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1 RITE 1

2 C6 C5 RITE Sustainable Industry C2 C3 C4 2

3 1 take-off food non-food DuPont C Advanced fuels 3

4 in ( kl/y) POET Broin C5C6 9.5 Novozymes Z. mobilis Vercipia (Verenium/BP) BP (Verenium) E.coli KO11 K. oxytoca BW34 E.coli KO11 K. oxytoca BW34 Mascoma CBP 7.6 Genencor, Yeast Themophilic anaerobe Bluefire Ethanol Inc C5C6 7.2 Yeast Abengoa Novozymes, Genencor, Dyadic, DSM DuPont Danisco Cellulosic Ethanol C5C6 0.1 Genencor Z. mobilis American Energy Enterprises 2010 mid 2010 C5C6 5.7 Yeast Pacific ethanol Q, Novozymes Yeast Themophilic anaerobe KL Energy / Western Biomass Energy C6 0.6 Novozymes Yeast 4

5 UP Land Usage CSR 5

6 2 $ 230 Billion in 2030 IT C 6 6

7 Green-chemical s market:$230billion by 2030 When bio-fuel gives you lemons, make green-chemicals at first. From BiofuelsDigest, partially modified 7

8 A Novel and Highly Efficient Bioprocess RITE Bioprocess 8

9 RITE RITE High productivity No energy loss for growth Simple system 9

10 RITE strain Corynebacterium glutamicum Under oxygen deprivation - Growth-arrested - Maintains main metabolic capabilities 10

11 Engineering of Hyper-producing Corynebacteria Sugars Gene introduction using compatible vectors Metabolite gene A I gene B II gene C III gene D IV Expression plasmids genome Selection of useful gene Optimization of gene expression level Identification of the best combination Products Chromosomal integration 11

12 Glucose PEP EM pathway DHAP NAD + NADH G-6-P F-6-P F-1,6-P 2 GAP PGP PTS PYR NADP + P8),15),16),20) GAPDH P15),12),17),19),23),21),22) NADPH 6-PGlucono -lactone PP pathway 6-PGluconate Rib5P GAP Xylose NADP + Xylose xyla Pentose transporter Xylulose xylb NADPH Ribu5P P3),2),4) Arabinose 5),6) Arabinose araa Ribulose arab Ribulose-5P arad Xlu5P Sed-7-P P4),3) PEP PYR F-6-P F-6-P GAP Ery-4-P P9) L-Alanine D-Lactic acid P14),11),13),14) P14),9) P13),P14),P16),P17), P18),P19),P20),7) P1),P2),1) P10),P11),P12), P14),8),10) L-Lactic acid Ethanol Isopropanol Succinic acid Branched-chain P9) amino acids(l-valine ) P5) Isobutanol P6),P7),18) Butanol Patent application / registration by RITE P1) WO P2) WO P3) PCT/JP2009/ P4) JP (A) P5) JP P6) JP P7) JP P8) JP P9) JP P10) EP A1 P11) WO A1 P12) US P13) JP P14) JP P15) JP P16) EP A1 P17) US P18) CN P19) IN P20) JP Publication by RITE 1) Appl. Microbiol. Biotechnol. 77: ) Appl. Environ. Microbiol. 72: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 77: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 81: ) Appl. Environ. Microbiol. 75: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 85: ) J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 8: ) J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 7: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 68: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 81: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 78: ) Microbiology 155: ) J. Bacteriol. 191: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 83: ) J. Bacteriol. 191: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 81: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 78: ) J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 15: ) Microbiology 154: ) J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 8: ) Biochem. Biophys. Res. Commun. 289: ) J. Biosci. Bioeng. 92: ) Microbiology 149:

13 CH 2 O O PYR Glucose PEP EM pathway C O C CH 3 DHAP NAD + NADH kj/mol G-6-P F-6-P F-1,6-P 2 GAP PGP PEP PTS GAPDH PYR NADP + NADPH 6-PGlucono -lactone HOCH 2 O 6-PGluconate Rib5P GAP F-6-P F-6-P GAP Xylose kj/mol kj/mol CO C O CH 2 DAHP PP pathway NADP + CO C O CH 2 CH HC HC CH 2 O CO 2 Xylose xyla Pentose transporter Xylulose xylb NADPH Ribu5P Arabinose Arabinose araa Ribulose arab Ribulose-5P arad Xlu5P Sed-7-P Ery-4-P kj/mol CHO HC HC CH 2 O O HOCH 2 13

14 RITE 14

15 CH 2 O O PYR Glucose PEP EM pathway O C C CH 3 DHAP NAD + NADH kj/mol G-6-P F-6-P F-1,6-P 2 GAP PGP PEP PTS GAPDH PYR NADP + NADPH 6-PGlucono -lactone HOCH 2 O 6-PGluconate Rib5P GAP F-6-P F-6-P GAP Xylose kj/mol kj/mol CO C O CH 2 DAHP Phenol PP pathway CO C O CH 2 CH HC HC CH 2 O NADP + CO 2 Xylose xyla Pentose transporter Xylulose xylb NADPH Ribu5P Arabinose Arabinose araa Ribulose arab Ribulose-5P arad Xlu5P Sed-7-P Ery-4-P CHO HC HC CH 2 O kj/mol O HOCH 2 Phenol 32.9 kj/mol 15

16 Green Sustainable Chemistry ,

17 RON

18 18

19 Air 19

20 BSE 120 t

21 RITE C6 C5 STY Space/Time/Yield 21

22 22

23 6 5 23

24 6 5 24

25 C6 C5 C6 C5 25

26 C6, C5 Biomass C5 Sugars Fermentation Solid/Liquid Separation Liquid Hemi-sugars Pretreatment & hemicellulose hydrolysis Solids Cellulose + Lignin Detoxification C-5 Fermentation Ethanol Cellulose Hydrolysis Glucose Fermentation Product Recovery Enzymatic Hydrolysis & Fermentation Lignin to Boilers 26

27 Sugar Metabolism Engineering Cellulose Cellobiose (C 6 -C 6 ) Adaptive mutant for cellobiose uptake ability 1) Glucose (C 6 ) RITE strain Hemicellulose Xylose (C 5 ) Chromosomal integration for xylose metabolic ability promoter promoter 2) xyla xylb xylose isomerase xylulokinase Arabinose (C 5 ) Chromosomal integration for arabinose metabolic ability arab araa arad L-arabinose isomerase L-ribulokinase L-ribulose-5-P-4-epimerase 1) Microbiology 149: ) Appl. Environ. Microbiol. 72: ) Appl. Microbiol. Biotechnol. 77: )

28 Simultaneous Utilization of Mixed Sugars Integration of a pentose transporter Glucose Glucose Sugar mm Xylose Arabinose Sugar mm Xylose Arabinose Time h Time h Appl. Microbiol. Biotechnol. 85:

29 Corynebacterium glutamicum Under oxygen deprivation - Growth-arrested -Maintains main metabolic capabilities 29

30 Corynebacterium glutamicum Shift Corynebacterium 30

31 Phase Trends Biotechnol. (2008) 26: EU Appl. Environ. Microbiol. (2007) 73: RITE 31

32 RITE

33 ETP2010: GHG 4 IEA Energy Technology Perspective

34 ETP2010: IEA Energy Technology Perspective

35 35

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