I 2 ESI - Ion Trap

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1 I 2 ESI - Ion Trap

2 ESI 520l/min 35V

3 V Taylor

4

5 20 R N-

6 ESI) Intens. x Cytochrome c Da 09123cyto mass00003.d: +MS ESI m/z

7 N-H- rnh() U LenardJones 4 r 12 r 6 + N - H aze U U Coulmb Coulmb 2 Ze ( r 4 r 0 a) 2 2 Ze 1 r 3 ( r a) a a

8 N-H N - H

9 Cytochrome c ccytochrome c Intens. x , cyto mass00003.d: +MS c m/z

10 Chain Sequence of Cytochrome c Basic Residues; Lysine;K, Arginine;R, Histidine;H 104 residues GDVEKGKKIFVQKCAQCHTVEKGGKHKTGPN LHGLFGRKTGQAPGFTYTDANKNKGITWKEET LMEYLENPKKYIPGTKMIFAGIKKKTEREDLIA YLKKATNE

11 (myoglobin (lysozyme [S-S] I (angiotensin I ) 110g/ml

12 Myoglobin Intens. x10 8 myo mass00000.d: +MS m/z

13 Chain Sequence of Myoglobin Basic Residues; Lysine;K, Arginine;R, Histidine;H 153 residues GLSDGEWQQVLNVWGKVEADIAGHGQEVLIRLFTG HPETLEKFDKFKHLKTEAEMKASEDLKKHGTVVLTAL GGILKKKGHHEAELKPLAQSHATKHKIPIKYLEFISDAI IHVLHSKHPGDFGADAQGAMTKALELFRNDIAAKYK ELGFQG

14 Lysozyme Lysozyme 14000amu Asp7Glu2Arg11Lys6 S-S

15 Lysozyme Length;129 residues Secondary structure; 41% helical (7 helices; 54 residues) 10% beta sheet (9 strands; 14 residues) Cystine;C, Disulfide bond;---- Reference; Protein Data Bank (

16 Reduction of S-S bonds with DTT H N O C SH SH + HSS HSS OH OH N H C O HO SH HS OH Dithiothreitol(DTT)

17 Lysozyme Intens. x S-S lysozyme mass 158vcap00000.d: +MS x m/z S-S lysozyme+dtt mass 158vcap00000.d: +MS Time [s] m/z

18 Disulfide-intact lysozyme H + H + Disulfide-reduced lysozyme H + H + s s H + H + s s H + H + H + s s H + H + H + H + H + S-S H + H + H + H + H + H +

19 Angiotensin (angiotensin) IIV4 I1 Asp - Arg - Val - Tyr - Ile - His - Pro - Phe - His - Leu - OH 1300amu Intens. x ang mass00004.d: +MS m/z

20 Bruker-Daltonics, HCT-ETD II

21 He N2 PC Hub

22

23

24 Source CID + N 2 N 2 N 2 N 2 N 2 N 2 N V

25 Intens. x x x Angiotensin I 40V angiotensin mass 129 vcap00000.d: +MS m/z angiotensin mass 230 vcap00000.d: +MS m/z Time [s] Vcap 129V Vcap 230V angiotensin mass 360 vcap00000.d: +MS Vcap 360V Time [s] m/z

26 Myoglobin 40V Intens. x x x myoglobin mass 151vcap d: +MS m/z myoglobin mass 300vcap d: +MS Time m/z[s] myoglobin mass 360vcap d: +MS Vcap 151V Vcap 300V Vcap 360V Time [s] m/z

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28 Octapole Ion Guide

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31

32 Quadrupole Ion Trap + ++

33

34 Angiotensin I z=2,3) C Intens. x angiotensin I mass 150vcap high res00000.d: +MS m/z Intens. x angiotensin I mass 150vcap high res00000.d: +MS m/z

35

36 Angiotensin I 1. ESIangiotensin I23 MALDI Myoglobin 1. Myoglobin 2. Lysozyme 1. Lysozyme4S-SDTTS-S 1. Lysozyme S-S S-S

37

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