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1 Dr. Ulrich Kaiser ウルリッヒ カイザー博士 Dipl.-Ing. Chemical Engineering( 化学工学 ) Manager Research & Development ( 研究および開発マネージャー ) gke-gmbh, Waldems, Germany 公認 : Expert of the Central Authority of the Laender for Health Protection (ZLG) DIN, EN および ISO のワーキンググループ ( バリデーション 滅菌 滅菌モニタリングのための生物学的 / 化学的インジケータ ) のメンバーである 事業内容 : 洗浄 消毒 滅菌工程 ( 乾熱 湿熱 ( 蒸気 ) EOG ホルマリン 過酸化水素ガス ) の設計 バリデーションおよびモニタリング 製造および販売 : 洗浄 消毒 滅菌工程のモニタリングおよびドキュメンテーションシステム 生物学的および化学的インジケータ 洗浄インジケータ 工程試験用具 (PCD) システム U. Kaiser 03/2018

2 EN ISO EN ISO 滅菌工程におけるバリデーションおよび日常的モニタリングに関する有効な規格 規格番号洗浄 滅菌工程注記 EN ISO TS すべて 特に特別な決まった基準がない場合 蒸気および熱水 工程 細菌の死滅率 および重要な工程パラメータモニタリングに関する知識の要求事項 物理的モニタリングが適切でない場合に 生物学的モニタリングおよび特殊試験用具を必要とする新たなバリデーション規格 Part 1 に対するガイドライン EN ISO/TS 全て 蒸気滅菌を行う製品群および処理区分について 医療機器を指定するための指針 EN ISO エチレンオキシドガス要求事項およびガイドライン EN ISO EN ISO EN ISO 放射線 ガイドライン EN ISO 乾熱要求事項 EN ISO ホルムアルデヒド要求事項 別製品に対して行う Part 1 および 2 に対するガイドライン 規格がない過酸化水素 EN ISO の一般的要求事項は必須適用事項 EN ISO すべて 再使用する器材の再生処理のバリデーション 洗浄 消毒 包装 および滅菌に関連する 完全な再処理の方法とその指示をユーザーに提供しなくてはならない EN ISO 洗浄ウォッシャーディスインフェクター (WD) U. Kaiser 03/2017

3 無菌性 (SAL = 10-6 ) と滅菌工程の再現性を保証するバリデーション手順 1. プロセス開発 (WD, 滅菌器, 滅菌工程 積み付けパターン 包装などを選択する ) 設計時適格性確認 Design Qualification DQ コミッショニング 製造者により 据付時に ユーザーの仕様で 特定のパラメータの適合性を検証 滅菌器据付後に 運転場所において 特定のパラメータに適合しているかどうかを検証 据付時適格性確認 Installation Qualification IQ 運転時適格性確認 Operation Qualification OQ 4. 滅菌する物品を選択する ( 産業ではロードごとに新たなバリデーションが必要となる ) 病院における 最悪のケース のロード配置を決定する テスト実施者の役割 稼働性の評価 5. 使用プログラムで規定した積載物配置パターンの滅菌が再現できるかを 適切な物理的 化学的 生物学的インジケータ または / および適切な工程試験用具 (PCD) を用いて 検証するかあるいは直接植菌して検証 稼働性能適格性確認 Performance Qualification PQ 6. 滅菌工程の長期安全性を確保するために 適切な日常モニタリングを定義 テスト実施者の役割 7. 検証報告テスト実施者の役割 8. 稼働性能適格性再確認 ( 毎年 ) 再適格性確認 Requalification RQ U. Kaiser 03/2017

4 生物学的インジケータ (BI) の要求事項 芽胞 (BI) は工程後芽胞が不活化 = 滅菌できたかどうかを 確認するために用いる BI が生残しているか死滅しているかを目視確認できない 菌の繁殖を確認しなければならない 理想的な環境にあれば 増殖性微生物は 15~25 分ごとに複製する しかし 栄養がなければ ( BI としては不適だが )1~2 カ月間で死滅する 増殖性微生物には芽胞を形成し栄養がなくても何年も生き延びるものがあるので BI として用いることができる 長期保存と安定性を考えると 増殖性微生物ではなく 芽胞だけが要求を満たすことができる BI は器材に付着する病原微生物よりもさらに不活化が難しくなければならない 同じ型の芽胞であっても複製する方法によって抵抗性 (D- 値 ) が異なることがある 同一の芽胞でも滅菌工程が異なれば抵抗性も異なる BI は病原性があってはならない 仕様が載った証明書が常に必要とされる (1.5) 345 U. Kaiser 02/2018

5 滅菌モニタリング用に規格化された微生物 バクテリア型使用する滅菌工程 ATCC-No.: * 培養温度 [ ] 1. G. ステアロサーモフィルス 高圧蒸気滅菌, ホルマリン滅菌過酸化水素低温プラズマ滅菌 C 2. B. アトロフェウス ( 旧名 : B. サブティリス ) 乾熱滅菌, EOG 滅菌, ホルマリン滅菌高圧蒸気滅菌 消毒のみ C 3. B. プミルス - およびコバルト放射線滅菌 C *American-Type-Culture-Collection: 細胞 微生物 遺伝子を保存し 世界の研究機関に研究試料として提供している (1.6) 110 U. Kaiser 02/2018

6 発酵器内で BI を製造抵抗性が異なる細菌増殖と芽胞形成 栄養菌の増殖 以下が変われば抵抗性も変わる 環境条件 芽胞形成の条件 担体の素材 etc.etc. 最終の芽胞形成 2 世代 3 世代 4 世代 1 世代 Up to10 12 = 1,000,000,000,000 細菌 1 菌 2 菌 4 菌 8 菌 16 菌 芽胞 (2.1) 411 H. Keßler 06/2018

7 滅菌器内で芽胞を殺滅し ストリップ型 BI の結果をラボで確認する ストリップをオートクレーブに入れる 滅菌後 ストリップを取り出し クリーンベンチに 培養する 無菌的に培養液に移し 汚染しないように無菌的に開封する (2.5) 415 H. Keßler 02/2018

8 ストリップ型 BI と培地一体型 SCBI との違い SCBI BI strip 部品 プラスチックふた フィルタ : 清潔なもの外側からでもよい SCBI: 培養液が入ったガラスアンプル ph インジケータも含む プラスチック製ヴァイアル 細菌検査室では結果が得られるのに時間がかかる 培養が必要であるが反応は速い BI ディスク : 芽胞が載っている (2.6) 417 H. Keßler 02/2018

9 EN ISO parts 1-8 生物学的インジケータ (BI) Part 1 Part 2 Part 3 Part 4 Part 5 BIの一般的要求事項 EOG 滅菌用のSCBI( 培地一体型 BI 1 ) とインジケータ紙片蒸気滅菌用のSCBI( 培地一体型 BI 1 ) とインジケータ紙片乾熱用のBI 低温蒸気ホルムアルデヒド (LTSF) 滅菌用のBI Part 6 2 Part 7 2 Part 8 2 過酸化水素ガス滅菌用の BI 選択 使用 BI の結果についての解釈についての指針 BI 培養時間短縮 (RIT) 1 SCBI( 培地一体型 BI)= 指標菌と培地が一体化し 中材内で培養が行えるタイプの BI 2 進行中 (3.1) 347 U. Kaiser 04/2018

10 D- 値が 2 分 121 C で蒸気滅菌した場合細菌量が減少する時間 min 滅菌時間ごとに残った菌数 滅菌時間 無菌性保証水準 sterility Assurance Level (SAL) 定義 開始新品の BI D = 2 min D = 4 min D = 6 min (F Bio 2) = BI の増殖 10 4 D = 8 min 1 5 D = 10 min F Bio - 値 = log Pop x D = BI ストリップの抵抗 1 of x packs = non-sterile x = 10 6 D = x = D = x = D = x = D = F Bio + 4 = BI 死滅 x = D = x = D = = EN に規定された無菌 (4.3) 382 U. Kaiser 02/2018

11 滅菌の確率についての説明 (1) 10 個の包装を滅菌して細菌が個々の包装に 1 個残っている程度 これらの 10 個の包装を別の D 値の単位 ( 例えば 2 分 ) で滅菌 9 of 10 個の包装のうち 9 個が滅菌され 1 個が汚染されたまま 確率 = 1 10 = 0.1 ~ 10% 未滅菌 (4.4) 459 U. Kaiser 09/2018

12 滅菌の確率についての説明 (2) 100 個の包装を滅菌して細菌が個々の包装に 1 個残っている程度 これらの 100 個の包装をまた D 値の単位 ( 例えば 2 分 ) で再度滅菌 個の包装が残る : 確率 = 0.1 ~ 10% 未滅菌 100 これらの 100 個の包装をまた D 値の単位 ( 例えば 2 分 ) で再度滅菌 1 個の包装が残る : 確率 1 = ~ 1% 未滅菌 滅菌時間を長くすることでこの確率を際限なく高めることができる しかし 100 % の無菌性を達成することはできない EN では SAL = 1 で製品が滅菌されていると認めている (4.5) 460 U. Kaiser 09/2018

13 生物学的インジケータ (BI) の総合的抵抗性 以下に左右される (1) 個体群対数 (lg Pop ) (2) 細菌抵抗性 (D 値 ) 総合的抵抗性 = F BIO 値 [ 分 ] = lg Pop x D 値 [ 分 ] F BIO 値は個体数が 1 CFU (66% 増殖 ) の 平均値に減じるまでの時間である 個体数 [CFU] D 値 [ 分 ] F BIO [ 分 ] より個体数が少ないインジケータが 総合的な抵抗性は高くなる しかしながら価格は安くなる (4.8) 114 U. Kaiser 06/2018

14 BI の様々なタイプ 2 種の芽胞 (B. atrophaeus と G. Stearothermophilus) を用い 異なる 4 タイプの BI が市販されている 1. ストリップ ( 紙片 ) 型 BI 2. 培地一体型 BI(SCBI) 3. BI サスペンション ( 懸濁液 ) 4. BI アンプル (5.1) 348 U. Kaiser 02/2018

15 インスタント ミニ バイオ プラス 培地一体型生物学的インジケータ (SCBI) 蒸気滅菌工程後の即時判定用 ( 1 ~ 3 時間の培養時間も不要 ) キャップ下にフィルター ( 濾紙 ) 菌数ごとにキャップを色分け : 10 5 = 薄いオレンジ 10 6 = 濃いオレンジ クラス 1CI ( プロセスインジケータ ) 培地と ph インジケータが入ったガラスアンプル培養後の変色 : 合格 (-)= 紫不合格 (+)= 黄緑 即時判定用クラス 5CI 合格 = 黒不合格 = 黄色 / 茶色 / 焦げ茶色 BI 指標菌 U. Kaiser 02/2015

16 BI サスペンション ( 懸濁液 ) ワーストケースでの管腔器材内部に植菌 活きた芽胞が水またはアルコール懸濁液で手に入る 細菌検査室で これらの懸濁液を複雑な器材の内部や密封された滅菌が困難な ( ワーストケース ) 箇所に注射器を使って植菌する その後 内部の菌を滅菌水で洗い流して菌数をカウントし 同じ菌数が回収できることを確認する ( 回収法の検証 ) 後に 植菌を繰り返す 器材を通常どおりに包装 滅菌した後 細菌検査室に移し 無菌的に開封し 滅菌水で洗い流し 芽胞を取り出す. 芽胞を確認し 生残してる場合には いくつ生残しているかを確かめる (5.6) 351 U. Kaiser 02/2018

17 SCBI 用 gke Steri-Record Bio-C-PCD (7.5) 441 U. Kaiser 02/2018

18 バリデーション実施時の BI の役割 ご聴講いただきありがとうございました 製品 サービス等についての問い合わせは株式会社名優までお願いします Tel: Fax: