究会

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いちえいよしくに
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2 13:00-13:30 13:30-13:50 Pseudomonas aeruginosa 13:50-14:10 14:10-14:30 Bacillus polymyxa KT551 * * 14:30-14:50 14:50-15:10 15:10-15:30 15:30-15:50 Streptomyces kasugaensis RNA rpoz * ** ** * ** 15:50-16:10 (Ganoderma lucidum) * * * * 16:10-16:30 16:30-16:50

3 ELISA µ µ

4 アグロバクテリウム : 秋田県産株の分離と最先端研究我彦広悦垣内康孝工藤恵利子 ( 秋田県立大生物工学研 ) 目的アグロバクテリウム Agrobacterium tumefaciens は多くの植物に感染して腫瘍 ( 根頭癌腫病別名クラウンゴール ) を形成するこれは菌が持つ Ti プラスミドの一部 T-DNA が植物ゲノムに挿入されるためである T-DNA 上には植物ホルモンであるサイトカイニンやオーキシンを合成する遺伝子やその働きを調節する遺伝子群がありその発現によって植物組織はカルス化し腫瘍となるそこで T-DNA 上のホルモン合成遺伝子を利用して内生的遺伝的に細胞内の植物ホルモンレベルを調節しその生理作用が研究されてきた一方 T-DNA の腫瘍遺伝子を有用遺伝子に置き換えるように改変して植物への遺伝子導入のベクター系が開発利用されてきた我々はこれまで植物ホルモン研究に役立ち形質転換が困難な植物にも感染し遺伝子導入可能な株を分離することを目的とし新規な A. tumefaciens を分離性格付けを行ってきた方法秋田県に存在する野外のクラウンゴールを採取し懸濁液を作り適当な選択培地にまいて候補となる菌を分離し生化学的生理学的性質を調べて A. tumefaciens としての同定分類を行った Ti プラスミドを分離し既知の T-DNA をプローブとしてサザンハ法により T-DNA を同定しクローニングした植物ホルモンの作用を高める6 b 遺伝子をタバコに導入した 6 b 遺伝子と相互作用するタバコ遺伝子を酵母の Two Hybrid 法により探索したまた AKE10 株をイネナシへの遺伝子導入に用いた結果と考察 A. tumefaciens の候補として約 90 株を分離し 6つのグループに分類したそのうちリンゴから得られた AKE10 株を用いて形質転換が困難なナシイネへの遺伝子導入に成功した AKE10 の6 b 遺伝子をタバコに導入した組織はホルモンを含まない培地で増殖した茎葉分化も促進されたこれはオーキシンやサイトカイニンの働きを高めていることによるものと思われるまた 6 b 遺伝子は植物およびヒトの細胞内での転写を促進することが明らかとなったこれらも含めアグロバクテリウムのゲノム研究種を超えた遺伝子導入についての世界の研究動向も紹介したい参考文献 Wabiko H, Kagaya M, Kodama I, Masuda K, Kodama Y, Yamamoto H, Shibano Y, and Sano H. (1989) Isolation and characterization of diverse nopaline typeti plasmids of Agrobacterium tumefaciens from Japan. Arch. Microbiol. vol. 152,

5 Bacillus polymyxa KT551 * * Bacillus polymyxa KT551 Bacillus polymyxa KT551 Toyopearl Super Q, EAH-Sepharose 4B, Toyopearl HW-50 34,000SDS PAEGE N Bacillus circulans Bacillus circulans pi ph 7.0 Ag +, Cu 2+, Mn 2+, Fe 3+ SDSN- -1,4

6 γ

7 - (DO) 1) MOI MOI 1 2 MOI DO Spodoptera frugiperda (Sf-9) β- AcNPV SF-900 II Sf-9 ( cells/ml) ( 1 L, BCP-S01, Able) rpm MOI=0.1 β- ONPG Fig.1. Time course of β-galactosidase accumulated in medium of virus-infected Sf-9 culture (MOI 0.1) under varied DO Fig.1 β conditions. β 2 8 5%DO 25% 45%DO 5 1.3%DO %DO (Fig.2) Time post infection (dpi) Sf-9 Fig.2. Time course of virus produced by Monod (1) virus-infected Sf-9 culture (MOI 0.1) under varied DO conditions. Symbols are the same Sf-9 as in Fig.1. DO (Fig.3) (3K S ) 3.5%DO qo [ DO] 2 q,max O = (1) 2 K + [ DO] S Titer Specific oxygen consumption rate q O2,max = = MOI DO 5% K S 1. Gotoh, T. et al., Biochem. Eng. J. 7, 69 (2001). 2. Gotoh, T. et al., Appl. Microbiol. Biotechnol. 56, (2001). galactosidase (U/ml) ( µ mol/10 6 cells/h) Time post infection (dpi) : 5 DO : 25 DO : 45 DO : un infected Sf 9 : virus infected Sf 9 (at 12 hpi) : virus infected Sf 9 (at 24 hpi) : calculation by eq. (1) DO (ppm) Fig.3. Effect of DO on specific oxygen consumption rate of Sf-9 insect cells.

9 ( Ganoderma lucidum) ) B16 B16 10F7 2) ergosterol peroxide (1) 1 B16 10F7 1 µg/ml 1 ergosterol (2) 1 1) N. Miura et al. Res. Commun. Pharmacol. Toxicol., 5, , ) K. Hata et al. Natl. Med. 54, , ) K. Hata et al. Natl. Med. 55, , 2001

10 1. Shindo,S., Yutaka,K., and Shiinoki, S.,(1998). Sake brewing from liquefied-rice with immobilized fungal mycelia and immobilized yeast cells. J. Inst. Brew.,104, Shindo, S., and Takahashi, S.,(2001) Stimulation of saccharifying enzyme production with immobilized fungal mycelia by liquefied rice-treated with protease. J. Biosci. and Bioeng. 93,

秋田応用微生物研究会

秋田応用微生物研究会 13:00-13:10 13:10-13:30 13:30-13:50 (Tricholoma auratum) 13:50-14:10 14:10-14:30 14:30-14:50 14:50-15:10 α-msh 15:10-15:30 Lewis 15:30-15:50 15:50-16:10 16:10-16:30 (1) (2) ( ) (2) (1) (2) (3) (1) (2)