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2 平成 27 年度病理組織検査サーベイ報告病理 ( マッソントリクローム染色 ) はじめに マッソントリクローム (MT) 染色は 原法では膠原線維をアニリンブルーで青色に 核を鉄ヘマトキシリンで黒紫色に 細胞質を酸フクシンで赤色に染色する しかし現在はマッソン変法が主流であり 酸フクシンに ビーブリッヒスカーレットやアソフロキシンなど複数の酸性色素を混合したマッソン液が多く使われている MT 染色はアザン染色に比べ短時間で仕上がる利点がある 例年のごとく 施行者の技量 染料以外に個体差 検体間の取り扱い差が出にくく 病理組織検査法の標準化を推進するため実施したので その方法と成績結果について報告する 材料および実施方法 材料は20% ホルマリン液にて固定した心筋梗塞 ( 解剖材料 ) を使用 厚さ3μm~4μm 程度に薄切した切片を室温で1 時間乾燥させたものを2 枚配付し 各施設で行われている方法で 染色を実施して頂いた なお 染色方法が異なると染色結果に差異が生じるので 所定の報告書をウェブ上で公開し 各施設で現在行っている方法の記入もお願いした 判定方法 下記の事項を基準に減点法で判定した 1 膠原線維が青 細胞質や筋線維が赤く染め分けられていること 2 共染がなく 色素顆粒の付着が見られないこと 3 赤と青のバランスが適度で観察しやすいこと 以上の項目について判定者は 兵臨技 病理細胞検査研究班解析委員 ( 合計 9 人 ) で行い 別に機会をもうけて病理医の立場から 伊藤智雄先生 ( 神戸大学附属病院病理部 ) にご確認頂いた 判定基準は A. 満足すべき標本 B-a. 診断上支障のない標本 B-b. 診断上支障はないが不満の残る標本 C. 診断上支障をきたす標本 として 慎重なる評価判定を行った 結果 < 集計にあたって> 1) 申し込み施設 34に対し 回収施設数 34 施設 (100%) であった < 集計結果 > マッソントリクローム染色についてのアンケートについてアンケート (1)~(5) の集計結果は別表に示すごとくである また アンケート (6)(7) についても記載している 染色の判定結果および講評評価兵臨技精度管理調査の病理組織検査部門への参加施設総数は 34 施設であった 近年 パラフィンブロックを配付し 薄切 染色をお願いしていたが 検体の確保の問題もあり 未染色標本を配布し染色を実施して頂く 従来の精度管理となった 参加施設の判定結果 ( ランク総数 ) は ( 表 1) に示し 染色の評価は下記のごとくである ( 表 2)

3 <マッソントリクローム染色について> 1) 満足すべき標本 と判定された施設は施設で 膠原線維が青 筋線維や細胞質が赤く染め分けられている 染色ムラがなく共染も見られない もしくは共染が見られてもごく軽度であり また赤と青のバランスが適切で観察しやすい仕上がりであった 病理診断をするにおいて満足すべき標本であった 2) 診断上支障のない標本 と判定された施設は施設で 膠原線維が青 筋線維や細胞質が赤く染め分けられているが 染色性がやや弱い もしくは共染が見られ 色ムラなども見られた しかし病理診断をするにおいて差し支えのない標本であった 3) 診断上支障をきたす標本 と判定された施設はなかった 参加施設の判定結果 ( ランク総数 )( 表 1) 判定 A. 満足すべき標本 B. 診断上支障のない標本 C. 診断上支障をきたす標本 a b 標本数 (%) 23.5% 58.8% 17.6% 0% 膠原線維が青 筋線維や細胞質が赤く染め分けられ 明瞭に観察でき A る 染色ムラがなく共染も見られない もしくはごく軽度である 赤と満足すべき標本 : 青のバランスが適切で観察しやすい 病理診断をするにおいて満足すべ き標本であった 膠原線維が青 筋線維や細胞質が赤く染め分けられているが染色性がや B-a や弱い もしくは共染が見られる 診断上支障のない標本 : B-b 診断上支障のない標本 : C 診断上支障をきたす標本 : 膠原線維が青 筋線維や細胞質が赤く染め分けられているが 両者のバランスが悪く明瞭に観察できない部分がみられる もしくは高度の共染が見られる 膠原線維が青 筋線維や細胞質が赤く染め出されていない 診断に用いるのに不適当な標本である 結語 マッソントリクローム染色の精度管理における結果は 満足すべき標本 および 診断上支障のない標本 と判定されたのが 34 施設中 34 施設 (100%) という結果が得られた A 満足すべき標本 と評価された施設は 23.5% であった この結果に満足せず アンケート結果などを参考により一層の精度向上に努めて頂きたい B-aの施設は膠原線維が青 筋線維や細胞質が赤く染め分けられているが染色性がやや弱い もしくは共染が見られた B-bの施設は膠原線維が青 筋線維や細胞質が赤く染め分けられているが 共染の強い施設 赤と青のバランスが悪い施設 封入剤不足により切片の周囲に気泡が見られる施設があった 診断上支障のない標本 であるが 染色に問題のあった施設は最高評価施設の染色法を参考に自施設の染色法を再検討し 品質向上に努めて頂きたい 標本の剥がれ 気泡のあった施設は標本の取扱いには十分注意していただきたい 今回 C 判定 ( 診断上支障をきたす標本 ) の施設はなく 当初考慮した未染標本を用いたA 判定施設での染色方法を実施するには至らなかった マッソントリクローム (MT) 染色はアザン染色に比べ短時間で核染色まで行う染色だが 施設での

4 実施件数は少ない染色であった アザン染色をしているとの意見も多かった 第一媒染は 28 施設 (82%) が実施しており 10% 重クロム酸化カリ /10% トリクロロ酢酸等量混合液が 21 施設 (75%) と主流を占めていた 第一媒染は行うと酸性色素の入りが良くなると言われており 赤の染色性が弱い場合は 第一媒染を行うことを推奨する 核染色はカラッチの鉄ヘマトキシリンが 29 施設 (85%) を占めている しかしマイヤーのヘマトキシリンやカラッチのヘマトキシリンを用いている施設が各 1 施設づつある MT 染色は洗浄に 1% 酢酸を使用すため 核染が脱色しやすい そのため鉄ヘマトキシリンの使用を推奨する 第二媒染は 20 施設 (59%) で行っていた 第一媒染が強すぎる場合 核が赤く染まる場合がある これを防ぐために実施されることが多いが 長すぎるとアニリンブルーの染色性が悪くなるので短時間で済ませることが望ましい オレンジ G(OG) 液を単独で行っているのは 19 施設 (56%) であった OG 液は赤血球をオレンジに染めるが 単独でなくてもアニリンブルー混合液を用いても同様の効果が得られる Masson 液は自家調整が 20 施設 (59%) 市販試薬 14 施設 (41%) であった 自家調整では ポンソーキシリジン系 12 施設 スカーレット系が 8 施設であった どちらの染色液でも目的物は赤く染まるのが 染色の工程や分別など手技によって色調が施設間ごとに違う 市販の試薬は武藤化学のマッソン B 液および機械染めロッシュ社の専用試薬 ( 成分不明 ) があるが マッソン B 液を用いた標本の多くは色調が似通っていた 好みもあると思われるが 精度管理の観点からは市販試薬の方が安定しており優れていると考えられる しかしながら自家調整では鮮やかな赤色を表現したりと工夫も可能であり どちらが良いとは断言できるものではない 分別 媒染の工程では リンタングステン酸単独で使用している施設が 23 施設 (68%) リンタングステン酸 / リンモリブデン酸等量混合液を使用している施設が 7 施設 (20%) であった どちらも膠原線維の部分が白く抜けるまで丁寧に分別する ここできちんと脱色しないと共染の原因となる また落とし過ぎはコントラスト不良となるので 1 枚づつ鏡検しながら注意深く進めることが肝要である 膠原線維の染色は アニリンブルー液を使用している施設が 30 施設 (88%) ライトグリーン液を使用している施設は 2 施設 (6%) アニリンブルー/ オレンジ G 混合液は 2 施設 (6%) であった ここでは長すぎると赤の部分に共染してしまい 細胞質や筋線維が紫色になってしまうので注意が必要である ライトグリーン液は比較的共染が少ないので 赤の鮮やかさが残る傾向にある 分別 脱水工程では 1% 酢酸で軽く洗って鏡検し ここで薄ければまたアニリンブルーに戻す その後の工程ではイソプロピルアルコールがよい しかしアニリンブルーが過染していた場合 純エタノールではアニリンブルーが落ちやすいので エタノールを使用して分別してもよい 今回 評価対象とはしなかったが 封入後乾燥させずに標本をケースに入れた施設があり 標本がケースに張りついていた 標本の破損につながるため 十分乾燥させたのちケースに入れるように注意をお願いしたい また 自動染色機を使用している施設で切片の剥がれが数件起こった 今後コーティングガラスの使用も検討したい より良好な標本を作製するには 改善すべき点を再確認する必要がある そのために数年前より 判定 ( ランク別 ) 結果だけを報告するのではなく 特にCと判定された施設には サーベイ時に記載していただいた染色に関するアンケート内容をふまえながら改善すべき点などのコメントを付記して報告する いわゆるアフターケアーができるような体制作りが不可欠と考え実施してきた とは言うものの 今回 Cと判定された施設はなかったため 全体的な講評評価を記載させて頂いた 解析集に判定 ( ランク別 ) 結果の病理組織標本写真を掲載しているので参考にしていただきたい

5 病理組織標本写真であるが 最上段より下方へ評価成績順で抜粋したものを掲載している 解析委員および病理医 伊藤先生が評価 Aの施設を選び掲載している また最高評価施設の染色手順を下記に記載している 参考にして頂けたら幸いである 我々病理 細胞検査研究班は 病理技術の向上および普及を図り 病理組織検査法の標準化を推進するよう努力するために精度管理を引き続き行わなければなければならないと痛感した 最後に職務ご多忙中にもかかわらず 精度管理にご参加下さいました各施設の技師の皆様に御礼申し上げます ( 文責 : 病理 細胞検査研究班 ) 平成 27 年度 ( 第 35 回 ) 兵臨技臨床検査精度管理 病理組織検査報告書 ( 表 2) 施設番号 マッソントリクローム染色染色評価 A B-a B-b C

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7 マッソントリクローム染色についてのアンケート結果 (1) 貴施設では 1 ヶ月何枚位のマッソントリクローム染色を実施していますか 染色枚数 施設数 % 0~ ~ ~ ~ ~50 以上 4 12 (2) 何 μmで薄切をしていますか 厚さ μm 施設数 % ~ ~ ~ ~ ~6 1 3 無記 1 3 (2) 今回貴施設で行った方法を具体的に記入して下さい 用手法 / 自動染色 施設数 % 用手法 自動染色 5 15 * 自動染色ロッシュ :4 件 サクラ Rrisma:1 件 脱パラ 施設数 % キシレン Hemo-De 4 12 ロッシュ 1 3 第 1 媒染の有無 施設数 % 有 無 2 6 不明

8 第 1 媒染の種類施設数 % 市販薬 ( 武藤科学 ) 重クロム酸カリウム+TCA 8 29 ロッシュ % 重クロム酸カリ % 重クロム酸 1 4 ブアン 1 4 核染の種類施設数 % 鉄ヘマトキシリン ロッシュ 3 9 マイヤー 1 3 カラッチ 1 3 核染時間 ( 分 ) 施設数 % 3~ ~ ~ 不明 1 3 分別施設数 % 有 無 8 24 不明 9 26 回答 17 施設 分別の種類施設数 % 塩酸アルコール 水洗 2 12 不明 2 12 色だし施設数 % 有 無 0 0 不明 2 6 回答 32 施設 色だしの種類施設数 % 水洗 ロッシュ 3 9 お湯 2 6 不明

9 第 2 媒染施設数 % 有 無 5 15 不明 9 26 回答 20 施設 第 2 媒染の種類施設数 % 2.5% リンタングステン酸 + 2.5% リンモリブデン酸 ロッシュ % 炭酸リチウム % リンモリ 1 3 不明 2 6 OG 単独施設数 % 有 無 不明 5 15 洗浄施設数 % 酢酸 水洗 4 12 なし 3 8 不明 8 24 染色 ( 細胞質 2) 種類施設数 % ポンソー マッソンB スカーレット 8 24 ロッシュ 4 12 マッソンⅠ 1 3 染色 ( 細胞質 2) 時間 ( 分 ) 施設数 % 1~ ~ ~ ~ ~ 不明

10 分別媒染の種類 施設数 % 2.5% リンタングステン酸 % リンタングステン酸 + 2.5% リンモリブデン酸 7 21 ロッシュ 4 12 洗浄施設数 % 酢酸 水洗 4 12 不明 6 18 染色 ( 結合織 ) 種類施設数 % アニリン青 アニリン青 + オレンジG 2 6 ライトグリーン 2 6 染色 ( 結合織 ) 時間 ( 分 ) 施設数 % 1~ ~ ~ ~ ~ 不明 2 6 分別脱水施設数 % アルコール イソプロピルアルコール 4 12 風乾 2 6 酢酸 アルコール 1 3 不明 3 9 封入施設数 % エンテラーニュー マリノール 7 21 エクセルマウント MGK-S 1 3 無記入

11 (5) 今回使用した試薬とメーカー名を記入して下さい < 第 1 媒染 > メーカー施設数 % 自家製 重クロム酸カリウム 和光純薬 6 50 (12 施設 ) 石津製薬 1 8 ナカライテスク 1 8 不明 4 34 トリクローム酢酸 和光純薬 7 58 ナカライテスク 1 8 不明 % 重クロム酸カリウム ( 重クロム酸カリウム10g 蒸留水 調整法 100ml ) 10% トリクロール酢酸 ( トリクロール酢酸 10g 蒸留水 100ml) の等量混合液として使用する など 調整済み (12 施設 ) 理由 : なし (1 施設 ) アザン マッソントリクローム用媒染剤 武藤化学 手軽なため 再現性がよく 染色性が安定している 安価で業務効率が良いため < 染色 ( 核 ) > メーカー 施設数 % 自家製 ヘマトキシリン メルク 6 75 (8 施設 ) 和光純薬 1 13 不明 1 13 塩化第 2 鉄 和光純薬 2 25 関東化学 2 25 武藤化学 1 13 シグマ 1 13 メルク 1 13 不明 1 13 塩酸 和光純薬 第 1 液 : ヘマトキシリン1g 100% アルコール100ml 調整法 第 2 液 :29% 塩化第二鉄 4ml 塩酸 1ml 蒸留水 95ml 第 1 液と第 2 液を使用時に等量混合 などワイゲルト鉄調整済みヘマトキシリン1 2 武藤化学 (19 施設 ) マイヤーヘマトキシリン 武藤化学 1 5 理由 : カラッチヘマトキシリン 武藤化学 1 5 手軽なため 再現性がよく 染色性が安定している 安価で業務効率が良いため

12 < 第 2 媒染 > メーカー施設数 % 自家製 リンタングステン酸 和光純薬 6 67 (9 施設 ) 武藤化学 1 11 キシダ化学 1 11 不明 1 11 リンモリブデン酸 和光純薬 7 78 関東化学 1 11 不明 % 重クロム酸カリウム ( 重クロム酸カリウム10g 蒸留水 調整法 100ml ) 10% トリクロール酢酸 ( トリクロール酢酸 10g 蒸留水 100ml) の等量混合液として使用する など 調整済み (8 施設 ) 理由 : なし (1 施設 ) マッソントリクローム染色用第二媒染剤 武藤化学 手軽なため 再現性がよく 染色性が安定している 安価で業務効率が良いため < 染色 ( 細胞質 1 オレンジGのみ ) > メーカー 施設数 % 自家製 オレンジ G クローマ 2 20 (10 施設 ) メルク 1 10 和光純薬 1 10 関東化学 1 10 片山化学 1 10 シグマ 1 10 不明 3 30 オレンジGを1% の割合で蒸留水に溶解する 調整法 0.8% の水溶液 オレンジG 0.75g 精製水 100ml 氷酢酸 2~3 滴 など 調整済み 0.75% オレンジG 液 武藤化学 7 88 (8 施設 ) 0.5% オレンジG 液 武藤化学 1 12 理由 : 手軽なため 再現性がよく 染色性が安定している 安価で業務効率が良いため

13 < 染色 ( 細胞質 2) > メーカー 施設数 % 自家製 ポンソーキシリジン 和光純薬 3 - (12 施設 ) クローマ 2 - 酸フクシン メルク 3 - 和光純薬 1 - 片山化学 1 - 関東化学 1 - ヒ ーフ リッヒ スカーレット ナカライテスク 1 - 不明 3-1% スカーレット水溶液 45mlと1% 酸性フクシン水溶液 45ml と酢酸 10mlを混合する a 液 : ポンソー キシリジン 1g 精製水 100ml b 液 : 酸フクシン 1g 精製水 100ml 氷酢酸 1ml c 液 : アゾフロキシン 0.5g 精製水 100ml 氷酢酸 0.2ml d 液 :0.2% 氷酢酸水 a 液 15ml:b 液 5ml:c 液 5ml:d 液 100ml 1% ポンソー酸水溶液 30ml 1% 酸フクシン50ml 0.5% アゾフロキシン50ml 蒸留水 200ml 氷酢酸 10ml 調整法 酸フクシン1g スカーレット1g 氷酢酸 10ml 蒸留水 100mlを加える 11% ポンソー酸水溶液 :60ml 21% 酸フクシン100ml+ 氷酢酸 0.2ml:20ml 4 0.5% アゾフロキシン100ml+ 氷酢酸 0.2ml:20ml 1 3を蒸留水 400mlに溶かし 氷酢酸 20mlを加えて 使用液とする 1% ヒ ーフ リッヒ スカーレット水溶液 90ml 1% 酸フクシン水溶液 10ml 酢酸 1ml を混合 など マッソンB 液 武藤化学 調整済み マッソンA 液 武藤化学 2 13 (16 施設 ) 手軽なため 理由 : 再現性がよく 染色性が安定している 安価で業務効率が良いため * 調整法が施設により異なるため代表的な試薬について記載する % は記載しない

14 < 媒染 > メーカー 施設数 % 自家製 リンタングステン酸 和光純薬 (22 施設 ) 関東化学 2 9 メルク 1 5 シグマ 1 5 キシダ化学 1 5 ナカライテスク 1 5 不明 5 23 リンモリブデン酸 和光純薬 2 33 ( 使用 6 施設 ) 片山化学 1 17 シグマ 1 17 不明 % リンタングステン酸水溶液 100mlと5% リンモリブデン酸 水溶液 100mlを等量混合する 調整法 5% に調整した水溶液を等量混合 100mlの蒸留水にリンタングステン酸 2.5gとリンモリ ブデン酸 2.5gをそれぞれ溶解させた液を等量混合する など 調整済み (5 施設 ) 理由 : 2.5% リンタングステン酸液 武藤化学 手軽なため 再現性がよく 染色性が安定している 安価で業務効率が良いため < 染色 ( 結合織 ) > メーカー 施設数 % 自家製 アニリン青メルク 4 33 和光純薬 3 25 (12 施設 ) クローマ 1 8 不明 2 17 ライトグリーン メルク 2 17 アニリン0.4g+ 氷酢酸 8ml+ 蒸留水 100mlを混合する アニリンブルー 0.4g 蒸留水 100ml 酢酸 8mlを30 分煮沸し 調整法 室温で冷却後に濾過し それを蒸留水で2 倍希釈 アニリン青 0.4gを100mlの蒸留水に溶かし 氷酢酸 8mlを加 えて20 分加温し冷却後濾過する など アニリン青武藤化学 調整済み 手軽なため (15 施設 ) 再現性がよく 染色性が安定している 理由 : 安価で業務効率が良いため

15 (6) マッソントリクローム染色で染色操作や試薬調整方法でコツや工夫していること 注意点などが あれば具体的に教えて下さい 核染色 鉄ヘマトキシリンは 使用直前に調整すること ワイゲルトの鉄ヘマトキシリンは使用 30 分前までにⅠ 液とⅡ 液を等量混合する 媒染剤 媒染剤は1カ月以内のものを使用 第 2 媒染で1 分を超えないこと. 第 2 媒染剤に1 分以上浸すと アニリン青の染色性が弱くなるので 1 分以内を厳守すること 染色液 臓器や標本の厚さによってポンソー キシリジン酸フクシンアゾフロキシン混合液から後の時間を変えて染色する 材料によりアニリン青の時間を調整している ( 病理医の指示により ) アニリン青が落ちやすい為アルコールを使わず 冷風乾燥している ライトグリーンは劣化が早いので2 週間毎に交換している 脱水 透徹 イソプロピルアルコールで分別 脱水の行程が脱水不足になりやすいので注意している その他 試薬の使用期限を守り なるべく使用時に調整する 染色操作はサクラ社の自動染色装置プリズマに上記のプログラムを組んで行っている 普段はエラスチカ マッソンの重染色を行っている 器具はきれいに洗浄する 染まり具合を確認しながら 染色時間などを微調整する 自動染色のため特になし 手染めとの染色性の違いを確認したい 滅多に依頼がなく あまりしないので コツなど教えていただきたいです (7) 今回行ったマッソントリクローム染色を自己判定して下さい A 満足すべき標本と判断された施設の自己評価 膠原繊維がきちんと染め分けられ 共染もなく 赤と青の色のバランスも適度で きれいに染色できていると思います 普段 ルーチンワークで行っているマッソントリクローム染色と遜色のない出来栄えだと思います 1 枚目を染色後 二枚目を染色するときには微調整を行ったため 3 色のコントラストがあざやかになったと思います 膠原繊維は染め分けできている 共染していないと思う マッソントリクローム染色の赤と青の染め分けが出来た標本となった 膠原線維が染め分けされており 共染もなく 青と赤のバランスもとれている 良好

16 B-a 診断上支障のない標本と判断された施設の自己評価 はがれのため 再染色の予定です 可 アニリン青の乗りが少し薄かった. アニリン青が若干薄く感じますが これ以上の追加の染色では共染する場合があるため染色を終えています 赤と青のコントラストが適度であった 膠原線維が青に 核が黒紫に 赤血球が橙黄に染まり 共染もしていないと考えます また 赤と青のバランスも適度であると思います 良好 膠原線維と筋線維が共染なく うまく染め分けられたと思います 少し剥がれがあったため 再乾燥する方がよかったと思う 染色頻度が少なく評価がしづらいのですが 予想より全体的に黒っぽい仕上がりでした 心当たりはやや古いヘマトキシリンを使用したことです やや染まりが薄い 良好と思われます 染め分けはできており 共染はしていないが アニリン青の染まりが少し悪いような感じがある まずまず良好 70 点 染め分けはできているので観察には適した標本だと思います 膠原線維が染め分けられている アニリン青が少し薄いと思います 赤と緑もきちんと色が乗っており 両者のバランスも良好だと思うが 核染色がやや弱い気がする B-b 診断上支障のない標本と判断された施設の自己評価 診断に支障のない染色性と考える 膠原線維が染め分けられているが 赤色が薄いと思う 若干オレンジGが薄くなった 膠原線維の染め分けは出来ているが 染色性がやや弱い 第 1 媒染を忘れてしまったので染まりが薄い 膠原繊維もやや薄く 赤血球はマッソンBに共染している まあまあです

17 最高評価の施設が実施しているマッソントリクローム染色における染色手順および試薬 1 脱パラフィン操作キリレンⅠ~Ⅲ( 各 5 分 ) 100% アルコールⅠ~Ⅳ( 各 5 分 ) 2 水 洗流水水洗 3 第 1 媒 染 10% 重クロム酸カリウムと 10% トリクロール酢酸の等量混合液 (30 分 ) 4 洗 浄流水水洗 (5 分 ) 5 染 色 ( 核 ) ワイゲルトの鉄ヘマトキシリン (5 分 )Ⅰ 液とⅡ 液等量混合液 6 分 別軽く水洗後 1% 塩酸アルコールで分別 7 洗浄 色出し流水水洗 (5 分 ) 8 第 2 媒 染 2.5% リンタングステン酸水溶液と 2.5% リンモリブデン酸の等量混合液 (1 分 ) 9 染色 ( 細胞質 1) 0.8% オレンジ G 水溶液 (1 分 ) 10 洗 浄 1% 酢酸水 Ⅰ Ⅱ 11 染色 ( 細胞質 2) マッソンⅠ 液 (20 分 ) 12 洗 浄 1% 酢酸水 Ⅰ Ⅱ 13 媒 染 2.5% リンタングステン酸 (10 分 ) 14 洗 浄 1% 酢酸水 Ⅰ Ⅱ 15 染色 ( 結合織 ) アニリン青 (10 分 ) 16 分 別 脱 水腎生検ではスライドガラスをろ紙で 1 枚ずつ染色液を吸い取り アルコールⅠ~Ⅳへ 17 透 徹キリレンⅠ~Ⅳ 18 封 入エンテランニュ < 第 1 媒染 > 自家製 試 薬 メ カ 名 重クロム酸カリウム 石津製薬 トリクロール酢酸 和光純薬 調整法 ;10% 重クロム酸カリウム ( 重クロム酸カリウム 10g 蒸留水 100ml ) 10% トリクロール酢酸 ( トリクロール酢酸 10g 蒸留水 100ml) の等量混合液として使用する使用理由 ; 記載なし < 染色 ( 核 )> 試 薬 メ カ 名 ヘマトキシリン メルク 塩化第 2 鉄 和光純薬 自家製 調整法 ; Ⅰ 液 ( ヘマトキシリン 1g 95% エタノール ) と Ⅱ 液 ( 塩化第 2 鉄 2g 塩酸 1ml 蒸留水 95ml) の等量混合液として使用する 使用理由 ; 記載なし

18 < 第 2 媒染 > 試 薬 メ カ 名 リンタングステン酸 キシダ化学 リンモリブデン酸 和光純薬 自家製 調整法 ;2.5% リンタングステン酸 ( リンタングステン酸 2.5g 蒸留水 100ml) と 2.5% リンモリブデン酸 ( リンモリブデン酸 2.5g 蒸留水 100ml) の等量混合液を使用する使用理由 ; 記載なし < 染色 ( 細胞質 1)> 試 薬 メ カ 名 オレンジG 関東化学 自家製 調整法 ; 0.8% オレンジ G 水溶液 ( オレンジ G0.8g 蒸留水 100ml) 使用理由 ; 記載なし < 染色 ( 細胞質 2)> 試 薬 メ カ 名 1% ポンソー酸水溶液 1% 酸フクシン 0.5% アゾフロキシン 和光純薬メルク CHOMA 自 家 製 調整法 ; 1% ポンソー酸水溶液 30ml 1% 酸フクシン50ml 0.5% アゾフロキシン50m 蒸留水 200ml 氷酢酸 10ml 使用理由 ; 記載なし < 媒染 > 試 薬 メ カ 名 リンタングステン酸 キシダ化学 自家製 調整法 ;2.5% リンタングステン酸水溶液 ( リンタングステン 2.5g 蒸留水 100ml) 使用理由 ; 記載なし < 染色 ( 結合織 )> 試 薬 メ カ 名 アニリン青 メルク 自家製 調整法 ; アニリン青 0.4g 蒸留水 100ml 酢酸 8ml 使用理由 ; 記載なし

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