衛 微 物技術協議会第 39 回研究会平成 30 年 7 5 ( 滋賀県 ) レファレンスセンター等関連会議薬剤耐性菌 担当 : 国 感染症研究所薬剤耐性研究センター鈴 和 松井真理 マルチプレックスPCRのトライアル結果について発表者 : 阪健康安全基盤研究所河原隆 先 各ブロックレファレンスセンター報告発表者 : 各ブロックレファレンスセンター担当者 平成 29 年度活動報告及び平成 30 年度活動予定発表者 : 国 感染症研究所薬剤耐性研究センター松井真理 薬剤耐性菌検査に関する研修 陽性コントロール配布 NESID 病原体サーベイランスについて 薬剤耐性菌検査に関する問い合わせ( 事例紹介 ) その他連絡事項など
平成 30 年度 薬剤耐性菌検査に関する研修 1 基本コース 2 実践コース 3 タイピングコース I* 4 タイピングコース II* 2.5 1.5 1.5 1 (1 泊 2 ) 9 11 ( )9:00 9 13 ( )13:00 9 19 ( )9:00 9 20 ( )13:00 13 ( ) 12:30 14 ( ) 16:00 20 ( ) 12:30 21 ( ) 13:00 薬剤耐性菌検査の基本 国内で分離が多い遺伝型株や典型的な表現型の株の判定 国内で分離が稀な遺伝 型株や 典型的な表現型株の判定 パルスフィールドゲル電気泳動 (PFGE) によるタイピング 法とその解釈 プラスミドゲノムのデータの解釈 耐性菌検査は初めて... 基本を知りたい 既に検査を実施している 以前に研修参加したが 情報をアップデートしたい タイピング解析 法を知りたい プラスミド解析 法を知りたい GPATを活 して 学会 論 発表したい * タイピングコース I, II は連続参加可能
陽性コントロール DNA 菌株送付 陽性コントロールDNA 送付平成 29 年度 73 施設 ( 平成 27 年度 28 年度 : 各 63 施設あわせて77 施設に送付済 ) 平成 30 年度も研修終了後に送付予定 陽性コントロールDNA 追加送付平成 29 年度 8 施設内容 :CRE 検査 ( 配布と同じ遺伝 型 ) バンコマイシン腸球菌 (VRE) 薬剤耐性アシネトバクター検査 随時発送可能 taiseikin@niid.go.jp まで 陽性コントロール菌株送付平成 29 年度 15 施設内容 :IMP-1, IMP-6 CTX-M-1 型, CTX-M-2 型, CTX-M-9 型, TEM 型, SHV 型, CIT 型 随時対応可能 ( 書類 続き約 2カ ) taiseikin@niid.go.jp まで
NESID 病原体検出情報システムへの CRE 検査結果報告 平成 29 年 3 28 健康局結核感染症課 通知 カルバペネム耐性腸内細菌科細菌(CRE) 感染症等に係る試験検査の実施について 薬剤耐性菌レファレンスセンターにて マニュアルを作成 2017 年検体採取分の検査結果 依頼 結果集計 検査結果については NESID の病原体検出情報システムを通じて 厚 労働省に報告する - 検査結果を 特記すべき 化学性状等 欄に半 英数でテキスト ( 検査未実施は * ) - 援ツール ( 阪健康安全基盤研究所河原先 作成 ) も併せて配布 7 6 シンポジウム I 1 薬剤耐性菌の分離状況と耐性機序 ( 鈴 和 ) にて結果を発表 プログラムで項 ごとに集計
NESID 今後の予定 2017 年検体採取分 ( 今回の集計結果 ) IASR 公表予定 4 24 以降に追加 いただいた検体順次精度管理予定 2018 年検体採取分順次集計予定 1 3 分離検体 :7 精度管理問い合わせ予定 精度管理問い合わせ対象項 形式が異なるもの 海外型カルバペネマーゼ遺伝 陽性かつ渡航歴無し ( シークエンスをお願いします ) 遺伝 検査と表現型不 致 ( 必須試験項 対象 )
検査に関する問い合わせ β- ラクタマーゼ遺伝 シークエンスについて β- ラクタマーゼ遺伝 シークエンス型別の標準配列は?(GenBank accession No.) http://www.lahey.org/studies/ ( 現在は更新終了 ) https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pathogens/beta-lactamase-data-resources/ bla IMP-1 S71932 bla NDM-1 FN396876 bla KPC-2 AY034847 bla IMP-6 AB040994 bla NDM-5 JN104597 bla OXA-48 AY236073 β-ラクタマーゼ遺伝 の表記 法は? PCR 検出のみ シークエンス型別未実施例 )IMP 型 β-ラクタマーゼ遺伝 IMP-1 型 β-ラクタマーゼ遺伝 など シークエンス型別を実施した場合例 )IMP-1 β-ラクタマーゼ遺伝 IMP-6 β-ラクタマーゼ遺伝 など
検査結果問い合わせ例 1 KPC 型カルバペネマーゼ産 株? < 医療機関からの情報 > 菌種 :Klebsiella pneumoniae CRE 判定基準を満たす薬剤 : イミペネム & セフメタゾール メルカプト酢酸ナトリウムボロン酸クロキサシリンクラブラン酸 CAZ CMZ CMZ CAZ CTX ACV SMA +BA CMZ +BA +MCIPC CMZ +MCIPC S/A CAZ CTX 陰性陽性陽性陰性 カルバペネマーゼ遺伝 カルバペネマーゼ以外の -ラクタマーゼ遺伝 IMP 型 - CTX-M-1 group NDM 型 - CTX-M-2 group KPC 型 + CTX-M-9 group OXA-48 型 - MOX 型 - VIM 型 CIT 型 - GES 型 DHA 型 - IMI 型 ACC 型 - KHM 型 EBC 型 - SMB 型 FOX 型 - Carba NP test: 陰性 ( 感染研実施 ) mcim: 陰性 ( 感染研実施 ) PCR 法で KPC 型陽性 表現型は AmpC ( ディスク法の写真は感染研実施分 ) 菌株分与を依頼し 感染研で再検 PCR KPC 型陰性菌種再同定 Enterobacter aerogenes E. aerogenes では KPC 型 特異バンドが出現する株があるようです ( 問い合わせ数件あり )
検査結果問い合わせ例 2&3 IMP 型メタロ -β- ラクタマーゼ産 株? 事例 2 CAZ Escherichia coli IMP-1 型検出 プライマー PCR: 陽性 (+) SMA ディスク法 : 陰性 (-) SMA IMP 型遺伝 シークエンス (IMP-1 all プライマー増幅産物 ) の結果 IMP 型 β- ラクタマーゼ遺伝 ORF 中に挿 配列あり! 事例 3 Serratia marcescens CAZ SMA IMP-1 型検出 プライマー PCR: 陽性 (+) SMA ディスク法 : 陰性 (-) mcim: 陰性 (-) IMP 型遺伝 シークエンスの結果 Serratia marcescens の染 体遺伝 (PCR 特異バンド ) であった 遺伝 型と表現型に 盾がある場合は シークエンス 別プライマー (multiplex など ) など 必ず確認をお願いします
検査結果問い合わせ例 4 カルバペネマーゼ産 腸内細菌科細菌? < 医療機関からの情報 > 菌種 :Serratia sp. mcim 陽性 メルカプト酢酸ナトリウムボロン酸クロキサシリンクラブラン酸 CAZ IPM SMA +BA IPM +BA 陰性 陰性 カルバペネマーゼ遺伝 カルバペネマーゼ以外の -ラクタマーゼ遺伝 IMP 型 - CTX-M-1 group - NDM 型 - CTX-M-2 group - KPC 型 - CTX-M-9 group - OXA-48 型 - MOX 型 - VIM 型 - CIT 型 - GES 型 - DHA 型 - IMI 型 ACC 型 - KHM 型 EBC 型 - SMB 型 FOX 型 - Carba NP test: mcim: 陽性 (6mm) カルバペネマーゼ遺伝 PCR とディスク法はどちらも陰性 mcim は カルバペネマーゼ産 が 唆 地 衛 研究所での菌種再同定の結果 Aeromonas hydrophila ( 腸内細菌科細菌ではないが CRE と間違えられやすい ) 結果に疑問がある場合 コンタミや菌種誤同定の可能性あり
その他 CRE 検査に関する参考情報 菌種名の変更 Enterobacter aerogenes Klebsiella aerogenes 医療機関からの届出菌種名が少しずつ変更されるのではと思います参考 献 :Int J Syst Evol Microbiol 2017,67(2):502-404 mcim ecim の報告 :Carbapenem inactivation method(cim) の変法 2mL TSB 被検菌コロニーを 1 L ループ 杯分懸濁 (CLSI M100, 2018 に掲載 ) カルバペネマーゼ産 菌であれば MEPM 分解 MEPM ディスクを れる 35 4hr MEPM disk を取り出し E. coli ATCC25922 を塗った MH agar に置く ecim: メタロ - - ラクタマーゼ産 のスクリーニング法追加 2mL TSB 2mL TSB with 5mM EDTA MEPM ディスクを れる 35 4hr 35 18 24hr 結果判定 6-15mm 陽性 16-18mm 判定保留 (intermediate) 19mm 陰性 35 18 24hr 結果判定陽性 : EDTA 添加による阻 円径拡張 5mm
まとめ 研修 参加希望は各ブロックのレファレンスセンターまで 陽性コントロール DNA 陽性コントロール DNA 配布 研修後に DNA 配布予定個別依頼は taiseikin@niid.go.jp へ 病原体検出マニュアル 平成 30 年度に改訂予定 ( 改訂時はレファレンスセンターを通じて連絡 ) NESID 結果 順次 精度管理 集計予定 薬剤耐性菌検査等に関するお問い合わせ taiseikin@niid.go.jp 国 感染症研究所薬剤耐性研究センター第 室