研究成果報告書(基金分)

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2 様 式 C-19 F-19 Z-19( 共 通 ) 1. 研 究 開 始 当 初 の 背 景 光 を 効 率 よく 伝 搬 するものに 光 ファイバ がある 光 ファイバをセンサに 用 いる 研 究 は いくつか 知 られており ひずみセンサや 切 断 面 に 金 などを 蒸 着 したSPR 様 センサなど が 挙 げられるが 入 射 光 と 反 射 光 が 混 在 した 状 態 で 情 報 取 得 に 複 雑 な 信 号 処 理 が 必 要 に なる 一 方 我 々は 光 ファイバをある 曲 率 以 上 に 曲 げただけのセンサシステムを 提 唱 し 物 質 界 面 センサとして 応 用 してきた 本 課 題 では 提 唱 するセンサシステムの 基 本 性 能 を 明 らかにし 生 物 反 応 を 伴 う 場 で 光 センシン グに 応 用 するとともに スペクトル 計 測 への 挑 戦 を 行 うことで 本 センサシステムの 応 用 拡 大 を 目 指 す 食 品 の 赤 外 分 光 計 測 に 良 く 用 いられる 手 法 のひとつに 全 反 射 減 衰 (ATR) 法 があり 主 に 据 え 置 き 型 の 分 光 器 にてサンプルを 測 定 する 4はかなり 挑 戦 的 な 課 題 であるが こ れを 投 げ 込 み 型 にできればプロセス 計 測 を はじめ 様 々な 用 途 への 拡 大 が 期 待 できる 3. 研 究 の 方 法 (1) 実 験 試 料 実 験 試 料 として 単 純 な 食 品 モデルとして 糖 水 溶 液, 塩 水 溶 液,さらにこれらを 混 合 した 糖 - 塩 水 溶 液 を 用 いた. 糖 と 塩 にはスクロー スと 塩 化 ナトリウム( 共 に 和 光 純 薬 工 業 社 製 の 試 薬 特 級 )を 採 用 した. 試 料 調 製 値 の 詳 細 を 表 1および 表 2 に 示 す. 2. 研 究 の 目 的 光 を 用 いた 計 測 手 法 ( 光 センシング)は 迅 速 かつ 非 破 壊 的 に 生 体 関 連 物 質 の 多 成 分 同 時 計 測 ができる 半 面 特 定 の 物 質 に 対 する 測 定 精 度 はあまり 良 くない しかし 様 々な エネルギー( 波 長 )の 光 を 用 いて 得 られるス ペクトルには 原 理 的 にその 場 に 関 わる 全 て の 物 質 の 情 報 を 含 む( 光 指 紋 情 報 )ことから 分 離 分 析 を 主 とする 化 学 分 析 にはない 特 徴 が 生 まれる われわれは 曲 げた 光 ファイバ に 注 目 し,これを 光 センシングプローブとし て 用 いる 着 想 に 至 った しかし 曲 げた 光 フ ァイバの 先 端 から 漏 出 する 光 量 が 接 触 する 物 質 の 性 質 に 依 存 する 現 象 は 既 知 であるも のの そのプローブ(センサ)としての 性 能 や 可 能 性 は 未 知 である 本 研 究 では 以 下 の 研 究 課 題 を 設 定 した 1 曲 げた 光 ファイバ 部 の 形 状 再 現 性 の 問 題 を 解 決 する 基 本 性 能 試 験 2 光 の 減 衰 率 と 水 溶 液 の 溶 質 濃 度 との 関 係 を 明 らかにする 基 本 性 能 試 験 3バイオケミカルセンサとしての 性 能 確 保 とそのプロセス 計 測 ( 経 時 的 変 化 を 伴 う 反 応 系 )への 応 用 ( 可 能 性 のある 挑 戦 的 課 題 ) 4スペクトル 測 定 ( 逆 ATR 法 )への 挑 戦 表 1 スクロース 糖 水 溶 液 の 試 料 調 製 値 質 量 溶 液 モル 濃 度 百 分 率 密 度 Brix% factor [mol/l] [wt%] [g/cm 3 ] また 反 応 を 伴 って 糖 濃 度 が 変 化 する 試 料 として アラビドプシス 細 胞 をスクロースで 13 日 間 培 養 し 経 時 的 にサンプリングするこ とで 複 雑 系 かつ 反 応 に 伴 って 糖 濃 度 が 変 化 する 試 料 とした 曲 げた 光 ファイバセンサに よる 光 量 減 衰 率 の 測 定 とともに 対 照 として 平 成 2~22 年 度 基 盤 研 究 C(256729)にて 開 発 した 赤 外 分 光 法 による 糖 濃 度 糖 消 費 速 度 計 測 を 行 った

3 様 式 C-19 F-19 Z-19( 共 通 ) 表 2 糖 - 塩 水 溶 液 試 料 名 Suc モル 濃 度 [mol/l] NaCl モル 濃 度 [mol/l] Suc 質 量 百 分 率 [wt%] NaCl 質 量 百 分 率 [wt%] 溶 液 密 度 電 気 伝 導 度 [s/m] [g/cm 3 ] Suc+NaCl Water ³ Brix% factor (2) 実 験 装 置 本 研 究 にて 設 計 構 築 した 実 験 装 置 の 外 観 と 概 略 図 を 図 1に 示 す. 光 源 ( 浜 松 ホトニク ス 社 製 L1671)と 分 光 器 ( 浜 松 ホトニクス 社 製 C183CAH, C11118GA)を 石 英 製 光 ファ イバを 介 して 曲 げたプラスチック 製 光 ファ イバ( 三 菱 レイヨン 社 製 SK6, CK12)に 接 続 した 4. 研 究 成 果 (1) 基 本 性 能 試 験 1 装 置 安 定 性 光 源 分 光 器 の 電 源 投 入 後 の 出 力 安 定 性 を 調 べるため 経 時 的 にスペクトルを 測 定 した ( 図 2a) いくつかのピーク 値 について 時 間 変 化 をプロットした 結 果 電 源 投 入 後 約 3 時 間 程 度 で 出 力 や 温 度 (c)が 安 定 すること がわかった ( 図 2b, c) (c) 5 1 暗 室 システム 2プラスチック 製 光 ファイバー 3アルミ 帯 4 試 料 5 試 料 台 6 光 源 接 続 用 石 英 光 ファイバー 7 分 光 器 接 続 用 石 英 光 ファイバー 8 光 源 9 分 光 器 1PC 図 1 実 験 装 置 外 観 と 概 略 図 図 2 光 源 分 光 器 の 電 源 投 入 時 からの 出 力 特 性 変 化

4 2ファイバ 先 端 形 状 安 定 性 ファイバの 曲 げ 幅 を 2-3 mm の 範 囲 で 変 え 空 気 に 対 する 水 の 光 量 減 衰 率 を 調 べた ファ イバ 先 端 に 異 なる 物 質 が 接 触 すると,ファイ バを 透 過 する 光 量 が 変 化 することが 確 認 で きた( 図 3a, b).また 曲 げ 幅 と 減 衰 率 (77 nm)の 関 係 を 図 3c に 示 した 曲 げ 幅 2 mm ではほとんど 減 衰 せず 8 mm 以 下 から 急 激 に 減 衰 率 が 大 きくなった 本 研 究 では 光 の 減 衰 が 大 きい 5 mm 幅 を 最 適 値 と 決 定 した A/D count, I [ - ] 6 3mm_air 4mm_air 5mm_air 5 6mm_air 7mm_air 8mm_air 1mm_air 4 2mm_air 3mm_water 4mm_water 3 5mm_water 6mm_water 7mm_water 8mm_water 2 1mm_water 2mm_water 1 Attenuation ratio (I a )/I a [-].4 Bending width 3mm 7mm.3 4mm 8mm 5mm 1mm 6mm 2mm (2) 糖 塩 水 溶 液 系 の 計 測 糖 水 溶 液, 塩 水 溶 液,およびそれらを 混 合 させ た 糖 - 塩 水 溶 液 を 用 いて, 質 量 百 分 率 濃 度, Brix% および 密 度 に 対 する 光 の 減 衰 率 変 化 の 関 係 を 調 べた 糖 水 溶 液 において 水 溶 液 中 の 溶 質 (スクロー ス) 量 の 増 加 に 伴 って 光 の 減 衰 率 は 増 加 した( 図 5) また 塩 水 溶 液 においても 同 様 であった(デ ータ 示 さず) 曲 げた 光 ファイバを 用 いて 光 の 減 衰 量 を 測 定 することで 溶 質 量 に 応 じた 光 の 減 衰 が 確 認 できたことから 溶 液 中 の 物 質 濃 度 の 測 定 の 可 能 性 が 示 された Wavelength, λ [ nm ] Wavelength, λ [ nm ] A/Dカウント 値 [-] 図 3 曲 げ 幅 を 変 えた 時 の 空 気 基 準 の 水 の 減 衰 率 変 化 3ファイバ 断 面 ( 接 合 部 )の 加 工 法 本 研 究 課 題 で 提 案 するセンサシステムは 構 造 が 非 常 に 単 純 であり 光 ファイバを 手 軽 にセンサ 部 が 加 工 成 形 できる しかしそれは 加 工 成 形 したときの 性 状 が 不 安 定 になる 可 能 性 をもっている 実 際 に ファイバ 両 端 を 研 磨 したにも 関 わらず 複 数 本 切 り 出 した 際 にかなりのバラツキが 観 察 された( 図 4a) そこで スペクトル 強 度 を 観 察 しながら 両 端 を 研 磨 する 工 程 (ノウハウとして 公 開 せず) を 決 定 した 結 果 バラツキを 抑 えた 加 工 がで きた( 図 4b) さらに3D プリンタで 曲 げた ファイバを 固 定 する 部 品 を 作 成 することで 安 定 したセンサ 部 を 構 築 することに 成 功 し た Attenuation ratio (I a )/I a [-] 波 長 [nm] Width [mm] 図 4 加 工 法 決 定 前 後 のセンサバラツキ (c) ファイバ 番 号 - 測 定 回 数 A/Dカウント 値 [-] 波 長 [nm] ファイバ 番 号 - 測 定 回 数 図 5 糖 水 溶 液 における 計 測 結 果 つぎに 糖 - 塩 水 溶 液 についての 測 定 結 果 を 図 6に 示 す 糖 に 着 目 した 場 合, 溶 質 量 ( 質 量 百 分 率 濃 度 )に 対 する 曲 げた 光 ファイバの 光 の 減 衰 率 は 総 じて 指 数 関 数 的 な 変 化 をしているものと 思 われる そこで 減 衰 率 の 対 数 値 を 計 算 し 糖 ま たは 塩 の 質 量 百 分 率 濃 度 に 対 する 関 係 をプロッ トした( 図 7) 減 衰 率 の 対 数 値 は, 溶 質 濃 度 と 直 線 関 係 となった すなわち ランバートベール の 法 則 に 則 った 現 象 が 観 察 された したがって 曲 げた 光 ファイバによって 得 られる 光 の 減 衰 率 は 分 光 計 測 における 光 の 透 過 率 に 相 当 すること また 本 法 は 光 計 測 手 法 の 原 理 原 則 に 則 ったデー タが 得 られる 計 測 手 法 であるといえる Attenuation ratio (I a )/I a [-] NaCl.M+Suc NaCl.5M+Suc NaCl 1.M+Suc NaCl 2.M+Suc NaCl 4.M+Suc Percent concentration of mass (sucrose) [wt%] 図 6 糖 塩 水 溶 液 における 溶 質 組 成 と 減 衰 率 の 関 係

5 1 れも 誤 差 を 生 じる 原 因 であると 考 えられた log [(I a )/I a ] NaCl.M+Suc NaCl.5M+Suc NaCl 1.M+Suc NaCl 2.M+Suc NaCl 4.M+Suc y=.676exp.477x R 2 =.9939 y=.82exp.477x R 2 =.9897 y=.971exp.477x R 2 =.991 y=.1141exp.477x R 2 =.9887 y=.1498exp.477x R 2 = Percent concentration of mass (sucrose) [wt%] 図 7 糖 塩 水 溶 液 における 溶 質 組 成 と 減 衰 率 対 数 値 の 関 係 (3) バイオケミカルセンサへの 展 開 1 複 雑 系 かつ 希 薄 糖 - 塩 水 溶 液 系 の 計 測 これまでの 研 究 成 果 から 本 課 題 で 提 案 した 曲 げた 光 ファイバを 用 いる 計 測 手 法 は 分 光 吸 収 ス ペクトル 測 定 において 最 も 重 要 なランバートベ ールの 法 則 に 準 じた 光 の 減 衰 率 データが 得 られ ることがわかった しかし この 結 果 は 糖 の 質 量 百 分 率 濃 度 ~24wt%( 全 質 量 34wt%)と 非 常 に 濃 い 濃 度 範 囲 での 基 礎 検 討 結 果 であり また 糖 塩 水 溶 液 は 単 純 な3 成 分 系 であるので 現 実 的 ではない そこで 生 体 モデルとして あるい は 実 際 の 食 品 や 発 酵 化 学 反 応 の 場 を 想 定 し 様 々な 物 質 の 混 合 物 であり 濃 度 ~3 g dm -3 ( ~.3wt% 程 度 )の 糖 を 含 んだムラシゲ-スクーグ (MS) 培 地 を 用 いて センサ 応 答 を 調 べた( 図 8) ただし 減 衰 率 計 算 の 対 照 は 水 としている Sucrose concentration [g/dm 3 ] 図 8 糖 塩 水 溶 液 における 溶 質 組 成 と 減 衰 率 対 数 値 の 関 係 この 濃 度 範 囲 では 直 線 関 係 は 得 られなかった 特 に 1 g/dm 3 (.1wt%) 以 下 の 濃 度 範 囲 ( 白 抜 シンボル)でバラツキが 顕 著 であり この 濃 度 範 囲 での 計 測 は 難 しいと 思 われる これは 水 を 基 準 とした 場 合 希 薄 糖 - 塩 水 溶 液 では 曲 げた 光 ファ イバを 通 過 する 光 の 減 衰 率 が 極 めて 小 さいため であると 思 われる また 構 築 したセンサシステ ムは 対 照 とサンプルを 別 々に 測 定 しており そ A/D count, I [ - ] 2フォトダイオードと LED を 用 いたセンサ 回 路 構 築 対 象 である 水 とサンプルを 同 時 に 測 定 し かつ わずかな 光 の 減 衰 率 ( 光 量 差 )を 増 幅 する 工 夫 を おこなった 具 体 的 には フォトダイオード(PD) と LED を 用 いて 水 -サンプル 間 の 差 動 増 幅 回 路 を 作 成 した( 図 9) MS 培 地 を 用 いたアラビド プシス 細 胞 培 養 系 の 経 時 的 な 糖 濃 度 変 化 の 計 測 に 適 用 し 赤 外 分 光 法 を 援 用 した 糖 濃 度 測 定 値 と 比 較 した その 結 果 極 めて 濃 度 が 薄 い 領 域 では 塩 やその 他 の 成 分 による 影 響 はみられるものの 全 体 的 には 赤 外 分 光 法 による 糖 濃 度 計 測 値 と 光 ファイバセンサの 光 減 衰 値 による 糖 濃 度 の 計 算 結 果 はよく 一 致 した( 図 1) Wavelength, λ [ nm ] 図 9 センサ 構 築 に 用 いた PD と LED の 特 性 とセンサ 概 略 図 増 幅 回 路 あり 光 ファイバ 計 測 による 測 定 値 [g/l] LED Photodiode 赤 外 分 光 法 による 測 定 値 [g/l] 図 1 赤 外 分 光 法 を 援 用 した 糖 濃 度 計 測 値 と 光 ファイバセン サによる 全 糖 濃 度 の 対 角 線 プロット 培 養 中 経 時 的 に 取 得 した 全 糖 濃 度 を 用 いて ロジスティック 曲 線 によるカーブフィッティン グを 行 った( 図 11) また 反 応 速 度 式 から 算 出 される 糖 消 費 速 度 を 赤 外 分 光 法 による 計 算 値 と 比 較 した( 図 12) 複 雑 系 かつ 低 濃 度 の 溶 質 計 測 が 可 能 となり バイオケミカルセンサとしての 適 応 可 能 性 が 示 された Responsivity [A/W]

6 全 糖 濃 度 [g/l] 培 養 期 間 [d] 図 11 全 糖 濃 度 変 化 に 対 するカーブフィッティング 結 果 ( 光 ファイバセンサと 回 路 を 用 いた 計 測 ) 全 糖 消 費 速 度 [(g/l)/d] 赤 外 分 光 法 回 路 付 きファイバーセンサ 培 養 期 間 [d] 図 12 糖 消 費 速 度 の 計 算 結 果 ( 赤 外 分 光 法 との 比 較 ) (4) 分 光 センサ 化 への 挑 戦 図 13 に 試 作 した 分 光 センサプローブ 外 観 とスペクトル 計 測 結 果 を 示 す 非 常 に 濃 い 色 素 溶 液 を 用 いているが 曲 げた 光 ファイバ は 投 げ 込 み 型 逆 ATRプローブとしての 用 途 開 発 が 可 能 ではないかと 思 われる ファイ バ 曲 部 に 固 定 化 した 色 素 や 抗 体 などの 光 量 変 化 検 出 には 4.3(2)で 示 したような 工 夫 が 必 要 だと 思 われた しかし 連 続 したファイ バを 光 が 通 過 している 構 造 を 有 する 本 手 法 は その 工 夫 が 比 較 的 簡 単 に 行 えるであろう 以 上 のことから 基 本 性 能 とその 実 用 化 指 針 (バイオケミカルセンサへの 展 開 と 分 光 センサ 化 )を 通 して 提 案 する 光 ファイバセ ンサの 本 センサシステムの 応 用 拡 大 に 関 す る 重 要 な 知 見 を 得 ることができたことから 挑 戦 的 萌 芽 としての 本 研 究 の 当 初 の 目 的 は ほぼ 達 成 できたと 思 われる 5. 主 な 発 表 論 文 等 ( 研 究 代 表 者 研 究 分 担 者 及 び 連 携 研 究 者 に は 下 線 ) 学 会 発 表 ( 計 1 件 ) 末 原 憲 一 郎 中 村 友 香 亀 岡 孝 治 橋 本 篤, 曲 げた 光 ファイバを 用 いた 糖 - 塩 水 溶 液 系 の 計 測, 日 本 食 品 工 学 会 第 16 回 大 会 会 (215 年 8 月 1-11 日 広 島 市 立 大 学 広 島 市 ) 6. 研 究 組 織 (1) 研 究 代 表 者 末 原 憲 一 郎 (SUEHARA, Ken-ichiro) 三 重 大 学 大 学 院 生 物 資 源 学 研 究 科 准 教 授 研 究 者 番 号 : (2) 研 究 分 担 者 橋 本 篤 (HASHIMOTO, Atsushi) 三 重 大 学 大 学 院 生 物 資 源 学 研 究 科 教 授 研 究 者 番 号 : Attenuation ratio (I w )/I w [-] ローダミンB メチレンブルー 以 上 Wavelength [nm] 図 13 試 作 した 分 光 センサプローブとそれを 用 いて 取 得 された 色 素 の 分 光 スペクトル

4 教 科 に 関 する 調 査 結 果 の 概 況 校 種 学 年 小 学 校 2 年 生 3 年 生 4 年 生 5 年 生 6 年 生 教 科 平 均 到 達 度 目 標 値 差 達 成 率 国 語 77.8% 68.9% 8.9% 79.3% 算 数 92.0% 76.7% 15.3% 94

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