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1 花 成 ホルモン(フロリゲン)の 同 定 と 植 物 制 御 への 応 用 島 本 功 Laboratory of Plant Molecular Genetics Nara Institute of Science and Technology (NAIST) 奈 良 先 端 科 学 技 術 大 学 院 大 学

2 様 々な 時 期 に 花 を 咲 かせる 植 物 たち さくら チューリップ アサガオ コスモス ウメ ラベンダー 菊 さざんか 四 季 のある 日 本 では 一 年 間 を 通 して 様 々な 花 を 見 ることが 出 来 ます しかし これらの 植 物 たちは どのようにして 決 まった 季 節 に 花 を 咲 かせることが 出 来 るのでしょうか?

3 日 本 における 日 長 の 変 化 明 期 > 暗 期 日 の 長 さ 明 期 = 暗 期 明 期 = 暗 期 明 期 < 暗 期 冬 至 (12 月 中 旬 ) 春 分 (3 月 中 旬 ) 夏 至 (6 月 中 旬 ) 秋 分 (9 月 中 旬 ) 冬 至 (12 月 中 旬 )

4 植 物 は 季 節 が 判 る 高 校 生 物 教 科 書 生 物 IB 第 一 学 習 社 P. 234

5 短 日 植 物 と 長 日 植 物 の 日 長 認 識 の 違 い 長 日 植 物 長 日 条 件 ( 春 分 夏 至 ) 短 日 植 物 明 期 > 暗 期 短 日 条 件 ( 秋 分 冬 至 ) 明 期 < 暗 期 ダイコン ほうれん 草 アサガオ イネ

6 光 周 性 植 物 が 花 を 咲 かせるために 必 要 な 明 暗 の 周 期 に 反 応 する 現 象 を 光 周 性 という 短 日 植 物 は ある 一 定 時 間 以 上 の 連 続 した 暗 期 を 花 を 咲 かせるために 必 要 とする 長 日 植 物 では 長 い 暗 期 はかえって 花 芽 形 成 を 妨 げる

7 長 日 植 物 と 短 日 植 物 との 代 表 選 手 長 日 植 物 シロイヌナズナ Arabidopsis thaliana 短 日 植 物 イネ Oryza sativa L 両 者 の 日 長 への 反 応 の 違 いは? 開 花 の 仕 組 みは 同 じ?

8 開 花 関 連 遺 伝 子 は 保 存 されているがその 制 御 に 違 いがある シロイヌナズナ ( 長 日 植 物 ) 長 日 条 件 GI 長 日 条 件 OsGI イネ ( 短 日 植 物 ) 短 日 条 件 OsGI CO FT フロリゲン Hd1 Hd3a 2つの 機 能 Hd1 Hd3a 開 花 誘 導 開 花 遅 延 開 花 誘 導 Hayama et al. (2003) Nature 422:

9 花 成 ホルモン(フロリゲン)

10 花 成 : 栄 養 生 長 から 生 殖 生 長 へ 栄 養 生 長 生 殖 生 長 発 芽 後 の 植 物 の 地 上 部 は 茎 の 先 端 にある 茎 頂 分 裂 組 織 で 作 られる 花 成 植 物 が 栄 養 生 長 から 生 殖 生 長 へと 移 行 する 際 に 茎 頂 分 裂 組 織 から 作 られ る 側 生 器 官 が 葉 から 花 芽 へと 変 化 し 花 序 分 裂 組 織 となる この 花 芽 形 成 の 開 始 を 花 成 と 呼 ぶ 葉 師 部 茎 頂 分 裂 組 織 花 成 花 序 分 裂 組 織 栄 養 生 長 生 殖 生 長

11 植 物 が 日 長 を 感 じる 部 位 は 葉 である 葉 に 短 日 処 理 をする 花 成 誘 導 される 茎 頂 に 短 日 処 理 をする 誘 導 されない (Chailakhyan et al, 1936)

12 花 成 ホルモン(フロリゲン) フロリゲン

13 花 成 ホルモン(フロリゲン):6つの 条 件 1 花 成 が 誘 導 される 日 長 条 件 に 置 かれた 植 物 の 葉 におい て 作 られる 2 花 成 を 誘 導 する 3 師 管 を 通 って 移 動 する 4 茎 頂 分 裂 組 織 に 運 ばれる 5 接 木 間 を 伝 わる 6 長 日 植 物 と 短 日 植 物 において 共 通 である

14 フロリゲン 研 究 の 歴 史 Chailakhyan 1936 接 ぎ 木 実 験 の 結 果 から 提 唱 多 くの 植 物 生 理 学 者 による 精 製 の 試 みー 不 成 功 に 終 わる シロイヌナズナの 分 子 遺 伝 学 ーFT 遺 伝 子 がフロリゲンをコードする 可 能 性 が 最 近 出 てきた 2005 Abe et al. Wigge et al. FTのパートナーFDは 茎 頂 で 発 現 FTは 葉 で 発 現 つまりFT は 葉 から 茎 頂 へ 移 動 する 必 要 がある 2005 Huang et al. ヒートショックプロモーターを 用 いて 葉 でFTを 発 現 させFT mrnaの 移 動 を 報 告 後 に 誤 りであることがわかる (2007) 2006 Lifshitz et al. FT mrnaは 接 ぎ 木 を 通 じた 移 動 なしと 報 告 FTタンパクは 葉 から 茎 頂 へ 移 動 するのか? FT mrnaは 本 当 に 移 動 するのか?

15 Hd3a 遺 伝 子 はどのようにしてイネ の 花 成 を 促 進 しているのか? 短 日 条 件 Hd3a OsGI Hd1 Hd3aタンパク 質? Hd3a mrna 茎 頂 分 裂 組 織 Hd3a Hd3aタンパク 質? Hd3a mrna 葉 師 部 Hd3a

16 イネの 開 花 促 進 遺 伝 子 Hd3a Hd3a はイネの 出 穂 にかかわるQTLの 一 つとして 特 定 された Hd3a 遺 伝 子 がコードしているタンパク 質 はシロイヌナズナの 花 成 統 合 因 子 FT と 高 い 相 同 性 を 示 す Hd3a は 短 日 条 件 で 特 異 的 に 発 現 が 誘 導 される Hd3a をイネにおいて 過 剰 発 現 させると 早 咲 き 表 現 型 を 示 す FT 1: MSI N.. I RDPL I VSRVVGDVLDPFNRSI TL KVTYGQREVTNGLDL RPSQVQNKPRVEI GG: 58 Hd3a 1: MAGSGRDRDPL VVGRVVGDVL DAFVRSTNL KVTYGSKTVSNGCEL KPSMVTHQPRVEVGG: FT 59: EDL RNF YT L VMVDPDVPSPSNPHL REYL HWL VTDI PATTGTTFGNEI VCYENPSPTAGI H:118 Hd3a 61: NDMRTF YT L VMVDPDAPSPSDPNL REYL HWL VTDI PGTTAASFGQEVMCYESPRPTMGI H: FT 119: RVVF I L FRQL GRQTVYAPGWRQNFNTREFAEI YNLGL PVAAVFYNCQRESGCGGRRL.. :175 Hd3a 121: RL VFVL FQQL GRQTVYAPGWRQNFNTKDFAEL YNLGSPVAAVYFNCQREAGSGGRRVYP:179 LD SD (Kojima et al., 2002; Hayama et al., 2003)

17 Hd3a mrnaは 茎 頂 ではほとんど 検 出 されない (Day) 0 LD30 SD10Sampling (ZT) Sampling 2.5 Hd3a / Ubq mrna 茎 頂 根 基 部 葉 鞘 葉 身

18 Hd3a は 維 管 束 特 異 的 な 発 現 を 示 す Hd3a pro GUS nos T 葉 身 葉 身 横 断 切 片 茎 頂 arrow head : 茎 頂 分 裂 組 織

19 解 析 に 用 いた 合 成 遺 伝 子 1 Hd3a pro Hd3a:GFP nos T 2 rolc pro Hd3a:GFP nos T 3 RPP16 pro Hd3a:GFP nos T

20 解 析 に 用 いた 合 成 遺 伝 子 1 Hd3a pro Hd3a:GFP nos T 2 rolc pro Hd3a :GFP nos T 3 RPP16 pro Hd3a :GFP nos T

21 Hd3a::Hd3a:GFP 形 質 転 換 体 は 早 咲 きになる (Day) 70 Days to flowering WTHd3a :: Hd3a : GFP 短 日 条 件 下 における 出 穂 ( 開 花 ) 日 Hd3a::Hd3a:GFP

22 arrow head: 茎 頂 分 裂 組 織 bar = 50 μm Hd3a:GFPは 茎 頂 において 観 察 される GFP 蛍 光 明 視 野 + GFP

23 茎 頂 茎 頂 分 裂 組 織 におけるHd3a:GFPの 観 察 葉 arrow head: 茎 頂 分 裂 組 織 bar = 50 μm Hd3a:GFP 維 管 束

24 解 析 に 用 いた 合 成 遺 伝 子 1 Hd3a pro Hd3a :GFP nos T 2 rolc pro Hd3a:GFP nos T 3 RPP16 pro Hd3a:GFP nos T

25 維 管 束 特 異 的 なプロモーターを 用 いた 形 質 転 換 体 も 早 咲 き 表 現 型 を 示 す (Day) 80 Hd3a : GFP GFP Days to flowering WT RPP16 rolc genotype WT RPP16 :: Hd3a : GFP RPP16 ::GFP rolc :: Hd3a : GFP rolc :: GFP Days to flowering (days ± S.E..) 50.4 ± 7.6 (n = 5) 14.6 ± 4.6 (n = 5) 62 (n = 2) 19.5 ±13.6 (n = 11) 82 (n = 2)

26 Hd3a:GFP を発現させた植物体の葉におい てHd3a:GFP タンパク質が検出された kda rolc:: WT GFP Hd3a:GFP rolc::hd3a:gfp Hd3a:GFP 46.9 kda GFP 27 kda RPP16::Hd3a:GFP

27 rolc::hd3a:gfp 植 物 体 において 維 管 束 特 異 的 に 発 現 させたHd3a:GFPは 茎 頂 分 裂 組 織 で 観 察 される rolc::kaede GFP 蛍 光 明 視 野 + GFP rolc::kaede arrow head: 茎 頂 分 裂 組 織 bar = 50 μm

28 フロリゲン6つの 条 件 と 今 回 の 解 析 で 明 らかになったこと 1 植 物 の 花 成 が 誘 導 される 日 長 条 件 下 の 葉 において 作 られる Hd3a mrnaは 短 日 条 件 の 葉 で 高 い 発 現 を 示 す 2 植 物 の 花 成 を 誘 導 する Hd3a 過 剰 発 現 体 は 早 咲 き 表 現 型 を 示 し 発 現 抑 制 体 は 花 成 がおくれる 3 接 木 間 を 移 動 できる Hd3a の 相 同 遺 伝 子 FT のタンパク 質 は 接 木 間 を 移 動 できる 4 長 日 植 物 と 短 日 植 物 において 共 通 である 短 日 植 物 のイネのHd3a と 長 日 植 物 のシロイヌナズナのFT は アミノ 酸 レベル で 高 い 相 同 性 を 示 し 機 能 もまた 保 存 されている 5 師 管 を 通 じて 移 動 する Hd3a は 維 管 束 の 師 管 周 辺 で 発 現 している (Corbesier et al, 2007) 6 茎 頂 分 裂 組 織 にシグナルとして 運 ばれる Hd3a タンパク 質 が 維 管 束 から 茎 頂 分 裂 組 織 まで 連 続 的 に 観 察 された

29 Hd3aタンパク 質 の 移 動 モデル Hd3a 茎 頂 分 裂 組 織 原 形 質 連 絡 Hd3a 師 管 Hd3a 師 孔 師 板 Hd3a Hd3a Hd3a Hd3a 伴 細 胞 師 部 柔 組 織

30

31 フロリゲン 今 後 の 課 題 フロリゲンによって 花 の 作 られるしくみ フロリゲンの 移 行 のしくみ フロリゲン 遺 伝 子 はひとつだけか? フロリゲンは 全 ての 植 物 で 共 通 か? 人 工 フロリゲンの 合 成 は 可 能 か?

32 茎 頂 におけるHd3a:GFP の 局 在 は 成 長 時 期 によって 異 なるかもしれない 栄 養 生 長 期 生 殖 生 長 期 spectrally unmixed Light Field + FITC

33 Ch #6 RFT1 14kb Hd3a Reina Komiya Hd3a とRFT1 遺 伝 子 は 高 い 相 同 性 を 持 ち 染 色 体 の 近 い 場 所 に 存 在 する しかし 通 常 RFT1 遺 伝 子 は 働 いていない Hd3aとRFT1 両 方 なくなると 花 は 咲 かない! Ubq Hd3a / Ubq AS linker RFT1 WT # 1 # 2 double RFT1-Hd3a RNAi S Hd3a T Days to flowering RFT1 / Ubq WT # 1 # 2 double RFT1-Hd3a RNAi > 300 days R-Hi1 WT

34 フロリゲンは 花 を 作 るためにふたつの 遺 伝 子 を 活 性 化 する 開 花 遅 延? mrna Hd3a RNAi plants Hd3a フロリゲン 遺 伝 子 RFT1 AcAc Ch.6 WT mrna mrna OsMADS14 OsMADS15 Hd3a RFT1 Vegetative stage Flowering no flowering 60 DAS 90 DAS 300 DAS

35 rolc::hd3a-gfp を 導 入 したキク 神 馬 サ イ ズ マ カ 非 形 質 転 換 体 形 質 転 換 体 (bp) 12,216 3, 時 間 日 長 下 で 蕾 を 付 けたHd3a 遺 伝 子 を 導 入 した 形 質 転 換 体 2,036 1,636 1, bp (Hd3a) RT-PCRによる 形 質 転 換 体 に おけるHd3a 遺 伝 子 発 現 の 確 認 蕾 内 の 正 常 な 花 芽 分 化

36 rolc::hd3a-gfp を 導 入 したキク 神 馬 の 開 花 時 間 日 長 下 (3,000lx)での 培 養 栽 培 培 養 ビン 中 での 開 花 の 様 子 鉢 上 げ 個 体 ( 左 記 の 挿 し 木 繁 殖 個 体 )の 開 花 従 来 キク 神 馬 では 花 芽 分 化 や 開 花 をしない 長 日 条 件 下 で 形 質 転 換 体 は 着 蕾 し 開 花 した イネ 由 来 Hd3a 遺 伝 子 がキクでも 働 き 開 花 を 促 進 できる 可 能 性 が 示 唆 された イネのフロリゲン 遺 伝 子 を 花 の 改 良 に 応 用 できる

37 人 工 フロリゲンの 合 成 は 可 能 か? たんぱく 質 の 改 変 植 物 への 導 入 法 の 開 発

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