蛍光ビーズを用いた HLA 抗体検査試薬の解析結果 WAKFlow HLA 抗体クラス Ⅰ&Ⅱ(MR) 平成 2 年 9 月 19 日 QC ワークショップ
WAKFlow HLA 抗体クラス Ⅰ&Ⅱ(MR) について パネル細胞の選択 対象抗原 クラス Ⅰ: 日本人における遺伝子頻度が 1% 以上の HLA-A または -B 抗原 クラス Ⅱ:HLA-DR および DQ 座の公認抗原 選択条件 クラス Ⅰ: HLA-B ローカスの抗原の組合せが 交差抗原であるパネル細胞であること 目的 : HLA 抗体検出感度を高める 許容抗原を交差抗原群内の抗原で可能 日本人に出現頻度の高い HLA ハプロタイプをホモ接合で保有するパネル細胞 ( 例 :A24-B52-Cw12,, A33-B44-Cw14, A24-B7-Cw7のホモ接合 ) クラス Ⅱ: 日本人で出現頻度の高い HLA 抗原型をホモ接合で保有するパネル細胞 解像度を上げるために DR4 および DR8 抗原型のサブタイプを保有するパネル細胞
WAKFlow HLA 抗体クラス Ⅰ(MR) 使用パネルセル A-1 A-2 B-1 B-2 Cw-1 Cw-2 A-1 A-2 B-1 B-2 Cw-1 Cw-2 Pc1 A2 A11.2 B54 B55 Cw1 - Pc15 A26 - B61 - Cw1 Cw8 Pc2 A2 A31 B48 B61 Cw8 Cw1 Pc16 A3 A33 B44 - Cw5 Cw14 Pc4 A24 - B62 B71 Cw7 Cw9 Pc17 A24 A26 B35 B46 Cw9 Cw1 Pc5 A24 - B62 B75 Cw9 - Pc18 A24 A31 B7 B56 Cw4 Cw7 Pc6 A26 - B51 B52 Cw1 Cw12 Pc19 A24 - B6 B61 Cw8 Cw1 Pc7 A1 A33 B37 B44 Cw6 Cw14 Pc2 A2 - B39 - Cw7 - Pc8 A11.1 A24 B54 B59 Cw1 - Pc21 A31 - B51 - Cw14 - Pc9 A2 A31 B7 B13 Cw7 Cw1 Pc22 A33 - B46 B58 Cw1 Cw1 Pc1 A24 - B52 - Cw12 - Pc23 A3 - B44 - Cw5 - Pc11 A33 - B44 - Cw14 - Pc24 A24 A31 B39 B67 Cw7 - Pc12 A24 - B7 - Cw7 - Pc25 A11.1 - B54 B67 Cw1 Cw7 Pc13 A24 - B54 - Cw1 - Pc26 A26 - B61 B44 Cw1 Cw14 Pc14 A11 - B62 - Cw4 -
WAKFlow HLA 抗体クラス Ⅱ(MR) 使用パネルセル Pd1 DR1/- DQ5/- DPB1*41/- Pd17 DR1/1 DQ5/- DPB1*21/*42 Pd2 DR15/- DQ6/- DPB1*21/*141 Pd18 DR4/1 DQ4/5 DPB1*51/- Pd3 DR16/- DQ5/- DPB1*31/- Pd19 DR4.1/4.2 DQ7/8 DPB1*21/*51 Pd4 DR3/- DQ2/- DPB1*21/- Pd2 DR8.1/9 DQ7/9 DPB1*51/*141 Pd5 DR4.1/- DQ4/- DPB1*42/*51 Pd21 DR8.1/15 DQ4/6 DPB1*21/*91 Pd6 DR4.2/- DQ8/- DPB1*51/- Pd22 DR8.2/15 DQ6/8 DPB1*51/*91 Pd8 DR7/- DQ2/- DPB1*151/- Pd23 DR8/143 DQ7/8 DPB1*51/- Pd9 DR8.1/- DQ6/- DPB1*51/*91 91 Pd24 DR8/14 DQ7/8 DPB1*21/*51 51 Pd1 DR9/- DQ9/- DPB1*21/*91 Pd25 DR14/15 DQ7/6 DPB1*51/*91 Pd11 DR11/- DQ7/- DPB1*41/- Pd26 DR11/12 DQ7/- DPB1*51/*61 Pd12 DR12/- DQ7/9 DPB1*51/- Pd27 DR13/143 DQ7/- DPB1*21/- Pd13 DR13/- DQ6/- DPB1*21/- Pd28 DR4.1/16 DQ4/5 DPB1*31/*51 Pd14 DR14/- DQ5/- DPB1*22/*251 Pd29 DR15/3 DQ6/2 DPB1*21/*131 Pd15 DR14/- DQ7/- DPB1*42/- Pd3 DR143/15 DQ6/7 DPB1*51/*91 Pd16 DR1/7 DQ2/5 DPB1*42/*171 ホモ接合パネル HLA-DR4およびDR8 抗原サブタイプのパネル
測定データの解析 Index 値 (NBG Ratio) での判定 Index 値の計算方法 Index 値 = 検体と # ビーズとのシグナル 検体と Blank ビーズとのシグナル NS* と # ビーズとのシグナル NS* と Blank ビーズとのシグナル NS:negative serum Cutoff 値 : 検体毎に交差反応性等を考慮し決定する必要がある ( 弱陽性の例では index が 2 以上で陽性と判定可能であった )
WAKFlow HLA クラス Ⅰ 抗体解析画面 B7
WAKFlow HLA クラス Ⅱ 抗体解析画面 DR15 DR8+11+13+14?
参加施設および検査内容 WAKFlow HLA クラス Ⅰ&Ⅱ 抗体 (MR) 参加施設数 : 9 施設 Lab No. クラスⅠ 二次抗体 二次抗体 クラス Ⅱ 添付品 IgM 吸収操作 添付品 IgM 2S9 - - - - - 吸収操作 2S15 - - - 2S18 - - - - 2S2 - - 2S25 - - - - 2S27 - - 2S29 - - 2S3 - - 2S33 - - - - 添付品 : 抗ヒト免疫グロブリン Fab 鎖 備考
WAKFlow HLA クラス Ⅰ&Ⅱ 抗体 (MR) 解析結果図表リスト 図表試薬サブクラス内容 Fig. 1~Fig. 13 Class I IgG Raw Data & Index グラフ Fig. 14~Fig. 26 Class II IgG Table 1 Class I & II IgG Class I and Class II IgG antibodies Fig. 27 Class I IgM Raw Data & Index グラフ Fig. 28 Class II IgM Table 2 Class I & II IgM Class I and Class II IgM antibodies
Fig 1. Raw Data of SH21 (Class I) 2, 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S3 2S29 2S33 2S2A 2S25A 2S27A 2S3A SH21 Ave Fig 2. Index value of SH21 (Class I) 16. 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 2S2A 2S25A 2S27A 2S3A 18, 14. 度 (median) 蛍光強 16, 14, 1 1, 8, 6, 4 4, Index va alue 12. 1. 8. 6. 4. 2.. Fig. 3 Average of index value of absorbed and non absorbed SH21 samle (Class I) 9. SH21 non-abs. Ave SH21 Abs Ave 8. 7. 6. Inde ex value 5. 4. 3. 2. 1..
Fig. 4 Raw Data of SH22 (Class I) 1, 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 SH22 Ave Fig. 5 Index value of SH22 (Class I Ab) 1. 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 SH22 Ave 9, 9 9. 8, 8. 蛍光強度 (median) 7, 6, 5, 4, Index value 7. 6. 5. 4. 3, 3. 2. 1, 1.. Fig. 6 Raw Data of SH23 ( Class I ) 1, 9, 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 2S3A SH23 Ave Fig. 7 Index value of SH23 (Class I Ab) 5. 4.5 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 2S3A SH23 Ave 8, 4 4. 蛍光強度 (median) 7, 6, 5, 4, Ind dex value 3.5 3. 2.5 2. 3, 1.5 1. 1,.5.
Fig. 8 Raw Data of SH24 (Class I) 1, 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 2S3A SH24 Ave Fig. 9 Index value of SH24 (Class I Ab) 5. 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 2S3A SH24 Ave 9, 45 4.5 8, 4. 蛍光強度 (median) 7, 6, 5, 4, Index value 3.5 3. 2.5 2. 3, 1.5 1. 1,.5. Fig. 1 Raw Data of SH25 (Class I) 2, 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 2S15A SH25 Ave Fig. 11 Index value of SH25 (Class I Ab) 25. 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S3 2S33 2S29 2S15A SH25 Ave 18, 16, 2. 蛍光強度 (median) 14, 1 1, 8, 6, 4, Ind dex value 15. 1. 5..
Fig. 12 Raw Data of SH26 (Class I) 22,5 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 2S15A SH26 Ave Fig. 13 Index value of SH26 (Class I Ab) 35. 2S9 2S15 2S18 2S2 2S25 2S27 2S29 2S3 2S33 2S15A SH26 Ave 2, 3. 蛍光強強度 (median) 17,5 15, 12,5 1, Index value 25. 2. 15. 7,5 5, 2,5 1. 5.. Fig. 14 Raw Data of SH21 1 2S15 2S18 2S2 2S27 2S29 2S3 2S33 2S15A 2S27A 2S3A 2S33A SH21 Ave Fig. 15 Index value of SH21 2S15 2S18 2S2 2S27 25. 2S3 2S29 2S33 2S15A 2S27A 2S3A 2S33A 1, 2. 蛍光強度 (median) 8, 6, In ndex value 15. 1. 4, 5..
Index value Fig. 16 Average of index value of absorbed and non absorbed SH21 sample 2. 18. 16. 14. 12. 1. 8. 6. 4. 2.. SH21 non-abs Ave SH21 Abs Ave Panel # DR DR51,52,53 DQ DPB1 BB 1 Pd1 DR1 DQ5 *41 Pd1 2 Pd2 DR15 DR51 DQ6 *21 *141 Pd2 3 Pd3 DR16 DR51 DQ5 *31 Pd3 4 Pd4 DR3 DR52 DQ2 *21 Pd4 5 Pd5 DR4.1 DR53 DQ4 *42 *51 Pd5 6 Pd6 DR4.2 DR53 DQ8 *51 Pd6 7 Pd8 DR7 DR53 DQ2 *151 8 Pd9 DR8.1 DQ6 *51 *91 9 Pd1 DR9 DR53 DQ9 *21 *91 1 Pd11 DR11 DR52 DQ7 *41 11 Pd12 DR12 DR52 DQ7 DQ9 *51 12 Pd13 DR13 DR52 DQ6 *21 13 Pd14 DR14 DR52 DQ5 *22 *251 14 Pd15 DR14 DR52 DQ7 *42 15 Pd16 DR1 DR7 DR53 DQ2 DQ5 *42 *171 16 Pd17 DR1 DR1 DQ5 *21 *42 17 Pd18 DR4 DR1 DR53 DQ4 DQ5 *51 18 Pd19 DR4.1 DR4.2 DR53 DQ7 DQ8 *21 *51 19 Pd2 DR8.1 DR9 DR53 DQ7 DQ9 *51 *141 2 Pd21 DR8.1 DR15 DR51 DQ4 DQ6 *21 *91 21 Pd22 DR8.2 DR15 DR51 DQ6 DQ8 *51 *91 22 Pd23 DR8 DR143 DR52 DQ7 DQ8 *51 23 Pd24 DR8 DR14 DR52 DQ7 DQ8 *21 *51 24 Pd25 DR14 DR15 DR51 DR52 DQ7 DQ6 *51 *91 25 Pd26 DR11 DR12 DR52 DR52 DQ7 *51 *61 26 Pd27 DR13 DR143 DR52 DR52 DQ7 *21 27 Pd28 DR4.1 DR16 DR51 DR53 DQ4 DQ5 *31 *51 28 Pd29 DR15 DR3 DR51 DR52 DQ6 DQ2 *21 *131 29 Pd3 DR143 DR15 DR51 DR52 DQ6 DQ7 *51 *91 Pd8 Pd9 Pd1 Pd11 Pd12 Pd13 Pd14 Pd15 Pd16 Pd17 Pd18 Pd19 Pd2 Pd21 Pd22 Pd23 Pd24 Pd25 Pd26 Pd27 Pd28 Pd29 Pd3 5, 4,5 4, Fig. 17 Raw Data of SH22 2S15 2S18 2S2 2S27 2S29 2S3 2S33 SH22 Ave Fig. 18 Index value of SH22 2S15 2S18 2S2 (Class II) 1. 9. 8. 2S27 2S29 2S3 2S33 SH22 Ave 蛍光強度 (median) 3,5 3, 2,5 ndex value I 7. 6. 5. 4 4. 1,5 3. 1, 2. 5 1..
Fig. 19 Raw Data of SH23 5, 2S15 2S18 2S2 2S27 2S29 2S3 2S33 SH23 Ave Fig. 2 Index value of SH23 1. 2S15 2S18 2S2 2S27 2S29 2S3 2S33 SH23 Ave 4,5 9 9. 4, 8. 蛍光強度 (median) 3,5 3, 2,5 Index value 7. 6. 5. 4. 1,5 3. 1, 2. 5 1.. Fig. 21 Raw Data of SH24 5, 2S15 2S18 2S2 2S27 2S29 2S3 2S33 2S3A 2S33A SH24 Ave Fig. 22 Index value of SH24 1. 2S15 2S18 2S2 2S27 2S29 2S3 2S33 2S3A SH24 Ave 4,5 9. 4, 8 8. 光強度 (median) 蛍 3,5 3, 2,5 Ind dex value 7. 6. 5. 4. 1,5 3. 1, 2. 5 1..
Fig. 23 Raw Data of SH25 5, 2S15 2S18 2S2 2S27 2S29 2S3 2S33 SH25 Ave Fig. 24 Index value of SH25 1. 2S15 2S18 2S2 2S27 2S29 2S3 2S33 SH25 Ave 4,5 9. 4, 8. 蛍光強度 (median) 3,5 3, 2,5 Index value 7. 6. 5. 4. 1,5 3. 1, 2. 5 1.. Fig. 25 Raw Data of SH26 7, 2S15 2S18 2S2 2S27 2S29 2S3 2S33 SH26 Ave Fig. 26 Index value of SH26 16. 2S15 2S18 2S2 2S27 2S3 2S33 2S29 SH26 Ave 6, 14. 蛍光強度 (median) 5, 4, 3, Ind dex value 12. 1. 8. 6. 4. 1, 2..
Sample SH21 Table1 Class I and Class II IgG antibodies (Positive:Index>2.) Class I Class II Positive Positive Specificities Panel # Panel # Specificities 広範囲 広範囲 (Pc21, 23, 16, 24, (HLA-A3, A24, A31, A33, 11 ( 陰性 )) B44, B67, B39, B51 抗原陰性 ) Pb1 (2, 21, 2, 1, 16, 8weak) DR9+DR7w SH22 Pc7, 11, 26, 16, 23 B44 - - SH23 - - - - SH24 - - - - SH25 広範囲 (Pc1, 13 陰性 ) 広範囲 (A11.2, A2, A24, B54, B55 抗原陰性 ) - - SH26 広範囲 (Pc1,12,13,1912 13 19 ( 陰性 )) 広範囲 (A24, B6, B61, B7, B54, B52 抗原陰性 ) Pb27,23,24,15,1 3,4,11,26,29,25,3,14,22,9,21 3411262925 DR52+DR8.2? 2?
Fig. 27 Index value of SH21 6 (Class I, IgM Ab, Lab:2S29) 14. SH21-M1 SH22-M1 SH23-M1 SH24-M1 SH25-M1 SH26-M1 Fig. 28 Index value of SH21 6 (ClassII, IgM Ab, Lab:2S29) 5. SH21-M SH22-M SH23-M SH24-M SH25-M SH26-M 12. 45 4.5 4. 1. 3.5 Index value 8. 6. Index value 3. 2.5 2. 4. 1.5 1. 2 2..5.. Sample Table2 Class I & II IgM antibodies (Positive:Index>2.) Class I Class II Positive Panel # Specificities e Positive Panel # Specificities e SH21 B62+(B71+B75)+B46+ 14,(4, 5, 8, 17, 25 weak) B35+A11 - (DR9weak?) SH22 7,11,26,(13,16, 23 weak) B44 - - SH23 (5, 5,24 weak)? - - SH24 (11 weak)? - - SH25 (1,2,21weak) 21weak)? - - SH26 21(2, 7, 8, 22weak)? 28(11weak)?