1068 三 し,各 凍 結 時 間 に て 凍 結 後30分 時 間 後(3頭), (4頭)の 3時 宅 後(3頭), 間 後(3頭), 5時 1 間後 に 溶 解 し た2.5% cacodylate 法 に し た が っ てEPon はLKB社 buffer(ph glutaraldehyd
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- ほのか おうじ
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2 1068 三 し,各 凍 結 時 間 に て 凍 結 後30分 時 間 後(3頭), (4頭)の 3時 宅 後(3頭), 間 後(3頭), 5時 1 間後 に 溶 解 し た2.5% cacodylate 法 に し た が っ てEPon はLKB社 buffer(ph glutaraldehydeと2% 7.4) OsO4 812で 包 埋 した.超 薄 切 片 製2008型 超 ミク ロ トー ム を用 い て 作 成 し,酢 酸 ウ ラ ニ-ル 標 本 を 摘 出 し た. 摘 出 組 織 は0.2M 敬 二 郎 と クエ ン 酸 鉛 の 二 重 染 色 で 染 色 後,日 立 製H-300型 電 子 顕 微 鏡 で観 察 した. 1本 の 摘 出神 経 組 織 よ り10個 前 後 の ブ ロ ッ クが 得 られ る が,す べ て の ブ ロ ッ クに つ き原 則 と し て そ の 横 断 面 の 観 察 を行 い そ の 平 均 的 所 見 につ き検 討 した. 結 図1は 果 凍 結 を行 な っ て い な い正 常 末 梢 神 経 の 電 顕 像 で あ る.有 髄 神 経 と無 髄 神 経 が 区 別 さ れ, こ れ は 刺 激 を伝 達 す る神 経 突 起 と こ れ を包 む 神 経 線 維 鞘 か ら な っ て い る.軸 索 膜 の 内 部 に は 神 経 細 糸,微 細 管,滑 面 小 胞体,糸 粒 体,な どの 細 胞 小 器 官 を含 む 電 子 密 度 の 低 い 軸 索 原 形 質 と い うほ ぼ 均 一 な 基 質 で 満 た さ れ て い る.軸 索 は 髄 鞘 と神 経 線 維 鞘 で 包 ま れ て い る.髄 鞘 は シ ュ ワ ン細 胞 か ら形 成 され る 多層 の 求 心 性 に 配 列 さ れ た 膜 構 造 か ら な って い る.無 髄 神 経 は シ ュ ワ ン 鞘 に 包 ま れ るが,シ ュ ワン細胞 の 回転 に よる ミエ リ ン鞘 を有 し て い な い. 図2は が,す 図1 正 常 肋 間神 経 の 電子 顕微 鏡 像(Bar: M:有 髄神 経 N:無 髄神 経 1μ) に よ る 二 重 固 定 後,ア ル コー ル 系 列 で脱 水, Luft 図2 各 凍結 時 間の凍 結直後 の電 顕像 で ある で に 髄 鞘 内 に ミエ リ ン 層 の わ ず か な 離 開 に よ る電 子 密 度 の 低 下 して い る と こ ろが 見 られ, 間 質 の 膠 原 線 維 の 離 開 も認 め ら れ た.た れ ら の 変 化 は,凍 各凍 結 時 間 の凍 結 直後 の 電 子顕 微鏡 像(Bar: 左:凍 結 時 間30秒 間 中:凍 結時 間1分 間 だ しこ 結 時 間 に よ る 明 らか な 差 は な 5μ) 右:凍 結 時 間2分 間
3 凍 結麻 酔 の基礎 的研 究 か った し,核 変 性 も 多数 見 られ た.ま 図3は 凍 結時 間2分 間の凍 結後30分, 1時 間 も見 られ た.他 た,間 質の 浮腫 の 凍 結 時 間 の 標 本 で も同 様 の 変 及 び3時 間後 の電 顕像 で あ る.髄 鞘最 内葉 と軸 化 を呈 し,凍 結 時 間 に よ る 明 らか な差 は な か っ 索膜 の 間に空 隙が で き,あ たか も軸索 が収縮 し た. たか の よ うにみ えた.こ の 空隙 は大小 さま ざま 図4は 各 凍結 時間 の凍結 後5時 間経過 した電 で,凍 結時 間や 凍 結後 の時 間経過 に よ る差 は な 顕像 で ある.凍 結後3時 間後の標 本 よ りさ らに かっ た.髄 鞘 は凍 結 直後 の変化 が時 間 とともに 髄鞘 の変 性が進行 してい るが,各 凍結 時間 での 進 み,隣 接 ミエ リン板 間の 間隔 が さ らに広 が り, 形態 学的変 化 は,本 質 的 な差 は認 め られ なか っ 電顕上 斑状 の電子 密度 の低 下 として認め られた. た.軸 索 内微細構 造 には 明 らか な障害 の傾 向 は ただ し凍結 直後 か ら30分後 までの変化 に比 べ, 今 回の検 索か らは断定 で きず,こ の時 点 で も微 その後 の変化 は 緩徐 で あっ た.ま た有髄神 経, 細管 や神経 細 糸の形 態は 比較的 よ く保 たれ て い 無髄神 経 ともに シュ ワン細胞 では小 器官 は膨化 た.こ れ らすべ て の変化 は有髄神 経 の線維径 に 図3 凍 結 時 間2分 間 の凍 結 後30分 後(左), 図4 1時 間 後(中), 3時 間後(右)の 凍 結後5時 間 の電 子 顕微 鏡像(Bar: 5μ) 左:凍 結 時 間30秒 間 中:凍 結 時 間1分 間 電 子 顕微 鏡像(Bar: 右:凍 結 時 間2分 間 5μ)
4 1070 三 宅 よ る 明 ら か な差 は 認 め られ なか っ た. 図5は 凍 結 後1か 月,図6は 過 した 標 本 で あ る.貧 凍 結 後2か 敬 二 郎 して い る.こ 月経 食 細 胞 に よ る ミエ リン 残 の 変 化 は各 凍 結 時 間 の どの 標 本 に も 認 め られ た が,凍 渣 の 処 理 が 見 ら れ,破 壊 さ れ た ミエ リン は,分 凍 結 時 間 と もに,再 離 し層 状 構 造 を残 し た ま ま シ ュ ワ ン細 胞 の 細 胞 る. 質 内 に 存 在 して し る.ミ 胞 体 は,軸 エ リ ン残 渣 を貧 食 し た 索 内 に も侵 入 し,な か に は従 来 軸 索 が あ っ た スペ ー ス が,ほ とん ど貧 食 胞体 で 置 換 結 時 間 の 短 い ほ うが 再 生 像 の 割 合 が 多か っ た,凍 結 後2か 図7は 凍 結 後3か 月 後 に な る と各 生 軸 索 の 比 率 が 増 加 して い 月経 過 した 標 本 で あ る.再 ミエ リン化 は さ ら に 進 行 し て い るが,依 像 も混 在 して い た.再 然変性 ミエ リ ン化 が 始 ま っ た初 さ れ て い る と こ ろ も あ っ た(membranous 期 の もの で は,髄 spheres10)).凍 結 後1か く,凍 結 時 間 の 短 い ほ うが 再 生 神 経 の 完 成 度 は 月 後 の 電 顕 像 で は,す で に 再 生 軸 索 も観 察 さ れ,変 図5 図6 化 再 生 の 像 は 混 在 高 か っ た.よ 鞘 の 厚 さ は正 常 の そ れ よ り薄 っ て 凍 結 後 の 神 経 再 生 に 関 し組 織 凍 結 後1か 月 の電 子 顕微 鏡像(Sar: 5μ) 左:凍 結 時 間30秒 間 中:凍 結 時 間1分 間 右:凍 結 時 間2分 間 凍結 後2か 月 の電 子顕 微 鏡像(Bar: 5k) 左:凍 結 時 間30秒 間 中:凍 結 時 間1分 間 右:凍 結 時 間2分 間
5 凍結 麻 酔の基礎 的研 究 図7 学 的 に は,一 1071 凍 結後3か 月 の電 子顕 微 鏡像(Bar: 5μ) 左:凍 結 時 間30秒 間 中:凍 結 時間1分 間 定 の 凍 結 温 度 で は凍 結 時 間 と神 経 組 織 の再 生 に 要 す る 時 間 に は 正 の 関 係 が あ る と い え た.再 生 神 経 は,軸 索 内 微 細構 造 も正 常 神 rapid 右:凍 結 時 間2分 間 coolingの 場 合 は透 化 あ る い は ガ ラ ス化 (vitrification)の た め 細 胞 破 壊 は起 き な い.細 胞 の 凍 害 の 機 序 は,塩 害 説(salt injury theory) 経 と差 は な か っ た.こ の 時 期 の 再 生 有 髄 神 経 は, の他,高 い ず れ の 凍 結 時 間 で も,小 径 線 維 の 再 ミエ リ ン そ れ 越 す と き に細 胞 膜 の 障 害 を 来 す とい うMer 化 は 遅 く,正 常 よ り髄 鞘 の 厚 さ が 薄 か っ た.ま ymanの た,無 髄 神 経 の 線 維 径 は,正 theory)13),根 井 の機 械 的 障 害 説19)などが あ るが, 常 よ り細 い も の も あ っ た. 最 小 容 積 説(minimal volume 遊 離 細 胞 と組 織 で は 異 な る し,組 織 の 低 温 感 受 考 性 も異 な る の で 形 態 や 機 能 の 変 化 を単 一 の 機 序 察 で は 説 明 で きな い.低 温 感 受 性 に つ い て は,細 生 物 学 分 野 で の 低 温 に お け る種 々 の 現 象 に つ い て の 研 究 は,低 れ て い る.も 張 液 中 の 細 胞 の収 縮 に は 限 界 が あ り, 温 生 物 学 と し て各 分 野 で 行 わ ち ろ ん,低 温 あ るいは凍 結 と医学 との 関 わ りは 深 く,そ の 歴 史 も古 い.生 物試料 胞 成 分 の 少 な い 間 質 の 多 い 組 織 は 抵 抗 が 強 く, 弾 性線 維 や 膠 原 線 維 に 富 む 組 織 は 構 造 変 化 を起 こ し に くい と言 わ れ て い る.一 般 に 末 梢 神 経 は 凍 結 障 害 を受 け や す い と理 解 さ れ て い る.こ れ は 組 成 の 大 部 分 が 水 分 で あ り,低 温 に お か れ る は凍 結 障 害 は 膜 障 害 で あ り,神 経 組 織 も多 くの と 当 然 水 か ら 氷 へ と物 理 的 な 変 化 を 起 こ す.た 膜 構 造 を持 っ て い る こ とか ら も 説 明 さ れ て い だ し生 体 内 組 織 で は 複 雑 な 有 機 物 を 含 ん だ 溶 液 る.13) 14). の 状 態 に あ る の で,純 水 を凍 らせ た と きの よ う 末 梢 神 経 の低 温 障 害 の メ カ ニ ズ ム に つ い て は に 簡 単 で は な く,凍 結 方 法 だ け で な く組 織 に よ 種 々 の 説 が あ る. Basbaum10), り形 態 的 機 能 的 な変 化 に差 が あ ら わ れ る11)12). 神 経 血 液 関 門 の 障 害 に よ るendoneuriumの Doebblerの 仮 説 に よ れ ば, 0.1 /minのslow Greenfield11)は coolingの 場 合 は 細 胞 外 に大 きい氷 晶 を作 る ため と述 べ,こ れ はendoneurium内 の 細 胞 の 脱 水 と塩 害(salt injury)に 如 が 深 く関 与 して い る と推 測 して い る.ま 破 壊 され る が, 1 10 /minの よ り細 胞 は 冷 却 で は塩 害 が 浮腫 が神 経 内 圧 の 上 昇 を来 し神 経 線 維 変 性 を起 こす 細 胞 レ ベ ル で の 障 害,特 の リン パ 系 の 欠 た, に ラ イ ソ ゾー ム 内 で の 及ぼす 細 胞 が 破 壊 され ない状 態 が あ る.また100 / 酵 素 活 性 化 が 細 胞 障 害 を来 す との 説16)もあ る. minのrapid Fernandez17), cooli の場 合 は,細 胞 内 氷 晶 形 成 の ため細 胞 は 破 壊 され るが,10000 /minのultra Harkinら18)は 低 温 自体 が 軸 索 伝 導 を 障 害 し,特 に 速 伝 導 が 障 害 さ れ る と報 告 し
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7 3) Nelson KM, Vincent RG, Bourke RS, Smith DE, Blakely WR, Kaplan RJ and Pollay R: Intraoperative intercostal nerve freezing to prevent postthoracotomy pain. Ann Thorac Surg (1974)
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10 A study on cryoanalgesia after thoracotomy -A new approach to pain relief- Part 2. Experimental study Keijiro MIYAKE Second Department of Surgery, Okayama University Medical School, Okayama 700, Japan (Director: Prof. S. Teramoto) Since July 1986, cryoanalgesia has been used for the relief of pain after thoracotomy as a routine method of postoperative pain control in our unit. A clinical study of cryoanalgesia showed that it was effective in controling postthoracotomy pain. There is little doubt that freezing provides an effective method of producing prolonged interruption of nerve conduc tion. This study showed the ultrastructual changes induced by freezing the intercostal serve of mongrel dogs. The earliest changes were dissociation of leaflets of the myelin seath and contraction of the axon followed by the degeneration of both elements. The second change was the absorption of degenerated myelin followed by the regeneration of nerves which were observed at a time when some degenerative changes were still progressing. No relationship has been found between nerve fiber size and susceptibility to freezing. There was a relationship between the duration of freezing and the time required for regeneration of the nerve. Although nerve function was not studied in this experiment, the structual changes were in accord with the clinical findiing of reduced sensitivity during and immediately following cryoanalgesia and also with the recovery of function within a few months of freezing.
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