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1 2695 Separations Module 日本ウォーターズ ( 株 ) ACG ALLI02-01 Rev:2 TEL : FAX : jp_support@waters.co.jp HomePage :

2 おことわり 本書の内容は永久的なものでなく 予告なしに変更される場合があります 本資料は 発行時点においては完全で正確なものと確信しておりますが もし万一誤りがあった場合には 日本ウォーターズは責任を負いかねますので御了承下さい いかなる場合においても 本資料の使用に関連するまたは本資料の使用から発生する偶発的または間接的な損害に対して 日本ウォーターズは責任を負いません 発行者の文書による許諾なしには いかなる形でも本書の全部または一部を複製することはできません Alliance, Millennium, PIC, および Waters は Waters Corporation の登録商標です また LAC/E PerformancePLUS SAT/IN SCC Synchronized Composition Control は Waters Corporation の商標です Micromass は Micromass Ltd. の登録商標であり MassLynx MassLynx NT は Micromass Ltd. の商標です その他の商標や登録商標はすべて各社の独占的所有物です

3 目次 第 1 章 Alliance 2695 の性能 送液 ダイアルミックスの性能 グラジェント性能及び精度 直線性 第 2 章 Alliance 2695 の構成 - ソルベントマネジメントシステム 2-1 構成 特徴 第 3 章 Alliance の構成 - サンプルマネジメントシステム 構成 特徴 流路 - 分析時 流路 - 溶媒置換機能 第 4 章分析手順 分析前準備 分析実行 第 5 章 Alliance 2695 使用時の注意事項及びトラブル対策 Alliance 2695 使用時の注意事項 エラー及び対策 トラブル - 送液されない トラブル - 注入再現性がない トラブル - 前のサンプルからコンタミする 第 6 章 Appendix Alliance 2695 の画面構成 Auto Start PLUS( 分析前準備サンプルセット ) ラインへの呼び水方法 ニードルウォッシュ時間の設定 バイアルセンサーの ON/OFF フリッツの交換 チェックバルブの交換 インラインフィルタの交換 Alliance 2695 保守部品 Separations Module -1

4 2695 Separations Module -2

5 第 1 章 Alliance 2695 の性能 この章では Alliance 2695 セパレーションモジュールの性能について 実測データを用いて紹介します 2695 Separations Module 1-1

6 Alliance 2695 の性能 1. 送液 ノイズの少ない送液による検出感度 (S/N 比 ) の向上 高速液体クロマトグラフィー (HPLC) では 性能の良いポンプ インジェクタが求められます 示差屈折計や電気伝導度計では 溶媒の流れや圧力の変動によりベースラインが影響を受けやすいため システム由来の圧力変動がベースラインノイズの原因となります Alliance 2695 は 2 つの圧力トランスデューサーを採用し 2 つのピストンドライブの独立制御によって送液の適正化を行うため 従来型ポンプと比較して送液変動の少ない優れた性能を示します よって パルスダンパーを必要としません 図 1. ノイズが少なく再現性のある送液 - 分析条件 - システム :2690アライアンスGPCシステム( Millennium) カラム :StyragelHR5E 2 HR2 1 溶離液 :THF 1.0mL/min 注入量 :300μL 分析温度 :40 良いポンプ インジェクタとは 1. 脈流が少ない 2. 安定した送液ができる 3. グラジェント精度が高い 4. 注入精度が高い 2695 Separations Module 1-2

7 ダイアルミックスの性能 2. ダイアルミックスの性能 溶媒混合誤差の軽減 従来 機器による自動溶媒混合は精度及び正確度が不十分であったため 混合溶媒を移動相に使用する場合はあらかじめ溶媒を混合しておく方法 ( プレミックス法 ) を用いるのが一般的でした しかし 分析者間の変動 あるいはメスシリンダーなどによる誤差を考えると プレミックス法を用いて分析するより Alliance 2695 の自動溶媒混合 ( ダイアルミックス法 ) を用いて分析するほうがより精度の高いデータを得ることが出来ます 図 2. アイソクラティック分析 (9 分 ) : 100 回注入 カラム内径 C18 (mm) 流速 (μl/min) 保持時間標準偏差 (min) PeakA PeakB PeakC PeakD N Separations Module 1-3

8 Alliance 2695 の性能 3. グラジェント性能及び精度 Alliance 2695 のシステム容量 ミキサーとダンパーが必要なく 最小限の内部配管によりシステム容量が 650μL 以下と最小化 ( 通常は数 ml) されています ミキサーやダンパーが必要ない理由については 2-6 ページの 事前加圧の効果 を参照してください 図 3. グラジェント正確度及び精度 -1 Step 0-100% B A = Methanol B = Methanol + Propylparaben 1.0 ml/min 254 nm 低流量の条件では システム容量を少なくすることによって分析時間を短縮できます システム容量が大きいと 流路中 ( カラム中 ) での拡散を招き グラジェントカーブを変形させてしまいます システム容量の影響システム容量が大きくなるほど 液がカラムに到達する時間が長くなります 流速 1mL/min であればシステム容量が 1.5mL あったとするとシステム平衡化時間は 1.5 分 特に大きな問題にはなりませんが 流速が 50μL/min という条件ではシステム平衡化時間は 30 分となり 無視できなくなります ( グラジェント条件の平衡化には一般的にシステム容量の 3 倍量 + カラムの 5 倍量を加えた容量が必要です ) 2695 Separations Module 1-4

9 グラジェント性能及び精度 ミキサーを必要としないポンプミキサーを用いない構造は最もシステム容量が少なくなりますが 一般に保持時間の再現性が悪くなり ベースラインが 波打ち (Ripple) 現象 を起こしやすくなります Alliance 2695 は GPV 部で計量した溶媒をポンプヘッド内で加圧し ミキシングします よって従来のポンプにおけるミキサーを必要としません 図 4. グラジェント正確度及び精度 -2 図 5. グラジェント正確度及び精度 Separations Module 1-5

10 Alliance 2695 の性能 4. 直線性 注入直線性 注入量の変更に伴って面積値が比例的に増加すると注入直線性があると考えられます 注入量対面積値の直線性がよく 一次式に適合しているかどうかは相関係数または決定係数 (R^2) で確認できます このデータでは 1 から 100μL まで注入容量を変えた場合の注入直線性を示しています ピーク面積の平均値 (N=10) を求め 注入量に対してプロットしています 図 6. 注入直線性 サンプルマネージメント構成シリンジ : 250μL ( 標準仕様 ) サンプルループ : 100μL ( 標準仕様 ) 分析条件システム : 2695/2487 (UV 検出器 257nm) カラム : Symmetry C mm 5μm 35 移動相 : 水 / メタノール = 40/60 ダイアルミックスサンプル : プロピルパラベン 10μg/mL in 移動相注入条件 : 各注入量 10 回 2695 Separations Module 1-6

11 第 2 章 Alliance 2695 の構成 - ソルベントマネジメントシステム この章では Alliance 2695 セパレーションモジュール - ソルベントマネジメントシステム : ポンプ構成についてご紹介しています 2695 Separations Module 2-1

12 Alliance 2695 の構成 - ソルベントマネジメントシステム 1. 構成 Alliance 2695 のソルベントマネジメントシステムは 下記コンポーネントで構成されています 各コンポーネントの機能 1 チェックバルブ逆流防止弁 : プランジャ吸い込みストローク時に開き 吐き出しストローク時に閉じます 2 トランスデューサー ( プライマリー側 ) プライマリピストンチャンバ内の溶媒送液の抵抗によって生じる背圧を感知します 3 トランスデューサー ( システム側 ) HPLC システム内の溶媒送液の抵抗によって生じる背圧を感知します 4 ベントバルブ溶媒パージ エア抜き 及び溶媒排出します 5 インラインフィルターソルベントマネジメントシステムとサンプルマネジメントシステムの間で溶媒をろ過します 6 プライマリーポンプシリアル送液設計の一部として溶媒を送液します 7 アキュムレーターポンプシリアル送液設計の一部として溶媒を送液します 8 シール洗浄ポンプ 2 つのプランジャのシールを洗浄する溶媒を供給します 9 デガッサ * 溶媒ライン A,B,C,D の脱気をします 10 グラジェントプロポーショニングバルブ : G P V * 溶媒ライン A,B,C,D から移動相条件にダイアルミックスする切り替えバルブです * 910 は図 1 には含まれません 2-6 ページの図 4 を参照してください 2695 Separations Module 2-2

13 構成 図 1. ソルベントマネージメントシステムコンポーネント 2695 Separations Module 2-3

14 Alliance 2695 の構成 - ソルベントマネジメントシステム 2. 特徴 2.1 従来式ポンプとの比較 従来式のポンプは カムやギアを使ってピストンドライブを制御するいわゆる 歯車式 です これに対して Alliance 2695 のポンプは独立したモーターで脈流を抑えた送液を実現する独自のユニークなプログラムで制御されています 直列で連結されることでチェックバルブの数を減らし メンテナンス性も改善されています 図 2. 従来式のポンプ vs Alliance 2695 ポンプ模式図 従来式のポンプ Alliance 2695 ポンプ 図 3. 従来式ポンプの構造 2695 Separations Module 2-4

15 特徴 表 1 従来式のポンプ vs Alliance 2695 ポンプ 従来式 Alliance 2695 連結方式 並列 直列 制御 変形ギア又は 独立したピストンドライブ カムによる連動したピストンドライブ チェックバルブ数 4 個 2 個 システムボリューム 数 ml オーダー <650μL 圧力ダンパー 必要 不要 ミキサー 必要 不要 ヘッドボリューム 固定式 * 可変式 デガッサーボリューム数 ml オーダー 500μL その他 オプション プランジャシール洗浄機構 * Alliance 2695 のヘッドボリュームは可変式 (25,50,100,130μL) です Empower Empower2 からも制御可能です 装置の設定項目名は Stroke Volume: ストロークボリューム です ポンプのストロークボリュームは使用する送液流量に応じて選択します 4 ページの表 2 が推奨ボリュームです 流速に対応した推奨ボリュームよりも小さなボリュームに設定することは出来ません 表 2 推奨ストロークボリューム 流速 (ml/min) ストロークボリューム (μl) > 25 μl > 50 μl > 100 μl > 130 μl 2695 Separations Module 2-5

16 Alliance 2695 の構成 - ソルベントマネジメントシステム 2.2 ソルベントマネージメントシステムの液の流れ グラジェントプロポーショニングバルブで組成比調整された溶媒はプライマリヘッドに入り 入った順番にアキュムレータヘッドへ送られます (First in, First out) 溶媒のミキシングはアキュムレータポンプヘッド側でヘッド内に溶媒が満たされる際に行われます 2 つのトランスデューサーが各ポンプヘッドにかかる圧力をモニターしています 4. トランスデューザー ( プライマリ側 ) がプライマリ側のポンプの圧力を 6. トランスデューサー ( システム側 ) がシステム圧 ( カラムにかかる圧力 ) をモニターしています 図 4. ソルベントマネージメントシステムの液の流れ 1. グラジェントプロポーショニングバルブ 2. チェックバルブ 3. プライマリヘッドプランジャー 4. トランスデューサー ( プライマリ側 ) 5. アキュムレーターヘッドプランジャー 6. トランスデューサー ( システム側 ) 7. 独立したピストンドライブモーター 8. デガッサー 2.3 ピストンの相対速度 Alliance 2695 の 2 つのポンプでは 各ピストンが違う動きをしています プライマリピストンは溶媒を大気圧から引き込み システム圧まで加圧を行う直前に加圧 ( 事前加圧 ) を行います この動きが Alliance 2695 の安定した送液を可能にしています ピストンの相対速度を図 5 に記しました 事前加圧の効果 圧変動 ( 脈流 ) がなくなる ( 圧力ダンパー不要 ) 溶媒中の気泡を溶かし込む 溶媒のミキシング ( ミキサー不要 ) 圧力ダンパー ミキサーが必要ないために システムボリュームが小さい 2695 Separations Module 2-6

17 特徴 図 5. ピストンの相対速度 ( このサイクルの繰り返し ) 2695 Separations Module 2-7

18 2695 Separations Module 2-8 Alliance 2695 の構成 - ソルベントマネジメントシステム

19 第 3 章 Alliance の構成 - サンプルマネジメントシステム この章では Alliance 2695 セパレーションモジュール - サンプルマネジメントシステム : オートサンプラーの構成に関してご紹介しています 2695 Separations Module 3-1

20 Alliance の構成 - サンプルマネジメントシステム 1. 構成 Alliance 2695 のサンプルマネジメントシステムは 下記コンポーネントで構成されています 各コンポーネントの機能 1. サンプルラック : カロ - セル 注入サンプルはカローセル ( サンプルラック ) が回転することによりインジェクタ下部へ移動します 1 つのカローセルに 24 本の 2ml バイアルが設置可能です A,B,C,D,E 合計 5 つのカローセルに合計 120 検体設置可能です サンプルクーラー及びヒーター機能も装備可能です 2. サンプルループ Alliance 2695 のサンプルループには常に移動相が流れており 移動相による洗浄効果があります 標準仕様では 100μL が装着されています 3. シリンジ サンプルを吸引します 標準仕様では 250μL が装着されています 4. インジェクタ : ニードルウォッシュシステム インジェクタは上下運動のみ行います ニードルが移動相流路の一部となり 内側は常に移動相で洗浄しています 外側を専用の独立したニードルウォッシュ液で洗浄する機構を持ちます 2695 Separations Module 3-2

21 構成 図 1. サンプルマネジメントシステムコンポーネント シリンジ インジェクタ カローセル よりみち カラムオーブンヒーター機能 クーラー機能を搭載可能 ヒーター機能のみの場合 室温 + 5 以上 ~ 65 での制御運転が可能です クーラー機能を搭載すると 温度制御範囲は 4 又は室温 -15 のどちらか高い方 ~ 65 です シリンジ及びサンプルループ容量の組み合わせ サンプルループ シリンジ 100μL ( 標準仕様 ) 25μL ( オプション ) 250μL ( 標準仕様 ) 2000μL ( オプション )2500μL ( オプション ) * この値はあくまでも参考値です サンプルループは必要容量に応じて使い分けます サンプルループ容量は 20% 前後の容量誤差があります 使用前に注入再現性の確認をお勧めします 2695 Separations Module 3-3

22 Alliance の構成 - サンプルマネジメントシステム 2. 特徴 2.1 流路及びニードルの構造 Alliance 2695 のニードルは 移動相の流れる流路となっていることが図 2 から確認できます 多くの HPLC のニードルは円柱状で その先端からサンプルを吸引しますが Alliance 2695 は先端は埋まっており 先端から約 7mm のところに穴が開いています その穴からサンプルを吸引し サンプル吸引が終わると 移動相がサンプルを押し流し 注入が行われます ( 詳細は 3-7 ページの 流路 - 分析時 を参照してください ) 分析時はサンプルループとニードルは流路の一部となります 図 2. 流路 - 分析時 needle 2695 Separations Module 3-4

23 特徴 2.2 ニードルウォッシュライン Alliance 2695 のニードルの内側は常に移動相が流れ 洗浄効果があります ニードルの外側は 専用の洗浄ラインがあります 緑色のラインから液が呼び込まれ 空気と一緒にニードルに液を吹き付けます 黄色のラインから排出されます 洗浄工程は注入の直前に洗われます 洗浄効果を高める場合 洗浄時間を 2 倍 4 倍と増やす * ことも可能です このラインは独立しているため 移動相と混ざりません 図 3. ニードルウォッシュライン * 洗浄時間を増やす機能は Alliance 2695 のファームウェア Rev.2.02 以上が必要です ソフトウェアで制御する場合 Empower ソフトウェアサービスパック D から対応しています 2695 Separations Module 3-5

24 Alliance の構成 - サンプルマネジメントシステム バイアルの使い分け Alliance 2695 のニードルは特殊な形状をしているため サンプル量が少ない場合には注意が必要です 最小残存量 の値を参考にします (5-7 ページの サンプルバイアル及び最小残存量の確認 を参照してください ) よりみち Alliance の名の由来一見 ソルベントマネージメントシステムとサンプルマネージメントシステムはそれぞれ独立して動いているように見えるかもしれません Alliance は違います 一度インジェクションをすると その時のポンプのプランジャーの位置を覚えていて 次の時にもプランジャーが同じ位置に来たタイミングでインジェクションします [alliance] には もともと 協調 提携 という意味があります Alliance の注入再現性の高さは ソルベントマネージメントシステムとサンプルマネージメントシステムが同期することによって実現しました 2695 Separations Module 3-6

25 流路 - 分析時 3. 流路 - 分析時 3.1 分析時 3-4 ページの 流路及びニードルの構造 でも紹介したように Alliance 2695 のニードルの先端は埋まっており 先端から約 7mm のところに穴が開いています 分析している時には移動相が V1 で分岐して 95% は上へ流れ サンプルループとニードルの内側を通ってカラムへ流れます V1 で分岐した残りの 5% はニードルの部分で合流します 図 4. 流路 - 分析時 2695 Separations Module 3-7

26 Alliance の構成 - サンプルマネジメントシステム 3.2 サンプリング時 サンプルを吸引する時には V1,V2 が切り替わり ニードル ~ サンプルループ ~ シリンジまでが閉鎖系になります ニードルがサンプルバイアルまで降りる途中でニードルが洗浄され (3-5 ページの ニードルウォッシュライン を参照してください ) さらに下降して行き シリンジでサンプルを吸引し サンプルループに溜めます その後流路が切り替わり (3-7 ページの 分析時 を参照してください ) インジェクションが行われます 図 5. 流路 - サンプリング時 2695 Separations Module 3-8

27 流路 - 溶媒置換機能 4. 流路 - 溶媒置換機能 Alliance 2695 では 溶媒置換に必要な流路の切り替えは溶媒置換機能に応じて電磁弁が自動で行います 移動相ラインの切り替えに使われる電磁弁は V1 ~ V3 の 3 つです 4.1 Wet Prime 溶媒を変更したい場合 あるいは Alliance 2695 が送液停止状態だった場合には ウェットプライムを行って下さい ウェットプライムは 溶媒ボトルから V3 ( 廃液バルブ ) までの流路中の溶媒を置換します 図 6. Wet Prime 2695 Separations Module 3-9

28 Alliance の構成 - サンプルマネジメントシステム 4.2 Injector Purge 前の分析の溶媒を完全に除去する 流路またはシリンジから気泡を除く あるいはウェットプライム後に新しい ( 親和性 ) 溶媒に切り替える場合には インジェクターパージを行います この動作は 2 工程を含みます ( インジェクターパージ -#1,#2) このパージプロセスには 液漏れや気泡の有無を調べるための圧縮テスト ( インジェクターパージ -#3) を含めることができます #1 V1 は閉じているため 液は左へのみ流れます V2 V3 が開放されているため 液はニードルのサンプル吸引口を通って V3 から排出されます ( 図 7) #2 V1 が開放され 液は上へ流れます #1 と同様に V2 V3 が開放されているため 液は V3 から排出されます このときに シリンジが上下に動いてシリンジ内部の液も置換されます ( 図 8) #3 コンプレッションチェック ( ニードルシールを調べるための圧縮テスト ) を実行すると ニードルの位置が少し下がり サンプル吸引口をふさぎます V3 も閉じてインジェクター内を閉鎖系にします その状態でシリンジが上に上がり 閉鎖系中の溶媒を圧縮し その時の圧力変動をモニターすることでインジェクター部分のリークテストを行います ( 図 9) 図 7. インジェクターパージ -# Separations Module 3-10

29 流路 - 溶媒置換機能 図 8. インジェクターパージ -#2 図 9. インジェクターパージ -# Separations Module 3-11

30 2695 Separations Module 3-12 Alliance の構成 - サンプルマネジメントシステム

31 第 4 章 分析手順 この章では Alliance 2695 セパレーションモジュールの分析前準備について その手順及び機能を紹介しています 本体からは 前面のフロントパネルディスプレイ及びキーボードで操作します フロントパネルディスプレイ及びキーボード 2695 Separations Module 4-1

32 分析手順 1. 分析前準備 この項では 日本ウォーターズ ( 株 ) が推奨する方法を使用して デガッサー付 Alliance 2695 を準備する手順 その役割を解説します フローチャートでは 以下の状態の Alliance 2695 のエア抜き 平衡化 パージを行う手順のシーケンスを示しています 一連の手順は 別紙 2695 Separations Module 分析前準備 を参照してください 新しい または乾燥した Alliance 2695 電源を切った またはフローのないアイドル状態の Alliance 2695 溶媒変更 ( 緩衝溶媒から有機溶媒へ ) を必要とする Alliance 2695 Empower/Empower2 から制御している場合には自動実行が可能です 4-10 ページの Empower/Empower2 コントロールによる分析前準備 を参照してください また Alliance 2695 のサンプルセットである Auto Start Plus でも同様の自動実行が可能です 6-8 ページの Auto Start PLUS ( 分析前準備サンプルセット ) を参照してください 1.1 画面構成 Alliance 2695 では Main Status 画面から主に作業します Main 画面 [Main] と [Status] の切替は [Menu/Status] キー Status 画面 [Diagnostics] へのアクセス シール洗浄液の置換 ニードル洗浄液の置換 スクリーンキー 装置運転操作 [Direct function] の実行 Dry Prime Wet Prime Purge Injector 2695 Separations Module 4-2

33 分析前準備 1.2 プランジャシール洗浄液の確認 役割 ポンプヘッド部分 ( プランジャーシール ) に移動相中の塩が付着 析出するのを防ぐための洗浄ラインです 移動相ラインとは独立しています 10% アルコール水溶液など ( 塩抜き溶媒 ) をご使用下さい 順相分析で 100% 有機溶媒を流している時には 空にします チューブは seal wash と緑でラベルされています ソルベントフィルタが白い樹脂製のチューブです 準備 プランジャシール洗浄液のレベルをチェックし 必要に応じて補充やエア抜きをします 液が流れていない場合 強制的に呼び水する必要があります その場合には 6-9 ページの 洗浄液の呼び水 を参照してください #1 [Main] 画面から [Diagnostics] 画面を起動します #2 [Diagnostics] 画面から [Prime Seal Wsh] を選択します #3 [Start] を選択すると Seal Wash ポンプが動き出します 止める時は [Halt] を選択し [Close] で画面を閉じます 2695 Separations Module 4-3

34 分析手順 1.3 ニードル洗浄液の確認 役割 ニードルの外側を洗浄します ( ニードルの内側は 分析中常に移動相が流れています ) サンプルが良く溶解する溶媒 ( 塩抜き溶媒 ) を選択します 移動相ラインとは独立しています 緑色のラインから吸い込み 黄色のラインへ排出されます 準備 ニードル洗浄液のレベルをチェックし 必要に応じて補充やエア抜きをします 液が流れていない場合 強制的に呼び水する必要があります その場合には 6-9 ページの 洗浄液の呼び水 を参照してください #1 [Main] 画面から [Diagnostics] 画面を起動します #2 [Diagnostics] 画面から [Prime Ndl Wsh] を選択します #3 [Start] を選択すると Seal Wash ポンプが動き出します 止める時は [Halt] を選択し [Close] で画面を閉じます 2695 Separations Module 4-4

35 分析前準備 1.4 デガッサを ON にする 役割 デガッサは移動相の脱気を行います Alliance 2695 の電源を入れただけでは作動しません A,B,C,D ラインはそれぞれ独立のチャンバーで脱気されますが 減圧ポンプは 1 つです 1つでも空のラインがあると デガス効率が落ちるため 分析時にはずべてのラインに液を満たしておく必要があります 溶媒を満たす作業は 1.5 移動相ライン A,B,C,D をウェットプライムを参照してください 準備 デガッサーの電源を ON にします #1 [Main] 画面から液晶画面右側 キーを 押して [Status] 画面に入ります #2 Degasser の Mode にカーソルを合わせ キーを押すと ON OFF が選択できます 2695 Separations Module 4-5

36 分析手順 1.5 移動相ライン A,B,C,D をウェットプライム 役割 溶媒ボトルや溶媒を変更したい場合 あるいは Alliance 2695 がある期間アイドル状態だった場合には ウェットプライムを行います ウェットプライムは 溶媒ボトルから V3 ( 廃液バルブ ) までの流路中の溶媒を置換します 流路は 3-9 ページの Wet Prime を参照してください 準備 各移動相ラインの溶媒レベルをチェックし 必要に応じて補充やエア抜きをします #4 で設定する流速及び時間は 溶媒置換の条件によって適宜調整します 各溶媒ラインについて Wet Prime するには 溶媒組成を A100%,B100%,C100%,D100% と切り替えて #2 ~ #4 を繰り返します 液が流れていない場合 強制的に呼び水する必要があります その場合には 6-9 ページの 移動相の呼び水 : ドライプライム を参照してください #1 [Main] 画面から液晶画面右側 キーを 押して [Status] 画面に入ります #2 Wet Prime する時の溶媒組成 (%) を設定します [Status] 画面から [DirectFunction] を選択します #3 2 Wet Prime にカーソルを合わせて [OK] を選択します 2695 Separations Module 4-6

37 分析前準備 #4 Wet Prime する時の流速と時間を設定します [OK] を選択します 設定した流速で設定した時間 #2 の液の組成で Wet Prime が実行されます 1.6 デガッサーチャンバーの平衡化 目的分析前準備工程で Wet Prime 等を実行すると デガッサーチャンバー内の溶媒は交流速で置換され 十分に脱気されていない溶媒で満たされた状態です そのため カラムに送液を開始する前に デガッサーチャンバー内の溶媒を十分にデガスさせるために 一時的に送液を停止させます 流速 5ml/min を超えるとデガッサーによる溶媒の脱気効率が落ちます デガッサーの役割については 4-5 ページの デガッサを ON にする を参照してください 準備流速を 0.000ml/min. にして 5 分間デガッサチャンバーの溶媒を平衡化します #1 [Main] 画面から液晶画面右側 キーを 押して [Status] 画面に入ります #2 送液を停止 (Flow を 0mL/min) させます * ボタンひとつで送液を停止することもできます 2695 Separations Module 4-7

38 分析手順 1.7 分析条件によるウェットプライム 目的 A,B,C,D の各移動相ラインの Wet Prime が済んだ後に 移動相条件で V3 バルブまでを置換します 1.5 移動相ライン A,B,C,D をウェットプライム よりも流速を緩やかに設定し 移動相条件で Alliance 2695 のラインをなじませます 準備 1.5 移動相ライン A,B,C,D をウェットプライム を参照し #2 で移動相条件を指定します 使用する溶媒組成で 5.00mil/min. で 3 分間ウエットプライムを行います 1.8 カラムの平衡化 目的 1.7 分析条件によるウェットプライム の後にカラムを接続し 分析条件でカラムの平衡化を行います 通常 最低 10 カラム容量分の溶媒量で平衡化を行います 例 ) mm のカラムはカラム容積は約 1mL です 準備 #1 [Main] 画面から液晶画面右側 キーを 押して [Status] 画面に入ります #2 移動相条件 ( 液の組成 流速 ) を入力し 送液を開始します 2695 Separations Module 4-8

39 分析前準備 1.9 インジェクターパージ 目的 前の分析の溶媒を完全に除去する 流路またはシリンジから気泡を除く あるいはウェットプライム後に新しい ( 親和性 ) 溶媒に切り替える場合には インジェクターパージを行います この動作は 2 工程を含みます ( インジェクターパージ -#1,#2) このパージプロセスには ニードルシールを調べるための圧縮テスト ( インジェクターパージ -#3) を含めることができます 流路は 3-10 ページの Injector Purge を参照してください 最低 6 ループ容量分だけインジェクタをパージします ( 注入再現性を求める場合は 3 回程度パージを実行し 最後に Compression Check を実行してエラーが出ないことを確認します ) * * Compression Check はカラムをつけた状態で実行します 準備 分析条件で Wet Prime をすませ カラムは接続しておきます #1 [Main] 画面から液晶画面右側 キーを 押して [Status] 画面に入ります #2 移動相の組成が分析条件であることを確認します [Status] 画面から [DirectFunction] を選択します 送液している状態からも実行できます #3 3 Purge Injector にカーソルを合わせて [OK] を選択します 2695 Separations Module 4-9

40 分析手順 #4 最低 6 ループ容量分だけインジェクタをパージします Compression Check を実行する場合はチェックを入れます OK を選択します Injector Purge には最低 6.5 分かかります 1.10 Empower/Empower2 コントロールによる分析前準備 Alliance 2695 の分析前準備をサンプルセットで自動実行する例です 1.3 ~8 の作業をサンプルスケジューリングとして実行できます 図 1. サンプルセット例 [WetPrime] 時の流速 各ラインへ液の引き込み 移動相条件でのポンプ内パージ / 脱気 サンプルループのパージ時間 [ インジェクタパージ ]1 行で [PuregeInjector] が 1 回実行されます 各ラインへの液の引き込み用のメソッドセット ( 装置メソッド ) は 各ライン 100% 組成で作成しておきます カラムオーブンなどの温度制御も行う場合は設定します 図 2. 例 : 装置メソッド トレーニング A100% の送液設定 2695 Separations Module 4-10

41 分析実行 2. 分析実行 2.1 サンプル準備時の注意事項 Alliance 2695 のニードル形状は特殊なため 分析開始前に下記事項に特に注意して下さい サンプルバイアル及び最小残存量の確認 サンプルの量が少ない場合には専用の微量バイアルの使用をお勧めします 図 3 からもわかるように バイアルに準備するサンプル必要量は下記のとおりです 必要サンプル量 = 最小残存量 + インジェクション量 Waters 製のバイアルは カタログに最小残存量が記載されています 図 3. 最小残存量 最小残存量バイアル本体 TypeA トータルリカバリーバイアル ( 最小残存量 9μL) TypeB 2mL ガラスバイアル ( 最小残存量 750μL) 2695 Separations Module 4-11

42 分析手順 ニードル位置の設定 バイアルの形状によってサンプル吸引時にニードルが下がる位置を調整する必要があります 特に微量バイアル使用時には注意します 規定の位置は 0 です Waters 製バイアルカタログには Alliance 2695 で使用する場合 高さ調整が必要なバイアルに ニードルオフセット値 として記載しています 図 4. ニードルの深さ TypeB 2mL ガラスバイアル ( 深さ =0) TypeC 2mL ガラスバイアルに微量瓶を使用した場合 ( 深さ =1) * ニードルを規定の位置 (=0) より下げることはできません 1. Empower/Empower2 からの設定 装置メソッド 全般 タグで設定します 図 5. 装置メソッド 2. Alliance 2695 からの設定 Alliance 2695 Sample 画面 2 ページ目で設定します 2695 Separations Module 4-12

43 分析実行 図 6. セパレーションメソッド 2.2 Empower/Empower2 からの分析操作 装置メソッド で Alliance 2695 を制御します 2.3 Allince 2695 本体からの分析操作 セパレーションメソッド Empower や Empower2 では 装置メソッド で Alliance 2695 を制御しますが 同様のものを Alliance 2695 では セパレーションメソッド と呼び 制御方法を保存 実行できます ( 詳細は 2695 セパレーションモジュールオペレーターズガイド 6.1 セパレーションメソッドの作成および編集 を参照してください ) サンプルセット分析 Empower や Empower2 では連続分析のスケジュールを サンプルセットメソッド として保存することで 同じ分析スケジュールを呼び出して繰り返し実行することが可能です Alliance 2695 からも同様に サンプルセット として連続分析スケジュールを保存 実行が可能です ( 詳細は 2695 セパレーションモジュールオペレーターズガイド 6.3 サンプルセットの作成および編集 を参照してください ) 2695 Separations Module 4-13

44 2695 Separations Module 4-14 分析手順

45 第 5 章 Alliance 2695 使用時の注意事項及びトラブル対策 この章では Alliance 2695 セパレーションモジュール使用時に気をつける点及びトラブル対策について紹介しています 2695 Separations Module 5-1

46 Alliance 2695 使用時の 注意事項及びトラブル対策 1.Alliance 2695 使用時の注意事項 1.1 溶媒調整 使用前にはフィルターろ過 Buffer 等の塩溶媒を使用する場合には 調整後に必ずフィルターろ過を行い 目に見えない不溶成分を除去します 有機溶媒も含まれる場合には フィルターの材質にも気をつけます ( 超純水や有機溶媒 100% の場合には不要です ) 1.2 塩溶媒使用後の置換 洗浄 Buffer 等の塩溶媒を使用している時には 置換 洗浄に特に気をつけます 特に有機溶媒に置き換えるときには 間に水を入れて洗浄し ラインから塩を除去します その後 親水性のある有機溶媒であれば直接 親水性のない有機溶媒に置換したい場合には 親水性有機溶媒で置換してから最終的に目的の溶媒に置換します 下記手順を参考にしてください 手順 1. Buffer を使用したラインを溶媒ボトルから抜く 2. 少し空気を吸わせる ( チューブ内に 1cm 程度 ) 3. ラインに水 (HPLC グレード ) をセットして Wet Prime (3min 5mL/min) 4. ラインを親水性の有機溶媒 ( 次の分析用溶媒 ) に置き換える ( 保存時はメタノール ) 5. 有機溶媒で Wet Prime 分析に使用したカラムを洗浄する場合は 手順 3 のあとに カラム洗浄すると効率的です 例 ) 移動相条件 : A/B = リン酸 buffer/ アセトニトリルの場合 A ラインを水で洗浄した後 移動相条件と同じ比率でカラムを洗浄します 移動相中の塩が抜けたところで手順 4,5 に進み 有機溶媒に置換して保存します 1.3 デガッサ 4 つの移動相ライン全てに溶媒を満たす A,B,C,D ラインはそれぞれ独立のチャンバーで脱気されますが 減圧ポンプは 1 つです 1 つでも空のラインがあると デガス効率が落ちるため 分析時にはずべての移動相ラインに液を満たしておく必要があります Prime は 10 ~ 15mL 溶媒が流れるように デガッサー容量は 500μL です 溶媒を置換する場合などにソルベントフィルターから V3 バルブまでの容量分 液を置換するには流速 3 ~ 5mL/min で 10 ~ 15mL 液が流れるように設定します デガッサーの適正使用流速は 0~5.000mL/min です 流速 5ml/min を超えるとデガッサーによる溶媒の脱気効率が落ちます 脱気効率は 溶媒中ガスの負荷と 溶媒が各真空チャンバーに残っている時間をベースにしています 溶媒フローが増加するとガス除去効率が低下しますが これは溶媒 2695 Separations Module 5-2

47 Alliance 2695 使用時の注意事項 が真空チャンバーに存在する時間が短くなるからです デガッサーは ~ ml/min の通常分析流量時に溶解ガスのほとんどを除去します Alliance 2695 では別な溶媒に置換する場合は 7.5 ml/min 程度でドライプライミングとウェットプライミングを実行することができます 短時間で溶媒を置換した場合 デガッサによる脱気をしっかり行うために 5min ほどポンプを止めてデガッサを十分減圧してから運転します 1.4 翌日すぐに分析を開始するために 送液停止よりも低流速終夜運転 翌日同じ分析をするのであれば 移動相は脱気状態に カラムは平衡状態に保つことで スムーズな分析開始が可能です 一度送液を停止してしまうと 再びカラムを平衡化させる必要があり 時間を浪費します 低流速 (0.05 ~0.1mL/min) デガッサーも動かしたままで終夜運転をすると 翌日の分析開始がスムーズに行えます ( このとき システム圧が 25psi 以上になるような流速で送液します 詳しくは 5-4 ページの Lost Prime を参照してください ) 特に塩溶媒を使用している場合には 塩を除いてからでないと送液停止が出来ず 翌日の分析は装置の平衡化 カラムの平衡化に手間と時間を要してしまいます 2695 Separations Module 5-3

48 Alliance 2695 使用時の 注意事項及びトラブル対策 2. エラー及び対策 2.1 Bubble Detected 送液時 アキュムレーターポンプに気泡が入ってしまった場合などに発生します システム圧力が 650psi (45 バール 4482kPa) を超えている時に C/D Ratio の値が 1.8 以上になった時に気泡検出のメッセージを返します C/D Ratio とは アキュムレーターポンプヘッドプランジャーが移動相を押す (Compression) 時 引く (decompression) 時の圧力比です Alliance 2695 では プライマリポンプの加圧液をアキュミレーターでは吸引するため 正しい送液状態では 1.8 未満です C/D Ratio の値は Diagnostics 画面から確認できます 図 1. Diagnostics - C/D Ratio 対策 デガッサーが ON になっているか確認溶媒の脱気 ( プレミックスした移動相の場合 リザーバー内で気泡がないことを確認し 気泡がある場合には溶媒ボトルごと超音波脱気します ) ライン上からの気泡の除去 (Wet Prime の実行 ) 2.2 Lost Prime 送液圧が一定時間 25psi 以下となった場合に発生します 溶媒ボトルが空になった時などに空気を吸い込み システム圧力がピストン往復の 50 サイクルにわたって 25psi (1.7 バール 172kPa) 未満になっていると Alliance 2695 は自動的に停止します 対策 空になったラインについて Dry Prime や Wet Prime を行い溶媒で満たします 下記手順で確認作業を行います 手順 1. カラムを外し Dry Prime や Wet Prime で空になったラインを溶媒で満たします 2. 分析条件で送液し カラム接続部分まで十分に空気抜きをします 2695 Separations Module 5-4

49 エラー及び対策 2.3 Plunger Homing Over Pressure Alliance 2695 電源投入時にインジェクターまでの流路でシステム圧力が高く 初期診断が不合格になったときのメッセージです 対策 再現する場合には インラインフィルターの洗浄 又は交換します (6-17 ページの インラインフィルタの交換 を参照してください ) 2.4 Solvent Delivery H/W Fault 送液部のハードウェア不良時に発生するエラーです 対策電源を再投入しても発生する場合には サービスサポート宛にご連絡ください 2695 Separations Module 5-5

50 Alliance 2695 使用時の 注意事項及びトラブル対策 3. トラブル - 送液されない 送液されない 廃液ラインから溶媒が排出されない場合には プランジャーが動いているか否かで対策が分かれます 3.1 プランジャーが動いていないドライブモーターの異常が考えられます 対策サービスサポート宛にご連絡ください 3.2 プランジャーが動いている チェックバルブの不良が考えられます 対策 チェックバルブの洗浄 または交換をします (6-16 ページの チェックバルブの交換 を参照してください ) 2695 Separations Module 5-6

51 トラブル - 注入再現性がない 4. トラブル - 注入再現性がない 4.1 パージ不足 溶媒交換をした場合などに溶媒混和による気泡などで ライン上やシリンジ部分に気泡が残ることがあります 対策 Injector Purge 及び Compression Check の実行 (4-9 ページの インジェクターパージ を参照してください ) 4.2 バイアル及びセプタムの最適化 Alliance 2695 は サンプルの量が少ない場合には吸えない事があります また 気密性の高いセプタムで大容量注入や繰り返し注入を行うと バイアル内が陰圧になり 正確な容量のサンプルを吸引できない場合があります 対策 1. サンプルバイアル及び最小残存量の確認サンプルの量が少ない場合には専用の微量バイアルの使用をお勧めします 図 2 からもわかるように バイアルに準備するサンプル必要量は下記のとおりです 必要サンプル量 = 最小残存量 + インジェクション量 Waters 製のバイアルは カタログに最小残存量が記載されています (4-11 ページの サンプルバイアル及び最小残存量の確認 を参照してください ) 2. セプタム Waters 製バイアルセプタムには スリットの入った プレスリット タイプのセプタムがあります 大容量注入を行う場合 通常のセプタムでは密閉性が高く 内圧が下がり サンプル注入量を正確に吸えない場合があります 大容量注入を行う際にはプレスリットタイプを使用することで 内圧調整が可能 ( バイアル内を大気圧に維持できる ) です 図 2. セプタム - プレスリットタイプ 2695 Separations Module 5-7

52 Alliance 2695 使用時の 注意事項及びトラブル対策 5. トラブル - 前のサンプルからコンタミする ブランクを注入した時に 前のサンプルと同じ場所にピークが確認された場合 コンタミが懸念されます 5.1 アイソクラティック分析の場合 対策 ニードルウォッシュ液のレベルチェック液レベル不足の場合は液を補充し ニードルウォッシュを実行します (4-4 ページの ニードル洗浄液の確認 を参照してください ) ニードルウォッシュ液の最適化ニードルウォッシュは サンプルの溶けやすい溶媒 ( 強溶媒 ) にします ニードルやシールの劣化を防止するため 不揮発性塩の使用は避けます ニードルウォッシュ液時間の最適化ニードルウォッシュ液を流す時間を 2 倍 4 倍に増やすことが出来ます ( 詳細は 6-12 ページの ニードルウォッシュ時間の設定 を参照してください ) フリッツの交換 (6-15 ページの フリッツの交換 を参照してください ) 水溶性 脂溶性に幅広く対応する液水 / アセトニトリル / イソプロパノール = 50/25/ グラジェント分析の場合 グラジェント分析の場合は 移動相由来のブランクピークが発生することがしばしばあります アイソクラティック分析の場合と同様の作業をしても改善しなかった場合には グラジェントブランクの確認をします 対ニードルを動かさずにグラジェントイベントのみ走らせる方法ソフトウェアからコントロール時には機能に 標準試料プレップ注入 又は 未知試料プレップ注入 を選択します Alliance 2695 単体で使用している時には function で Condition を選択します ) 2695 Separations Module 5-8

53 第 6 章 Appendix 1. Alliance 2695 の画面構成 Auto Start PLUS( 分析前準備サンプルセット ) ラインへの呼び水方法 ニードルウォッシュ時間の設定 バイアルセンサーの ON/OFF フリッツの交換 チェックバルブの交換 インラインフィルタの交換 Alliance 2695 保守部品 Separations Module 6-1

54 Appendix 1.Alliance 2695 の画面構成 1.1 画面の構成 Alliance 2695 の画面は 各操作項目ごとに切り替えます その階層構造を図 1 に記しました 各画面は主に下記操作を行う時に使用します 図 1. Alliance 2695 の画面階層 Main 電源投入時の初期画面です 電源投入時には 機械的診断及び初期化を行い 問題なく終了すると Idle( アイドル ) モードに入ります この画面から 又はスクリーンキーで各操作画面へ切り換えます 図 2. Main 画面 バナー ( 見出し ) 領域 Revision 番号 スクリーンキー 2695 Separations Module 6-2

55 Alliance 2695 の画面構成 Status(1) Status(2) 運転状況のモニター及び変更をします また Direct Function 機能選択画面へアクセスします Method ( メソッド ) 現在のセパレーションメソッドを示します Status 画面でどれかのパラメータを変更すると このフィールドは <direct> に変わります Flow ( 流量 ) ソルベントマネージメントシステムの現在の流量を示します System ( システム圧力 ) 現在のシステム圧力 ( 単位 : psia, bar, または kpa) を示します Sample サンプルコンパートメント設定温度と現在の温度を示します Composition ( 組成 ) 現在の溶媒組成比を示します Sample ( サンプルループ圧 ) サンプルループの現在の圧力を示します Degasser ( デガッサー ) インラインバキュームデガッサーのステータスを示します ( 組み込まれている場合 ) Mode: 動作モードを選択します - On または Off Pressure:psia, bar, または kpa での現在の真空レベル Column ( カラムオーブン温度 ) カラムの設定温度と現在の温度を示します ( カラムヒーターが組み込まれている場合 ) Pressure Ripple ( 圧力変動 ) 1 分間のソルベントマネージメントシステムの圧力の読みを示します Max: 最高圧力 Min: 最低圧力 Delta: 圧力差 図 3. Status 画面 2695 Separations Module 6-3

56 Appendix [Direct Function] 各種ダイレクトコントロール機能選択画面にアクセスします Dry Prime Dry Prime を実行するタイミング及び操作方法については 6-9 ページの 移動相の呼び水 : ドライプライム を参照してください Wet Prime Wet Prime を実行するタイミング及び操作方法については 4-6 ページの 移動相ライン A,B,C,D をウェットプライム を参照してください Purge Injector Purge Injector を実行するタイミング及び操作方法については 4-9 ページの インジェクターパージ を参照してください 図 4. Direct Function 画面 [Develop Methods] Methods ( メソッド ) 画面が表示され 記憶されているメソッドを作成 編集 表示 コ ピー 削除 および実行することができます 各メソッド実行方法については 6-9 ページの ラインへの呼び水方法 を参照してください 図 5. Develop Methods 画面 2695 Separations Module 6-4

57 Alliance 2695 の画面構成 [Run Samples] Methods ( メソッド ) 画面が表示され 記憶されているセパレーションメソッド サンプルセット およびサンプルテンプレートを実行することができます 実行操作については 6-9 ページの ラインへの呼び水方法 を参照してください 図 6. Run Sample 画面 [Diag] Diagnostics ( ダイアグノスティクス ) 画面が表示されます ウォッシュ液の置換 種々の診断機能を実行することができます また 以下が表示されます 現在のトランスデューサの読み 圧縮チェック結果 ([Comp Check] 画面から ) 図 7. Diagnostics [Config] Configuration ( コンフィギュレーション ) 画面が表示され 基本設定の確認 変更を行います Syringe size, Loop size ( シリンジサイズ ループサイズ ) シリンジサイズ ループサイズの確認 変更を行います シリンジやループを付け替えた時には必ずこの設定を変更します Verify vial presence このチェックボックスがチェック ( デフォルト設定 ) されていると 指定されたカローセル位置にバイアルが存在していない場合に ユーザに知らせます 2695 Separations Module 6-5

58 Appendix ( 分析中に指定したカローセル位置にバイアルが見つからないと Vial missing というエラーになり 分析も停止します ) IEEE 488 Address ソフトウェアと IEEE 488 ケーブルで接続している時に この数字がアドレス番号として認識されます Pressure Units フロントパネルディスプレイにおける全ての圧力表示を psi, bar, kpa 表示に切り換えます 図 8. よりみち 単位換算例 psi : bar : kpa : kgf/cm 2 = 1000 : 約 70 : 約 6900 : 約 70 [Log] Error Log ( エラーログ ) 画面が表示されます Error Log 画面には 最後の 10 個のメッセージが発生時刻順に表示されます 最も新しいメッセージが画面の最下段に示されます Page キーまたは上矢印キーを使用して古いメッセージを表示させます エラーログは 最大 100 のメッセージを保存することができます Refresh スクリーンキーを押すと 最後に画面にアクセスした後に記録された新しいメッセージが表示されます Print スクリーンキーを押すと エラーログにファイル名を入力できます ファイル名を使用して フロッピーディスクにファイルを出力します 2695 Separations Module 6-6

59 Alliance 2695 の画面構成 図 9. Error Log 画面 2695 Separations Module 6-7

60 Appendix 2.Auto Start PLUS ( 分析前準備サンプルセット ) サンプルセット分析 の応用として 日常のシステムスタートアップ作業を標準化するために 分析前準備のサンプルセット Auto Start PLUS と呼ばれるセパレーションメソッド付きのサンプルセットが Default で保存されています AutoStartPLUS プロトコルは Alliance 2695 と同様 工場設定されていますが 別のサンプルファイル名でコピー 保存して特定のニーズに合わせて編集することができます 内容は下記のとおりです ( 詳細は 2695 セパレーションモジュールオペレーターズガイド Auto Start PLUS スタートアップ手順を参照してください ) 図 10. AutoStartPLUS-Main 画面 AutoStartPLUS の内容 以下の自動手順が行われます 1. デガッサーを On にします 2. 流速 7.5 ml/min で 0.2 分間 (12 秒間 ) 各溶媒のウェットプライムを行います 3. 流速を 0.000mL/min にして 5 分間デガッサーチャンバーの平衡化を行います 4. 溶媒 ( この例では A と B) のウェットプライムを行います 5. 約 300 ul の 50 : 50 A:B でカラムのフラッシングを始めます 6. A 100% 1 ml/min で 30 分間継続運転します ( これは 3.9 mm x 250 mm カラム [ 約 10 カラム容量分 ] の使用をベースにしています ) 7. A 100% で 10 ループ容量分のインジェクターパージを行います 8. 圧縮テストを行います 9. 流速を 100% A の 0.00 ml/min に設定します 2695 Separations Module 6-8

61 ラインへの呼び水方法 3. ラインへの呼び水方法 Alliance 2695 には 移動相用のラインが 4 本 (A,B,C,D) に加えてシールウォッシュライン ニードルウォッシュライン 合計 6 本のラインがあります 各ラインには 分析前に溶媒を満たす必要があります 各ライン毎に呼び水の方法を紹介します 3.1 洗浄液の呼び水 プランジャーシール洗浄ライン 及びニードル洗浄ラインが空になっている場合には 強制的にポンプまで呼び水する必要があります 廃液ライン側から引き込むか 吸い込み口から押し込みます 図 11. 呼び水 3.2 移動相の呼び水 : ドライプライム 移動相ラインの液が空になっている場合には 強制的にポンプまで呼び水する必要があります 呼び水するには ドライプライム 機能を使用してバルブを切替えてから 図 12 のようにベントバルブから液を吸い込みます 手順 1. 空のシリンジをベントバルブに取り付けます 2. バルブを反時計方向に 1/2 回転してバルブを開きます 3. [Main] 画面から液晶画面右側 キーを 押して [Status] 画面に入ります 2695 Separations Module 6-9

62 Appendix 4. [Status] 画面から [DirectFunction] を選択します #3 1 Dry Prime にカーソルを合わせて [OK] を選択します 5. エア抜きを行いたい溶媒ラインのスクリーンキーを押します 6. シリンジプランジャを引き出して チューブから溶媒を抜き取ります システムから空気と溶媒を抜き取るにはある程度の力が必要な場合があります 7. 溶媒ラインからすべての空気をシリンジ内に抜き取るまで 繰り返します 8. エア抜きを行いたい各溶媒ラインについて 5 ~ 7 を繰り返します 9. ベントバルブを閉じます 10. [Cancel] で画面を抜けます この画面から各溶媒 100% で Wet Prime をすることが出来ます その場合の手順を以下に記します ( 必須ではありません ) 11. Enter a Duration に Wet Prime 実行時間を入力します 12. Wet Prime を行いたい溶媒ラインのスクリーンキーを押します 13. Continue を押します ( 流速で Wet Prime が実行されます ) 2695 Separations Module 6-10

63 ラインへの呼び水方法 図 12. 呼び水 ベントバルブ 2695 Separations Module 6-11

64 Appendix 4. ニードルウォッシュ時間の設定 ニードルの外側に付着したサンプルが残り コンタミするような場合には ニードルウォッシュ液の最適化が必要 (4-4 ページの ニードル洗浄液の確認 を参照してください ) ですが ウォッシュ時間を長くする方法も効果的です 洗浄時間を増やす機能は Alliance 2695 のファームウェア Rev.2.02 以上が必要です ソフトウェアで制御する場合 Empower ソフトウェアサービスパック D から対応しています 4.1 本体からの設定 セパレーションメソッド 3/6 の Needle Wash で設定します (4-13 ページの セパレーションメソッド を参照してください ) 図 13. セパレーションメソッド - 3/6 Needle Wash ニードル洗浄時間のプログラム Normal = 設定のまま : 約 13 秒 Dowble( 2) = ダブル : 約 26 秒 Xtended( 4) = 拡張 : 約 52 秒 4.2 Empower/Empower2 からの設定 Empower のサービスパック D から装置メソッドで設定及び制御が可能です 2695 Separations Module 6-12

65 ニードルウォッシュ時間の設定 図 14. 装置メソッド 2695 Separations Module 6-13

66 Appendix 5. バイアルセンサーの ON/OFF 5.1 バイアルセンサー ニードルが Draw 位置に移動する前に 発光ダイオードアセンブリがバイアルの存在をチェックします これによって 設定されたバイアル位置にバイアルがなくても誤ってインジェクション動作しないようにします センサーを ON にすることで Missing Vial というエラーメッセージで知らせ 空気が誤って溶媒流路に注入されないようにします 注入動作はそこで停止します 5.2 バイアルセンサーの切替 #1 [Main] 画面から Config を選択します #2 Verify vial presence にカーソルを合わせて キーを押します 画面を キーで抜けます Save するかどうか聞いてきますので OK として設定変更を保存します バイアルセンサーは 色の濃いバイアルキャップをしていた場合 正常に動作します キャップの色が薄い 又は透明な場合 バイアルがあるにもかかわらず 検知できずに VIal Missing となることがあります このような場合にバイアルセンサー機能を OFF にしておくとエラーとなりません 2695 Separations Module 6-14

67 フリッツの交換 6. フリッツの交換 6.1 要事交換 次のような場合は ニードル洗浄フリッツを交換します クロマトグラムにゴーストピークが現われる サンプルキャリオーバが明らかである 予防保守が定期的に必要である ( 6 ヶ月毎か 5000 回の注入毎 ) 6.2 交換部品の準備 交換用一体型ニードル洗浄フリッツ 交換用スペアパーツ部品番号については 6-19 ページの Alliance 2695 保守部品 を参照してください 6.3 手順 14. 交換用フリッツをニードルウォッシュ液 又はアルコールに数分間浸しておきます 15. サンプルカローセルドアを開き ドア口とその右隣のカローセルを取り外します 16. Alliance 2695 の電源を切り 電源ケーブルを電源コンセントから抜きます 17. サンプルコンパートメント内右上側の下部フリッツリテーナーを手で反時計回り方向に回し 外します 18. リテーナーからフリッツを取り外します 先の細いペーパークリップ等をリテーナーキャップの穴に挿入することで簡単に取り除けます 古いフリッツは廃棄します 19. 浸漬させ ぬらしておいた新しいフリッツを取り付けます 20. 時計回り方向に回すことによって下部リテーナーを元に戻します 21. Alliance 2695 の電源ケーブルを電源コンセントに再び差し込み 装置の電源を入れます 22. サンプルカローセルを元に戻し サンプルカローセルドアを閉めます 23. ニードル洗浄ポンプのエア抜きをします (4-4 ページの ニードル洗浄液の確認 を参照してください ) 詳細は 2695 セパレーションモジュールオペレーターズガイドの 下部ニードル洗浄フリッツの交換を参照してください 図 15. フリッツの位置 フリッツ フリッツリテーナー 2695 Separations Module 6-15

68 Appendix 7. チェックバルブの交換 7.1 要事交換 次のような場合は チェックバルブを洗浄又は左右交換又は新品交換します 送液されない 脈流がある 予防保守が定期的に必要である ( 半年毎 ) 7.2 交換部品の準備 交換用スペアパーツ部品番号については 6-19 ページの Alliance 2695 保守部品 を参照してください 7.3 手順 1. Alliance 2695 の電源を切り 電源ケーブルを電源コンセントから抜きます 2. チェックバルブハウジングに接続しているステンレス配管を外します 3. ポンプヘッドからチェックバルブハウジングを外します 4. チェックバルブハウジングから古いチェックバルブカートリッジを取り出します 5. 新しいチェックバルブカートリッジを 100% アルコールで濡らします 6. 新しいチェックバルブカートリッジを チェックバルブハウジングに挿入します 7. チェックバルブハウジングを元の場所へ挿入し 手でいっぱいに締め付けます 8. さらにスパナでチェックバルブハウジングを 1/8 回転締め付けます 9. 2 で外したステンレス配管をインレットチェックバルブハウジングに締め込みます 注意 : チェックバルブカートリッジの矢印が 上を向いていることを確認してください 10. Alliance 2695 の電源ケーブルを電源コンセントに再び差し込み 装置の電源を入れます 11. ウェットプライムを実行してチェックバルブハウジング内に溶媒を満たします 詳細は 2695 セパレーションモジュールオペレーターズガイドの インレットチェックバルブカートリッジの交換を参照してください 図 16. チェックバルブカートリッジ 2695 Separations Module 6-16

69 インラインフィルタの交換 8. インラインフィルタの交換 8.1 要事交換 インラインフィルタは ソルベントマネージメントシステムとサンプルマネージメントシステムの間で溶媒をろ過します インラインフィルタが背圧上昇の原因になっているときには インラインフィルタエレメントを清掃および交換します 注 : ソルベントマネージメントシステムの問題を特定する方法の詳細については 2695 セパレーションモジュールオペレーターズガイド 第 8 章診断およびトラブルシューティング をご参照ください 8.2 交換部品 交換用スペアパーツ部品番号については 6-19 ページの Alliance 2695 保守部品 を参照してください 8.3 手順 1. Alliance 2695 の電源を切り 電源ケーブルを電源コンセントから抜きます ( カラム が接続されている場合はカラムを外しておきます ) 1. インラインフィルタの左側のステンレス配管を外します 2. ハウジングをゆるめます 3. アウトレットハウジングからインラインフィルタエレメントを取り出します 4. 交換用インラインフィルタエレメントをアルコールでぬらします 5. 交換用インラインフィルタエレメントを アウトレットインラインフィルタハウジン グに挿入します 6. インラインフィルタインレットおよびアウトレットハウジングを再び接続します 7. インレットハウジングにステンレス配管を再び締め込みます 8. Alliance 2695 の電源ケーブルを電源コンセントに再び差し込み 装置の電源を入れま す 9. ソルベントマネージメントシステムを 1 ml/min の移動相で 10 分間洗います 10. インラインフィルタのもれを検査し 必要な場合はフィッティングを締め付けます 詳細は 2695 セパレーションモジュールオペレーターズガイドの インラインフィルタの交換を参照してください 2695 Separations Module 6-17

70 Appendix 図 17. インラインフィルタエレメント 2695 Separations Module 6-18

71 Alliance 2695 保守部品 9.Alliance 2695 保守部品 図 18. チェックバルブ 図 19. インラインフィルタ 図 20. フリッツ フリッツ (5) Separations Module 6-19

72 Appendix 図 21. Alliance 2695 交換パーツ 価格は随時更新されます ご注文の際には定価をご確認ください 2695 Separations Module 6-20