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1 動物試験代替法による生活習慣病改善機能素材のスクリーニング サービス ~LipoCULTURE 細胞試験 ~ ご案内 株式会社エーセル株式会社スカイライト バイオテック

2 サービス概要 細胞培養系の試験により 脂質代謝への影響を詳細に解析し 研究対象素材のスクリーニング 機能性評価を支援する受託サービスです 活用シーン スクリーニング: 脂質代謝改善作用を有する機能性食品素材の絞り込み 候補素材の機能性検証: 既に絞り込まれた候補素材の機能検証 製品化素材の新たなエビデンスデータの取得 お客様のメリット 動物試験代替法を活用し 動物試験のプロセスを削減した研究を推進することによる コストの削減 素材評価のスピードアップ 動物愛護の観点からの CSR への取組み強化等

3 評価方法 HepG2 細胞を培養し 上清に分泌されるリポタンパク質をゲル濾過 HPLC により粒子サイズに従って分離し オンラインの酵素反応をさせることにより 脂質 ( コレステロール及び中性脂肪 ) 濃度を定量します 培養上清 : HepG2 培養上清 ゲルろ過 HPLCシステム 提供データ 脂質代謝の変化がよくわかる 培養上清中に分泌されるリポタンパク質パターン( クロマトグラム ) 培養上清中の総コレステロール 中性脂肪値 主要分画(CM VLDL LDL HDL) および詳細 20 分画におけるコレステロール 中性脂肪値

4 データ事例. 培養細胞のリポタンパク代謝 培養前 コレステロール中性脂肪 培養細胞 :HepG2 細胞培地 :DMEM(phenol red free)+0.% (W/V) BSA 培養 日後培養 4 日後 VLDL~LDL コレステロール中性脂肪 VLDL~LDL HDL FG コレステロール中性脂肪 VLDL と LDL の中間サイズのリポタンパクが出現 HDL も出現し FG が確認された

5 データ事例 2. 薬剤投与による培養細胞のリポタンパク代謝変化 培養細胞 :HepG2 細胞培地 :DMEM(phenol red free)+0.% (W/V) BSA Control : 培地 +0.%Ethanol Statin : 培地 +μm Simvastatin Fibrat : 培地 +200μM Fenofibrate コレステロール Control 中性脂肪 Simvastatin Fenofibrate 4 日培養上清採取 & 脂質測定 スタチン系薬剤ではコレステロールの低下 フィブラート系薬剤では中性脂肪の低下を検出し 脂質異常症改善効果を評価できた

6 データ事例. 脂質代謝改善機能素材のスクリーニング活用例 -: コレステロール -: 中性脂肪 オレイン酸添加で脂質代謝が亢進される VLDL LDL HDL ジュンサイ添加群で脂質代謝の抑制が見られた

7 データ事例. 脂質代謝改善機能素材のスクリーニング活用例 Scientific name (Japanese name) Na oleate Cholesterol (μg/0 6 cells) Triglyceride (μg/0 6 cells) Total VLDL LDL HDL Total VLDL LDL HDL Control -.6±0.6 0.±0..0±0. 2.±0.4 **.±0. ** 0.8±0.2 **.8±0.2 ** 2.±0.4 Na oleate alone +.±0.2 0.±0.0.2±0..4±0. 2.6± ±0..2±0.4.4±0.4 Fenofibrate (00 mm) + 0.±0. ** 0.±0.2 ** 0.4±0.2 ** 0.2±0.2 **.±0.8 ** 0.2±0. **.±0. **.2±0. ** Abelmoschus esculentus (Okura) +.±0.4 0.±0.2.2±0..4±0. 2.±0. 2.4±0.2 6.±0. 2.8±0. Allium fistulosum (Negi) +.2±0. 0.6±0.2.±0..±0.2.±0.4 *.2±0.2 ** 8.±0. **.6±0. Aralia cordata (Udo) +.2±0.4 0.±0..±0..2±0. 4.4±0. 2.±0. ** 8.2±0..±0.2 Brasenia schreberi (Jyunsai) + 0.±0. ** 0 ** 0.2±0.2 ** 0.±0.2 **.±0. ** 0.2±0. ** 0.±0. ** 0.8±0. ** Matteuccia struthiopteris (Kusasotetsu) +.±0. * 0 ** 0.±0.2 ** 0.±0. **.±0.6 2.± ±0. * 2.±0. ** Kochia scoparia (Houkigi) +.±0.2 0.±0.2.4±0..4±0..8±. **.±0. 0.8±. **.±0.4 Zingiber mioga (Myoga) + 2.±0.6 0.±0.2.0±0.2.±0. 2.±0..8±0..±0.2.2±0. スクリーニングの結果から ジュンサイの脂質代謝改善作用に注目した

8 データ事例 4. 動物試験代替法としての有効性評価 方法 C/BL6 マウスに High Fat Diet+ ジュンサイ EtOH 抽出エキス (BSET) % を混餌し 2 週間投与 結果 Tissue weight Control group BSET group Body weight (g) 26.8± ±. Liver weight (mg) 00.± ±4. Kidney weight (mg) 6.±..±. Spleen weight (mg) 80.0± ±.6 Mesenteric adipose tissue (mg) 22.0±48. 6.±2.0* Epididymal asipose tissue (mg) 06.8± ±6.* Serum Control group BSET group Triglyceride (mg/dl) 62.±0. 8.±.4** Cholesterol (mg/dl) 20.8± ±2.2 Glucose (mg/dl) 2.±20..0±22.2* AST (U/L) 68.± 4. 8.±.4 ALT (U/L) 0.8±. 26.8±0.4 Values are the mean ± SD (n=6), *p<0.0 and **p<0.0 vs. control group. ジュンサイ添加群において 中性脂肪値低下と内臓脂肪蓄積抑制の有意な効果が確認された

9 参考文献. HPLC analysis of lipoproteins in culture medium of hepatoma cells: an in vitro system for screening antihyperlipidemic drugs Biotechnol Lett (200) : 2. Lupeol reduces triglyceride and cholesterol synthesis in human hepatoma cells Phytochemistry Letters 2 (200) 6 8. In vitro screening for antihyperlipidemic activities in foodstuffs by evaluating lipoprotein profiles secreted from human hepatoma cells J Nat Med (20) 6: メタボ改善素材開発におけるリポタンパク質プロファイル解析の意義と応用 New Food Industry (202) vol 4 No.4 :-2

10 サービスプロセス お問い合わせ先 本サービスは 細胞試験を ( 株 ) エーセルにて実施し 検体解析を ( 株 ) スカイライト バイオテックが実施する 連携サービスです サービスプロセス お問合わせ 機密保持契約締結 試験計画書提案お見積もり 発注委託契約締結 試験実施報告書納品 試験費用ご請求 お問い合わせ 株式会社エーセル TEL: / info@a-cel.co.jp 補足事項 - 細胞培養試験をお客様にて実施頂き 培養上清を送付頂く段階からご依頼頂く方式も可能です ご相談下さい

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