Oligotex ™-dT30 <Super> mRNA Purification Kit (From total RNA)
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- えつと あると
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1 研究用 Oligotex -dt30 <Super> mrna Purification Kit (From total RNA) 説明書 v201706
2 Oligotex-dT30 <Super> は 培養細胞や動植物組織などの total RNA から polya + RNA を高純度に分離 精製するために JSR ライフサイエンス社およびロシュ ダイアグノスティックス株式会社が共同開発した mrna 精製用試薬です Oligotex-dT30 <Super> は Latex 粒子の表面に oligo(dt)30 の 5' 末端領域を結合させたもので 熱 アルカリに安定です また Latex 粒子は表面積が大きく懸濁性が高いことから 固定化された oligo(dt)30 と試薬中の mrna は迅速かつ効率よく結合します 本製品は Oligotex-dT <Super> にバッファー類とスピンカラムを組み合わせたキットです Latex 粒子で polya + RNA をトラップした後 スピンカラムで洗浄 溶出を行うので 手軽に mrna 精製を行うことができます 本キットを用いると RT-PCR はもちろん DNA マイクロアレイ用のプローブ調製やノーザンハイブリダイゼーションにも使用可能な高純度の mrna を短時間で回収することができます 1 回あたり最大 250 μg の total RNA が処理可能です I. 内容 (20 回用 ) *1 1. Oligotex-dT30 <Super> *2 300 μl 2. 2 Binding Buffer 1.5 ml 2 3. Wash Buffer 14 ml 4. RNase Free dh2o 10 ml 5. スピンカラムセット 20 sets 6. スピンカラム用遠心チューブ 40 個 Oligotex-dT30 <Super> Latex 10% (W/V) Suspension 30 mg / 300 μl Oligo(dT)30 固定化ラテックス粒子 10 mm Tris-HCl (ph7.5) 1 mm EDTA 0.1% SDS 0.1% NaN3 *3 * 1: total RNA 250 μg の処理を 1 回分とします * 2 : Oligotex-dT30 <Super> は JSR ライフサイエンス社により製造されたものです * 3: NaN3 は金属と反応して 爆発性の高い金属アジドを生成することがありますので 廃棄の際は大量の水と共に洗い流してください キット以外に必要な機器 ( 主なもの ) マイクロ遠心機 遠心チューブ マイクロピペットおよびチップ II. 保存 4 (Oligotex-dT30 <Super> は凍結厳禁 ) 適切に保存し 受取り後 2 年を目途にご使用ください タカラバイオ ( 株 ) 2
3 III. total RNA サンプルの調製について 本製品は total RNA から mrna を精製するキットです 高純度で全長を有する polya + RNA を回収するには 純度の高い total RNA サンプルを得ることが重要です そのために 細胞に含まれる RNase の作用を抑えること また使用する器具や溶液などの外部からの RNase の混入を避けることが大切です RNA 調製にあたっては 実験者の汗や唾液に含まれる RNase の混入を防ぐため作業中は不必要に話をせず 清潔なディスポーザブルグローブを着用し RNA 調製専用の実験台を設けるなどの細心の注意を払ってください [ 器具 ] 実験器具に関しては 可能な限りディスポーザブルのプラスチック製品を使用してください 一般のガラス器具は以下の処理を行ってから使用してください 1) ガラス器具を 0.1% ジエチルピロカーボネート (DEPC) 溶液で 時間以上処理する 2) 残存 DEPC を除去するために オートクレーブ ( 分 ) する RNA 実験に用いる器具 ( プラスチックおよびガラス ) は 他の器具と区別して RNA 専用として用いることをお勧めします [ 溶液 ] 実験に用いる試薬は 乾熱滅菌 ( 分 ) したガラス器具で調製し あらかじめ 0.1% DEPC 処理を行いオートクレーブした滅菌精製水または超純水で溶解します 用いる溶液 滅菌精製水 超純水はすべて RNA 実験専用としてお使いください [total RNA サンプルの調製法 ] AGPC 法 ( 酸性グアニジウム - フェノール - クロロホルム法 ) 等で高純度に精製した total RNA を調製することができます 細胞 組織からの抽出には RNAiso Plus( 製品コード 9108/9109) や NucleoSpin RNA( 製品コード /.50/.250) を用いると 短時間で高純度の total RNA を調製することができます IV. Oligotex-dT30 <Super> 使用上の注意 1. 試薬溶液中に凝集を認める場合には ピペッティングによりよく分散させてからご使用ください 2. 本品を強酸性条件下で使用することは避けてください 3. 本品には防腐剤として 0.1% アジ化ナトリウムを添加しておりますが 開封後の雑菌汚染には十分注意してください 4. 長時間冷蔵保存した場合 Latex 粒子が沈降することがあります 使用前に 37 に保温してよく撹拌し十分に懸濁してからご使用ください 懸濁はピペッティングまたはタッピングによって行い ボルテックスは避けてください 5. 上清中の mrna が少量の場合 溶存する試薬成分の影響により 正確な UV 測定ができないことがあります このような場合にはフェノールクロロホルム抽出 エタノール沈殿を行い溶存する試薬成分を除去してください タカラバイオ ( 株 ) 3
4 V. 操作 反応液の調製 ( 市販のチューブ ) 下記に示す反応液を滅菌チューブに調製する Oligotex-dT30 <Super> は 37 で保温しておく 2 Binding Buffer が析出している場合 37 で完全に溶かしてから使用する total RNA 水溶液 * 2 Binding Buffer Oligotex-dT30 <Super> 最終反応液 Total 量 150 ~ 250 μg/150 μl の場合 150 μl 15 μl 315 μl 100 ~ 150 μg/100 μl の場合 100 μl 10 μl 210 μl ~ 100 μg/ 50 μl の場合 50 μl 10 μl 110 μl *:total RNA の量により上記のような容量になるように RNase free dh2o で調製 total RNA 2 Binding Buffer Oligotex-dT30 <Super> チューブのふたをしっかり閉め 反応液を穏やかによく混和し 70 3 分間加熱する (RNA の変性 ) 加熱後 室温にて 10 分間放置する (Oligotex-dT30 と mrna とのハイブリダイゼーション ) 15,000 rpm 5 分間 上清除去 Buffer 除去 Oligotex-dT30 を Wash Buffer で懸濁 15,000 rpm 30 秒間 Wash Buffer で懸濁 Oligotex-dT30 を吸い込まないように注意して上清を除去する (* 1; 実施例参照 ) 上清除去後 350 μl の Wash Buffer でよく Oligotex-dT30 を懸濁後 スピンカラムセットのカップに移し 遠心にて Buffer を分離する (* 2; 実施例参照 ) カップ内の Oligotex-dT30 を再び 350 μl の Wash Buffer でよく懸濁し 新しいスピンカラム用遠心チューブに移し 遠心にて Buffer を分離する (* 3; 実施例参照 ) 15,000 rpm 30 秒間 タカラバイオ ( 株 ) 4
5 Buffer 除去 RNase free dh2o 15,000 rpm 30 秒間 mrna の回収 カップ内 Oligotex-dT30 をあらかじめ 70 で加熱しておいた 20 ~ 50 μl( 適量 ) の RNase free dh2o でよく懸濁し 新しいスピンカラム用遠心チューブを用いて mrna を溶出する (* 4; 実施例参照 ) この操作を 2 ~ 3 回繰り返す ( 毎回新しく あらかじめ 70 で加熱しておいた RNase free dh2o を加えてください ) 全工程 30 分未満 VI. 実施例 Oligotex-dT30 <Super> mrna Purification Kit を用いた HeLa 細胞由来 total RNA からの mrna 精製 方法 HeLa 細胞由来の total RNA 150 μg/150 μl に 150 μl の 2 Binding Buffer と 15 μl の Oligotex-dT30 <Super> を添加して反応液を調製し V. 操作に従って精製操作を行った 結果 4.5 μg の mrna を回収することができた また rrna は 2 回の洗浄により充分のぞかれていることが確認できた M M レーン 1: HeLa 細胞由来 Total RNA 1 μg レーン 2: binding 後の除去した上清 (V. 操作の * 1 に相当 ) レーン 3: 1 回洗浄後の液 (V. 操作の * 2 に相当 ) レーン 4: 2 回洗浄後の液 (V. 操作の * 3 に相当 ) レーン 5: 溶出された mrna(v. 操作の * 4 に相当 ) レーン M: λ-hind III digest タカラバイオ ( 株 ) 5
6 VII. 参考文献 1) 栗林恵子 日方幹雄 平岡修 宮本力 古市泰宏オリゴ (dt) ラテックスによる Poly (A) + mrna の精製生化学 60: 967, )Kuribayashi, K., Hikata, M., Hiraoka, O., Miyamoto, C., and Furuichi, Y. A rapid and efficient purification of poly (A) + -mrna by oligo (dt)-latex. Nucleic Acids Reserch., Symposium series. 19: 61-64, ) 栗林恵子 古市泰宏新しい遺伝子工学試薬オリゴテックス dt30 バイオサイエンスとインダストリー 47:(5), , ) 垣塚彰 Oligo (dt)-latex 粒子を用いたポリ (A) RNA の精製方法実験医学 17:(7), , VIII. 関連製品 Oligotex -dt30 <Super>( 製品コード W9021A W9021B) RNAiso Plus( 製品コード 9108/9109) NucleoSpin RNA( 製品コード /.50/.250) PrimeScript Double Strand cdna Synthesis Kit( 製品コード 6111A) cdna Library Construction Kit( 製品コード 6136) RNase-OFF (RNase コンタミネーション除去溶液 )( 製品コード 9037) IX. 注意 本製品は研究用試薬です ヒト 動物への医療 臨床診断には使用しないようご注意ください また 食品 化粧品 家庭用品等として使用しないでください タカラバイオの承認を得ずに製品の再販 譲渡 再販 譲渡のための改変 商用製品の製造に使用することは禁止されています ライセンスに関する情報は弊社ウェブカタログをご覧ください PrimeScript RNase-OFF はタカラバイオ株式会社の Oligotex は JSR 株式会社の商標です その他 本説明書に記載されている会社名および商品名などは 各社の商号 または登録済みもしくは未登録の商標であり これらは各所有者に帰属します v201706
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< 目次 > 免疫組織染色手順 ( 前処理なし ) p2 免疫組織染色手順 ( マイクロウェーブ前処理 ) p3 免疫組織染色手順 ( オートクレーブ前処理 ) p4 免疫組織染色手順 ( トリプシン前処理 ) p5 免疫組織染色手順 ( ギ酸処理 ) p6 免疫組織染色手順 ( ギ酸処理後 マイクロウェーブまたはオートクレーブ処理 )p7 抗原ペプチドによる抗体吸収試験 p8 ウエスタン ブロッティング
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I II III IV V VI .................. VII VIII IX X 1-1 1-2 1-3 1-4 ( ) 1-5 1-6 2-1 2-2 3-1 3-2 3-3 8 3-4 3-5 3-6 3-7 ) ) - - 3-8 3-9 4-1 4-2 4-3 4-4 4-5 4-6 5-1 5-2 5-3 5-4 5-5 5-6 5-7 5-8 5-9 5-10 5-11
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i i vi ii iii iv v vi vii viii ix 2 3 4 5 6 7 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60
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Glutathione Sepharose 4B, 4FF を用いた GST 融合タンパク質のバッチ精製プロトコール 1 予め準備する試薬と装置 Glutathione Sepharose 担体製品名 包装単位 コード番号 Glutathione Sepharose 4B 10 ml 17-0756-01 Glutathione Sepharose 4B 3 10 ml 72-0239-03 Glutathione
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i 1 1 2 3 6 6 7 8 10 10 11 12 12 12 13 2 15 15 16 17 17 18 19 20 20 21 ii CONTENTS 25 26 26 28 28 29 30 30 31 32 35 35 35 36 37 40 42 44 44 45 46 49 50 50 51 iii 52 52 52 53 55 56 56 57 58 58 60 60 iv
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MLPA 法 Q&A 集 目次 1. MLPA 法の導入 Q1. 導入にあたり 何が必要になりますか? Q2. 実験にはどのようなサンプルが必要でしょうか? Q3. サンプルDNAはどれくらい用意すれば良いですか? Q4. キャピラリーシーケンサが自施設に無い場合でも実験はできますか? Q5. FFPE 検体でも実験はできますか? 2. 実験のセットアップ Q1. 実験において重要なポイントはありますか?
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i ii iii iv v 43 43 vi 43 vii T+1 T+2 1 viii 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 a) ( ) b) ( ) 51
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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 I II III 11 IV 12 V 13 VI VII 14 VIII. 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 _ 33 _ 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 VII 51 52 53 54 55 56 57 58 59
パナテスト ラットβ2マイクログロブリン
研究用試薬 2014 年 4 月作成 EIA 法ラット β 2 マイクログロブリン測定キット PRH111 パナテスト A シリーズラット β 2- マイクロク ロフ リン 1. はじめに β 2 - マイクログロブリンは, 血液, 尿, および体液中に存在し, ヒトでは腎糸球体障害, 自己免疫疾患, 悪性腫瘍, 肝疾患などによって血中濃度が変化するといわれています. また,β 2 - マイクログロブリンの尿中濃度は,
平成18年版 男女共同参画白書
i ii iii iv v vi vii viii ix 3 4 5 6 7 8 9 Column 10 11 12 13 14 15 Column 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Column 27 28 29 30 Column 31 32 33 34 35 36 Column 37 Column 38 39 40 Column 41 42 43 44 45
遺伝子検査の基礎知識
リアルタイム PCR( インターカレーター法 ) 実験ガイドこの文書では インターカレーター法 (TB Green 検出 ) によるリアルタイム PCR について 蛍光検出の原理や実験操作の流れなどを解説します 実際の実験操作の詳細については 各製品の取扱説明書をご参照ください - 目次 - 1 蛍光検出の原理 2 実験に必要なもの 3 実験操作法 4 結果の解析 1 1 蛍光検出の原理 インターカレーターによる蛍光検出の原理
TaKaRa Bradford Protein Assay Kit
研究用 TaKaRa Bradford Protein Assay Kit 説明書 v201701da TaKaRa Bradford Protein Assay Kit は Coomassie Dye を用いる Bradford 法に基づいたキットであり 簡単な操作で迅速に 濃度範囲が 1 ~ 1,000 μg/ml のタンパク質溶液の定量を行うことができます 本キットの定量の原理は Coomassie
cDNA cloning by PCR
cdna cloning/subcloning by PCR 1. 概要 2014. 4 ver.1 by A. Goto & K. Takeda 一般的に 細胞または組織由来の RNA から作製した cdna(cdna pool) から 特定の cdna をベクターに組み込む操作を cdna cloning と呼ぶ その際 制限酵素認識配列を付与したオリゴ DNA primer を用いた PCR
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
ytotoxicity L ssay Kit-WST はじめに 本説明書は ytotoxicity L ssay Kit-WST を用いた抗体依存性細胞傷害測定用 (ntibody-dependent cellmediated cytotoxicity: ) です 本製品のキット内容や Working Solution の調製方法に関して 製品添付の取扱い説明書も合わせてご覧ください 正確な測定のために
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i 1 1 2 3 5 5 6 7 7 8 9 9 10 11 11 11 12 2 13 13 14 15 15 16 17 17 ii CONTENTS 18 18 21 22 22 24 25 26 27 27 28 29 30 31 32 36 37 40 40 42 43 44 44 46 47 48 iii 48 50 51 52 54 55 59 61 62 64 65 66 67 68
PanaceaGel ゲル内細胞の観察 解析方法 1. ゲル内細胞の免疫染色 蛍光観察の方法 以下の 1-1, 1-2 に関して ゲルをスパーテルなどで取り出す際は 4% パラホルムアルデヒドで固定してから行うとゲルを比較的簡単に ( 壊さずに ) 取り出すことが可能です セルカルチャーインサートを
1. ゲル内細胞の免疫染色 蛍光観察の方法 以下の 1-1, 1-2 に関して ゲルをスパーテルなどで取り出す際は 4% パラホルムアルデヒドで固定してから行うとゲルを比較的簡単に ( 壊さずに ) 取り出すことが可能です セルカルチャーインサートを用いた培養ではインサート底面をメス等で切り取ることで またウェルプレートを用いた培養ではピペットの水流でゲル ( 固定後 ) を底面から浮かすことで 回収しやすくなります
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I II III IV V VI VII VIII IX X XI I II III IV V I I I II II II I I YS-1 I YS-2 I YS-3 I YS-4 I YS-5 I YS-6 I YS-7 II II YS-1 II YS-2 II YS-3 II YS-4 II YS-5 II YS-6 II YS-7 III III YS-1 III YS-2
Microsoft Word - タンパク質溶液内酵素消化 Thermo
タンパク質の溶液内酵素溶液内酵素消化 ( 質量分析用サンプル調製 ) 質量分析計によるタンパク質解析においては 一般的にタンパク質を還元 アルキル化した後にトリプシン等で酵素消化して得られた消化ペプチドサンプルが用いられます 本資料ではこのサンプル調製について 専用キットを用いて行う方法 各種試薬や酵素を用いて行う方法 また関連情報として タンパク質の定量法についてご紹介しています 内容 1 培養細胞の酵素消化
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Protocol for CRISPR/Cas system in medaka ver. 1.3 1. Materials ベクター pcs2+hspcas9: Cas9 vector, Amp 耐性, [Addgene Plasmid 51815] pdr274: sgrna vector, Kan 耐性, [Addgene Plamsmid 42250] 作製 : 安齋賢 2015.12.17
ノーウオ―クウイルスのPCR法
厚生労働科学研究新型インフルエンザ等新興 再興感染症研究事業 現在 国内で分離 同定できないウイルス性出血熱等の診断等の対応方法に関する研究 班より SFTS ウイルス検査マニュアル 平成 25 年 3 月 13 日 RT-PCR 法により SFTS ウイルス核蛋白質 (NP) 遺伝子を特異的に検出 同定する検査法を解説する 本法は 1 本の反応チューブ内で逆転写反応 遺伝子増幅を連続的に行い SFTS
ii iii iv CON T E N T S iii iv v Chapter1 Chapter2 Chapter 1 002 1.1 004 1.2 004 1.2.1 007 1.2.2 009 1.3 009 1.3.1 010 1.3.2 012 1.4 012 1.4.1 014 1.4.2 015 1.5 Chapter3 Chapter4 Chapter5 Chapter6 Chapter7
PrimeSTAR® Mutagenesis Basal Kit
PrimeSTAR Mutagenesis Basal Kit 説明書 v201107da 目次 I. キットの内容...3 II. 保存...3 III. 本システムの原理...3 IV. プライマー設計について...5 V. 操作...8 VI. 実験例...10 VII. トラブルシューティング...13 VIII. 関連製品...13 IX. 注意...13 2 PrimeSTAR Mutagenesis
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(Windows 95 ) ii iii iv NEC Corporation 1999 v P A R T 1 vi P A R T 2 vii P A R T 3 P A R T 4 viii P A R T 5 ix x P A R T 1 2 3 1 1 2 4 1 2 3 4 5 1 1 2 3 4 6 5 6 7 7 1 1 2 8 1 9 1 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4
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鳥インフルエンザ A(H7N9) ウイルス 検出マニュアル ( 第 2 版 ) 1 目次 1 臨床検体またはウイルス培養液からの RNA の抽出 ( 参考 ) ---------- 3 2 リアルタイム RT-PCR(TaqMan Probe 法 ) による鳥インフルエンザ A(H7N9) ウイルスの検出方法 ---------- 4 3 Conventional RT-PCR 法よる鳥インフルエンザ
困ったときのQ&A
ii iii iv NEC Corporation 1997 v P A R T 1 vi vii P A R T 2 viii P A R T 3 ix x xi 1P A R T 2 1 3 4 1 5 6 1 7 8 1 9 1 2 3 4 10 1 11 12 1 13 14 1 1 2 15 16 1 2 1 1 2 3 4 5 17 18 1 2 3 1 19 20 1 21 22 1
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GenomeLab GeXP Genetic Analysis System Sequenci Chemistry Protocol シークエンスケミストリープロトコル V.5 1. 反応試薬と消耗品について 1-1. 弊社供給試薬 製品名製品番号保存条件 DTCS クイックスタートキット (100 反応 ) 608120-20 DTCS クイックスタートキットに含まれている試薬キット内の試薬はミネラルオイル以外
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しょうゆの食塩分測定方法 ( モール法 ) 手順書 1. 適用範囲 この手順書は 日本農林規格に定めるしょうゆに適用する 2. 測定方法の概要 試料に水を加え 指示薬としてクロム酸カリウム溶液を加え 0.02 mol/l 硝酸銀溶液で滴定し 滴定終点までに消費した硝酸銀溶液の量から塩化ナトリウム含有量を算出する 3. 注意事項 (a) クロム酸カリウムを取り扱う際には 皮膚に付けたり粉塵を吸入しないようゴーグル型保護メガネ
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