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1 技 術 分 類 試 料 目 的 別 技 術 / 生 体 試 料 /メタボローム/ 糖 鎖 技 術 名 称 同 位 体 標 識 (IGOT 法 ) 技 術 内 容 糖 タンパク 質 のペプチド 配 列 と 糖 鎖 付 加 位 置 を 同 定 する 方 法 である レクチンカラムを 用 いたアフ ィニティークロマトグラフィーで 糖 ペプチドを 捕 集 後 N-グリカナーゼを 作 用 させる Asn 結 合 型 (N- 結 合 型 ) 糖 鎖 はコンセンサス 配 列 (Asn-Xaa-Ser/Thr, XaaはPro 以 外 )に 付 加 されておりこの 酵 素 で 特 異 的 に 切 断 される 切 断 時 にコンセンサス 配 列 のAsnはAspに 変 換 されるが 酵 素 処 理 を 安 定 同 位 体 18Oで 構 成 された 水 中 で 行 うと コンセンサス 配 列 のAsnの 側 鎖 に18Oが 取 り 込 まれたAspが 生 じる これをタグとしてペプチド 配 列 の 決 定 を 行 うことで 糖 鎖 付 加 位 置 を 同 定 する 応 用 分 野 マウスやヒト 組 織 中 の N- 結 合 型 糖 タンパク 質 を 網 羅 的 に 同 定 する 際 に 使 用 される 図 IGOT 法 概 略 出 典 :Reprinted by permission from Nature Biotechnol, Vol. 21 (6) pages , 2003, Kaji H et al., Copyright: Macmillan Magazines Ltd, Fig.1 Schematic representation of the IGOT strategy 出 典 / 参 考 資 料 Lectin affinity capture, isotope-coded tagging and mass spectrometry to identify N-linked glycoproteins., Nature Biotechnol, Vol. 21 (6) 2003, Kaji H et al., pages

2 技 術 分 類 試 料 目 的 別 技 術 / 生 体 試 料 /メタボローム/ 脂 質 技 術 名 称 グループ 特 異 的 解 析 LC-ESI-MS による 網 羅 的 解 析 技 術 内 容 グループ 特 異 的 解 析 とは トリプルステージ 型 質 量 分 析 計 の MS/MS 解 析 を 利 用 し ニュートラル ロススキャンやプリカーサースキャンを 用 いて 特 定 のフラグメントイオンやニュートラルロスを 持 つプリカーサーイオンのみを 全 て 検 出 し 解 析 する 手 法 である 一 方 LC-ESI-MS による 網 羅 的 解 析 とは リン 脂 質 など 一 定 の 抽 出 条 件 で 分 離 される 分 子 群 全 体 を 対 象 とし LC-ESI-MS MS/MS を 用 いて 網 羅 的 に 同 定 する 手 法 である( 下 図 ) 図 グループ 特 異 的 同 定 と 網 羅 的 同 定 出 典 : Part3 11 章 メタボローム 解 析 ポストゲノム マススペクトロメトリー 2003 年 7 月 15 日 東 京 大 学 大 学 院 田 口 良 著 丹 羽 利 充 編 株 式 会 社 化 学 同 人 発 行 204 頁 図 2 脂 質 メタボローム 解 析 における 網 羅 的 同 定 法 と 特 異 的 同 定 法 例 えばリン 脂 質 の 各 クラス( 下 図 (a)の X の 種 類 ) 由 来 のニュートラルロス プリカーサースキ ャンで 測 定 することにより 各 クラスでグルーピングされたスペクトルを 得 ることができ( 下 図 (b)) グループ 特 異 的 な 解 析 が 可 能 となる

3 図 リン 脂 質 構 造 (a)とグループ 特 異 的 な 同 位 体 法 により 検 出 された 脂 質 のスペクトラム 例 (b) (a) (b) PC:ホスファチジルコリン PE:ホスファチジルエタノールアミン PS:ホスファチジルセリン PG:ホスファチジグリセロール PI: ホスファチジルイノシトール 出 典 : 東 京 大 学 大 学 院 医 学 系 研 究 科 田 口 良 教 授 より 提 供 関 連 資 料 : メタボロームによる 脂 質 代 謝 パスウェイ 解 析 ダイナミックに 新 展 開 する 脂 質 研 究 実 験 医 学 増 刊 号 Vol.23 No 年 3 月 30 日 有 田 正 規 田 口 良 著 清 水 孝 雄 新 井 洋 由 編 株 式 会 社 羊 土 社 発 行 153 頁

4 これらの 手 法 により 得 た 脂 質 の MS 解 析 の 知 見 はデータベース 化 し 質 量 分 析 データから 自 動 で 同 定 する 手 法 変 動 を 検 出 するための 定 量 的 解 析 手 法 さらにこれらの 結 果 を 代 謝 パスウェイ 解 析 に 結 びつける 可 視 化 の 手 法 等 の 開 発 が 進 められている( 下 図 ) 図 リン 脂 質 全 体 を 対 象 とした 網 羅 的 解 析 システムの 概 略 出 典 : ダイナミックに 新 展 開 する 脂 質 研 究 実 験 医 学 増 刊 号 Vol.23 No 年 3 月 30 日 清 水 孝 雄 新 井 洋 由 編 株 式 会 社 羊 土 社 発 行 153 頁 図 リン 脂 質 全 体 を 対 象 とした 網 羅 的 解 析 シス テムの 概 略 出 典 / 参 考 資 料 Part3 11 章 メタボローム 解 析 ポストゲノム マススペクトロメトリー 2003 年 7 月 15 日 東 京 大 学 大 学 院 田 口 良 著 丹 羽 利 充 編 株 式 会 社 化 学 同 人 発 行 204 頁 ダイナミックに 新 展 開 する 脂 質 研 究 実 験 医 学 増 刊 号 Vol.23 No 年 3 月 30 日 清 水 孝 雄 新 井 洋 由 編 株 式 会 社 羊 土 社 発 行 頁 Two-dimensional analysis of phospholipids by capillary liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry. J Mass Spectrom., 2000 Aug;35(8), Taguchi R, Hayakawa J, Takeuchi Y, Ishida M., pages "A shotgun tandem mass spectrometric analysis of phospholipids with normal-phase and/or reverse-phase liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry.", Rapid Commun Mass Spectrom. 2005;19(5), Houjou T, Yamatani K, Imagawa M, Shimizu T, Taguchi R., pages

5 技 術 分 類 試 料 目 的 別 技 術 / 生 体 試 料 /メタボローム/イオン 性 代 謝 物 質 技 術 名 称 キャピラリー 電 気 泳 動 - 質 量 分 析 (CE-MS) 技 術 内 容 メタボロームとは 生 体 内 の 代 謝 産 物 を 対 象 とした 研 究 である メタボローム 研 究 ではこれまでに も GC-MS LC-MS FT-ICR-MS MALDI-TOF-MS などが 用 いられているが 迅 速 かつ 簡 便 な 網 羅 的 解 析 方 法 としてキャピラリー 電 気 泳 動 - 質 量 分 析 (CE-MS)( の 項 参 照 )にも 期 待 が 寄 せられている CE-MS は 生 体 内 でたんぱく 質 脂 質 糖 質 無 機 塩 類 ビタミンなど 様 々 な 物 質 が 代 謝 を 受 けると そのほとんどが 電 荷 をもつ 分 子 となることに 着 目 し メタボローム 解 析 に 応 用 された 技 術 である まず 有 機 溶 媒 により 夾 雑 物 を 除 去 した 細 胞 の 粗 抽 出 液 を フューズドシリカキャピラリーに 注 入 し 電 圧 をかけて 電 気 泳 動 を 行 う キャピラリーの 出 口 はソフトイオン 化 法 である ESI を 用 いて 質 量 分 析 と 接 続 されており 陰 イオンの 測 定 の 場 合 はキャピラリーの 陽 極 側 に MS を 接 続 し( 下 図 (a)) 測 定 を 行 う フューズドシリカキャピラリーに 以 下 の 工 夫 を 施 すことで これまで 難 しかった 測 定 も 可 能 となった 陰 イオンの 測 定 キャピラリーに 電 圧 を 印 加 すると 陽 極 から 陰 極 に 向 かって 液 流 が 生 じる このため 陰 イ オンが 進 む 方 向 の 先 端 と ESI インターフェースの 間 に 空 気 層 が 生 じイオンが MS に 導 入 され ない この 問 題 は 内 面 に 塩 基 性 物 質 をコーティングしたキャピラリーを 用 いて 液 流 を 反 転 させることで 解 決 し 陰 イオン 測 定 が 可 能 となった 多 価 陰 イオンの 測 定 塩 基 性 物 質 をコーティングしたキャピラリーを 用 いると 多 価 陰 イオンはキャピラリーの 内 壁 に 吸 着 してしまう これを 解 決 するために 内 壁 を 中 性 のポリマーでコーティングしたキ ャピラリーを 用 いる 内 壁 が 中 性 になることで 電 流 が 流 れなくなるが エアーポンプで 加 圧 して 一 定 流 量 を MS に 送 り 込 み 測 定 を 行 う 同 一 の 泳 動 条 件 でほとんどのイオンを 測 定 することができるため 網 羅 的 解 析 に 適 した 方 法 である と 言 える( 下 図 (b) 枯 草 菌 代 謝 物 の 測 定 例 )

6 図 CE-MS による 代 謝 物 測 定 例 (a) (b) 出 典 : 慶 應 義 塾 大 学 SFC オープンリサーチフォーラム 2004 年 11 月 24 日 曽 我 朋 義 ( 慶 應 義 塾 大 学 環 境 情 報 学 部 助 教 授 ヒューマン メタボローム テクノロジーズ 株 式 会 社 取 締 役 )プレゼン テーション 資 料 (a) (b) 年 2 月 10 日 検 索 出 典 / 参 考 資 料 慶 應 義 塾 大 学 SFC オープンリサーチフォーラム 2004 年 11 月 24 日 曽 我 朋 義 ( 慶 應 義 塾 大 学 環 境 情 報 学 部 助 教 授 ヒューマン メタボローム テクノロジーズ 株 式 会 社 取 締 役 )プレゼ ンテーション 資 料 CE-MS によるメタボローム 測 定 法 メタボローム 研 究 の 最 前 線 2003 年 11 月 30 日 曽 我 朋

7 義 著 富 田 勝 西 岡 孝 明 編 シュプリンガー フェアラーク 東 京 株 式 会 社 発 行 9-24 頁 ケルナー 分 析 化 学 II 2003 年 9 月 25 日 発 行 R. Kellner 他 編 不 破 敬 一 郎 他 著 中 村 洋 他 訳 株 式 会 社 科 学 技 術 出 版 1419 頁 "Determination of small carboxylic acids by capillary electrophoresis with electrospray-mass spectrometry", Analytica Chimica Acta, Volume 389, Issues 1-3, 14 May 1999, Steve K. Johnson et al., Elsevier B.V., Pages 1-8 "Analysis of peptides, proteins, protein digests, and whole human blood by capillary electrophoresis/electrospray ionization-mass spectrometry using an in-capillary electrode sheathless interface", Journal of the American Society for Mass Spectrometry, Volume 9, Issue 10, October 1998, Ping Caoa, Mehdi Moini, Elsevier B.V., pages

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