2.6.1 非臨床概要緒言 アレジオン点眼液 0.05% 第 2 部 ( モジュール 2): CTD の概要 ( サマリー ) 非臨床概要緒言 参天製薬株式会社 1

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1 2.6.1 非臨床概要緒言 アレジオン点眼液 0.05% 第 2 部 ( モジュール 2): CTD の概要 ( サマリー ) 非臨床概要緒言 参天製薬株式会社 1

2 2.6.1 非臨床概要緒言 緒言 DE-114 点眼液は 図 に示す化学構造を有し ヒスタミン H 1 受容体に結合することによる抗ヒスタミン作用と メディエーター遊離抑制作用による抗アレルギー作用を併せ持つヒスタミン H 1 受容体拮抗薬であり これらの薬理作用からアレルギー性結膜炎の治療薬として有用であると考えられる HCl 図 DE-114 の構造式 DE-114 点眼液の申請効能 効果及び申請用法 用量を以下に示す 効能 効果 用法 用量 アレルギー性結膜炎 通常 1 回 1 滴 1 日 4 回 ( 朝 昼 夕方及び就寝前 ) 点眼する 2

3 2.6.2 薬理概要文 アレジオン点眼液 0.05% 第 2 部 ( モジュール 2): CTD の概要 ( サマリー ) 非臨床概要薬理試験の概要文 参天製薬株式会社 1

4 2.6.2 薬理概要文 目次 薬理試験の概要文 まとめ 効力を裏付ける試験 副次的薬理試験 安全性薬理試験 薬力学的薬物相互作用 考察及び結論 図表 参考文献一覧

5 2.6.2 薬理概要文 表 非臨床概要薬理試験で用いた略語一覧 略語又は用語 略さない表現又は定義 Alum Aluminum hydroxide gel( 水酸化アルミニウムゲル ) AST Astemizol( アステミゾール ) AZE Azelastine hydrochloride( アゼラスチン塩酸塩 ) camp cyclic adenosine monophosphate( 環状アデノシン一リン酸 ) cgmp cyclic guanosine monophosphate( 環状グアノシン一リン酸 ) DA 2 Dopamine D 2 ( ドーパミン D 2 ) DEX Dexamethasone( デキサメタゾン ) DE-114 DE-114 点眼液 エピナスチン塩酸塩の参天製薬株式会社の開発コード名 エピナスチン塩酸塩を含有する治験薬処方の製剤 DIP Diphenhydramine hydrochloride( ジフェンヒドラミン塩酸塩 ) EC 30 EC 50 ED 35 ED 50 IC 50 最大作用の 30% の作用を示す濃度最大作用の 50% の作用を示す濃度最大作用の 35% の作用を示す用量最大作用の 50% の作用を示す用量 50% の阻害作用を示す濃度 ISO Isoproterenol( イソプロテレノール ) LTC 4 Leukotriene C 4 ( ロイコトリエン C 4 ) Ketotifen fumarate( ケトチフェンフマル酸塩 ) MAO Monoamine oxidase( モノアミン酸化酵素 ) MAO-A MAO-B Monoamine oxidase-a( モノアミン酸化酵素 -A) Monoamine oxidase-b( モノアミン酸化酵素 -B) MET Methysergide maleate( マレイン酸メチセルジド ) OVA Ovalbumin( 卵白アルブミン ) OXA Oxatomide( オキサトミド ) PAF Platelet-activating factor( 血小板活性化因子 ) pa 2 アゴニストの用量反応曲線を 2 倍だけ高用量側にシフトさせるために必要な競合的ア ンタゴニストのモル濃度の負の常用対数 PCA Passive cutaneous anaphylaxis( 受動皮膚アナフィラキシー ) PRO Promethazine hydrochloride( プロメタジン塩酸塩 ) PYR Pyrilamine maleate( マレイン酸ピリラミン ) REM Rapid eye movement( 急速眼球運動 ) SRS-A Slow reacting substance of anaphylaxis( アナフィラキシー遅延反応物質 ) TER Terfenadine( テルフェナジン ) THEO Theophylline( テオフィリン ) 3

6 2.6.2 薬理概要文 表 非臨床概要薬理試験で用いた略語一覧 ( 続き ) 略語又は用語 化合物 A* 略さない表現又は定義 エピナスチン塩酸塩の代謝物 分解物 WEB WEB 2086 BS Apafant( アパファント ) 5-HT 1 5-hydroxytryptamine 1 serotonin 1( セロトニン 1) 5-HT 2 5-hydroxytryptamine 2 serotonin 2( セロトニン 2) プラセボ点眼液 エピナスチン塩酸塩を含有しない DE-114 点眼液の基剤 4 *: 新薬承認情報提供時に置き換え

7 2.6.2 薬理概要文 薬理試験の概要文 まとめ DE-114 点眼液はアレルギー性結膜炎治療のために開発され 本剤の有効成分は 既に内服 薬として 1994 年に承認されているアレジオン 錠 10 及びアレジオン 錠 20( 日本ベーリンガ ーインゲルハイム株式会社 ) の有効成分であるエピナスチン塩酸塩と同一である また エ ピナスチン塩酸塩を含有する点眼薬については RELESTAT 及び ELESTAT 点眼液が そ れぞれヨーロッパ及びアメリカ等全世界 49 ヵ国 (2012 年 9 月現在 ) で承認が取得されてい る DE-114 点眼液の有効成分であるエピナスチン塩酸塩は 内服薬の製造承認申請時の非臨床 試験により ヒスタミン H 1 受容体に強く結合し 抗ヒスタミン作用を発揮するとともに 肥 満細胞からのヒスタミンやロイコトリエン等のメディエーター遊離抑制作用も有することが 確認されている ( 第 項 ) DE-114 点眼液の製造販売承認申請にあたっては 効力を裏付ける試験として ヒスタミン 誘発結膜炎モデル動物を用いて エピナスチン塩酸塩の点眼による抗ヒスタミン作用を確認 した また アレルギー性結膜炎モデル動物を用いて 点眼による有効性並びにメディエー ター遊離抑制作用を確認した エピナスチン塩酸塩の副次的薬理試験及び安全性薬理試験は 内服薬の製造承認申請時に 一般薬理試験として実施されている ( 第 項 ) 体重 60 kg のヒトに 0.05% DE-114 点 眼液を両眼に 1 日 4 回点眼したときの投与用量は 0.2 mg/ 日 ( mg/kg) である これに 対し 内服薬の製造承認申請時の一般薬理試験は十分に高用量 (~300 mg/kg) で実施されて おり また 内服薬の臨床用量は 20 mg/ 日であることから DE-114 点眼液の点眼投与により ヒトで全身における副作用を発現する可能性は低いと考えられた そのため 本剤の製造販 売承認申請にあたって 副次的薬理試験及び安全性薬理試験としては 新たな試験は実施し なかった 効力を裏付ける試験 内服薬製造承認申請時の非臨床薬理試験エピナスチン塩酸塩の薬理作用については 内服薬の製造承認申請時の非臨床試験で 類薬との効力比較及び作用機序が検討されている 効力を裏付ける薬理試験の成績一覧表を第 項に示した その結果から エピナスチン塩酸塩は ヒスタミン H 1 受容体拮抗作用 LTC 4 及び PAFに対する抗メディエーター作用並びに肥満細胞からのヒスタミン及び SRS-A の遊離抑制作用を有し I 型アレルギー反応に対して強い抗アレルギー作用を示すことが確認されている 5

8 2.6.2 薬理概要文 ヒスタミン誘発による結膜炎モデル動物に対する作用モルモットに 0.025% 0.05% 及び 0.1% DE-114 点眼液を単回点眼し ヒスタミン誘発による結膜の血管透過性亢進に対する効果を検討した その結果 DE-114 点眼液は ヒスタミン投与の 15 分前点眼では 0.025% 以上 ヒスタミン投与の 6 時間前点眼では 0.05% 以上の用量で血管透過性亢進を有意に抑制した また 0.05% DE-114 点眼液群の色素漏出量は ヒスタミン投与の 15 分前点眼及び 6 時間前点眼のいずれにおいても 0.025% レボカバスチン点眼液 ( 販売名 : ) 群に比べて有意に低い値を示した 以上の結果から DE-114 点眼液はヒスタミン誘発による結膜の血管透過性亢進を抑制し 0.05% 以上の用量では点眼による抗ヒスタミン作用が 6 時間以上持続することが示された アレルギー性結膜炎モデル動物に対する作用 OVA 含有 Alumで能動感作したマウスに 0.05% DE-114 点眼液を単回点眼し 抗原誘発による結膜の血管透過性亢進に対する効果を検討した その結果 0.05% DE-114 点眼液は抗原誘発による結膜の血管透過性亢進を有意に抑制し その抑制効果は 0.1% オロパタジン点眼液 ( 販売名 : ) と同程度であった 抗 OVA 血清で受動感作したラットに 0.05% 0.1% 0.3% 及び 0.5% DE-114 点眼液を 2 回点眼し 抗原誘発による結膜肥満細胞の脱顆粒に及ぼす影響を病理組織学的に検討した その結果 DE-114 点眼液はすべての用量で 抗原誘発による結膜肥満細胞の脱顆粒を有意に抑制した さらに 受動感作ラットの摘出結膜からの抗原刺激によるヒスタミン遊離は プラセボ点眼液投与後の結膜組織に比べて 0.05% 0.1% 0.3% 及び 0.5% DE-114 点眼液投与後の結膜組織で有意に減少した 以上の結果から 0.05% DE-114 点眼液は アレルギー性結膜炎モデルの血管透過性亢進を有意に抑制することが示された また DE-114 点眼液は 結膜肥満細胞の脱顆粒を抑制することによって 結膜からのメディエーター遊離抑制作用を示すと考えられた 副次的薬理試験 該当する試験はない 安全性薬理試験 該当する試験はない 6

9 2.6.2 薬理概要文 薬力学的薬物相互作用試験 該当する試験はない 7

10 2.6.2 薬理概要文 効力を裏付ける試験 ヒスタミン誘発による結膜炎モデル動物に対する作用 モルモットのヒスタミン誘発による結膜炎モデルの血管透過性亢進に対する作用 ( 第 項 試験番号 ) 添付資料 雄性 Hartley 系モルモットに 0.025% 0.05% 及び 0.1% DE-114 点眼液 0.025% レボカバスチン点眼液 ( 販売名 : ) 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液 ( ) あるいはプラセボ点眼液を両眼に 25 μl/ 眼ずつ単回点眼した 薬物投与の 15 分あるいは 6 時間後に 100 μg/mlヒスタミンを 50 μl/ 眼ずつモルモットの両眼の眼瞼結膜下に注射した ヒスタミン投与直後に 1% エバンスブルー溶液を体重 1 kgあたり 1 ml ずつモルモットの前肢静脈に注射した ヒスタミン投与 30 分後にモルモットをジエチルエーテル麻酔下で放血致死させ 眼瞼結膜を摘出した 摘出した結膜組織は 個体ごとに両眼の組織を合わせて湿重量を測定した後 ホルムアミド 4 ml に冷蔵庫内で 16~18.5 時間浸漬して組織中に漏出した色素を抽出した 抽出液の 620 nmの吸光度を測定し 比色定量法によって色素濃度から組織重量あたりの色素漏出量 (μg/g) を算出した その結果 ヒスタミン投与 15 分前の単回点眼では すべての用量の DE-114 点眼液及び 0.025% レボカバスチン点眼液群の色素漏出量は プラセボ点眼液群に比べて有意に減少した 一方 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液群とプラセボ点眼液群の色素漏出量に 有意な差は認められなかった また DE-114 点眼液群の色素漏出量は すべての用量で 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液群に比べて有意に低い値を示し 0.05% 及び 0.1% DE-114 点眼液群では 0.025% レボカバスチン点眼液群に比べて有意に低い値を示した ( 図 ) ヒスタミン投与 6 時間前の単回点眼では 0.05% 及び 0.1% DE-114 点眼液群でプラセボ点眼液群に比べて有意な色素漏出量の減少が認められた 一方 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液及び 0.025% レボカバスチン点眼液群の色素漏出量は プラセボ点眼液群との間に有意な差は認められなかった また 0.05% DE-114 点眼液群の色素漏出量は 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液及び 0.025% レボカバスチン点眼液群に比べて有意に低い値を示した ( 図 ) 以上の結果から DE-114 点眼液はヒスタミン誘発による結膜の血管透過性亢進を有意に抑制し 0.05% DE-114 点眼液の抑制作用は 6 時間以上持続することが示された また 0.05% DE-114 点眼液は 点眼 15 分後及び点眼 6 時間後のいずれにおいても 0.025% レボカバスチン点眼液に比べて有意に血管透過性亢進を抑制した 一方 メディエーター遊離抑制薬である 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液は 本モデルでは薬効を示さなかった 8

11 2.6.2 薬理概要文 色素漏出量 (μg/g) ** $$ # # ** $$ ** $$ \\ 10 0 プラセボ点眼液 0.025% DE-114 点眼液 0.05% DE-114 点眼液 0.1% DE-114 点眼液 0.025% レボカバスチン点眼液 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液 図 モルモットのヒスタミン誘発結膜炎モデルの血管透過性亢進に対する DE-114 点眼液 0.025% レボカバスチン点眼液 ( 販売名 : ) 及び 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液 ( 販売名 : ) のヒスタミン投与 15 分前点眼による効果 数値は平均値 + 標準誤差 (n=10) を示す **:p<0.01 プラセボ点眼液群との比較(Dunnett 検定 ) # :p< % レボカバスチン点眼液との比較 (Studentの t 検定 ) $$ :p<0.01 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液との比較 (Student の t 検定 ) \\ :p<0.01 プラセボ点眼液群との比較(Studentの t 検定 ) ( 添付資料 の図 1から作成 ) 9

12 2.6.2 薬理概要文 70 色素漏出量 (μg/g) ** # $ * 10 0 プラセボ点眼液 0.025% DE-114 点眼液 0.05% DE-114 点眼液 0.1% DE-114 点眼液 0.025% レボカバスチン点眼液 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液 図 モルモットのヒスタミン誘発結膜炎モデルの血管透過性亢進に対す る DE-114 点眼液 0.025% レボカバスチン点眼液 ( 販売名 名 : 果 数値は平均値 + 標準誤差 (n=10) を示す ) 及び 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液 ( 販売 ) のヒスタミン投与 6 時間前点眼による効 *:p<0.05 **:p<0.01 プラセボ点眼液群との比較 (Dunnett 検定 ) # :p< % レボカバスチン点眼液との比較 (Student の t 検定 ) $ :p<0.05 2% クロモグリク酸ナトリウム点眼液との比較 (Student の t 検定 ) ( 添付資料 の図 2 から作成 ) アレルギー性結膜炎モデル動物に対する作用 血管透過性亢進に対する抑制作用 (1) マウス能動感作アレルギー性結膜炎モデルの血管透過性亢進に対する作用 ( 第 項 試験番号 389Qg100) 添付資料 雄性 BALB/c 系マウスの腹腔内に感作液 (20 μg OVA/20 mg Alum/mL) 0.5 ml/ 匹を注射し アレルギー感作を行った さらに 5 日後に感作液 0.5 ml/ 匹をマウスの腹腔内に注射して追感作を行った 追感作の 5 日後に 0.05% DE-114 点眼液 0.1% オロパタジン点眼液 ( 販売名 : ) あるいはプラセボ点眼液をマウスの右眼に 2 μl/ 眼ずつ単回点眼した 薬物投与の 30 分後にマウスの尾静脈に 0.1% エバンスブルー溶液を体重 1 kgあたり 15 ml 注射し その直後に 5% OVA 溶液 2 μl/ 眼をマウスの右眼に点眼してアレルギー反応を惹起した 5% OVA 溶液点眼 30 分後にマウスを頚椎脱臼で安楽殺し 眼球及び眼瞼結膜を含む周辺組織を摘出した 摘出した組織は 8 mm 径の生検トレパンを用いて 眼球を中心に切り取り 色素抽出液 ( 硫化ナトリウム含有アセトン溶液 )0.4 mlに浸漬して漏出した色素を抽 10

13 2.6.2 薬理概要文 出した 抽出液の 620 nmの吸光度を測定し 比色定量法によって色素濃度から各サンプル 1 眼あたりの色素漏出量 (μg/eye) を算出した その結果 0.05% DE-114 点眼液投与群及び 0.1% オロパタジン点眼液 ( 販売名 : ) 群の色素漏出量は プラセボ点眼液群に比べて有意に減少した また 0.05% DE-114 点眼液群及び 0.1% オロパタジン点眼液群の色素漏出量は同程度であった ( 図 ) 以上の結果から 0.05% DE-114 点眼液は抗原誘発による結膜の血管透過性亢進を有意に抑制し その抑制効果は 0.1% オロパタジン点眼液と同程度であることが示された # # # 色素漏出量 (μg/eye) *** *** 0.0 惹起物質 : プラセボ点眼液 精製水 ( 非惹起 ) プラセボ点眼液 0.05% DE-114 点眼液 5% OVA 溶液 0.1% オロパタジン点眼液 図 マウス能動感作アレルギー性結膜炎モデルの血管透過性亢進に対する 0.05% DE-114 点眼液及び 0.1% オロパタジン点眼液 ( 販売名 : ) の効果 各値は平均値 + 標準誤差 (n=7-8) を示す ***:p<0.001 プラセボ点眼液/5%OVA 溶液投与群との比較 (Aspin-Welchの t 検定 ) # # #:p<0.001 プラセボ点眼液/ 精製水投与群 ( 非惹起 ) 群との比較 (Aspin-Welchの t 検定 ) ( 添付資料 の図 1から作成 ) 結膜からのメディエーター遊離抑制作用 (1) 正常又は受動感作アレルギー性結膜炎モデルラットの結膜肥満細胞の脱顆粒に対する作用 ( 第 項 試験番号 U -2206) 添付資料 雄性 Wistar 系ラットの両眼の下眼瞼に抗 OVA 血清 10 μl/ 眼を注射した 正常ラット及び感作 72 時間後のラットの両眼に DE-114 点眼液 (0.05% 0.1% 0.3% 及び 0.5%) ケトチフェン溶液 (0.05% 0.1% 0.3% 及び 0.5%) クロモグリク酸ナトリウム溶液(1% 2% 及び 11

14 2.6.2 薬理概要文 4%) あるいはプラセボ点眼液を 10 分間隔で 2 回点眼した (10 μl/ 眼 ) 2 回目の点眼の 5 分後に 25 mg/ml OVA 溶液を体重 1 kgあたり 1 ml ずつラットの静脈に注射した 抗原投与の 2 時間後にペントバルビタールナトリウムの心臓内投与でラットを安楽殺し 結膜組織を摘出した 摘出した組織は 10% ホルマリン緩衝液で固定後 パラフィンブロックを作製して薄切し 病理標本を作製した 病理標本は 1% トルイジンブルー溶液で染色し 結膜組織中の肥満細胞を 細胞外に 5 個以上の顆粒が認められるか 細胞内に薄く染色された顆粒が 5 個以上認められたものを脱顆粒したものとして分類し 脱顆粒率を計測した 個体ごとに左右眼の脱顆粒率を平均し その値を各個体の脱顆粒率とした その結果 正常ラットに抗原を投与した場合の結膜肥満細胞の脱顆粒率には いずれの薬剤投与群でも変化が認められなかった 一方 受動感作ラットでは 抗原誘発による結膜肥満細胞の脱顆粒をいずれの薬剤も有意に抑制し 0.05%~0.5% の DE-114 点眼液の抑制効果には用量による差は認められなかった ( 表 ) 以上の結果から DE-114 点眼液は ケトチフェン溶液やクロモグリク酸ナトリウム溶液と同様に抗原誘発による肥満細胞の脱顆粒を抑制することが示された 表 正常又は受動感作アレルギー性結膜炎モデルラットの結膜肥満細胞 の脱顆粒に及ぼす DE-114 点眼液の影響 投与薬物 アレルギー性結膜炎モデル正常ラット脱顆粒率 (%) 抑制率 (%) 脱顆粒率 (%) プラセボ点眼液 85.65± ± % DE-114 点眼液 55.37±2.454** ± % DE-114 点眼液 55.38±2.553** ± % DE-114 点眼液 53.49±2.199** ± % DE-114 点眼液 54.25±2.101** ± % ケトチフェン溶液 58.77±1.195** ± % ケトチフェン溶液 42.47±1.729** ± % ケトチフェン溶液 49.10±2.569** ± % ケトチフェン溶液 49.50±1.690** ± % クロモグリク酸ナトリウム溶液 41.29±2.539** ± % クロモグリク酸ナトリウム溶液 34.89±1.903** ± % クロモグリク酸ナトリウム溶液 33.24±1.982** ±1.638 脱顆粒率は平均値 ± 標準誤差 抑制率はプラセボ点眼液群と各群の平均脱顆粒率から算出した値を示す (n=10) **:p<0.01 プラセボ点眼液群との比較(Dunnettの多重比較検定) ( 添付資料 の Table No. 1 から作成 ) 12

15 2.6.2 薬理概要文 (2) ラット受動感作アレルギー性結膜炎モデルの摘出結膜からのヒスタミン遊離に対する作用 ( 第 項 試験番号 U -0333) 参考資料 雄性 Wistar 系ラットに第 (1) 項の方法と同様に受動感作した 感作の 72 時間後 ラットの両眼に DE-114 点眼液 (0.05% 0.1% 0.3% 及び 0.5%) ケトチフェン溶液(0.05% 0.1% 0.3% 及び 0.5%) クロモグリク酸ナトリウム溶液(1% 2% 及び 4%) あるいはプラセボ点眼液を 10 分間隔で 2 回点眼した (10 μl/ 眼 ) 2 回目の点眼の 5 分後にラットの心臓にペントバルビタールナトリウム溶液を注射して安楽殺し 結膜組織を摘出した 摘出結膜は 37 C の生理食塩液 1 mlに浸漬し 抗原液 (0.4 mg/ml OVA 溶液 100 μl/ チューブ ) を加えて抗原刺激を行った 抗原刺激の 15 分後に 0.4 規定の過塩素酸を 1 ml 加え 反応を停止した 反応液を遠心し 上清中のヒスタミン量を Shoreらの方法に基づく蛍光ヒスタミン測定法で測定した 1 その結果 DE-114 点眼液は 0.05% 0.1% 0.3% 及び 0.5% のいずれの用量でも 抗原誘発によるヒスタミン遊離を有意に抑制した 一方で ケトチフェン溶液は 0.5% のみヒスタミン遊離を有意に抑制し クロモグリク酸ナトリウムは抑制効果を示さず 1% 及び 4% ではむしろ増加した ( 表 ) 表 ラット受動感作アレルギー性結膜炎モデルの摘出結膜からのヒスタ ミン遊離に及ぼす DE-114 点眼液の影響 投与薬物 ヒスタミン放出量 (μg) 抑制率 (%) プラセボ点眼液 ± % DE-114 点眼液 ±0.0698* % DE-114 点眼液 ±0.0545* % DE-114 点眼液 ±0.0687* % DE-114 点眼液 ±0.0507* % ケトチフェン溶液 ± % ケトチフェン溶液 ± % ケトチフェン溶液 ± % ケトチフェン溶液 ±0.0506* 23 1% クロモグリク酸ナトリウム溶液 ±0.0520* -22 2% クロモグリク酸ナトリウム溶液 ± % クロモグリク酸ナトリウム溶液 ±0.0704* -33 ヒスタミン放出量は平均値 ± 標準誤差 抑制率はプラセボ点眼液群と各群のヒスタミン放出量から算出した値を示す (n=10-15) *:p<0.05 プラセボ点眼液群との比較(Dunnettの多重比較検定) ( 参考資料 の Table No. 1 から作成 ) 13

16 2.6.2 薬理概要文 副次的薬理試験 該当する試験はない 安全性薬理試験 該当する試験はない 薬力学的薬物相互作用 該当する試験はない 14

17 2.6.2 薬理概要文 考察及び結論アレルギー性結膜疾患は Ⅰ 型アレルギーが関与する結膜の炎症性疾患で 何らかの自他覚症状を伴うもの と定義される アレルギー性結膜炎は 結膜に増殖性変化のみられないアレルギー性結膜疾患で 抗原の刺激により感作された肥満細胞から遊離するヒスタミン等のメディエーターが病態形成に関与すると考えられている 2 アレルギー性結膜炎の治療は 抗アレルギー点眼薬 ( メディエーター遊離抑制薬及びヒスタミン H 1 受容体拮抗薬 ) を基盤とした薬物療法が中心である 2 3 日本で承認されている抗アレルギー点眼薬の作用機序を図 に示した 現在 日本では 6 種類のメディエーター遊離抑制薬 ( クロモグリク酸ナトリウム アンレキサノクス ペミロラストカリウム トラニラスト イブジラスト及びアシタザノラスト水和物 ) 及び 3 種類のヒスタミン H 1 受容体拮抗薬 ( ケトチフェンフマル酸塩 レボカバスチン塩酸塩及びオロパタジン塩酸塩 ) が使用されている また ヒスタミン H 1 受容体拮抗薬のうち ケトチフェンフマル酸塩及びオロパタジン塩酸塩はメディエーター遊離抑制作用を併せ持つのに対し レボカバスチン塩酸塩はメディエーター遊離抑制作用を持たない純粋なヒスタミン H 1 受容体拮抗薬であることが報告されている DE-114 点眼液の有効成分であるエピナスチン塩酸塩の薬理作用については 内服薬の製造承認申請時の非臨床試験により ヒスタミン H 1 受容体に強く結合し 抗ヒスタミン作用を発揮するとともに 肥満細胞からのヒスタミンやロイコトリエン等のメディエーター遊離抑制作用も有することが確認されている ( 第 項 ) 本剤の製造販売承認申請にあたっては 効力を裏付ける試験として ヒスタミン誘発結膜炎モデル動物を用いて 点眼による抗ヒスタミン作用を確認した また アレルギー性結膜炎モデル動物を用いて 点眼による有効性を確認した DE-114 点眼液は モルモットのヒスタミン誘発による結膜の血管透過性亢進に対して ヒスタミン投与 15 分前の点眼では 0.025% 以上 ( 図 ) ヒスタミン投与 6 時間前の点眼では 0.05% 以上の用量で有意な抑制効果を示した ( 図 ) また 0.05% 以上の DE-114 点眼液は 0.025% レボカバスチン点眼液 ( 販売名 : ) に比べて有意に血管透過性亢進を抑制した さらに 0.05% DE-114 点眼液は マウス能動感作アレルギー性結膜炎モデルの血管透過性亢進を有意に抑制し その抑制効果は 0.1% オロパタジン点眼液 ( 販売名 : ) と同程度であった ( 図 ) 以上の結果から DE-114 点眼液は アレルギー性結膜炎の血管透過性亢進に対して既存の抗ヒスタミン点眼薬と同程度以上の抑制効果を示し 0.05% 以上の用量では 点眼による抗ヒスタミン作用が 6 時間以上持続する可能性が示された DE-114 点眼液の抗ヒスタミン作用以外のアレルギー性結膜炎に対する作用として 肥満細胞からのメディエーター遊離抑制作用を検証した 15

18 2.6.2 薬理概要文 DE-114 点眼液は 0.05%~0.5% の用量で 受動感作アレルギー性結膜炎モデルラットの結膜組織中肥満細胞の抗原誘発による脱顆粒を有意に抑制した ( 表 ) また ex vivo 試験で 0.05%~0.5% DE-114 点眼液投与により 受動感作ラットの摘出結膜からの抗原刺激によるヒスタミン遊離が プラセボ点眼液群に比べて有意に減少したことから ( 表 ) DE-114 点眼液は 抗原誘発による肥満細胞の脱顆粒を抑制することによって 結膜からのヒスタミンをはじめとするメディエーター遊離抑制作用を示すと考えられた 本剤の製造販売承認申請にあたって副次的薬理試験及び安全性薬理試験は行わなかったが DE-114 点眼液の用法 用量では 内服薬の製造承認申請時の一般薬理試験 ( 第 項 ) に用いられた用量及び内服薬の臨床用量を超える可能性はなく 本剤の点眼によりヒトで全身における副作用を発現する可能性は低いと考えられた 以上のことから DE-114 点眼液は ヒスタミン H 1 受容体に結合することによって 強力な抗ヒスタミン作用を示すアレルギー性結膜炎治療薬であると考えられた さらに 図 に示すように DE-114 点眼液は 0.1% オロパタジン点眼液や 0.05% ケトチフェン点眼液 ( 販売名 : ) と同様にメディエーター遊離抑制作用による抗アレルギー作用を併せ持つヒスタミン H 1 受容体拮抗薬であることが示唆された 図 日本で承認されている抗アレルギー点眼薬及び DE-114 点眼液 ( エピ ナスチン塩酸塩点眼液 ) の作用機序 16

19 2.6.2 薬理概要文 図表 本文中に記載 参考文献一覧 (1) Shore PA, Burkhalter A, Cohn VH Jr. A method for the fluorometric assay of histamine in tissues. J Pharmacol Exp Ther. 1959;127(3):182-6.[ 添付資料 ] (2) アレルギー性結膜疾患診療ガイドライン作成委員会. アレルギー性結膜疾患診療ガ イドライン ( 第 2 版 ). 日本眼科学会雑誌. 2010;114(10): [ 添付資料 ] (3) 庄司純. アレルギー性結膜疾患. Medicament News 2011;2065: 1-3.[ 添付資料 ] (4) 内尾英一. 点眼薬. 診断と治療. 2011;99(2):347-9.[ 添付資料 ] 福島敦樹. アレルギー性結膜疾患. 医学と薬学 2012;67(1):21-7.[ 添付資料 ] 17

20 2.6.3 薬理概要表 アレジオン点眼液 0.05% 第 2 部 ( モジュール 2): CTD の概要 ( サマリー ) 非臨床概要薬理試験の概要表 参天製薬株式会社 1

21 2.6.3 薬理概要表 目次 薬理試験概要表 薬理試験 : 一覧表 効力を裏付ける試験 副次的薬理試験 安全性薬理試験 薬力学的薬物相互作用 内服薬製造承認申請時の効力を裏付ける試験 内服薬製造承認申請時の一般薬理試験

22 2.6.3 薬理概要表 薬理試験概要表 薬理試験 : 一覧表 試験の種類試験系投与方法実施施設試験番号記載箇所 (1) 効力を裏付ける試験モルモットのヒスタミン誘発による結膜炎モデルの血管透過性亢進に対する作用マウス能動感作アレルギー性結膜炎モデルの血管透過性亢進に対する作用正常又は受動感作アレルギー性結膜炎モデルラットの結膜肥満細胞の脱顆粒に対する作用 モルモット点眼日本 マウス 点眼 日本参天製薬株式会社 389Qg ラット 点眼 スペイン U ラット受動感作アレルギー性結膜炎モデルの摘出結膜のヒスタミン遊離に対する作用 ラット 点眼 ex vivo スペイン U 参考資料 (2) 副次的薬理試験該当する試験はない (3) 安全性薬理試験該当する試験はない (4) 薬力学的薬物相互作用試験該当する試験はない 3

23 制作用管透過性亢進抑2.6.3 薬理概要表 効力を裏付ける試験 試験項目動物種 / 系統投与経路投与量 投与期間試験結果試験番号記載箇所 (1) ヒスタミン誘発による結膜炎モデル動物に対する作用 モルモットのヒスタミン誘発結膜炎モデルの血管透過性亢進に対する作用 Hartley 系モルモット 雄性 点眼 0.025% 0.05% 及び 0.1% DE-114 点眼液 0.025% レボカバスチン点眼液 ( ) 2% クロモグリク酸ナトリウム ( ) あるいはプラセボ点眼液 1 回 25 μl 両眼単回点眼 ( ヒスタミン投与 15 分前又は 6 時間前 ) ヒスタミン投与 15 分前点眼 : すべての用量の DE-114 点眼液及び 0.025% レボカバスチン点眼液群の色素漏出量は プラセボ点眼液群に比べて有意に減少した 0.05% 及び 0.1% DE-114 点眼液群の色素漏出量は 0.025% レボカバスチン点眼液及び 2% クロモグリク酸ナトリウム群に比べて有意に減少した ヒスタミン投与 6 時間前点眼 :0.05% 及び 0.1% DE-114 点眼液群の色素漏出量は プラセボ点眼液に比べて有意に減少した 0.05% DE-114 点眼液群の色素漏出量は 0.025% レボカバスチン点眼液及び 2% クロモグリク酸ナトリウム群に比べて有意に減少した (2) アレルギー性結膜炎モデル動物に対する作用血389Qg メディエーター遊離抑制作用マウス能動感作アレルギー性結膜炎モデルの血管透過性亢進に対する作用 正常又は受動感作アレルギー性結膜炎モデルラットの結膜肥満細胞の脱顆粒に対する作用 抗原惹起による摘出結膜からのヒスタミン遊離に対する作用 BALB/c 系マウス 雄性 Wistar 系ラット 雄性 Wistar 系ラット 雄性 摘出結膜組織 点眼 0.05% DE-114 点眼液 0.1% オロパタジン点眼液 ( ) あるいはプラセボ点眼液 1 回 2 μl 片眼単回点眼 ( 抗原投与 30 分前 ) 点眼 0.05% 0.1% 0.3% 及び 0.5% DE-114 点眼液 0.05% 0.1% 0.3% 及び 0.5% ケトチフェン溶液 1% 2% 及び 4% クロモグリク酸ナトリウム溶液あるいはプラセボ点眼液 点眼 ex vivo 1 回 10 μl 両眼 2 回点眼 (10 分間隔 ) 0.05% DE-114 点眼液及び 0.1% オロパタジン点眼液はプラセボ点眼液に比べて有意に血管透過性亢進を抑制した 受動感作アレルギー性結膜炎モデルラットでは DE-114 点眼液 ケトチフェン溶液及びクロモグリク酸ナトリウム溶液のすべての群でプラセボ点眼液群に比べて 結膜肥満細胞の脱顆粒率が有意に低下した 正常ラットではいずれの薬物も結膜肥満細胞の脱顆粒率に影響しなかった 薬物投与後に摘出した結膜からの抗原刺激によるヒスタミン遊離は プラセボ点眼液群に比べてすべての用量の DE-114 点眼液群で減少した U U 参考資料 4

24 2.6.3 薬理概要表 副次的薬理試験該当する試験はない 安全性薬理試験該当する試験はない 薬力学的薬物相互作用該当する試験はない 5

25 2.6.3 薬理概要表 内服薬製造承認申請時の効力を裏付ける試験 エピナスチンと類薬の効力比較 ( 記載箇所 ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 1. アレルギー反応における検討 1) メディエーター遊離に対する作用 (i) ヒスタミン遊離に対する作用 (1) 抗原刺激モルモット 能動感作肺切片 (2) Compound 48/80 刺激 モルモット 能動感作肺切片 ラット 受動感作腹腔内肥満細胞 ラット 腹腔内肥満細胞 (3) A23187 刺激ラット 腹腔内肥満細胞 (ii) SRS-A 遊離に対する作用 モルモット 能動感作肺切片 1-10 mg/kg 経口 ex vivo μmol/l μmol/l μmol/l μmol/l 1-10 mg/kg 経口 ex vivo DE-114 はヒスタミン遊離を抑制した 抑制作用の強さは DE-114 > ED 50 = 4.69 mg/kg mg/kg で軽度の作用 DE-114 > EC 50 = 75.9 μmol/l μmol/l で約 30% の抑制に留まった なし DE-114はヒスタミン遊離を抑制した EC 30 = 16.0 μmol/l なし DE-114はヒスタミン遊離を抑制した DE-114 > EC 30 = 37.1 μmol/l 100 μmol/l 以下で有意な抑制作用を示さなかった DE-114はヒスタミン遊離を抑制した EC 30 = 55.5 μmol/l DE-114 は SRS-A 遊離を抑制した 抑制作用の強さは DE-114 > ED 50 = 1.37 mg/kg mg/kg で軽度の作用 6

26 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンと類薬の効力比較 ( 続き ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 2) メディエーター誘発反応に対する作用 (i) 気管支痙攣に対する作用 (1) ヒスタミン誘発モルモット (10-30) (2) PAF 誘発モルモット (3) μg/kg 経口 mg/kg 静脈内 PRO WEB ヒスタミン誘発気管支痙攣を DE-114 は抑制した 抑制作用の強さは > DE-114 > PRO ED 50 = μg/kg PAF 誘発気管支痙攣に対する抑制作用の強さは WEB > DE-114 > ED 50 = mg/kg (3) セロトニン誘発ラット (3-4) (4) ブラジキニン誘発 モルモット (5-6) (ii) 摘出気道平滑筋収縮に対する作用 (1) 単独作用モルモット 気管 (8) (2) ヒスタミン誘発モルモット 肺切片 (3) (3) LTC 4 誘発モルモット 気管 (4-8) (4) セロトニン誘発モルモット 気管 (3) μg/kg 静脈内 1 10 mg/kg 経口 g/ml 濃度範囲記載なし mol/l 濃度範囲記載なし PRO AZE OXA AZE OXA DIP なし セロトニン誘発気管支痙攣に対する抑制作用の強さは DE-114 > PRO ED 50 = μg/kg ブラジキニン誘発気管支痙攣に対する抑制作用の強さは DE-114 AZE > > OXA DE-114:1 mg/kgで有意に抑制した :10 mg/kgで有意に抑制した AZE:1 mg/kgで有意に抑制した OXA:10 mg/kgで抑制しなかった DE-114は摘出気管平滑筋の張力には影響しなかった は g/mlで濃度依存的にわずかに弛緩させた OXA AZEは影響しなかった DE-114は摘出肺切片のヒスタミン誘発収縮を抑制した 抑制作用の強さは > DE-114 > DIP pa 2 = 摘出気管平滑筋の LTC 4 誘発収縮を DE-114は 10-8 mol/l 以上で有意に抑制した 摘出気管平滑筋のセロトニン誘発収縮に対する抑制作用の強さは DE-114 > pa 2 = 7.8 作用なし 7

27 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンと類薬の効力比較 ( 続き ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 (iii) ヒスタミン誘発による気管の粘液線毛輸送機能低下に対する作用 ウズラ (6) 3 mg/kg 筋肉内 (iv) 実験的鼻炎 ( ヒスタミン誘発による鼻腔の血管透過性亢進 ) に対する作用 ラット (v) ヒスタミン誘発膨疹に対する作用ラット (6-13) (vi) セロトニン誘発足蹠浮腫に対する作用 ラット (10) 3) アレルギー反応に対する作用 (i) PCA 反応に対する作用 (homologous) (heterologous) ラット ラット (ii) Schultz-Dale 反応に対する作用モルモット 能動感作回腸 (6) mg/kg 経口 1-10 mg/kg 経口 mg/kg 経口 mg/kg 経口 mg/kg 経口 mol/l AZE AST TER PRO PRO MET ヒスタミンにより気管粘膜異物輸送速度は低下するが その変化を DE-114 はともに抑制した 実験的鼻炎に対する抑制作用の強さは DE-114 AZE ED 50 = mg/kg ヒスタミン誘発膨疹に対する抑制作用の強さは > AST > DE-114 > PRO > TER ED 50 = mg/kg セロトニン誘発足蹠浮腫に対する抑制作用の強さは MET > DE-114 > > PRO ED 35 = mg/kg DE-114は homologous PCA 反応を抑制した 抑制作用の強さは > DE-114 ED 50 = mg/kg heterologous PCA 反応に対する抑制作用の強さは > DE-114 ED 50 = mg/kg Schultz-Dale 反応に対する抑制作用の強さは DE-114 > ED 50 = mol/l 8

28 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンと類薬の効力比較 ( 続き ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 4) 実験的病態モデルに対する作用 (i) 抗原刺激による気管支痙攣に対する作用 ( 受動感作 ) ラット (2-30) ( 能動感作 ) モルモット mg/kg 静脈内 mg/kg 経口 (ii) 抗原刺激によるアセチルコリン気道過敏に対する作用 単回投与 ラット (4-7) 10 mg/kg 経口 3 回 (48 時間間隔 ) 連続投与 ラット (4-7) 2. 実験的炎症に対する作用 1) デキストラン誘発足蹠浮腫に対する作用ラット (6-8) 10 mg/kg 経口 3 回 / 日 5 日 mg/kg 経口 PRO MET OXA AZE 受動感作ラットで DE-114は抗原刺激による気管支痙攣を抑制した 抑制作用の強さは MET > DE-114 > PRO > ED 50 = mg/kg 能動感作モルモットで 抗原刺激による気管支痙攣に対する抑制作用の強さは > DE-114 ED 50 = mg/kg DE-114は能動感作ラットで 抗原刺激によるアセチルコリン気道過敏を抑制しなかった も抑制しなかった DE-114は能動感作ラットで 抗原刺激によるアセチルコリン気道過敏を抑制した も抑制した デキストラン誘発足蹠浮腫を DE-114 は抑制した 抑制作用の強さは DE-114 > OXA > AZE ( デキストラン投与 1 時間後 ) DE-114:0.4 mg/kg で有意に抑制した :10 mg/kg で有意に抑制した AZE:50 mg/kg で有意に抑制した OXA:10 mg/kg で有意に抑制した 9

29 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンと類薬の効力比較 ( 続き ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 2) カラゲニン誘発足蹠浮腫に対する作用ラット (6-12) 3. 気道クリアランスに対する作用 1) 粘液線毛輸送機能に対する作用単独作用ウズラ (6) 2) 気道分泌液量に対する作用 単独作用ウサギ (5-7) 3) 肺表面活性物質分泌に対する作用単独作用ラット (4) 4. 鼻粘膜血行動態に対する作用 2-50 mg/kg 経口 3 mg/kg 筋肉内 3 10 mg/kg 経口 10-5 mol/l 1) 単独作用 ウサギ (3-5) mg/kg 静脈内 2) ノルアドレナリンによる血流減少に対する作用 ウサギ (3-5) mg/kg 静脈内 5. 作用持続時間の検討 1) ヒスタミン誘発膨疹に対する作用 (ED 50 の 2 倍量を投与 ) ラット (7-8) 4 mg/kg 経口 OXA AZE PYR なし なし カラゲニン誘発足蹠浮腫に対する抑制作用の強さは DE-114 >AZE OXA ( カラゲニン投与 1 時間後 ) DE-114:50 mg/kg で有意に抑制した :50 mg/kg で有意に抑制した AZE:50 mg/kg で抑制しなかった OXA:50 mg/kg で抑制しなかった 粘液線毛輸送機能に対して DE-114 ともに影響しなかった 気道分泌液量に対して DE-114 ともに影響しなかった 肺胞 Ⅱ 型培養細胞からの 3 H-phosphatidylcholine 分泌に対し DE-114 PYR は影響しなかった は軽度 有意に抑制した DE-114 は単独では鼻粘膜血行動態に影響しなかった DE-114 はノルアドレナリンによる鼻粘膜血流減少を抑制した ED 50 = 1.8 mg/kg DE-114 の持続時間は よりも長かった 作用持続時間の長さは DE-114 > 10

30 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンと類薬の効力比較 ( 続き ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 6. 中枢作用 1) 生化学的検討 (i) アミンの取り込みに対する作用ラット 脳シナプトゾーム (2-4) (ii) MAO 活性に対する作用 2) 薬理学的検討 (i) 自発運動量に対する作用 ラット 脳ホモジネート (3-4) マウス (8) (ii) アルコール睡眠に対する作用マウス (8) (iii) チオペンタール睡眠に対する作用 マウス (10) 濃度範囲記載なし 濃度範囲記載なし mg/kg 経口 mg/kg 経口 mg/kg 経口 AST TER AST TER AZE DIP AZE DIP AZE DIP 各アミンの取り込みに対して DE-114は影響しなかった IC 50 : [ 3 H] ノルアドレナリン : >10000 [ 3 H] セロトニン : 9000 [ 3 H] ドパミン : >10000 [ 3 H] コリン : >10000 nmol/l AST TERも影響しなかった DE-114 は MAO 活性に対して影響しなかった IC 50 : MAO-A 活性 : >10000 MAO-B 活性 : > nmol/l TER は影響しなかったが AST は MAO-B 活性を抑制した (IC 50 = 855 nmol/l) DE-114 は 20 mg/kg 以上で自発運動量を有意に減少させた 減少作用の強さは DIP > > AZE > DE-114 ED 50 = mg/kg DE-114 はアルコール睡眠を延長させなかった 延長作用の強さは DIP > AZE > DE-114 ED 50 = >100 mg/kg DE-114 は 50 mg/kg でチオペンタール睡眠を有意に延長させた 延長作用の強さは DIP > > AZE > DE-114 ED 50 = mg/kg 11

31 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンと類薬の効力比較 ( 続き ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 (iv) ヘキソバルビタール睡眠に対する作用マウス (6-10) (v) 最大電撃痙攣に対する作用 マウス (8) (vi) ペンテトラゾール痙攣に対する作用マウス (8) (vii) 脳波に対する作用 (1) パワースペクトラムの解析 (2) 睡眠 - 覚醒相に対する作用 ラット (10) ネコ (3-8) mg/kg 経口 mg/kg 経口 mg/kg 経口 20 mg/kg 経口 3-20 mg/kg 経口 なし AZE DIP AZE DIP AZE DIP TER 12 DE-114 は 300 mg/kg でヘキソバルビタール睡眠を有意に延長させた DE-114 は最大電撃痙攣の強直性伸展痙攣を抑制しなかった 抑制作用の強さは DIP > AZE DE-114 ED 50 = 28.0 >100 mg/kg DE-114 はペンテトラゾールによる間代性痙攣の持続時間を延長させなかった 延長作用の強さは DIP > AZE DE-114 ED 50 = 69.1 >100 mg/kg DE-114 は影響しなかった 大脳皮質 δ 波のパワーデンシティの変化 ( 薬物投与後 分 ) DE-114 AZE DIP 前頭葉 後頭葉 海馬 扁桃核 ( : 影響なし : 増加 ) と DIP は扁桃核の θ 波を有意に増加させた すべての薬剤は α 波 β 波に影響を及ぼさなかった DE-114:3-20 mg/kgで用量依存的な変化はみられなかった :1-10 mg/kgで総睡眠時間を増加し 総睡眠時間に対する REM 睡眠時間の割合を減少させた TER:1-40 mg/kgで影響を及ぼさなかった

32 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンの作用機序の試験成績 ( 記載箇所 ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 1. 抗アレルギー作用機序 - Ⅰ~Ⅳ 型アレルギー反応における抑制作用の比較 1) Ⅰ 型アレルギー反応に対する検討 (i) PCA 反応に対する作用 (homologous) ラット (heterologous) ラット (ii) 抗原刺激による気管支痙攣に対する作用 ( 受動感作 ) ラット (2-30) mg/kg 経口 mg/kg 経口 mg/kg 静脈内 2) Ⅱ 型アレルギー反応に対する検討 (i) 抗ラットウサギ血清による後肢浮腫反応に対する作用 PRO MET 13 DE-114は homologous PCA 反応を強く抑制した ED 50 :2.30 mg/kg も抑制した DE-114は heterologous PCA 反応を強く抑制した ED 50 :2.94 mg/kg も抑制した DE-114 は受動感作ラットで抗原刺激による気管支痙攣を抑制した (ED 50 :0.052 mg/kg) MET PRO も抑制した ラット mg/kg 経口 DEX DE-114は 50 mg/kgで投与 2 時間後の後肢浮腫反応を有意に抑制した DEXは 2 mg/kgで投与 1-4 時間後まで有意の抑制作用を示した (ii) Forssman 全身反応に対する作用 抗 SRBC( ヒツジ赤血球 ) ウサギ血清投与後の生存時間 モルモット mg/kg 経口 DEX DE-114は 20 mg/kg 以上で有意に生存時間を延長させた DEXは 5 mg/kgで有意に延長させなかった 3) Ⅲ 型アレルギー反応に対する検討 (i) 能動的アルツス反応に対する作用モルモット (8) 4) Ⅳ 型アレルギー反応に対する検討 mg/kg 経口 (i) 遅延型アレルギー性皮膚炎症反応に対する作用 picryl chloride 刺激耳腫脹 マウス (5-7) mg/kg 経口 DEX (ii) 遅延型アレルギー性足蹠浮腫反応に対する作用 SRBC( ヒツジ赤血球 ) 誘発足蹠浮腫 マウス mg/kg DEX 経口 DEX DE-114 は 20 mg/kg 以上で反応惹起 2 時間の炎症スコアーの増大を有意に抑制したが 炎症部位の面積は縮小させなかった DEX は 5 mg/kg で両者とも有意に抑制した DE-114 は皮膚炎症反応を抑制しなかった DEX 2 5 mg/kg は有意に抑制した DE-114 は足蹠浮腫反応を抑制しなかった DEX 2 5 mg/kg は有意に抑制した

33 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンの作用機序の試験成績 ( 続き ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 2. Ⅰ 型アレルギー反応抑制の作用機序 1) 抗体産生に対する作用 ラット 2) メディエーター遊離に対する作用 (i) ヒスタミン遊離に対する作用 (1) 抗原刺激モルモット 能動感作肺切片 モルモット 能動感作肺切片 ラット 受動感作腹腔内肥満細胞 (2) Compound 48/80 刺激 ラット 腹腔内肥満細胞 (3) A23187 刺激ラット 腹腔内肥満細胞 (ii) SRS-A 遊離に対する作用 モルモット 能動感作肺切片 30 mg/kg 経口 1 回 / 日 13 日間 1-10 mg/kg 経口 ex vivo μmol/l μmol/l μmol/l μmol/l 1-10 mg/kg 経口 ex vivo 化合物 A* なし なし DE-114は抗体産生には影響しなかった 化合物 A* も影響しなかった DE-114は抗原刺激によるヒスタミン遊離を抑制した ED 50 :4.69 mg/kg の抑制作用は弱かった DE-114はヒスタミン遊離を抑制した EC 50 :75.9 μmol/l の抑制作用は弱かった DE-114はヒスタミン遊離を抑制した EC 30 :16.0 μmol/l DE-114はヒスタミン遊離を抑制した EC 30 :37.1 μmol/l の抑制作用は弱かった DE-114はヒスタミン遊離を抑制した EC 30 :55.5 μmol/l DE-114 は SAS-A 遊離を抑制した ED 50 :1.37 mg/kg の抑制作用は弱かった 14 *: 新薬承認情報提供時に置き換え

34 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンの作用機序の試験成績 ( 続き ) 試験項目 1. 動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 3) メディエーター誘発反応に対する作用 (i) ヒスタミンに対する作用 (1) 受容体結合試験ラット 脳 - 膜標本 (2-4) (2) ヒスタミン誘発平滑筋収縮に対する作用 (ii) PAFに対する作用 (1) PAF 誘発気管支痙攣に対する作用 (2) PAF 誘発血小板凝集に対する作用 モルモット 回腸 (3-5) モルモット 回腸 (3-4) モルモット (3) ウサギ 血小板 (4) (iii) LTC 4 誘発気管収縮に対する作用モルモット 気管 (4-8) (iv) セロトニン誘発気管支痙攣に対する作用ラット (3-4) 濃度範囲は記載なし 1-10 ng/ml mol/l mg/kg 静脈内 mol/l mol/l μg/kg 静脈内 AST TER AST TER WEB WEB なし PRO DE-114は H 1 受容体に対し最も高い親和性を示したが H 2 5-HT 1 ムスカリニック DA 2 受容体に対する親和性は低かった α 1 α 2 5-HT 2 受容体にも親和性を示した H 1 及び H 2 受容体に対する IC 50 は H 1 DE-114 > AST > TER nmol/l H 2 AST > DE-114 > TER >10000 nmol/l DE-114はヒスタミン誘発回腸収縮を抑制した EC 50 :2.6 ng/ml AST TERも抑制した DE-114はヒスタミン誘発回腸収縮を抑制した EC 50 : mol/l も抑制した DE-114は PAF 誘発気管支痙攣を抑制した ED 50 :0.037 mg/kg WEB も抑制した 抑制作用の強さは WEB > DE-114 EC 50 = 1.56x x x10-4 mol/l DE-114 は 10-8 mol/l 以上で LTC 4 誘発気管収縮を有意に抑制した DE-114 はセロトニン誘発気管支痙攣を抑制した ED 50 :26 μg/kg PRO も抑制した 15

35 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンの作用機序の試験成績 ( 続き ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 (v) ブラジキニン誘発気管支痙攣に対する作用モルモット 1 10 mg/kg (5-6) 経口 3. メディエーター遊離抑制の作用機序 1) Ca 2+ に対する作用 (i) 細胞外液からの 45 Ca 取り込みに対する作用 ラット 腹腔内肥満細胞 (ii) 細胞内 Ca 貯蔵部からの Ca 2+ 遊離に対する作用 モルモット 能動感作肺肥満細胞 (7) ラット 腹腔内肥満細胞 (7) 2) カルモジュリンに対する作用 ウシ カルモジュリン依存性ホスホジエステラーゼ (3) 1-5 mg/kg 経口 ex vivo μmol/l μmol/l μmol/l AZE OXA なし なし なし DE-114 は 1 mg/kg で有意に抑制した AZE も抑制したが OXA は抑制しなかった DE-114 は compound 48/80 刺激による 45 Ca 取り込み増大を抑制した ED 50 :3.14 mg/kg DE-114 は 10 μmol/l 以上で 抗原刺激による細胞内 Ca 2+ 濃度上昇を抑制した DE-114 は 10 μmol/l 以上で compound 48/80 及び substance P 刺激による細胞内 Ca 2+ 濃度上昇を抑制した カルモジュリン依存性ホスホジエステラーゼ活性を DE-114:100 μmol/l で約 26% 有意に抑制した :10 μmol/l で約 34% 有意に抑制した 16

36 2.6.3 薬理概要表 エピナスチンの作用機序の試験成績 ( 続き ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路対照薬試験結果 3) campに対する作用 (i) camp cgmp 含量に対する作用 モルモット 能動感作肺切片 1-5 mg/kg 経口 ex vivo (ii) アデニレートシクラーゼ活性に対する作用ラット mol/l 腹腔内肥満細胞 (3-7) (iii) ホスホジエストラーゼ活性に対する作用 ラット 腹腔内肥満細胞 (3) 4) モデル膜での作用 ( 膜安定化作用 ) (i) リン酸脂質二重層の order parameterに対する作用 (ii) 示差走査熱量分析 mol/l 動物は使用せず mmol/l 動物は使用せず mmol/l なし ISO THEO なし なし 抗原非存在下 :DE-114 は camp 含量 cgmp 含量を用量依存的に増加させた 抗原存在下 :DE-114 は用量依存的に camp 含量及び A/G 比 (camp/cgmp 含量 ) を増加させたが cgmp には影響しなかった DE-114 は 10-5 mol/l 以上で有意に亢進させた ISO は 10-6 mol/l 以上で有意に亢進させた DE-114 は影響しなかった THEO は 10-4 mol/l で有意に抑制した DE-114 は影響しなかった DE-114 は影響しなかった 17

37 2.6.3 薬理概要表 内服薬製造承認申請時の一般薬理試験 ( 記載箇所 ) 試験項目動物種 (n) 投与量 / 投与経路試験結果 用(1) 一般症状 中枢神経系及び体性神経系に対する作用 一般症状及び行動に及ぼす影響 マウス (3) 自発運動量に及ぼす影響 マウス ( オープンフィールド法 ) (8) 麻酔作用 マウス ( ヘキソバルビタール睡眠 ) (6-10) (8) 最大電撃痙攣法 マウス (8) ペンテトラゾール痙攣法 マウス 300 mg/kg で睡眠時間を延長した 抗痙攣作1-100 mg/kg 経口 mg/kg 経口 mg/kg 経口 mg/kg 経口 mg/kg 経口 影響しなかった 抑制した (ED 50 = 26.5 mg/kg) 影響しなかった 影響しなかった 鎮痛作Writhing 法用熱板法 マウス (8) マウス (8) 体温に及ぼす影響 ウサギ (3) (2) 自律神経, 平滑筋及び消化器系に対する作用摘出回アセチルコリン収縮腸バリウム収縮 モルモット (9) モルモット (9) 消化器に及ぼす影響 マウス ( 腸管輸送能に対する作用 : 炭末法 ) (8) (3) 呼吸 循環器系に対する作用 呼吸運動 血圧 心拍数 血流量 イヌ 心電図に及ぼす影響 (5-10) 水及び電解質代謝に及ぼす影響 ( 尿量 尿中ナトリウム カリウム 塩素イオンの測定 ) ラット (8) mg/kg 経口 mg/kg 経口 mg/kg 静脈内 mol/l mol/l mg/kg 経口 mg/kg 静脈内 mg/kg 経口 100 mg/kgでのみ抑制した インドメタシン 10 mg/kgは著明に抑制した 100 mg/kgでのみ軽度の鎮痛作用を示した ほとんど影響しなかった 10-7 mol/lでわずかに,10-6 mol/lで著明にアセチルコリンの収縮を非競合的に抑制した バリウムの収縮は 10-4 mol/lでわずかに,10-3 mol/lで著明に抑制された 影響しなかった 1 mg/kg 以上で血圧は低下, 心拍数は増加, また呼吸数は一過性に増加した 10 mg/kg 以上で後肢血流は増加, 腎血流は減少した また心電図 PQ 間隔及び QRS 群幅は延長した 尿量, 電解質 (Na + K + Cl - ) 排泄量に影響しなかった 18

38 2.6.3 薬理概要表 内服薬製造承認申請時の一般薬理試験 ( 続き ) 用試験項目 動物種 (n) 投与量 / 投与経路 試験結果 (4) 類薬から予想される薬理作用胃粘膜に及ぼす影響 ラット mg/kg 10 mg/kg 及び 100 mg/kgで胃損傷を形成した (8) 経口 胃液分泌に及ぼす影響 ラット mg/kg 100 mg/kgで胃液分泌量を抑制した (8-9) 皮下 唾液分泌に及ぼす影響 イヌ mg/kg 10 mg/kgでのみ, 一過性に減少した (4) 静脈内 瞳孔径に及ぼす影響 ウサギ (3) 1 10 mg/kg 静脈内 表面麻酔ウサギ % 影響しなかった 角膜反射法 (13) 局所適用 浸潤麻酔 モルモット % (13) 皮内 影響しなかった 局所麻酔 % で抑制 0.1% では 2% リドカインによる局麻作用と同等の効力を示した その他の作用 α 後肢灌流法 受容頚動脈洞反射体遮瞬膜断作用 フェントラミンの 1/10 程度であった 摘出血イヌ (10) イヌ (9) ネコ (6) 尾動脈 ラット (4-13) 大動脈 摘出輸精管 モルモット (7-13) モルモット mg/kg 静脈内 mg/kg 静脈内 mg/kg 静脈内 mol/l mol/l mol/l ノルアドレナリンによる灌流圧の増加を用量依存的に抑制した その効力はフェントラミンの 1/10 程度であった 1 mg/kg 以上で抑制した 1 mg/kg 以上で節前, 節後神経刺激による収縮を軽度に抑制した その効力は 経壁電気刺激収縮 : 抑制した EC 50 = mol/l ノルアドレナリン収縮 : 抑制した pa 2 = 7.44 ノルアドレナリン収縮 : 抑制した 効力はフェントラミンの 1/54であった pa 2 = 6.84 ヒスタミン収縮 : 抑制した pa 2 = 8.11 KCl 収縮に対しては影響しなかった ノルアドレナリン収縮に対しては 10-7 mol/l 以上で有意に抑制した フェントラミンは 10-9 mol/l 以上でノルアドレナリンによる収縮を抑制した 19