病理検査部門病理精度管理報告病理検査部門病理精度管理委員熊谷直哉 ( 弘前大学医学部附属病院病理部 ) I. はじめに鍍銀染色 ( 渡辺の鍍銀 ) は結合組織線維の一種である細網線維及び膠原線維を染色する方法である細網線維は肝脾リンパ節などの網内系組織に多く存在する緻密な繊維であり細網状

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5 years ago
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1 病理検査部門病理精度管理報告病理検査部門病理精度管理委員熊谷直哉 ( 弘前大学医学部附属病院病理部 ) I. はじめに鍍銀染色 ( 渡辺の鍍銀 ) は結合組織線維の一種である細網線維及び膠原線維を染色する方法である細網線維は肝脾リンパ節などの網内系組織に多く存在する緻密な繊維であり細網状ないし格子状に走行していることから格子状繊維とも呼ばれる細網線維の走行様式によりかつては未分化な悪性腫瘍の鑑別 ( 上皮性か非上皮性か ) に用いられていたが免疫染色の発達によりこの目的での鍍銀染色は行われなくなってきたものの肝臓や脾臓骨髄の線維化の評価には依然として有用性の高い染色法である II. 染色原理鍍銀染色は細網線維の好銀性を利用した染色法であり酸化鉄ミョウバンによる増感の後にアンモニア銀溶液を作用させることで細網線維に銀アンモニア錯体を沈着させるこの状態で還元を行うと細網線維に沈着した銀アンモニア錯体が金属銀へと変化し黒く染め出される III. 調査方法鍍銀染色用として剖検症例の肝臓から作成したパラフィン包埋ブロックから 5μmの切片を作成し各施設に未染標本 2 枚とアンケート回答用 Excel ファイルの入った USB メモリをそれぞれの施設に配布したまた今回は希望施設を対象にアルシアン青染色未染標本を染色して頂くこととしたアルシアン青染色用に剖検症例の唾液腺から作成したパラフィン包埋ブロックから 3 μmの切片を作成し各施設に未染標本 2 枚を併せて配布した染色済み標本と回答済み USB メモリを回収した

2 IV. サーベイの評価評価は病理医 2 名で行った評価項目としては粘液の染色性アルシアン青の共染後染色の染色性を設定したそれぞれを診断に影響がなく美しい標本を 2 点診断に影響はないがまだ工夫が必要な標本を 1 点診断に影響をきたす標本を 0 点としたまた総合判定として診断に影響がなく美しい標本を A 診断に影響はないがまだ工夫が必要な標本を B 診断に影響をきたす標本を C とした V. 主なアンケート結果まとめ 1 切片の厚さ切片の厚さ (μm) 4 5 5~6 6 6~8 7~8 8 約 10 施設数年間染色枚数年間染色枚数 0 2 0~ ~300 施設数酸化剤酸化剤 0.5% 過マンガン酸カリウム 0.5% 過ヨウ素酸 1.0% 過ヨウ素酸調整法調整済み調整済み調整済み施設数銀液に対するゼラチン液の添加ゼラチンを添加するゼラチンを添加しない施設数塩化金後のシュウ酸処理の有無ありなし施設数定着液 0.5% チオ硫 1% チオ硫酸 2% チオ硫酸 5% チオ硫酸酸性硬膜定着定着液酸ナトリウムナトリウムナトリウムナトリウム剤を5 倍希釈施設数

3 VI. 鍍銀染色の染色像および評価染色性の一例細網線維の染色性膠原線維の染色性非特異染色の強さ総合判定 A A B C C C C C A B B C

4 染色性の一例細網線維の染色性膠原線維の染色性非特異染色の強さ総合判定 B B B B B B A A B B

5 VII. アンケート結果切片の厚さ (μm) 年間染色枚数酸化剤酸化剤の調整法酸化剤のメーカー酸化後のシュウ酸鉄ミョウバン処理メーカー ~ ~ 枚 0.5% 過マンガン酸 0.5% 過ヨウ素酸水溶 0.5% 過マンガン酸 1% 過ヨウ素酸水溶液カリウム水溶液液カリウム水溶液調整済み調整済み調整済み DAKO 和光純薬和光純薬和光純薬 5% シュウ酸水溶液なしなし 2% シュウ酸水溶液 2.5% 鉄ミョウバン水溶 2% 鉄ミョウバン水溶 2% 鉄ミョウバン水溶 2% 鉄ミョウバン水溶 DAKO 0.2-1% 硝酸銀 10% 硝酸銀 5ml 20% 硝酸銀液 2.5ml 10% 硝酸銀水溶液 5mL アンモニア銀の組成 % 水酸化アンモニウム 0.2-1% 水酸化カリウム 10% 水酸化カリウム 5 滴 10% 水酸化カリウム 5 滴濃アンモニア十数滴濃アンモニア水 50ml までメスアップ 1% ゼラチン 2.5ml 1% ゼラチン液 2.5ml 10% 水酸化カリウム水溶液アンモニア水 (28~ 30%) 1mL アンモニア銀の調整法自動染色装置 (Dako Artisan) を使用していますので試薬は全て付属の Artisan 都銀染色キットの組成です濃アンモニアは銀粒が 10 粒位残るよう攪拌しながら滴下する 20% 硝酸銀と 10% 水酸化カリウムを所定の量加え混和する混和した液を撹拌子ながら濃アンモニア水を滴下し黒色の粒が 10 粒ほど残る状態にするその液にを加えて全量 50ml にメスアップするさらに 1% ゼラチン液を 2.5ml 加え使用液とする 50mL 遠沈管に 10% 硝酸銀水溶液 5ml と 10% 水酸化カリウム水溶液 1ml を入れ混和アンモニア水を滴下し銀粒子が数個残るくらいにするを加え 50mL にメスアップこれを使用液とする 20-33% エタノール 2% 鉄ミョウバン 1ml ホルマリン原液 0.5ml ホルマリン原液 0.5mL 還元液の組成還元液の調整法 % ホルマリンホルマリン原液 0.5ml 2% 鉄ミョウバン水 1ml % メタノール 37.5ml 48.5ml 自動染色装置 (Dako Artisan) を使用していますので試薬は全て付属の Artisan 都銀染色キットの組成です上記の試薬を使用直前に混和する使用直前に調整する 1mL 48.5m L 塩化金処理塩化金の調整法塩化金のメーカー塩化金後のシュウ酸処理シュウ酸水溶液の調整法シュウ酸のメーカー調整済み調整済み調整済み調整済み DAKO 和光純薬武藤化学ナカライテスクなし 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液 - - 和光純薬和光純薬和光純薬定着に用いる試薬 5% チオ硫酸ナトリウム酸性硬膜定着剤を 5 倍希釈 2% チオ硫酸ナトリウム 2% チオ硫酸ナトリウム定着液の調整法定着液のメーカー調整済み調整済み調整済み DAKO フジフィックス和光純薬武藤化学

6 切片の厚さ (μm) 年間染色枚数酸化剤酸化剤の調整法酸化剤のメーカー酸化後のシュウ酸鉄ミョウバン処理メーカーアンモニア銀の組成 20% 硝酸銀液 2.5ml 硝酸銀 1g 8% 硝酸アンモニウム 7ml 10% 硝酸銀液 10ml 40% 水酸化ナトリウム滴 5~6 10% 水酸化ナトリウム 5 滴 35ml % 過ヨウ素酸水溶液 0.5% 過ヨウ素酸水溶 0.5% 過マンガン酸 0.5% 過マンガン酸液カリウム水溶液カリウム水溶液和光純薬なし 2% 鉄ミョウバン水溶なし 2% 鉄ミョウバン 2% シュウ酸水溶液 2% 鉄ミョウバン水溶和光純薬 2% シュウ酸水溶液 2% 鉄ミョウバン水溶 4% 水酸化カリウム水溶液 25% アンモニア水数滴アンモニア水約 10 滴 4% 水酸化ナトリウム 8ml 濃アンモニア水溶液適量 5ml 50ml 100ml 10% 硝酸銀 3.8ml 1% ゼラチン液 2ml 1% ゼラチン 1ml アンモニア銀の調整法三角コルベンに硝酸銀 1g を入れ 10ml を加え溶かす 10% 水酸化ナトリウムを 5 滴滴下すると黒褐色の沈殿ができるアンモニアを滴下し撹拌することを黒褐色の沈殿を数粒残す程度まで繰り返す全量が 100ml になるまでを加える 10% 硝酸銀と 4% 水酸化カリウムを所定の量加え混和する混和した液を撹拌しながら濃アンモニア水を滴下し黒色の粒がわずかに残る状態にするその液にを加えて全量 100ml にメスアップする中性ホルマリン 1ml ホルマリン 0.5ml ホルマリン原液 1ml ホルマリン原液 1ml 還元液の組成 2ml 2% 鉄ミョウバン 1ml 2% 鉄みょうばん 2ml 2ml 97ml 48.5ml 97ml 97ml 還元液の調整法使用する直前 ( アンモニア銀液に入ってから ) に調製する塩化金処理塩化金の調整法調整済み調整済み塩化金のメーカー和光純薬武藤化学武藤化学ナカライテスク塩化金後のシュウ酸処理 - - 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液シュウ酸水溶液の調整法 - - シュウ酸のメーカー定着に用いる試薬 - 2% チオ硫酸ナトリウム - 記載なし 2% チオ硫酸ナトリウム 1% チオ硫酸ナトリウム水溶液ナカライテスク定着液の調整法定着液のメーカー和光純薬和光純薬記載なし武藤化学

7 切片の厚さ (μm) 年間染色枚数酸化剤酸化剤の調整法酸化剤のメーカー酸化後のシュウ酸鉄ミョウバン処理メーカーアンモニア銀の組成アンモニア銀の調整法 10% 硝酸銀液約 10 0~5 20 約 % 過マンガン酸カリウム水溶液 0.5% 過ヨウ素酸水溶液 0.5% 過ヨウ素酸水溶液 0.5% 過マンガン酸カリウム水溶液和光純薬和光純薬和光純薬 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液 2% 鉄ミョウバン水溶 2% 鉄ミョウバン水溶 2% 鉄ミョウバン水溶 2% 鉄ミョウバン 10ml 10% 水酸化カリウム 11 滴 20% 硝酸銀液 2.5ml 20% 硝酸銀水溶液 2.5ml 10% 硝酸銀 20ml 10% 水酸化カリウム 5 滴 10% 水酸化カリウム 5 滴 10% 水酸化カリウム 25% アンモニア水濃アンモニア水濃アンモニア水約 1ml アンモニア 1% ゼラチン液 2ml DW 10% 硝酸銀液 10ml ニ,10% 水酸化カリウム 11 滴を加えると黒褐色の沈殿ができるこれを良く浸透しながら,25% アンモニア水を滴下し透明になる直前でやめる ( ごくわずかに沈殿が残る程度 ) 最後にを加えて,100ml とする total50m l にメスアップ 1% ゼラチン 2.5ml 20% 硝酸銀 2.5ml と 10% 水酸化カリウムを駒込ピペットにて 5 滴加え混和する混和した液を撹拌しながら濃アンモニア水を滴下し黒色の粒が 10 粒ほど残る状態にするその液にを加えて全量 50ml にメスアップするさらに 1% ゼラチン液を 2ml 加え使用液とする 50ml 三角フラスコに硝酸銀水溶液と水酸化カリウムを加えフラスコの底部を回転させながら混和後濃アンモニア水を攪拌しながら滴下し黒色顆粒が 10 粒程残る状態を終点とするその後 DW を加えて全量 50ml にメスアップする更に 1% ゼラチン 2.5ml を加えて使用液とする ml 顆粒をわずかに残す 73ml 10% 硝酸銀 20ml に 10% 水酸化カリウム 4ml をフラスコを振りながら入れ細かい顆粒を作る顆粒をわずかに残すようにアンモニアを滴下するを加え全量を 100ml にする (20+4+NH3 の使用量 + )=100ml ホルマリン原液 1ml ホルマリン原液 2ml 2% 鉄ミョウバン 1ml 局法ホルマリン 1ml 還元液の組成 2% 鉄ミョウバン水溶 2ml 2% 鉄ミョウバン水溶 4ml ホルマリン原液 0.5ml 2% 鉄みょうばん 3ml 97ml 194ml 37.5ml 96ml 還元液の調整法鉄ミョウバンホルマリンの順に使用直前に調整使用直前に上記の順に混合する切片をアンモニア銀に入れてから調整する塩化金処理塩化金の調整法調整済み塩化金のメーカーナカライ記載なし武藤化学和光純薬塩化金後のシュウ酸処理シュウ酸水溶液の調整法シュウ酸のメーカー 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液和光純薬記載なし和光純薬なし - - 定着に用いる試薬酸性硬膜定着液 (5 倍希釈液 ) 0.5% チオ硫酸ナトリウム定着液の調整法定着液のメーカー記載なし記載なし和光純薬和光純薬

8 切片の厚さ (μm) 年間染色枚数酸化剤酸化剤の調整法酸化剤のメーカー酸化後のシュウ酸鉄ミョウバン処理メーカーアンモニア銀の組成 20% 硝酸銀 2.5ml 8% 硝酸アンモニウム 7ml 10% 水酸化カリウム 5 滴 35ml アンモニア水 ~8 6 6~ % 過ヨウ素酸水溶液 0.5% 過マンガン酸カリウム水溶液 0.5% 過ヨウ素酸水溶液和光純薬 - - なし 2% シュウ酸水溶液なし 2% 鉄ミョウバン 2% 鉄ミョウバン 2% 鉄ミョウバン適当量 4% 水酸化ナトリウム 1% ゼラチン 2.5ml 10% 硝酸銀 3.8ml 20% 硝酸銀水溶液 2.5ml 10% 水酸化カリウム 5 滴 8ml アンモニア水数滴上記全量 50ml 1% ゼラチン 2.5ml アンモニア銀の調整法三角フラスコで 20% 硝酸銀液 2.5ml に 10% 水酸化カリウムを 5 滴加えフラスコの底部を回転させながら混和後濃アンモニア水を撹拌しながら滴下黒色顆粒が 10 粒程度残る状態をアンモニアを加える終点とするその液にを加えて全量を 50ml とするさらに 1% ゼラチン 2.5ml を加えて使用液とする 4% 水酸化ナトリウムは 40% のものを使用時に希釈して用いるアンモニア水の滴下は黒色顆粒が 10 粒程残る状態で終了使用時に調製ホルマリン原液 2ml ホルマリン原液 0.5ml ホルマリン原液 2ml 還元液の組成 2% 鉄ミョウバン水溶 4ml 2% 鉄ミョウバン水溶 1ml 2% 鉄ミョウバン水溶 4ml 150ml 48.5ml 150ml 還元液の調整法使用時に作製する使用時に調製塩化金処理塩化金の調整法調整済み塩化金のメーカーナカライテスク記載なし記載なし塩化金後のシュウ酸処理シュウ酸水溶液の調整法シュウ酸のメーカー 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液 2% シュウ酸水溶液和光純薬記載なし記載なし定着に用いる試薬定着液の調整法定着液のメーカー和光純薬記載なし記載なし

9 時間備考時間備考時間備考時間備考脱パラ親水脱パラ親水脱パラ親水脱パラ親水酸化 0.5% 過マンガン酸カリウム 1% 過ヨウ素酸 1% 過ヨウ素酸 0.5% 過マンガン酸カリウム水溶液洗浄 2 回 Artisan 洗浄液を使用水洗水洗水洗軽く流す還元 5% シュウ酸増感 2% シュウ酸水溶液なじませる程度 2 分切片が白くなるまで洗浄 2 回 Artisan 洗浄液を使用水洗軽く流す 2.5% 硫化第二鉄アンモニウム ( 鉄ミョウバン ) 2% 鉄ミョウバン 1 分 1 分を超えない 2% 鉄ミョウバン 50 秒 1 分を超えない洗浄 4 回 Artisan 洗浄液を使用水洗水洗水洗鍍銀アンモニア銀ゼラチン加アンモニア銀液 5 秒 3 回 10 分ゼラチン加アンモニア銀液 5 秒 3 回 10 分アンモニア銀液 10 分 95% アルコー分別 95% エタノール 1 秒 95% エタノール 1 秒ル 10% アルコールホルマリン還元還元液 2 分入れたら動かさない還元液 2 分入れたら動かさない還元液 1 分なじませる程度 1 分 1 分を超えない 3~4 回を交換水道水を除去する洗浄瓶を用い切片をまんべんなくしっかり洗い流すスライドの表裏表と両面に吹き付けるある程度素早くスライドを勢いよく入れたらあとは動かさない洗浄 11 回 Artisan 洗浄液を使用水洗水洗なじませる程度調色 30 分 1 時間以上水溶液 10 分洗浄 4 回 Artisan 洗浄液を使用水洗水洗水洗軽く流す定着 5% チオ硫酸ナトリウム 2% シュウ酸 1 分 2% シュウ酸 1 分 2% シュウ酸水溶液なじませる程度水洗水洗水洗軽く流す定着液定着液 2% チオ硫酸ナトリウム水溶液洗浄 5 回 Artisan 洗浄液を使用水洗水洗水洗軽く流すなじませる程度程度時間備考時間備考時間備考時間備考脱パラ親水脱パラ親水脱パラ親水脱パラ親水 x2 10 秒酸化還元 1.0% 過ヨウ素酸 0.5% 過ヨウ素酸水溶液 0.5% 過マンガン酸カリウム水溶液水洗流水水洗流水水洗 x3 10 秒 0.5% 過マンガン酸カリウム水溶液軽く水洗しを通す 2% シュウ酸水溶液流水水洗を通す切片は褐色切片の褐色が消える 1 分 30 秒まで増感 50 秒程度 1 分 50 秒 1 分を超えない 50 秒 1 分を超えない程度水洗 1 分 3 流水水洗流水水洗水洗 2 分 3 x3 10 秒水洗 2 分ずつ 2 回鍍銀アンモニア銀液 10 分アンモニア銀液 10 分アンモニア銀液 10 分アンモニア銀液 7 分切片が薄茶色分別 95% エタノール 1~2 秒 95% アルコール還元還元液 2 分還元液 2 分調色 1 秒 2 回出し入れ 95% エタノール数秒上下 95% エタノール 1 秒数回出し入れして切片全体が褐色になったら静置水洗流水水洗 2 分流水水洗酸水溶液還元液 2 分使用直前に調整還元液 2 分 x3 普段は10 分だが昼食水 1 時間 2 時間時にかかったので長く溶液した水洗流水水洗 x3 10 秒 10 秒 1 時間流水水洗を通す酸水溶液軽く水洗しを通す 60 分還元液に入れたら動かさない定着 2% シュウ酸水溶液流水水洗 x3 1% チオ硫酸ナトリウム 2 分 10 秒 1 分 2% シュウ酸水溶液流水水洗を通す水洗 2 分流水水洗流水水洗水洗 2 分 2 分

10 時間備考時間備考時間備考時間備考脱パラ親水脱パラ親水脱パラ親水脱パラ親水酸化 0.5% 過マンガン酸カリウム 0.5% 過ヨウ素酸 0.5% 過ヨウ素酸水溶液 3min 0.5% 過マンガン酸カリウム 10 分流水洗水洗流水水洗 3min 水洗還元 2% シュウ酸 2 分 2% シュウ酸 1min 2% シュウ酸切片白くなったら水洗流水洗流水水洗 3min 水洗増感 2% 鉄ミョウバン水 50 秒 40 秒厳守流水洗十分にスライドを揺すりながら掛け流す 2 分 2 回 2% 鉄ミョウバン 1min 2% 鉄ミョウバン 1 分 DW 3 槽水洗 2 分滅菌 2 分 2 曹充分に洗浄鍍銀アンモニア銀液 1アンモニア銀液 10 分ゼラチン加アンモニア銀液 10min アンモニア銀 7 分分別 95% エタノール 1 秒 95% エタノール還元還元液流水洗 1 分以上還元液 2 分エタノールをスライドガラスに載せる程度の時間 95% アルコール 1~2s 70% アルコールエタノールを載せたまま還元液 (200ml 作製 ) に入れ還元液 2min 還元液 2 分て静置 2 秒流水水洗 3min 水洗 DW 3 槽染色ムラになるので切片を動かさない調色液 30 分液 10min 30 分水洗 DW 3 槽水洗 1 分 2% シュウ酸 2% シュウ酸 1 分 2% シュウ酸 1min 流水洗水洗流水水洗 3min 定着酸性硬膜定着液 2% チオ硫酸ナトリウム 5min 0.5% チオ硫酸ナトリウム流水洗水洗 2 分流水水洗 3min 水洗時間備考時間備考時間備考脱パラ親水脱パラ親水脱パラ親水酸化 0.5% 過ヨウ素酸水 2~ 0.5% 過マンガン酸カリウム 0.5% 過ヨウ素酸水水洗水洗 ~ 水洗水洗還元 2% シュウ酸 2~完全に漂白水洗 2~3 回換える増感 2% 鉄ミョウバン水洗 1 分各 3~5 秒 3 回ほどを交換水洗してよく洗う 2% 鉄ミョウバン液水洗 50 秒 1 分を超えないように 2% 鉄ミョウバン水 2 分ずつ 3 回水洗 3 槽 1 分各 3~5 秒鍍銀ゼラチン加アン 7~10 分モニア銀液アンモニア銀液 10~25 分ゼラチン加アンモニア銀液 10 分分別 95% アルコール 1~2 秒還元還元液 1~2 分素早く2 回通す程度ですぐに還元液に移す 95% エタノール 1 秒 95% エタノール 1~2 秒還元液に入れる時はよく撹拌しながら入れ還元液 1~2 分 1 分は動かさない還元液 2 分る水洗 1~2 分水洗流水水洗 1~2 分 5~10 秒水洗 2~3 回調色 10 分液 30 分 ~ 0.2% 塩化筋液 60 分 5~10 秒水洗各 3~5 秒 3 回ほどを交換水洗してよく洗う水洗 3 槽各 3~5 秒水洗 2~3 回 2% 蓚酸 1 分 2% シュウ酸 1 分 2% シュウ酸水 1 分定着水洗 3~水洗流水水洗 2% チオ硫酸ナトリウム ( 定着液 ) 3~ 水洗 2~3 回 2% チオ硫酸ナトリウム液定着液水洗 1~2 分水洗流水水洗 1~2 分

11 VIII. アルシアン青染色結果及び評価染色性の一例粘液の染色性アルシアン青の共染核染色の染色性総合判定 B B B C B B B B

12 染色性の一例粘液の染色性アルシアン青の共染核染色の染色性総合判定 B B C B

13 IX. まとめ今年度の精度管理は鍍銀染色を題材としたが県内の施設の約半数では染色枚数が年間 10 枚以下である一方で年間 200~300 枚程度染色している施設もあり実施状況の差が施設間で非常に大きい染色であるこのような状況を反映してか A 評価を獲得できた施設は約半数の 6 施設であり病理医 2 名の評価がともに C 評価となった施設も 2 施設あり染色法試薬等を今一度見直す必要があると考える鍍銀染色の際の酸化剤は教科書的には 0.5% 過マンガン酸カリウムを使用しているが 0.5% ないし 1% 過ヨウ素酸を用いても同様の結果が得られるという報告 1) もあり実際今回の標本からも両者の染色性の差は見られなかった過マンガン酸カリウムが特定化学物質であることを考えると作業環境への配慮という観点から過ヨウ素酸による酸化への切り替えを考えていく必要があると考える染色頻度が比較的少ない染色であり県内の 5 施設で年間染色枚数が 0 枚ということでしたがそういった施設におかれましても今回のサーベイが鍍銀染色に関して考えて頂く一つのきっかけになれば幸いですまた今年度は昨年度行ったアルシアン青染色を一定手順 (JAMT 技術教本シリーズ病理検査技術教本に準じた方法 ) で染色していただき評価を行った A 評価を獲得した施設は昨年度の 1 施設から 3 施設へ増加し総合評価では昨年度と同様であった施設でも核染色の染色性の項目で改善した施設が多く見られた染色性の改善精度管理の観点からも今回の染色法を各施設参考にしていただければと考える参考文献 1) 田島秀昭, 當銘良也, 藤澤紀良 : 過ヨウ素酸を用いた細網線維染色法. 検査と技術 43(5): ,2015

Alcian blue染色 Elastica Van Gieson染色

Alcian blue染色 Elastica Van Gieson染色 Alcian blue 染色平成 19 年度基礎講座目的 Alcian blue 染色生体に存在する酸性ムコ物質を検出する方法として広く用いられている酸性ムコ物質はカルボキシル基を有するヒアルロン酸硫酸基を有するコンドロイチン硫酸ムコイチン硫酸ケラト硫酸ヘパリンなどの 2 つのグループに分類される Alcian blue 染色液の ph 値を調節することによりその 2 種類の酸性ムコ物質を染め分けることができる