2001~2002年度の札幌市における

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1 札幌市衛研年報 44, (2017) 2016/2017 シーズンの札幌市におけるインフルエンザの流行状況 大西麻実菊地正幸濱谷和代鈴木欣哉 1. 諸言札幌市では 感染症発生動向調査事業として市内医療機関 ( 患者報告定点 病原体検査定点 ) の協力のもとに病原体情報を収集し その発生動向の把握及び情報提供を行っている 本稿では 定点医療機関から報告されたインフルエンザ患者数及びウイルス検査の結果から 2016/2017 シーズンの札幌市におけるインフルエンザの流行状況について報告する 2. 方法 2-1 インフルエンザ患者発生状況インフルエンザ患者発生状況は感染症発生動向調査における市内の小児科 37 定点及び内科 19 定点の計 56 定点医療機関の報告を集計した 2-2 ウイルスの分離 検出状況 (1) 検査材料検査材料は 2016 年 10 月から 2017 年 5 月までに 札幌市内定点医療機関 ( 小児科 10 定点 内科 4 定点 ) を受診した患者から採取された咽頭拭い液等合計 278 検体 ( 小児科 212 検体 内科 66 検体 ) を対象とした (2) インフルエンザウイルスの分離及び型 亜型の同定検査材料はMDCK 細胞 ( イヌ腎臓由来株化細胞 ) に接種し 33 で培養した このうち 細胞変性効果 (cytopathogenic effect : CPE) が認められた場合はウイルス分離陽性とし 認められなかった場合は継代を3 代まで行った ウイルス分離陽性のものについて 国立感染症研究所 ( 以下 感染研 ) が示す方法 1) に準じて 赤血球凝集 (HA) 試験を行い 一定のHA 価を示した分離株について型 亜型の同定を行った インフルエンザウイルスの同定には 感染研から配布された同定用キット ( ウサギ免疫血清 : A/California/07/2009 ( X-179A ) A/HongKong/4801/2014(X-263) B/Texas/02/2013 (Victoria 系統 ) B/Phuket/3073/2013( 山形系統 )) を用いて 赤血球凝集阻止 (HI) 試験を実施した HA 試験及びHI 試験は0.75% モルモット赤血球を用いた また ウイルス分離を行った検体のうち HA 試験において HA 価が低く (4HA 以下 )HI 試験を行えなかった分離株及びウイルス分離陰性であった臨床検体について RNA 抽出を行い 感染研が示す方法 1) に準じて リアルタイム RT-PCR 法により型 亜型の同定を行った RNA 抽出には QIAamp Viral RNA Mini Kit(QIAGEN) を用いた 2-3 インフルエンザウイルスの HA 遺伝子解析 2016/2017 シーズンに札幌市内で分離 検出されたウイルスの一部について インフルエンザウイルスの抗原性状に係わる Hemagglutinin(HA) 遺伝子の解析を行った 遺伝子解析は感染研の方法 1) に準じて RT-PCR 法で遺伝子を増幅した後 ダイレクトシーケンス法により塩基配列を決定し Neighbor-joining(NJ) 法により系統解析を行った また 系統解析には感染研において解析された札幌市内の分離株及びワクチン株 参照株等の塩基配列を The Global Initiative on Sharing All Influenza Data(GISAID) から入手し 用いた 2-4 抗インフルエンザ薬耐性株サーベイランス AH1N1pdm09 ウイルス ( 以下 AH1pdm09) はノイ

2 ラミニダーゼ ( 以下 NA) 遺伝子の 275 番目のアミノ 酸がヒスチジン (H) からチロシン (Y) に変異 ( 以 下 H275Y) すると 抗インフルエンザ薬のオセルタ ミビル及びペラミビルに耐性を示す 今シーズン 札幌市で分離 検出された AH1pdm09 分離株につい て 感染研が示す Allele-specific RT-PCR 法に よる H275Y 変異の検出 1) に準じて H275Y 変異の 検出を行い 抗インフルエンザ薬耐性株の調査を行 った また Allele-specific RT-PCR 法で検出限 界以下であった臨床検体について ダイレクトシー ケンス法により NA 遺伝子の塩基配列を決定し H275Y 変異の有無を確認した 札幌市で分離されたインフルエンザウイルス分 離株の一部については感染研において薬剤感受性 試験 1) が実施された 3. 結果と考察 3-1 インフルエンザ患者発生状況 2016/2017 シーズンの札幌市におけるインフルエ ンザ患者報告数を図 1 に示す 定点 (56) 当たりの患者報告数は 2016 年第 43 週 (10/24~10/30) に流行開始の目安である 1.0 を超 え 2017 年第 3 週 ( 1/16~1/22) に定点当たり 10.9 と流行発生注意報レベルの基準値 (10.0) を上回り 2017 年第 5 週 (1/30~2/5) に定点当たり 23.4 と ピークになった その後患者報告数は徐々に減少し たものの 2017 年第 12 週 (3/20~3/26) まで注意報 80 インフルエンザの定点当たり患者報告数 レベルで推移し 第 21 週 (5/22~5/28) に定点当たり 1.0 を下回った 今シーズンの患者報告数は 14,015 人 (56 定点 2017 年 6 月 20 日現在 ) であった 札幌市では 今シーズンは流行開始が早かったものの 警報レベル ( 定点当たり 30) を超えることはなく 過去 5 年及び全国と比べピークが低く 大きな流行にはならなかった 3-2 インフルエンザウイルスの分離 検出状況 2016/2017 シーズンの札幌市におけるインフルエンザウイルスの分離 検出状況を図 2 に示す 今シーズンのインフルエンザウイルスは 2016 年第 42 週採取の咽頭拭い液から AH3 亜型ウイルス ( 以下 AH3 ) が初分離され シーズンを通して 127 株が分離 検出された 昨シーズン優勢であった AH1pdm09 は 2016 年第 44 週採取の咽頭拭い液か初分離され シーズン初めの第 49 週までに 7 株が分離 検出された また B 型ウイルス (Victoria 系統 以下 B 型 Victoria 系統 ) は 2017 年第 3 週採取の咽頭拭い液から B 型ウイルス ( 山形系統 以下 B 型山形系統 ) は 2017 年第 1 週採取の咽頭拭い液から初分離された 2017 年 6 月 20 日現在 分離 検出された B 型ウイルス 36 株の内訳は Victoria 系統が 17 株 山形系統が 18 株 B 型系統不明が 1 株であった 今シーズンの流行は AH3 が主流となり 後半に B 型ウイルスの両系統の割合が多くなった 2011/2012 年 2012/2013 年 2013/2014 年 2014/2015 年 2015/2016 年 2016/2017 年 2016/2017 年 ( 全国 ) ( 週 ) 2016 年 53 週の報告値札幌市 1.8 全国 0.9 図 /2012~2016/2017 シーズンのインフルエンザ患者報告数

3 インフルエンザウイルスの分離 検出数 B 型 ( 系統不明 ) B 型 ( 山形系統 ) B 型 (Victoria 系統 ) AH3 AH1pdm09 患者報告 ( 札幌市 ) 患者報告 ( 全国 ) インフルエンザの定点当たりの患者報告数 年 ( 週 ) 2016 年 ( 週 ) 2017 年 ( 週 ) 図 / /2017 シーズンのインフルエンザウイルス分離 検出状況 13% % % 80 4% % % % AH3 68 株 A/HongKong/4801/2014(X-263)( ホモ価 5120) AH1pdm09 5 株 A/California/07/2009(X-179A) ( ホモ価 ) 35% % 12% % % B 型 Victoria 系統 17 株 B/Texas/02/2013( ホモ価 320) 図 /2017 シーズン分離株の HI 試験結果 B 型山形系統 16 株 B/Phuket/3073/2013( ホモ価 320) 3-3 インフルエンザウイルスの型 亜型の同定及び HI 試験結果分離されたインフルエンザウイルスの HI 試験結果を図 3 に示す なお HI 試験はウサギ免疫血清を用いており この結果から正確な抗原性解析は行えないため 結果は参考値である 今シーズン MDCK 細胞により分離された AH3 は 69 株であった 69 株のうち 68 株について HI 試験を行った結果 HI 価はワクチン株である A/Hong

4 Kong( 香港 )/4801/2014(X-263) 抗血清 ( ホモ価 5120) に対して 80~2560 の範囲にあった 1 株は HA 価が上がらず HI 試験を行うことができなかったため リアルタイム RT-PCR 法により AH3 に同定された 今シーズン MDCK 細胞により分離されたAH1pdm09 は5 株であった HI 試験を行った結果 HI 価はワクチン株であるA/California/07/2009(X-179A) 抗血清 ( ホモ価 ) に対して全てであった 今シーズン MDCK 細胞により分離された B 型 Vi ctoria 系統は 17 株であった HI 試験を行った結果 ワクチン株である B/Texas/02/2013 抗血清 ( ホモ価 320) に対して HI 価が 320~ の範囲にあった また 山形系統は 16 株分離され HI 試験を行った結果 ワクチン株である B/Phuket/3073/201 3 抗血清 ( ホモ価 320) に対して HI 価が 160~64 0 の範囲にあった インフルエンザ様疾患として搬入された臨床検体のうち MDCK 細胞による分離が陰性であった検体について リアルタイム RT-PCR 法により型 亜型の同定を行った この結果 58 検体が AH3 2 検体が AH1pdm09 2 検体が B 型山形系統に同定され 1 検体が B 型 ( 系統不明 ) であった 今シーズンの AH3 は MDCK 細胞による分離が 54.3% と低かった 3-4 インフルエンザウイルスの HA 遺伝子解析 2016/2017 シーズンの札幌市において分離 検出されたインフルエンザウイルスの抗原性状に係わる HA 遺伝子の系統解析を行った 図 4~7 に系統樹を示す (1) AH3 今シーズン札幌市で分離 検出した AH3 127 株のうち当所において 17 株 感染研において 9 株の遺伝子解析が行われた この結果 26 株全てがサブクレード 3C.2a( 以下 3C.2a 株 ) に属していた このうち 12 株は昨シーズンに流行していた N171K I 406V G484E のアミノ酸置換をもつ 3C.2a.1 に属していた また 今シーズンは T131K R142K のアミノ酸置 換をもつ群 I58V N121K S144K S219Y のアミノ酸置換をもつ群 2017 年年明け頃から検出された N 31S R142G S144R N171K I192T Q1H のアミノ酸置換をもつ群と多様な 3C.2a 株が検出された この結果から 今シーズン札幌市で流行していた AH3 は 3C.2a 株が大部分を占めていたと推察される 3C.2a 株は 国内において 2013/2014 シーズン後半から検出され始め 2014/2015 及び 2015/2016 シーズンの流行株 2),3),4) であり 今シーズンは国内及び世界的にも大部分が 3C.2a 株であった 5),6) 3C.2a 株は今シーズンのワクチン株に選定されている (2) AH1pdm09 今シーズン札幌市で分離 検出された AH1pdm09 7 株のうち 5 株が感染研において遺伝子解析が行われた この結果 5 株全てがサブクレード 6B.1( 以下 6B.1 株 ) に属していた 国内においても 6B.1 株が国内分離株の大部分を占めていた 5) 6B.1 株は感染研が実施した HI 試験結果からワクチン株 (A/ California/07/2009) の抗原性と類似していた (3) B 型ウイルス今シーズン札幌市で分離 検出された B 型 Victo ria 系統 17 株のうち 1 株について感染研において HA 遺伝子の解析が行われた この結果 1 株はクレード 1A に属し 感染研が実施した HI 試験結果ではワクチン株 (B/Texas/02/2013) の抗原性と類似していた また 今シーズン札幌市で分離 検出された B 型山形系統は 18 株あり このうち 1 株について感染研において HA 遺伝子の解析が行われた この結果 1 株はクレード 3 に属し 感染研が実施した HI 試験結果からワクチン株 (B/Phuket/3073/ 2013) の抗原性と類似していた 3-5 抗インフルエンザ薬耐性株サーベイランス 2016/2017 シーズンに札幌市内で分離 検出された AH1pdm09 7 株について オセルタミビル ペラミビルに対し耐性を示す H275Y 変異株について解析を行った この結果 7 株全てにおいて H275Y 変異は検出されなかった

5 また AH1pdm09 5 株 AH3 9 株及び B 型 Victori a 系統 2 株 B 型山形系統 4 株について 感染研が実施した薬剤感受性試験の結果 全ての株がオセルタミビル ザナミビル ペラミビル及びラニナミビルに対して感受性を保持していた 今シーズン国内において検出された抗インフルエンザ薬耐性株 (2017 年 6 月 21 日現在 ) については AH1pdm09 が 175 株解析され このうち 2 株 ( 1.1%) がオセルタミビル ペラミビルに耐性を示すウイルスであったが 国内で拡がりは確認されていない 7) AH3 亜型 333 株 B 型は 214 株が解析されたが オセルタミビル ペラミビルに耐性を示すウイルスは検出されていない 7) 4. まとめ 2016/2017 シーズンの札幌市におけるインフルエンザの流行は昨シーズンより早く 10 月後半から始まり 1 月後半から 2 月初めにかけて流行のピークとなり ピーク後も注意報レベルで推移した 今シーズンは昨シーズンほど大きな流行にはならなかったものの 昨シーズンは流行期 ( 定点当たりの患者発生数が 1.0 を超えた時点から 1.0 を下回るまでの間 ) が 23 週間であったのに対し 今シーズンは 31 週間と流行期が長く持続していた 分離 検出されたインフルエンザウイルスの割合は AH3 が 75.1%(127 株 ) AH1pdm09 が 4.1%(7 株 ) B 型 Victoria 系統が 10.1%(17 株 ) B 型山形系統が 10.7%(18 株 ) であった 今シーズンは AH3 が多数を占め 流行の主流であった また シーズン後半は B 型ウイルスの割合が増え Victoria 系統及び山形系統の両系統が流行していた 今シーズン分離 検出された AH1pdm09 B 型 Victoria 系統 B 型山形系統は感染研において実施された HI 試験結果からワクチン株に類似していたと考えられる 一方 AH3 は 今シーズンの札幌市の流行株のうちワクチン株の抗原性と相違していたものがあった これは発育鶏卵を用いたワクチ ン製造時のワクチン株の抗原性の変化が要因の一つと考えられる 5) また 札幌市において分離 検出されたインフルエンザウイルスの一部から抗インフルエンザ薬耐性株は検出されなかったが 今後も動向を監視していく 謝辞 : ご協力いただきました医療機関 保健所の皆様に深謝致します 5. 文献 1) 国立感染症研究所 : インフルエンザ診断マニュアル第 3 版平成 26 年 9 月 2) 大西麻実, 古舘大樹, 扇谷陽子他 :2014/2015 シーズンの札幌市におけるインフルエンザの流行状況,42,57-61,2015 3) 大西麻実, 菊地正幸, 楢林秀紀他 : 2015/2016 シーズンの札幌市におけるインフルエンザの流行状況,43,57-65,2016 4) 国立感染症研究所インフルエンザウイルス研究センター第一室 WHO インフルエンザ協力センター 地方衛生研究所インフルエンザ株サーベイランスグループ : 病原微生物検出情報, 37 (11), ,2016 5) 国立感染症研究所 厚生労働省結核感染症課 : 今冬のインフルエンザについて (2016/2017 シーズン ), mages/idsc/disease/influ/fludoco1617.pdf 6) WHO:Recommended composition of influenza virus vaccines for use in the northern hemisphere influenza season 7) 国立感染症研究所インフルエンザウイルス研究センター第一室 WHO インフルエンザ協力センター 全国地方衛生研究 : 抗インフルエンザ薬耐性株サーベイランス 2017 年 6 月 21 日, ww.niid.go.jp/niid/ja/influ-resist.html

6 2016/2017 札幌分離 検出株 2015/2016 札幌分離 検出株 2016/2017 シーズンワクチン株 2015/2016 シーズンワクチン株 L3I,N144S,F159Y Q311H,D489N N225D A138S F159S T135K,T160I,M268I A/SAPPORO/32/2017_Feb A/SAPPORO/18/2017_Jan A/SAPPORO/89/2016_Jun A/SAPPORO/121/2016_Dec A/SAPPORO/122/2016_Dec A/SAPPORO/16/2017_Jan A/SAPPORO/90/2016_Oct A/SAPPORO/93/2016_Nov A/SAPPORO/5/2016_Jan A/SAPPORO/106/2016_Dec A/SAPPORO/109/2016_Dec A/SAPPORO/91/2016_Oct A/SAPPORO/1/2017_Jan A/SAPPORO//2016_Nov A/MIE/25/2015 A/SAPPORO/69/2016_Feb A/SAPPORO/53/2016_Feb /2016_Mar /2016_Feb A/SAPPORO/29/2016_Jan A/SAPPORO/78/2016_Mar A/SAPPORO/86/2016_Apr A/SAPPORO/83/2016_Apr A/SAPPORO/84/2016_Apr A/Hong_Kong/7127/2014 A/SAPPORO/39/2017_Apr A/SAPPORO/22/2017_Feb A/SAPPORO/107/2016_Dec A/SAPPORO/35/2017_Mar A/SAPPORO/21/2017_Feb A/SAPPORO/34/2017_Feb A/SAPPORO/114/2016_Dec A/SAPPORO/118/2016_Dec A/SAPPORO/64/2015_Dec A/SAPPORO/61/2015_Nov A/SAPPORO/52/2015 Apr A/SAPPORO/62/2015_Nov A/SAPPORO/53/2015_Apr A/SAPPORO/55/2015_Apr A/SAPPORO/38/2015_Mar /2015_Jan A/SAPPORO/21/2015_Feb A/SAPPORO/71/2015_Dec A/SAPPORO/63/2015_Nov A/SAPPORO/24/2017_Feb A/SAPPORO//2016_Nov A/SAPPORO/66/2015_Dec A/SAPPORO/26/2015_Feb A/SAPPORO/28/2015 Feb A/SAPPORO/154/014_Dec A/SAPPORO/137/2014 Nov A/SAITAMA/103/2014 A/SAPPORO/39/2015_Mar D53S,Y94H,T160A,R261Q,A304P A/SAPPORO/40/2017_Apr N31S,R142G,S144R A/SAPPORO/29/2017_Feb N171K,I192T A/SAPPORO/15/2017_Jan Q1H D53N A/SAPPORO/36/2017_Mar A/Hong_Kong/4801/2014 (K160T) L194P A/Hong_Kong/4801/2014_X-263 A/Virginia/14/2014 A/Hong_Kong/146/2013 E62K,Y94H S1P A/SAPPORO/146/2014_Dec A/SAPPORO/6/2015_Jan A/SAPPORO/140/2014_Dec A/SAPPORO/138/2014_Nov A/TOKYO/34284/2014 A/Switzerland/15293/2013 A/SAPPORO/117/2014 A/SAPPORO/132/2014 A/VICTORIA/2078/2014 A/SAPPORO/116/2014 A/TOKYO/31512/2013 A/SAPPORO/106/2013 A/SAPPORO/112/2013 A/Samara/73/2013 A/New_York/39/2012 S279Y A/SAPPORO/121/2012 A/SAPPORO/50/2012 A/Texas/50/2012 n=2 (2011 札幌株 ) A/Victoria/361/2011 A/SAPPORO/24/2012 A/Victoria/208/2009 A/Victoria/210/2009 A/Perth/16/2009 K326R N145S T128A R142G Q33R N278K K160T Q57K F193S n=4(2012 札幌株 ) R142G N171K I406V G484E A106G N121K A530V A304T R261Q T131K R142K I58V,N121K S144K,S219Y R142G K92R H311Q L243F A212T n=8(2014/2015 札幌株 ) 3C.3a 3C.3 3C.2a.1 3C.2a 3C 図 4 AH3 の HA 遺伝子系統樹

7 2016/2017 札幌分離 検出株 2015/2016 札幌分離 検出株 2016/2017 シーズンワクチン株 2017/2018 シーズン推奨ワクチン株 S84N I216T S162N A/Michigan/45/2015 A/Yokohama/90/2015 A/India/P158900/2015 A/Fukuoka/SDC1/2015 A/SAPPORO/10/2014 A/SAPPORO/31/2014 S84N A/SAPPORO/63/2014 A/Louisiana/08/2013 A/Mississippi/11/2013 E491G V321T A/SAPPORO/110/2016_Dec V47I,I96N,V321I A/SAPPORO/102/2016_Nov A/SAPPORO//2016_Nov A/HOKKAIDO/19/2016 A/SAPPORO/36/2016_Feb A/SAPPORO/23/2016_Feb A/SAPPORO/2/2016_Jan A/SAPPORO/58/2016_Mar A/SAPPORO/103/2016_Nov A/SAPPORO/94/2016_Nov A/SAPPORO/87/2016_May A/SAPPORO/71/2016_Mar 6B.1 6B n=32(2013/2014 札幌株 ) T15S S451N DN,K163Q,S185T,A256T K283E,E4K E283D A/SAPPORO/107/2013 A/Sichuan-Qingyang/SWL15/2013 A/Beijing-Xicheng-Nan-Pian/SWL11619/2013 A/SAPPORO/35/2014 A/SAPPORO/72/2014 A261S V152T,V173I,E491G,D501E A/SAPPORO/66/2014 A/SAPPORO/1/2016_Jan A/SAPPORO/18/2016_Mar A/Minnesota/32/2015 A/FUKUOKA/15032/2015 A/KANAGAWA/73/2015 6B.2 n=25(2013/2014 札幌株 ) E374K P83S S203T I321V A/SAPPORO/44/2014 A/SAPPORO/77/2014 A/SAPPORO/58/2014 A/SAPPORO/8/2014 A/SAPPORO/163/2011 A/SAPPORO/576/2009 A/SAPPORO/31/2010 A/PERTH/261/2009 A/SAPPORO/190/2009 A/SAPPORO/569/2009 A/SAPPORO/464/2009 A/California/07/ 図 5 AH1pdm09 の HA 遺伝子系統樹 N129D I117V V146I B/SAPPORO/2/2017_Jan B/SAPPORO/51/2016_May B/SAPPORO/23/2015_Nov B/MIE/3/2015 B/Texas/02/2013 T73M B/SAPPORO/16/2013 B/SAPPORO/24/ B/SAPPORO/2/2014 B/SAPPORO/93/2014 B/SAPPORO/19/2012 B/SAPPORO/57/2012 B/Brisbane/60/2008 B/Shizuoka/57/2011 B/Taiwan/55/2009 B/Ohio/01/2005 1A K211R N116K K2E E312K M251V L172Q N421S B/SAPPORO/1/2017_Jan T234K B/SAPPORO/54/2016_May N145S B/SAPPORO/57/2016_Jun B/SAPPORO/12/2016_Feb B/SAPPORO/1/2015 B/SAPPORO/15/2015 B/SAPPORO/22/2015 B/SAPPORO/2/2015 B/SAPPORO/94/2014 B/PHUKET/3073/2013 B/SAPPORO/30/2013 B/SAPPORO/36/2013 B/SAPPORO/1/2014 B/SAPPORO/33/2013 B/SAPPORO/31/2013 M251V B/SAPPORO/5/2015 B/SAPPORO/1/2013 B/Wisconsin/01/2010 B/SAPPORO/21/2013 B/MALAYSIA/412/2012 B/SAPPORO/62/2012 B/Massachusetts/02/2012 B/SAPPORO/40/2012 B/SAPPORO/72/2011 B/KANAGAWA/37/2011 B/Florida/04/ 図 6 B 型 Victoria 系統の HA 遺伝子系統樹 図 7 B 型山形系統の HA 遺伝子系統樹

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