CONTENTS エンドトキシン 試 験 基 本 の き 4 7 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 比 濁 法 ゲル 化 法 リムルス ES-IIシリーズ 8 9 PYROSTAR ES-Fシリーズ PYROSTAR ES-F/Plate リムルス ES-Ⅲ リ

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1 本 社 大 阪 市 中 央 区 道 修 町 三 丁 目 1 番 2 号 TEL: ( 機 器 システム 部 ) 東 京 本 店 東 京 都 中 央 区 日 本 橋 本 町 二 丁 目 4 番 1 号 TEL: ( 機 器 システム 部 ) 北 海 道 営 業 所 TEL: 東 北 営 業 所 TEL: 筑 波 営 業 所 TEL: 藤 沢 営 業 所 TEL: 東 海 営 業 所 TEL: 中 国 営 業 所 TEL: 九 州 営 業 所 TEL: URL: お 問 い 合 わせ 先 : Web からの 機 器 簡 単 見 積 デモ 依 頼 : 機 05T 2014 年 2 月 改 訂

2 CONTENTS エンドトキシン 試 験 基 本 の き 4 7 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 比 濁 法 ゲル 化 法 リムルス ES-IIシリーズ 8 9 PYROSTAR ES-Fシリーズ PYROSTAR ES-F/Plate リムルス ES-Ⅲ リムルス PS シングルテスト ワコー リムルス Jシリーズ 18 リムルス Fシリーズ 19 比 色 法 リムルス カラー KY シリーズ 20 Endochrome-K TM 21 エンドトキシン 試 験 関 連 試 薬 22 乾 熱 滅 菌 バリデーション 用 試 薬 エンドトキシンインジケーター 22 SLP 試 薬 セット LPS(リポポリサッカリド) 26 エンドトキシン 検 出 用 抽 出 液 27 エンドトキシン 除 去 フィルター 28 アクロディスクシリンジフィルター ムスタング Eアクロディスク 選 択 的 エンドトキシン 除 去 用 クロマトグラフィー 充 填 剤 セルファインRE T クリーン 29 エンドトキシン 試 験 関 連 器 材 30 バイオクリーンチップ ワコーRシリーズ エンドトキシン 試 験 機 材 31 サーモステーション TS-37S/24 VIAL TUBE MIXER VTM-252/VIAL ADAPTER SASAETE30 エンドトキシン 測 定 システム トキシノメーター ET マイクロプレートリーダー 法 エンドトキシン 測 定 システム MPRエンドトキシン 測 定 システム 34 簡 易 型 エンドトキシン 測 定 システム Endosafe -PTS TM 35 バリデーション サポート サービス 36 注 ) 本 カタログに 収 載 の 製 品 は 試 験 研 究 用 試 薬 機 器 です 疾 病 の 診 断 にはご 使 用 になれません リムルス 関 連 試 薬 機 材 消 耗 品 価 格 表 37 1

3 ライセート 試 薬 選 択 のフローチャート 試 験 管 法 エンドトキシン 特 異 的 試 薬 比 濁 法 ゲル 化 法 日 本 薬 局 方 シングルテスト(CSE 付 ) リムルス ES-II シングルテスト: ( 表 示 感 度 EU/mL) P.8 マルチテスト(CSE 付 ) リムルス ES-II テスト: ( 表 示 感 度 EU/mL) P.8 マルチテスト(CSE なし) カブトガニ 血 球 抽 出 物 ES-II: ( 表 示 感 度 EU/mL) P.8 マルチテスト(CSE なし) カブトガニ 血 球 抽 出 物 ES-III: ( 表 示 感 度 0.03EU/mL) P.14 シングルテスト(CSE なし) リムルス PS シングルテスト: P.16 FDA 対 応 シングルテスト(CSE 付 ) PYROSTAR ES-F シングルテスト: ( 表 示 感 度 0.015EU/mL) P.10 マルチテスト(CSE 付 ) PYROSTAR ES-F マルチテスト: ( 表 示 感 度 0.015EU/mL) P.10 マルチテスト(CSE なし) PYROSTAR ES-F マルチテスト: ( 表 示 感 度 0.015EU/mL) P.10 比 色 法 日 本 薬 局 方 シングルテスト(CSE 付 ) リムルスカラー KY シングルテスト: P.20 マルチテスト(CSE 付 ) リムルスカラー KY テスト: P.20 エンドトキシン 非 特 異 的 試 薬 ゲル 化 法 専 用 日 本 薬 局 方 シングルテスト(CSE 付 ) リムルス J シングルテスト: ( 表 示 感 度 0.25 EU/mL) P.18 リムルス HS ー J シングルテスト: ( 表 示 感 度 0.03 EU/mL) P.18 FDA 対 応 シングルテスト(CSE 付 ) リムルス F シングルテスト: ( 表 示 感 度 0.25 EU/mL) P.19 リムルス HS ー F シングルテスト: ( 表 示 感 度 0.03 EU/mL) P.19 比 濁 法 ゲル 化 法 日 本 薬 局 方 シングルテスト(CSE 付 ) リムルス HS ー T シングルテスト: ( 表 示 感 度 EU/mL) P.18 マルチテスト(CSE 付 ) リムルス J テスト: ( 表 示 感 度 0.25 EU/mL) P.18 リムルス HS-J テスト: ( 表 示 感 度 0.03 EU/mL) P.18 マルチテスト(CSE なし) カブトガニ 血 球 抽 出 物 J: ( 表 示 感 度 0.25 EU/mL) P.18 カブトガニ 血 球 抽 出 物 HS-J: ( 表 示 感 度 0.03 EU/mL) P.18 FDA 対 応 マルチテスト(CSE 付 ) リムルス HS-F テスト: ( 表 示 感 度 0.03 EU/mL) P.19 マルチテスト(CSE なし) カブトガニ 血 球 抽 出 物 F: ( 表 示 感 度 0.25 EU/mL) P.19 カブトガニ 血 球 抽 出 物 HS-F: ( 表 示 感 度 0.03 EU/mL) P.19 比 色 法 FDA 対 応 マルチテスト(CSE 付 ) Endochrome-K 256 test kit: P.21 マルチテスト(CSE なし) Endochrome-K 320 tests: P.21 Endochrome-K 3200 tests: P.21 1: 生 物 学 的 製 剤 に 適 した 試 薬 2: 水 に 不 溶 なサンプルに 適 した 試 薬 プレート 法 エンドトキシン 特 異 的 試 薬 比 濁 法 FDA 対 応 マルチテスト(CSE 付 ) PYROSTAR ES-F/Plate: P.12 比 色 法 日 本 薬 局 方 マルチテスト(CSE 付 ) リムルスカラー KY テスト: P.20 エンドトキシン 非 特 異 的 試 薬 比 色 法 FDA 対 応 マルチテスト(CSE 付 ) Endochrome-K 256 test kit: P.21 マルチテスト( CSE なし ) Endochrome-K 320 tests: P.21 Endochrome-K 3200 tests: P.21 マルチテスト : ライセート 試 薬 をエンドトキシン 試 験 用 水 で 溶 解 し 反 応 用 試 験 管 またはプレートに 必 要 量 分 注 し 使 用 するタイプ シングルテスト : 1 回 の 測 定 分 のライセート 試 薬 が 反 応 用 試 験 にあらかじめ 分 注 されているタイプ 2 3

4 エンドトキシン 試 験 基 本 の き 1.エンドトキシンとは エンドトキシンとは グラム 陰 性 菌 の 細 胞 壁 に 存 在 しているリポ 多 糖 ( L P S) のことです 代 表 的 な 発 熱 性 物 質 で あり pg( g ) やng( 10-9 g)という 微 量 でも 血 中 に 入 ると 様 々な 生 体 反 応 を 引 き 起 こします 耐 熱 性 であり オートクレーブ 処 理 程 度 では 失 活 しません 完 全 に 失 活 させるには250 以 上 で30 分 以 上 の 乾 熱 滅 菌 が 必 要 です グラム 陰 性 菌 が 生 息 する 環 境 中 のあらゆる 場 所 ( 水 空 気 )に 存 在 し 菌 が 死 んで もLPS は 残 ります 図 1に 構 造 の 模 式 図 を 示 し ま す リピドA 部 分 が 生 物 活 性 を 担 う 本 体 であり この 部 分 の 分 子 量 は 約 2 千 です 糖 鎖 部 分 を 含 んだ 全 体 は 通 常 分 子 量 5 千 から8 千 程 度 です ただし LPSは 親 水 性 部 分 ( 糖 鎖 )と 疎 水 性 部 分 (リピドA)を 持 つ 分 子 であるため 水 溶 液 中 で 会 合 し 見 かけの 分 子 量 が 数 十 万 数 百 万 の ミセル 構 造 をとります ミセル 構 造 が 変 化 すると 生 物 活 性 の 強 弱 も 変 化 することが 報 告 されています 図 2 に 大 腸 菌 型 とサルモネラ 型 のLipid Aの 構 造 を 示 します Lipid Aの 基 本 構 造 は 菌 株 が 異 なっても 共 通 している 部 分 が 多 くみられます 通 常 のライセート 試 薬 は Factor Gを 介 した 反 応 経 路 が 存 在 するため エンドトキシンに 加 えて (1 3)- β-d-グルカン( 真 菌 の 細 胞 壁 構 成 成 分 )にも 反 応 します Factor G を 除 くか 作 用 をブロックすることで エンドトキシン 特 異 的 な 試 薬 を 調 製 する 技 術 が 開 発 されています 図 3 の 反 応 機 構 を 利 用 した 種 々のライセート 試 薬 や 測 定 システムが 市 販 されていま す エ ンドト キ シ ン を 測 定 する 際 には 必 要 な 精 度 試 験 の 頻 度 や 検 体 数 などを 考 慮 して 適 切 なものを 選 びます 日 米 欧 の 薬 局 方 やFDA ガイドラインには エンドトキシン 試 験 法 として ゲル 化 法 比 色 法 比 濁 法 の3つ の 方 法 が 記 載 され て い ま す 以 下 そ れ ぞ れ の 方 法 に つ い て 解 説 し 対 応 する 弊 社 のライセート 試 薬 の 特 徴 使 用 例 について 述 べます (1)ゲル 化 法 試 験 管 中 でライセート 試 薬 と 検 体 を 混 合 し 37±1 で 60±2 分 間 振 動 を 与 えないようにブロックヒー ターなどで 加 温 します 加 温 終 了 後 ただちに 試 験 管 をゆっくりと180 転 倒 し 変 形 したり 崩 れたりしない ゲルが 生 じていれば 陽 性 生 じていなければ 陰 性 と 判 定 します 検 体 を 等 倍 希 釈 ( 通 常 2 倍 段 階 希 釈 )する ことにより どの 希 釈 倍 数 まで 陽 性 判 定 されるかを 調 べます 陽 性 判 定 された 最 も 大 きい 希 釈 倍 数 ( あるい は 最 小 濃 度 )をエンドポイントと 呼 びます 図 2 Lipid Aの 構 造 図 1 リポ 多 糖 の 構 造 模 式 図 ( 大 腸 菌 型 とサルモネラ 型 ) 2.エンドトキシン 試 験 の 種 類 と 種 々のライセート 試 薬 エンドトキシン 試 験 には カブトガニの 血 球 抽 出 物 から 作 られるライセート 試 薬 を 用 います ラ イセ ート 試 薬 の 反 応 を 図 3 に 示 します 最 初 に エンドトキシンにより セリンプロテアーゼ 前 駆 体 であるFactor Cが 活 性 型 に 変 換 されます 同 じくセリンプロテアーゼ 前 駆 体 であるFactor B Proclotting enzymeが 順 次 活 性 化 を 受 け 最 終 的 にCoagulogen が 水 解 されてCoagulinとなり 不 溶 性 のゲルを 形 成 します エンド トキシン 試 験 では 本 カスケード 反 応 によるゲル 化 比 濁 増 加 もしくは 合 成 基 質 の 切 断 による 黄 色 発 色 を 測 定 することにより エンドトキシンを 定 量 します Endotoxin(LPS) Factor C Factor C (1 3)-β-D-Glucan Factor B Factor B Factor G Factor G Proclotting enzyme Clotting enzyme Coagulogen Coagulin ( ゲル 化 濁 度 増 加 ) または Peptidyl-pNA Peptide + pna( 黄 色 発 色 ) 合 成 基 質 内 の 各 因 子 は 活 性 型 を 示 す 図 3 ライセート 試 薬 の 反 応 機 構 陽 性 (+) 陰 性 ( ) 対 応 試 薬 : J F シ リ ーズ Jは 日 局 対 応 試 験 が FはFDA 対 応 試 験 が 行 えるラ イセ ート 試 薬 で す 両 者 とも に (1 3)-β-D- グルカンにも 反 応 します 0.03 EU/mLと0.25 EU/mL の2 種 類 のゲル 化 感 度 の 商 品 があり 管 理 したいエンドトキシン 濃 度 によってどちらかを 選 択 します また 1 回 の 測 定 分 の 試 薬 が 反 応 用 バイアルにあらかじめ 分 注 されているシングルタイプと 溶 解 して から 反 応 用 試 験 管 に 必 要 量 小 分 けして 使 用 するマルチタイプの2 種 類 があります 測 定 検 体 数 が 少 ない 時 はシングルタイプ 多 い 時 はマルチタイプの 使 用 をおすすめします マルチタイプでは 反 応 用 試 験 管 に0.1 mlの 溶 解 したライセート 試 薬 を 小 分 けし 続 いて0.1 mlの 検 体 を 加 えて 混 合 し ま す シ ン グ ル タ イ プ で は 凍 結 乾 燥 さ れ たライセート 試 薬 が 入 った 反 応 用 バイアルに 0.2 ml の 検 体 を 加 えて 混 合 します HS-T シングル 日 局 対 応 試 験 が 行 えるシングルタイプのライセート 試 薬 です ゲル 化 感 度 は0.015 EU/mL となります (1 3)-β-D- グルカンにも 反 応 します ES-II シリーズ 日 局 対 応 試 験 が 行 える エンドトキシン 特 異 的 な((1 3)-β-D- グルカンには 反 応 しない)ライセート 試 薬 です ゲル 化 感 度 は0.015 EU/mL となります こちらもシングルタイプとマルチタイプがあります ES-F シリーズ E S - Ⅱシリーズと 同 じ 組 成 / 製 法 の 試 薬 ですが F DA 認 証 を 取 得 しているので F DA 対 応 試 験 が 行 えます エ ンドト キ シ ン 特 異 的 な ラ イセ ート 試 薬 で す ゲ ル 化 感 度 は E U / m L と な りま す シ ング ル タ イ プ と マルチタイプがあります 4 5

5 (2) 比 色 法 エンドトキシンによるライセート 試 薬 の 活 性 化 を 発 色 合 成 基 質 が 切 断 されることで 検 出 する 方 法 です P-ニトロアニリンの 黄 色 発 色 を405 nm 付 近 の 吸 光 度 変 化 で 測 定 するため 検 体 が405 nm 付 近 に 大 きな 吸 収 を 持 つと 適 用 できません 対 応 試 薬 : カラー K Y シリーズ 日 局 対 応 試 験 が 行 えるエンドトキシン 特 異 的 な 比 色 法 用 の 試 薬 です トキシノメーター (BL2タイプ)と 組 み 合 わせてカイネティック- 比 色 法 が 行 えるシングルタイプと トキシノ メーター に 加 えてマイクロプレートリーダーによるカイネティック- 比 色 法 測 定 にも 適 用 できるマルチタイプ があります また 弊 社 の 試 薬 の 中 では 最 も 低 濃 度 まで 測 定 できる( 高 感 度 )という 特 長 があります( 検 出 限 界 が シングルタイプでは0.0002EU/mL マルチタイプでは0.0005EU/mL) Endochrome-K 米 国 CHARLES RIVER 社 製 でFDA 対 応 試 験 が 行 え (1-3)-β-D-グルカンにも 反 応 する 比 色 法 試 薬 です マイクロプレートリーダーもしくはトキシノメーター によるカイネティック- 比 色 法 測 定 で 使 用 できます (3) 比 濁 法 エンドトキシンによるライセート 試 薬 の 活 性 化 を ゲル 化 に 伴 う 濁 度 変 化 で 検 出 する 方 法 です 濁 りが 大 きい 検 体 には 適 用 できません J Fシリーズ ES-Ⅱ ES-Fシリーズ HS-Tシングル ゲル 化 法 で 紹 介 した J FシリーズのマルチタイプやES-Ⅱ ES-Fシリーズ HS-Tシングルとトキシノメー ター を 組 み 合 わせることにより カイネティック- 比 濁 法 による 測 定 ができます これらの 試 薬 では 測 定 時 間 を60 分 とすることで カイネティック- 比 濁 法 のデータを 採 取 しながら ゲル 化 法 の 判 定 も 行 うことができます ES-F/Plate FDA 対 応 試 験 が 行 えるエンドトキシン 特 異 的 な 比 濁 法 用 の 試 薬 です マイクロプレートリーダーによるカ イネティック- 比 濁 法 測 定 で 使 用 できます 3. 使 用 器 具 について エンドトキシン 試 験 を 行 う 際 に 使 用 する 器 具 はエンドトキシン β- グルカンフリーのものを 使 用 しなけれ ばなりません 250 以 上 で30 分 以 上 の 乾 熱 がエンドトキシン 不 活 化 には 必 要 ですので 通 常 は 乾 熱 滅 菌 したガラス 器 具 を 使 用 し ま す 微 量 に 溶 出 す る 金 属 イ オン(Fe Al Ga Cr 等 )が 試 験 に 影 響 するので 金 属 製 器 具 の 使 用 は 避 け て 下 さ い 使 い 捨 てのプラスチック 器 具 等 は メーカーによる 保 証 のあるものを 除 いて ❶エンドトキシンの 汚 染 がない ❷エンドトキシンが 吸 着 しない ❸ 試 験 結 果 に 影 響 する 溶 出 物 が ないことを ガラス 製 器 具 と 比 較 確 認 してからご 使 用 下 さい 4.エ ンドト キ シ ン 標 準 品 に つ い て 行 おうとする 試 験 目 的 にあったエンドトキシン 標 準 品 をご 使 用 下 さい 医 薬 品 の 最 終 製 品 検 査 など 薬 局 方 に 準 拠 する 試 験 を 行 う 必 ず 薬 局 方 エンドトキシン 標 準 品 をご 使 用 下 さい 原 料 検 査 工 程 検 査 な ど を 行 う 米 国 で 販 売 す る 薬 剤 ( F D A 規 制 )の 最 終 試 験 を 行 う Control Standard Endotoxin(CSE)の 使 用 が 可 能 です 5. 試 料 の 影 響 エンドトキシン 試 験 を 実 施 する 際 には 試 料 が 試 験 におよぼす 影 響 ( 反 応 干 渉 因 子 )に 注 意 が 必 要 です 反 応 干 渉 因 子 は2 種 類 に 大 別 されます ❶ライセート 試 薬 に 影 響 するもの 蛋 白 変 成 作 用 の あ る も の( 酸 ア ル カリ 尿 素 界 面 活 性 剤 有 機 溶 剤 ) プロテアーゼ プロテアーゼ 阻 害 剤 キレート 剤 ( 反 応 に 必 要 な Ca や Mgが 捕 捉 される) 比 色 法 の 場 合 着 色 物 質 (405 nm 付 近 に 大 きな 吸 収 を 持 つ 物 質 ) 比 濁 法 の 場 合 濁 り ❷エンドトキシンに 影 響 するもの 金 属 イオン(Fe Al Ga Crイオン 等 μm 程 度 でも 影 響 あり) 界 面 活 性 剤 試 料 の 影 響 の 有 無 は 既 知 量 のエンドトキシンを 添 加 した 検 体 を 測 定 し 添 加 したエンドトキシン 量 の 回 収 率 を 求 める 試 験 によって 判 断 しま す 局 方 で は 反 応 干 渉 因 子 試 験 と 呼 ば れ て い る 試 験 で す 添 加 した エンドトキシンの 回 収 率 が % の 範 囲 であれば 試 料 は 測 定 に 影 響 せず その 試 料 濃 度 で 測 定 した エンドトキシンの 濃 度 は 正 しいということになります 試 料 の 影 響 が 見 られた 場 合 試 料 を 希 釈 して 測 定 すると 影 響 を 軽 減 することができます ただし 試 料 を 希 釈 すると 原 液 換 算 ( 希 釈 する 前 の 液 )で 検 出 できる エンドトキシ ン の 濃 度 が 高 くな って し ま い ま す 希 釈 可 能 な 倍 数 ( 最 大 有 効 希 釈 倍 数 )は 検 出 したい エンドトキシン 濃 度 と 用 いるライセート 試 薬 の 検 出 感 度 によって 決 まります( 反 応 干 渉 因 子 試 験 や 最 大 有 効 希 釈 倍 数 の 詳 細 は 日 本 薬 局 方 の エ ンドト キ シ ン 試 験 法 を 参 照 して 下 さ い ) 6. 参 考 資 料 (もっとよく 知 るために) エ ンドトキシン 試 験 の 実 施 方 法 ❶ 第 16 改 正 日 本 薬 局 方 4.01 エンドトキシン 試 験 法 (2011) ( 第 16 改 正 日 本 薬 局 方 追 補 エンドトキシン 試 験 法 ( エ ンドトキ シンの 構 造 や 作 用 機 構 など 全 般 ❷ 棚 元 憲 一 エンドトキシンと 医 薬 品 の 品 質 管 理 Bull. Natl. Inst. Health Sci., 126, 19-33(2008) ( ❸レギュラトリーサイエンス 財 団 HP 技 術 情 報 ( 6 7

6 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 リムルス ES-II シリーズ 比 濁 法 ゲル 化 法 エンドトキシン 特 異 的 日 本 薬 局 方 検 体 中 の( 1 3)-β-D-グルカンの 影 響 を 受 けることなく 高 感 度 でエンドトキシンの 特 異 的 な 検 出 が 可 能 日 本 薬 局 方 収 載 エンドトキシン 試 験 法 に 適 合 したキットおよび 試 薬 ライセート 試 薬 には 和 光 で 検 定 した 日 本 薬 局 方 標 準 エンドトキシン(JP-RSE)によるゲル 化 感 度 が 力 価 (EU/mL)として 表 示 強 固 なゲルが 形 成 されるよう 工 夫 されているため ゲル 化 判 定 が 極 めて 容 易 トキシノメーター による 高 感 度 分 析 が 可 能 測 定 試 料 の ph の 影 響 を 受 けにくいため 安 定 したエンドトキシン 測 定 が 可 能 水 および 各 種 の 薬 剤 に 使 用 可 能 動 物 血 液 中 ウシ 乳 汁 中 のエンドトキシン 測 定 に 最 適 トシキノメーターによる 比 濁 法 の 実 験 例 透 過 光 量 比 (%) Tg(min.) リ ム ル ス 関 連 試 薬 シングルテスト コード No. 品 名 ラベル 表 示 ゲル 化 感 度 (EU/mL) 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) リムルス ES-II シングルテストワコー 回 用 33,000 (リムルス ES-II シングル 1 検 体 0.2mL 用 25 バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1 バイアル) マルチテスト リムルス ES-II テストワコー 回 用 35,000 (リムルス ES-II 試 薬 2mL 用 3 バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1 バイアル) マルチ 単 品 カブトガニ 血 球 抽 出 物 ES-II 凍 結 乾 燥 品 回 用 55,000 (リムルス ES-II 試 薬 2mL 用 5 本 ) 上 記 のCSE(コントロールスタンダードエンドトキシン)はE.coli UKT-B の 菌 体 から 精 製 したエンドトキ シンの 凍 結 乾 燥 品 で 1バイアル 中 に 500ng のエンドトキシンと 添 加 剤 マンニトールとグリシンを 含 有 し ロットごとに 日 本 薬 局 方 標 準 エンドトキシンで 検 定 した 参 考 値 (EU/Vial)が 記 載 されています リムルス ES(エンドトキシン 特 異 的 反 応 試 薬 )の 原 理 ) ゲル 化 時 間 (min 時 間 ( 分 ) エンドトキシン 凝 固 酵 素 前 駆 体 凝 固 酵 素 図 1 リムルステストの 反 応 カスケード (1 3)-β-D-グルカン 活 性 化 活 性 化 ファクタ ー C ファクタ ー C ファクタ ー G ファクタ ーG ファクタ ー B タイムコースデータ 活 性 化 ファクタ ー B コア ュローゲン コア ュリン ゲル 化 時 間 (min ) ゲル 形 成 濃 度 値 (EU/mL) 検 量 線 データ ライセート 試 薬 とエンドトキシンの 反 応 カスケード 機 構 は 図 1 に 示 すと お り で す 反 応 系 に( 1 3)-β-D-グルカン * が 存 在 する とファクター G を 活 性 化 し エンドトキシンがなくてもゲル 化 する いわゆる 疑 陽 性 反 応 が 起 こります このままではエンドトキシンに 特 異 的 と は 言 え ま せ ん 当 社 が 開 発 したリムルス ES は 反 応 系 に 大 過 剰 の(1 3)-β-D- グルカン(カルボキシメチル 化 カードラン) を 共 存 させることにより β- グルカン 自 身 によるライセート 試 薬 の 活 性 化 を 阻 害 し エンドトキシンを 特 異 的 に 検 出 する 方 法 です なぜ 大 過 剰 のβ-グルカンがそれ 自 身 の 反 応 を 阻 害 するかに ついては 図 2 に 示 すとおりβ- グルカンとライセート 試 薬 の 反 応 領 域 が 狭 い 範 囲 である こ と に よ り ま す し か し な が ら エ ンド ト キ シンとリムルスの 反 応 は 低 濃 度 から 高 濃 度 までの 広 い 領 域 で 反 応 し 大 過 剰 のβ- グルカンの 共 存 でも 阻 害 されないことがリムルス E S に 応 用 さ れ て い ま す ( 図 3 ) *:(1 3)-β-D-グルカンはカビ( 真 菌 )やセルロース 系 のろ 過 膜 から 由 来 します CM-カードラン log(mg/ml) エンドトキシン EU/mL エンドトキシン EU/mL A ゲル 化 時 間 (min ) B 図 2 CM-カードランとLALの 反 応 性 図 3 リムルス HS およびリムルス ES を 用 いたエンドトキシン 測 定 に 及 ぼす トキシノメーター の 測 定 時 間 を99 分 に 設 定 し CM-カードランの 影 響 リムルス HS を 用 いて 測 定 した :9 9 分 以 内 にゲル 化 判 定 されなかったもの :ゲル 化 判 定 さ れ た も の A :リムルス HS を 使 用 B:リムルス ES を 使 用 測 定 はトキシノメーター を 用 い て 測 定 時 間 9 9 分 で 行 った :エンドトキシン 希 釈 系 列 :1mg/mLの CM-カードランを 含 むエンドトキシン 希 釈 系 列 8 9

7 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 PYROSTAR ES-Fシリーズ 比 濁 法 ゲル 化 法 エンドトキシン 特 異 的 FDA 承 認 検 体 中 の( 1 3)-β-D-グルカンの 影 響 を 受 けることなく 高 感 度 でエンドトキシンの 特 異 的 な 検 出 が 可 能 米 国 輸 出 品 目 の 最 終 製 品 試 験 に 適 用 可 能 なキットおよび 試 薬 ライセート 試 薬 はFDAより 製 造 承 認 (U.S. License No.1762) 本 品 はロットごとにUSP 標 準 エンドトキシン(USP-RSE)によるゲル 化 感 度 検 定 力 価 (EU/mL)が 表 示 強 固 なゲルが 形 成 されるよう 工 夫 されているため ゲル 化 判 定 が 極 めて 容 易 トキシノメーター による 比 濁 法 では1 ~ 0.001EU/mLまで 広 範 囲 高 感 度 に 検 出 可 能 測 定 試 料 のpHの 影 響 を 受 けにくいため 安 定 したエンドトキシン 測 定 が 可 能 シングルテスト コード No. 品 名 表 示 感 度 (EU/mL) 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) Limulus Amebocyte Lysate 回 用 39,000 PYROSTAR TM ES-F SINGLE TEST 検 量 線 情 報 リ ム ル ス 関 連 試 薬 (PYROSTAR TM ES-F 試 薬 1 検 体 0.2mL 用 25バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1バイアル) マルチテスト Limulus Amebocyte Lysate 回 用 90,000 PYROSTAR TM ES-F MULTI TEST (PYROSTAR TM ES-F 試 薬 5.2mL 用 3バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1バイアル) 比 濁 法 における 添 加 エンドトキシンの 回 収 率 マルチ 単 品 Limulus Amebocyte Lysate 回 用 140,000 PYROSTAR TM ES-F MULTI TEST (PYROSTAR TM ES-F 試 薬 5.2mL 用 5 バイアル) 10 11

8 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 PYROSTAR ES-F/Plate 比 濁 法 エンドトキシン 特 異 的 FDA 承 認 PYROSTAR TM ES-F/Plate は 96 ウェルマイクロプレート 専 用 の 比 濁 法 ライセート 試 薬 です 吸 光 プレートリーダーを 用 いることにより 簡 単 に 短 時 間 で 多 検 体 の 同 時 測 定 が 可 能 です 定 量 範 囲 は EU/mLと 幅 広 く 水 の 試 験 はもちろん 希 釈 が 必 要 な 各 種 薬 剤 の 試 験 にも 適 用 できます 米 国 食 品 医 薬 品 局 (FDA)の 認 可 を 取 得 (U.S. License No.1762) 米 国 輸 出 品 目 における 最 終 製 品 試 験 にも 適 用 可 能 検 体 中 の(1 3)-β-D-グルカンの 影 響 を 受 けず エンドトキシンを 特 異 的 な 検 出 が 可 能 1well 当 たりサンプル 量 50ul で 測 定 できるため 貴 重 なサンプルでも 少 量 で 測 定 可 能 検 量 線 情 報 リ ム ル ス 関 連 試 薬 コード No. 品 名 検 量 範 囲 (EU/mL) 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) Limulus Amebocyte Lysate EU/mL 160 回 用 56,000 PYROSTAR TM ES-F/Plate (PYROSTAR TM ES-F/Plate 試 薬 2.0ml 4バイアル(160 回 用 ) Control Standard Endotoxin(CSE)1バイアル) 比 濁 法 における 添 加 エンドトキシンの 回 収 率

9 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 リムルス ES-Ⅲ 比 濁 法 ゲル 化 法 エンドトキシン 特 異 的 日 本 薬 局 方 生 物 学 的 製 剤 基 準 生 物 学 的 製 剤 特 にアルブミン 製 剤 やアルブミンを 含 有 した 製 剤 に 最 適 な 試 薬 アルブミン 含 有 量 6% から 測 定 可 能 生 物 学 的 製 剤 基 準 の エンドトキシン 試 験 法 で 要 求 される 平 行 線 定 量 法 に 適 用 可 能 な 試 薬 日 本 薬 局 方 収 載 エンドトキシン 試 験 法 に 適 合 したキットおよび 試 薬 日 本 薬 局 方 のエンドトキシン 標 準 品 (JP-RSE)で 検 定 したゲル 化 感 度 (EU/mL)をラベル 表 示 強 固 なゲルが 形 成 されるよう 工 夫 されているので ゲル 化 判 定 が 極 めて 容 易 トキシノメーター 法 ( 比 濁 時 間 分 析 法 )による 高 感 度 分 析 が 可 能 測 定 試 料 のpHの 影 響 を 受 けにくいため 安 定 したエンドトキシン 測 定 が 可 能 専 用 ソフトウェアの 設 定 画 面 専 用 ソフトウェア トキシマスター QC7 または トキシマスター QC7 ER/ES では 生 物 学 的 製 剤 基 準 のエンドトキシン 試 験 法 に 記 載 された 平 行 線 定 量 法 によるデータ 処 理 機 能 をサポートし HSAやインターフェロンのほか 様 々な 生 物 学 的 製 剤 のエンドトキシン 試 験 に 利 用 できるように 設 計 されています 分 散 分 析 の 結 果 と 製 剤 内 在 エンドトキシンの 定 量 値 および 生 データを 画 面 およびプリンタに 出 力 できます リ ム ル ス 関 連 試 薬 マルチ 単 品 コード No. 品 名 表 示 感 度 (EU/mL) 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) カブトガニ 血 球 抽 出 物 ES-III 凍 結 乾 燥 品 回 用 55,000 (リムルス ES- Ⅲ 試 薬 2mL 5 本 ) 実 験 例 ア ル ブ ミ ン 製 剤 ( 2 5 % )に エ ンドト キ シ ン を 添 加 後 注 射 用 水 で 希 釈 し アルブミン 濃 度 6.25 ~ 0.1%までの 測 定 結 果 を 平 行 線 定 量 ( 平 行 線 定 量 法 ソフト LS-MAXMASTER BP1.0 使 用 ) 検 体 の 濃 度 点 数 や 繰 り 返 し 数 など 検 体 設 定 内 容 をチェックするテンプレート チェック 機 能 で 各 種 試 験 項 目 に 準 拠 した 試 験 をサポートします 測 定 レポート 測 定 終 了 後 に 必 要 な 試 験 結 果 を 表 示 プリントアウト 平 行 線 定 量 法 に 準 拠 した レポートを 作 成 できます 図 1 平 行 線 定 量 法 の 実 験 例 平 行 線 定 量 法 とは 一 般 には あるサンプルの 内 在 エンドトキシンを 定 量 するには 検 量 線 法 が 用 いられています この 方 法 では 標 準 品 のエンドトキシンの 各 濃 度 に 対 するゲル 化 時 間 をプロットし 用 量 反 応 直 線 ( 検 量 線 )を 作 成 し これに 希 釈 サンプルによるゲル 化 時 間 を 当 てはめ 希 釈 サンプルの エンドトキシン 量 を 求 めます そして 求 められた 希 釈 サンプル 中 の エンドトキシン 量 に 希 釈 倍 率 を 乗 じて サンプルの 内 在 エンド トキシン 定 量 値 としています この 方 法 には エンドトキシン 濃 度 の 変 化 にともなうゲル 化 時 間 の 変 化 はサンプルでも 標 準 品 でも 同 じ 割 合 であり サンプルをどんな 希 釈 倍 数 (ただしエンドトキシンの 検 出 限 界 内 )で 定 量 しても 求 めら れるサンプル 中 のエンドトキシン 定 量 値 は 同 じになる という 仮 定 が 含 まれます これはすなわち 標 準 希 釈 系 列 の 用 量 反 応 直 線 とサンプ ル 中 のエンドトキシン 濃 度 による 用 量 反 応 直 線 は 平 行 であるという ことを 暗 黙 的 に 認 めていることに 相 当 します しかし 生 物 学 的 製 剤 等 で は 反 応 系 によっては 前 述 の 仮 定 が 正 しく ないこともあります 2 つの 用 量 反 応 直 線 が 平 行 でない 場 合 測 定 に 用 いたサンプルの 希 釈 率 によって 製 剤 の 内 在 エンドトキシン 量 の 計 算 値 が 大 きく 異 なってしまうことになります 平 行 線 定 量 法 は 標 準 品 とサンプルのそれぞれの 希 釈 系 列 による 用 量 反 応 直 線 を 作 成 し 統 計 的 手 法 を 用 いて 標 準 品 とサンプルの 用 量 反 応 直 線 の 平 行 性 を 検 定 することによって 両 用 量 反 応 直 線 が 互 いに 平 行 である 場 合 に サンプル 中 の 被 検 物 質 (エンドトキシン) 量 を 標 準 品 に 対 する 相 対 価 値 として 定 量 する 方 法 です 図 2 検 量 線 法 によるエンドトキシンの 測 定 例 えば 10 倍 に 薄 めたサンプルに 標 準 検 量 線 を 適 用 して 本 当 に 1/10 の 濃 度 値 が 導 出 されるかどうかを 確 認 後 標 準 検 体 に 対 する 相 対 力 価 としてサンプル 中 の 被 検 物 質 の 濃 度 を 求 めます 10 希 釈 1/10 濃 度 となる 場 合 図 3 平 行 平 行 線 定 量 法 によるエンドトキシン 量 の 測 定 10 希 釈 1/10 濃 度 とならない 場 合 平 行 でない 14 15

10 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 リムルス PS シングルテストワコー 比 濁 法 エンドトキシン 特 異 的 日 本 薬 局 方 パイロセップ に 試 料 中 のエンドトキシンを 吸 着 させて 濃 縮 するので 共 存 物 質 の 影 響 を 受 けずに 微 量 のエンドトキシンを 特 異 的 に 測 定 することが 可 能 エンドトキシンはエタノール 中 でもパイロセップ に 吸 着 するため 通 常 のリムルステストでは 検 出 不 可 能 な 脂 溶 性 試 料 でも エタノールに 溶 解 できればエンドトキシンの 測 定 が 可 能 ( 例 : 脂 溶 性 ビタミン 油 脂 ) ライセート 試 薬 は 測 定 に 必 要 な 数 だけ 使 用 できるので 無 駄 がありません 測 定 原 理 パイロセップ ( 水 不 溶 性 担 体 にスペーサーを 介 して ヒスチジンを 結 合 させたアフィニティー 吸 着 体 で エン ドトキシンを 特 異 的 に 吸 着 する)を 充 てんしたキャピラ リ ー カ ラム に 試 料 中 の エ ンドトキシンを 吸 着 させます 試 料 を 洗 い 流 した 後 吸 着 したエンドトキシンをライセ ート 試 薬 と 反 応 させて 試 料 中 のエンドトキシンの 定 量 を 行 い ま す 測 定 はト キ シノメ ー タ ー で 行 います 測 定 原 理 内 容 (1)LAL ESシングル 試 薬 :カブトガニ 血 球 抽 出 物 の 凍 結 乾 燥 品 20バイアル(0.3mL 用 ) ( 2 )パ イ ロ セ ップ 懸 濁 液 (リン 酸 緩 衝 液 に 懸 濁 ) 20バイアル(0.77mL) (3)LAL 溶 解 液 2 バイアル(7mL) (4) 洗 浄 液 4バイアル(11mL) (5) 検 体 希 釈 用 緩 衝 液 4バイアル(10mL) ( 6 )キ ャ ピ ラ リ ー( シ リコ ン チ ューブ 付 き ) 2 0 本 本 品 には 注 射 器 3 方 コ ッ ク 専 用 アダ プ タ ー は 入 っておりません 別 途 PSアクセサリーキット( )をお 求 めください 測 定 方 法 パイロセップ の 模 式 図 応 用 例 A. 透 析 液 中 エンドトキシン 測 定 への 応 用 市 販 の 腹 膜 透 析 液 ダイアニー ル P D 4( バ ク ス タ ー 社 ) 人 工 腎 臓 用 補 液 サ ブ ラ ッド A 及 び B( 扶 桑 薬 品 ) 各 5.0mLにUSP 標 準 エンドトキシンを 添 加 した 後 0.1M 酢 酸 でpHを5 付 近 に 調 製 して 検 体 とし まし た こ れ らのエンドトキシン 濃 度 をパイロセップ 法 で 測 定 し 添 加 エンドトキシンの 回 収 率 を 求 めました パイロセップ 法 を 使 用 することにより 透 析 液 中 のエンドトキシンが 0.1EU/L から 検 出 可 能 となりました 検 量 線 ( 検 体 量 :5.0mL) No. 設 定 濃 度 値 (EU/L) Tg(min.) 平 均 T g( m i n. ) 表 パイロセップ 法 における 腹 膜 透 析 液 補 液 の エンドトキシン 回 収 率 検 体 エンドトキシン エンドトキシン 添 加 量 (EU/L) 回 収 率 (%) ダイアニールPD サブラッドA サブラッドB B. 脂 溶 性 ビタミン 中 のエンドトキシン 測 定 の 応 用 脂 溶 性 ビタミンであるビタミン D E K をエタノール で 溶 解 し USP 標 準 エンドトキシンを 添 加 した 後 パ イロセップ 法 でエンドトキシン 濃 度 を 測 定 添 加 したエンドトキシンの 回 収 率 を 求 めました パイロセップ 法 を 用 いることにより これまでリム ルス 試 薬 では 測 定 不 可 能 だった 脂 溶 性 ビタミン 中 の エンドトキシンが 測 定 可 能 となりました D E K エンドトキシンは 終 濃 度 が 0.05EU/mLとなるように 添 加 その 他 の 応 用 例 エタノー ル シ リコ ン オイル 大 豆 油 オ リ ーブ 油 ス テ ア リン 酸 卵 黄 レ シ チ ン オイルアジュバンドのワクチン アルブミン 製 剤 凝 固 因 子 製 剤 ( 第 8 因 子 ) インターフェロン 製 剤 アンチスロンビンIII 製 剤 免 疫 グ ロ ブ リ ン 製 剤 そ の 他 エタノー ル に 溶 解 で きる 試 料 は 測 定 可 能 表 (min ) EC-6 濃 度 値 (EU/L) パイロセップ 法 におけるエタノール 溶 解 脂 溶 性 ビタミン のエンドトキシン 回 収 率 ビタミン 濃 度 エンドトキシン (mg/ml) 回 収 率 (%) リ ム ル ス 関 連 試 薬 パイロセップ 懸 濁 液 を 軽 く 振 り 混 ぜながら 吸 引 し 内 容 液 全 量 をキャピラリーカラムに 充 てんする パイロセップ を 充 てんしたキャピラリー カ ラム に 試 料 を 吸 引 す る エ ンドト キ シ ン は 吸 着 さ れ 共 存 物 質 は パイロセップ を 素 通 りして 除 かれます 試 料 の p H は 3 7に イオン 強 度 は 0.05 以 下 になるようにしてください 試 料 がリム ルス 反 応 に 阻 害 などの 影 響 を 与 える 場 合 は 洗 浄 液 を 通 して 洗 浄 します シングルテスト コード No. 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) リムルス PS シングルテストワコー 20 回 用 98,000 アクセサリーキット PS アクセサリーキット 1 セット 20,000 LAL ES 試 薬 をパイロセップ ゲルと 一 緒 に LAL ES 試 薬 が 入 っていた 試 験 管 にゆっくり 排 出 する 試 料 を 吸 引 したキャピラリーカラムに LAL 溶 解 液 で 溶 解 したLAL ES 試 薬 を 吸 引 する ( 内 容 ) 2 0 m L 注 射 器 ( 針 なし) 1 2 本 三 方 コ ッ ク R 型 1 2 個 専 用 アダ プ タ ー 2 0 個 目 玉 クリップ 12 個 FALCON 2058ポリスチレンチューブ(5mL) 25 本 FALCON 2057ポリスチレンチューブ(14mL) 25 本 試 験 管 立 て(50 穴 ) 1 個 手 順 書 1 部 16 17

11 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 リムルス J シリーズ 比 濁 法 ゲル 化 法 日 本 薬 局 方 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 リムルス F シリーズ 比 濁 法 ゲル 化 法 FDA 承 認 日 本 薬 局 方 収 載 エンドトキシン 試 験 法 に 適 合 したキットおよび 試 薬 ライセート 試 薬 には 日 本 薬 局 方 標 準 エンドトキシン(JP-RSE)によるゲル 化 感 度 検 定 力 価 (EU/mL)が 表 示 強 固 なゲルが 形 成 されるためゲル 化 転 倒 法 による 判 定 が 容 易 です (1 3)-β-D- グルカンにも 反 応 米 国 輸 出 品 目 の 最 終 製 品 試 験 に 適 用 可 能 なキットおよび 試 薬 ライセート 試 薬 はFDAより 製 造 承 認 (U.S. License No.1197) 本 品 はロットごとにUSP 標 準 エンドトキシン(USP-RSE)によるゲル 化 感 度 検 定 力 価 (EU/mL)が 表 示 強 固 なゲルが 形 成 されるためゲル 化 転 倒 法 による 判 定 が 容 易 です ( 1 3)-β-D- グルカンにも 反 応 リ ム ル ス 関 連 試 薬 シングルテスト コードNo. 品 名 表 示 感 度 ( E U / m L ) 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) リムルス HS-Tシングルテストワコー 回 用 30,000 (リムルス HS-T 試 薬 1 検 体 0.2mL 用 25バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1バイアル) マルチテスト コードNo. 品 名 表 示 感 度 ( E U / m L ) 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) リムルス HS-Fテストワコー 回 用 24,000 (リムルス F 試 薬 5.2mL 用 1バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1バイアル) マルチテスト リムルス Jテストワコー 回 用 23, リムルス HS-Jテストワコー 回 用 24,000 (リムルス J/HS-J 試 薬 5.2mL 用 1バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1バイアル) マルチ 単 品 カブトガニ 血 球 抽 出 物 F 回 用 18, カブトガニ 血 球 抽 出 物 HS-F 回 用 19,000 (リムルス F/HS-F 試 薬 5.2mL 用 1バイアル) マルチ 単 品 カブトガニ 血 球 抽 出 物 J 回 用 18, カブトガニ 血 球 抽 出 物 HS-J 回 用 19,000 (リムルス J/HS-J 試 薬 5.2mL 用 1バイアル) ゲル 化 法 FDA 承 認 ゲル 化 法 日 本 薬 局 方 シングルテスト ゲル 化 法 専 用 リムルス F シングルテストワコー 回 用 26, リムルス HS-Fシングルテストワコー 回 用 30,000 (リムルス F/HS-F 試 薬 1 検 体 0.2mL 用 25バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1バイアル) シングルテスト ゲル 化 法 専 用 リムルス J シングルテストワコー 回 用 26, リムルス HS-J シングルテストワコー 回 用 30,000 (リムルス J/HS-J 試 薬 1 検 体 0.2mL 用 25 バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1 バイアル) 18 19

12 エンドトキシン 測 定 用 試 薬 リムルスカラー KY シリーズ エンドトキシン 測 定 用 試 薬 Endochrome-K TM チ ャ ールス リバ ー ラボ ラトリーズ CHARLES RIVER LABORATORIES 比 色 法 エンドトキシン 特 異 的 日 本 薬 局 方 比 色 法 FDA 承 認 ライセート 試 薬 と 発 色 合 成 基 質 が 一 体 製 剤 されており 試 薬 溶 解 後 (シングルテストは 試 料 を 混 合 する だけ) 試 料 と 混 合 するだけで 反 応 を 開 始 させることが 可 能 溶 解 後 の 試 薬 の 安 定 性 にすぐれ ブランクの 反 応 性 が 低 く 抑 制 検 体 中 の( 1 3)- β - D - グ ル カ ン の 影 響 を 受 け ず エ ンドトキシンを 特 異 的 に 検 出 可 能 検 量 範 囲 が 広 く ほとんどの 場 合 試 料 の 希 釈 が 不 要 ( 検 出 限 界 がシングルタイプは EU/mL) 高 感 度 のため 希 釈 法 により 試 料 中 の 反 応 阻 害 促 進 物 質 の 影 響 を 低 減 トキシノメーター ET-6000 他 (ET-301 BL2 以 降 の 機 種 )による 定 量 が 可 能 また マイクロプレート リーダーによる 測 定 も 可 能 原 理 エンドトキシンによる 本 試 薬 の 発 色 機 構 は ライセート 中 に 含 まれるセリンプロテアーゼ 前 駆 体 が 順 次 活 性 化 され 最 後 に 凝 固 酵 素 が 黄 色 発 色 合 成 基 質 を 水 解 し 発 色 基 (pna)が 遊 離 して 黄 色 の 発 色 を 呈 する 米 国 輸 出 品 目 の 最 終 製 品 試 験 に 適 用 可 能 なキットおよび 試 薬 ライセート 試 薬 はFDA 製 造 承 認 ライセート 試 薬 と 発 色 合 成 基 質 が 一 体 製 剤 されており 試 薬 溶 解 後 試 料 と 混 合 するだけで 反 応 を 開 始 させることが 可 能 ライセート 試 薬 + CSE とライセート 試 薬 のみの2 種 類 の 商 品 形 態 が 選 択 可 能 検 量 範 囲 が 広 く ほ と ん ど の 場 合 試 料 の 希 釈 が 不 要 高 感 度 のため 希 釈 法 に より 試 料 中 の 反 応 阻 害 促 進 物 質 の 影 響 を 低 減 トキシノメーター マイク ロ プ レ ートリーダーによる 測 定 が 可 能 (1 3)-β-D- グルカンにも 反 応 リ ム ル ス 関 連 試 薬 原 理 に 基 づいています (エンドトキシン 特 異 的 検 出 の 原 理 は 9 ページ 参 照 ) プレートリーダー 法 トキシノメーター 法 エンドトキシン リポ 多 糖 LPS C 因 子 B 因 子 C 因 子 B 因 子 凝 固 酵 素 前 駆 体 ( 内 の 各 因 子 は 活 性 型 を 示 す) トキシノメーター 法 シングルテスト 凝 固 酵 素 発 色 合 成 基 質 リムルスカラー 試 薬 の 発 色 カスケード 機 構 発 色 基 pna Boc-Thr-Gly-Arg-pNA コード No. 品 名 検 量 範 囲 (EU/mL) 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) マルチテスト コード No. メーカーコード 品 名 検 量 範 囲 (EU/mL) 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) R1708K Endochrome-K test kit 96,000 (Endochrome- K 試 薬 3.2mL 用 8 バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン (CSE) 2 バイアル LAL 溶 解 液 30mL 3 本 ) R1710K Endochrome-K tests 110,000 (Endochrome- K 試 薬 3.2mL 用 10 バイアル ) R17100K Endochrome-K tests 980,000 (Endochrome- K 試 薬 3.2mL 用 100 バイアル) リムルスカラー KY シングルテストワコー 回 用 50,000 (リムルスカラー 試 薬 1 検 体 0.2mL 用 25バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1バイアル) トキシノメーター マイクロプレートリーダー プレートリーダー 法 トキシノメーター 法 マルチテスト リムルスカラー KY テストワコー 回 用 54,000 (リムルスカラー 試 薬 2mL 用 3バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)1バイアル) プレートリーダー 法 で120 回 用 (1well 当 たり50μL) トキシノメーター マイクロプレートリーダー エンドトキシン 濃 度 (EU/mL) エンドトキシン 濃 度 (EU/mL) 活 性 化 時 間 (min.) 活 性 化 時 間 (min.) 活 性 化 時 間 (min.) 活 性 化 時 間 (min.) エンドトキシン 濃 度 ( E U / m L ) エンドトキシン 濃 度 ( E U / m L ) 20 21

13 エンドトキシン 試 験 関 連 試 薬 ペプチドグリカンおよび β- グルカン 検 出 用 SLP 試 薬 セット Silkworm Larvae Plasma 試 薬 バ ッ フ ァ ー 各 種 標 準 品 コードNo. 品 名 規 格 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) Mトリス- 塩 酸 緩 衝 液 (PH7.3) LAL 溶 解 用 5mL 10 12, コントロールスタンダードエンドトキシン( C S E ) E.coli UKT-B 株 製 500ng 6, USP 標 準 エンドトキシン E.coli 0113:H10 株 10000EU 照 会 エンドトキシン 標 準 品 E.coli UKT-B 株 製 照 会 ロットにより 変 動 乾 熱 滅 菌 バリデーション 用 試 薬 エンドトキシンインジケーター エンドトキシンインジケーター チ ャ ールス リバ ー ラボ ラトリーズ CHARLES RIVER LABORATORIES エンドトキシンインジケーターは 乾 熱 滅 菌 のバリデーションやモニタリング 用 として 開 発 されました 乾 熱 滅 菌 工 程 の 有 効 性 は 乾 熱 滅 菌 前 後 のエンドトキシン 値 を 測 定 することで 確 認 できます コード No. メーカーコード 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) EVV2K エンドトキシンインジケーター2,000EU 12 バイアル 32, EVV10K エンドトキシンインジケーター 10,000EU 12 バイアル 32, EVV100K エンドトキシンインジケーター100,000EU 12 バイアル 32, EVV1M エンドトキシンインジケーター 1million EU 1バイアル 8, EVV2.5M エンドトキシンインジケーター2.5million EU 1バイアル 12, EVV10M エンドトキシンインジケーター 10million EU 1バイアル 12,500 原 理 カイコ(Bombyx morui)の 体 液 中 にはフェノール 酸 化 酵 素 前 駆 体 (ProPO)カスケードと 呼 ばれる 生 体 防 御 機 構 が 存 在 し ペプチドグリカン(PG)および(1 3)-β-Dグルカン(β- グルカン)によって 反 応 が 開 始 され 最 終 的 にフェノール 酸 化 酵 素 (PO)が 活 性 化 されます PO の 活 性 化 の 機 構 は 複 数 のセリンプ ロテアーゼの 活 性 化 を 含 むカスケード 機 構 であると 推 測 されておりますが 現 在 のところ 十 分 には 解 明 され て お り ま せ ん こ の カ ス ケ ード 機 構 は 異 物 侵 入 の 際 に 昆 虫 体 内 で 認 められるメラニン 形 成 に 重 要 な 役 割 を 果 していると 考 えられております SLP 試 薬 は カイコの 体 液 を 無 菌 的 に 採 取 調 製 した ProPOカスケードの 因 子 をすべて 含 んだ 凍 結 乾 燥 品 です 本 試 薬 は PG およびβ- グルカンによって 活 性 化 され 基 質 剤 に 含 まれるDOPA(L-3,4-ジヒドロキシ フェニルアラニン)を 酸 化 し メラニン 色 素 を 生 成 します PG はほとんどの 細 菌 の 細 胞 壁 に β- グルカン も 多 くの 真 菌 の 細 胞 壁 に 認 められる 成 分 であることから 生 成 したメラニン 色 素 を 指 標 として 各 種 微 生 物 の 検 出 が 可 能 です SLP 試 薬 の 活 性 化 機 構 は 図 1のように 考 えられてお り ま す す な わ ち P G ま た は β - グ ル カンがそれぞれ の 認 識 タンパク(PGRP およびβGRP)と 結 合 することにより ProPOカスケードの 反 応 が 開 始 され 最 終 的 にPOが 活 性 化 されます 活 性 化 したPO によって 基 質 剤 中 に 含 まれるDOPA が 酸 化 さ れ 結 果 として 黒 色 の メラニン 色 素 が 生 じます カブトガニ 血 球 抽 出 物 (ライセート 試 薬 )で 検 出 することのできるエンドトキシン はSLPのカスケード 機 構 を 活 性 化 しませんが ライセート 試 薬 では 検 出 できないPGをSLP 試 薬 で 検 出 する こ と が で き ま す( 図 1 ) SLP 試 薬 は 各 種 細 菌 由 来 の PG およびβ-1 3- グルコシド 結 合 を 持 つβ- グルカンに 強 く 反 応 しますが グラム 陰 性 菌 の 細 胞 壁 成 分 であるリポ 多 糖 (エンドトキシン)にはほとんど 反 応 しません リ ム ル ス 関 連 試 薬 (1 3)-β-D - グルカン ペプチドグリカン βgrp PGRP の 因 子 Pro-PPAE PPAE ProPO PO DOPA ドーパクロム メラニン 図 1 カイコ 血 液 のフェノール 酸 化 酵 素 前 駆 体 カスケード 22 23

14 SLP 試 薬 セット PG はグラム 陽 性 菌 のみならずグラム 陰 性 菌 にも 存 在 するため SLP 試 薬 は グラム 陽 性 陰 性 にかかわら ず 広 く 一 般 の 細 菌 に 反 応 します また 真 菌 由 来 のβ-グルカンにも 反 応 することから SLP 試 薬 は 微 生 物 全 般 に 反 応 すると 考 えられます これらのことにより エンドトキシン 及 びβ- グルカンに 反 応 するライセート 試 薬 とSLP 試 薬 の 併 用 で 検 体 中 の 微 生 物 の 種 類 を 予 測 できる 可 能 性 が 考 えられます 1. 高 感 度 でペプチドグリカンおよびβ- グルカンを 測 定 可 能 2. 特 別 な 測 定 装 置 を 必 要 としない 目 視 判 定 法 による 測 定 可 能 3.マイク ロ プ レートリーダーや 並 列 型 比 濁 時 間 分 析 装 置 トキシノメーター を 用 いることにより 精 度 よく 高 感 度 にペプチドグリカンおよびβ- グルカンの 定 量 が 可 能 4. 本 品 は 冷 蔵 ( )で 1 8 か 月 以 上 安 定 用 途 1.ペ プ チド グ リ カ ン の 構 造 活 性 相 関 生 合 成 代 謝 病 因 的 意 義 の 解 明 2. 水 質 汚 染 の 指 標 3. 人 工 透 析 液 の 微 生 物 汚 染 対 策 4. 医 薬 品 生 物 製 剤 遺 伝 子 工 学 製 品 な ど の 菌 体 成 分 混 入 の 検 出 5. 昆 虫 の 生 体 防 御 反 応 機 構 の 解 明 内 容 SLP 試 薬 セット 1.SLP 試 薬 1バイアル 3mL 用 感 度 : 目 視 判 定 法 (30 1 時 間 反 応 )によるエンドポイント(PG 及 びβ- グルカン)をロット ごとに 表 示 2. 基 質 剤 1バイアル 3mL 用 DOPAを 含 有 3. 基 質 溶 解 液 1バイアル 3mL 用 グッド 緩 衝 液 を 含 有 SLP-HSシングル 試 薬 セット 1.SLP-HS(Silkworm Larvae Plasma High Sensitive) 0.2mL 用 20バイアル 感 度 :1 0 p g / m L(PG) 1pg/mL(カードランアルカリ 溶 解 液 ) (トキシノメーター ( 3 0 )で 分 以 内 に 検 出 ) 2.SLP-Diluent 1.0mL 用 20バイアル 3.Standard(Digested Peptidoglycan from S. aureus) 0.5mL 用 1バイアル 関 連 商 品 コード No. 品 名 規 格 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) カードラン(*1) 生 化 学 用 1g 1, ペプチドグリカン(*2) 生 化 学 用 2mL 5,400 (*1): (1 3)-β-D-グルカン (*2): Micrococcus luteus 由 来 のペプチドグリカン 1μg/mLを 含 有 測 定 方 法 SLP を 用 いたPG 並 びにβ- グルカンの 測 定 法 として トキシノメーター 法 マイクロプレートリーダー 法 目 視 判 定 法 があります トキシノメーター およびマイクロプレートリーダーでは 活 性 化 に 伴 って 生 じる 色 素 量 を 吸 光 度 変 化 とし て 捉 え 吸 光 度 があらかじめ 設 定 したしきい 値 に 達 するまでの 反 応 時 間 を 活 性 化 時 間 (Ta またはonset t i m e )とし T a を 指 標 に SLP 活 性 化 物 質 (PG およびβ- グルカン)を 定 量 します こ の 原 理 は ト キ シノメ ー タ ー を 用 いてエンドトキシンを 測 定 する 場 合 と 同 様 です( 図 2 ) ト キ シノメ ー タ ー 法 を 用 いた 測 定 例 を 図 4 に マイクロプレートリーダーを 用 いた 原 理 ( 図 3)と 測 定 例 を 図 5に 示 します 目 視 判 定 法 では 一 定 時 間 反 応 させた 後 反 応 液 の 色 調 の 変 化 を 観 察 することにより 判 定 を 行 ないます この 方 法 は ライセート 試 薬 におけるゲル 化 転 倒 法 と 同 様 の 方 法 ですが 反 応 液 の 色 が 変 化 するため 判 定 が 容 易 であること 振 動 の 影 響 を 受 けないこと 等 で 優 れています 図 2 測 定 原 理 : 測 定 開 始 からR(t)が Rth になるまでのTaを 測 定 します ( T h: 判 定 し き い 値 ) 図 3 測 定 原 理 : 測 定 開 始 から OD = 0.01 に 達 する 時 間 を 測 定 リ ム ル ス 関 連 試 薬 価 格 コード No. 品 名 規 格 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) SLP 試 薬 セット 微 生 物 検 出 用 3mL 用 39, SLP-HS シングル 試 薬 セット 微 生 物 検 出 用 20 回 用 51,000 図 4 トキシノメーターR 法 図 5 マイクロプレートリーダー 法 24 25

15 LPS(リポポリサッカリド) エンドトキシン 検 出 用 抽 出 液 L P S( リポ ポ リ サ ッ カ ラ イド リポ 多 糖 内 毒 素 )は グ ラム 陰 性 菌 の 外 膜 に 存 在 して い る 成 分 で す 様 々 な 生 物 活 性 発 現 や 細 胞 間 コミュニケーションに 大 きな 役 割 を 果 たしており LPS を 用 いた 自 然 免 疫 研 究 生 体 防 御 機 能 の 研 究 が 盛 んに 行 われています 精 製 法 により2 種 類 の 製 品 を 用 意 フェノール 抽 出 品 : Westphal 法 (フェノール 抽 出 法 )による 精 製 品 超 遠 心 品 : フェノール 抽 出 品 をさらに 超 遠 心 で 2 回 精 製 した 製 品 医 療 用 具 等 のエンドトキシン 試 験 に 最 適 医 療 用 具 等 の エ ンドトキ シン 試 験 に は 従 来 水 や 生 理 食 塩 水 に よる 抽 出 法 が 用 いられていますが これら の 方 法 では 必 ずしも 有 効 に 抽 出 されていないことが 判 ってきまし た 本 品 は 人 血 清 ア ル ブ ミ ン( H S A )を 含 有 したエンドトキシンフリーの 抽 出 液 (20 倍 濃 縮 液 )で 水 や 生 理 食 塩 水 では 抽 出 できないエンドトキシンも 抽 出 することが 可 能 です 特 に 血 液 やたんぱく 質 を 含 有 した 液 体 と 接 触 する 用 具 のエンドトキシン 試 験 に は 本 品 の 使 用 を 推 奨 し ま す リ ム ル ス 関 連 試 薬 Escherichia coli LPS フェノール 抽 出 品 コード No. 品 名 規 格 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細 胞 生 物 学 用 25mg 14, Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細 胞 生 物 学 用 25mg 14, Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細 胞 生 物 学 用 25mg 14, Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細 胞 生 物 学 用 25mg 14,000 Escherichia coli LPS 超 遠 心 品 Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細 胞 生 物 学 用 5mg 18, Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細 胞 生 物 学 用 5mg 19, Lipopolysaccharide, from E.coli O86a 細 胞 生 物 学 用 5mg 20, Lipopolysaccharide, from E.coli O103 細 胞 生 物 学 用 5mg 17, Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細 胞 生 物 学 用 5mg 18, Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細 胞 生 物 学 用 5mg 17, Lipopolysaccharide, from E.coli O157 細 胞 生 物 学 用 5mg 19,000 Campylobacter jejuni LPS フェノール 抽 出 品 Lipopolysaccharide, from C. jejuni Penner O:19 細 胞 生 物 学 用 5mg 17,000 Endotoxin(mEU/product) Endotoxin(mEU/product) Product A (Pipet) Water 0.05% TEA 本 品 Solution for Extraction Product C (Pipet) 各 種 抽 出 液 を 用 いた 市 販 滅 菌 済 用 具 のエンドトキシン 汚 染 検 出 Endotoxin(mEU/product) Endotoxin(mEU/product) Product B (Pipet) Water 0.05% TEA 本 品 Solution for Extraction Product D (Serum tube) Helicobacter pylori LPS 超 遠 心 品 Lipopolysaccharide, from H. pylori CA2( 胃 がん 患 者 由 来 菌 ) 細 胞 生 物 学 用 2mg 30, Lipopolysaccharide, from H. pylori GU2( 胃 潰 瘍 患 者 由 来 菌 ) 細 胞 生 物 学 用 2mg 30,000 Water 0.05% TEA 本 品 Solution for Extraction Water 0.05% TEA 本 品 Solution for Extraction Porphyromonas gingivalis LPS 超 遠 心 品 Lipopolysaccharide, from P. gingivalis ATCC mg 35,000 Salmonella LPS 超 遠 心 品 Lipopolysaccharide, from S. minnesota 1114 細 胞 生 物 学 用 5mg 18, Lipopolysaccharide,from S. minnesota R595 (Re mutant) 細 胞 生 物 学 用 5mg 18,000 Proteus LPS フェノール 抽 出 品 Lipopolysaccharide, from P.vulgaris OX2 細 胞 生 物 学 用 25mg 15, Lipopolysaccharide, from P.vulgaris OX19 細 胞 生 物 学 用 25mg 15, Lipopolysaccharide, from P.mirabilis OXK 細 胞 生 物 学 用 25mg 15,000 Berdetella pertussis Tohama 超 遠 心 品 Lipopolysaccharide, from B. pertussis Tohama 細 胞 生 物 学 用 2mg 35,000 使 用 方 法 1.エンドトキシン 検 出 用 抽 出 液 の 調 製 本 品 1バイアル(10mL)をエンドトキシンフリー 水 190mLと 混 合 し 20 倍 希 釈 して 使 用 します 2. 使 用 方 法 エンドトキシン 検 出 用 抽 出 液 を 一 定 量 とり 用 具 等 の 検 体 を 浸 漬 または 検 体 に 添 加 し 軽 く 攪 拌 した 後 約 1 時 間 室 温 で 放 置 します 再 び 軽 く 攪 拌 し 抽 出 されたエンドトキシンを 測 定 します コードNo. 品 名 規 格 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) エンドトキシン 検 出 用 抽 出 液 (20 倍 濃 縮 液 ) エンドトキシン 検 出 用 10mL 4 15,000 参 考 文 献 1 ) 井 上 勝 二 高 岡 文 土 谷 正 和 松 浦 脩 二 : 日 本 動 物 実 験 代 替 法 学 会 第 6 回 大 会 要 旨 集 1 1 0( ) 2 ) 井 上 勝 二 原 田 和 明 土 谷 正 和 松 浦 脩 二 : 日 本 防 菌 防 黴 学 会 第 2 1 回 大 会 要 旨 集 4 4( ) 26 27

16 エンドトキシン 除 去 フィルター 選 択 的 エンドトキシン 除 去 用 クロマトグラフィー 充 填 剤 アクロディスクシリンジフィルター 日 本 ポール( 株 ) セルファイン ET クリーン J N C( 株 ) 優 れた 流 量 特 性 と 他 社 デバイスより 高 いろ 過 処 理 量 低 タンパク 吸 着 性 でサンプルロスが 最 少 化 γ 線 滅 菌 により 残 留 EOG による 潜 在 的 汚 染 を 排 除 水 溶 液 中 のバイオバーデンとパイロジェンの 除 去 性 能 を 高 めたポジダインフィルターを 使 用 仕 様 ポアサイズ 0.2μm 材 質 フィルター ポジダイン( 正 荷 電 ナイロン6,6) ハウジング ポリプロピレン 接 続 メス ルアー ロック( 入 口 ) オス ルアースリップ( 出 口 ) 有 効 ろ 過 面 積 2.8cm 2 許 容 使 用 温 度 60 (210kPa) アクロディスクシリンジフィルター コード No. 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) P-L 4908アクロディスクシリンジフィルター(ポジダイン0.2μM) 50 個 20,000 セルファイン シリーズの 選 択 的 エンドトキシン 除 去 ゲル ETクリーン は セルロース 粒 子 に 安 全 性 の 高 いε- ポリリジンを 共 有 結 合 で 固 定 化 した 工 業 的 スケールでの 使 用 が 可 能 な 新 しいタイプのエンドトキシン 除 去 剤 です セルロースベースゲルの 水 酸 基 にスペーサーを 介 し リガンドのアミノ 基 が 共 有 結 合 され アルカリ 処 理 においても 高 い 耐 久 性 エンドトキシンのみを 吸 着 して 目 的 とするタンパク 質 は 通 過 させる 高 い 選 択 性 リガンドであるε-ポリリジンはStreptomyces albulusが 発 酵 生 産 する リジンのホモポリマーで 食 品 添 加 物 としても 幅 広 く 利 用 されており 安 全 性 が 高 い テニクニカルデータ 品 名 粒 子 サイズ(μm) 吸 着 容 量 (μg/ml) 排 除 限 界 分 子 量 ET クリーン S <10 3 ET クリーン L 各 種 タンパクを 汚 染 しているエンドトキシンの 除 去 をバッチ 法 で 行 った 結 果 Removal of LPS from a Protein Solution by ET-Clean 周 辺 機 器 エンドトキシン 除 去 フィルター ムスタング E アクロディスク 水 バッフ ァ ー 中 性 糖 液 一 部 の 生 物 溶 液 か ら エ ンドト キ シ ン を 除 去 可 能 USP 生 物 学 的 安 全 性 試 験 In Vivo <88>に 適 合 γ 線 滅 菌 済 み 仕 様 ポアサイズ 0.2μm 材 質 フィルター ムスタング E ハウジング ポリプロピレン 接 続 メス ルアー ロック( 入 口 ) オス ルアースリップ( 出 口 ) メンブレンベッドボリューム 0.12m L 許 容 使 用 温 度 ( M P a ) 3 8 ( M P a ) 標 準 的 な 差 圧 1mL/ 分 時 0.07bar(7kPa 1psi) 以 下 日 本 ポール( 株 ) Sample solution ET-Clean S ET-Clean L (μ=0.05, ph7.0) (μ=0.40, ph7.0) Protein pi LPS conc. Remain Recovery of Remain Recovery of in protein LPS Protein LPS Protein solution (pg/ml) (%) (pg/ml) (%) (pg/ml) BSA <10 97 γ-globulin <10 97 CytochromeC <10 98 コード No. 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) セルファイン ETクリーンS 10mL 23, セルファイン ETクリーンL 10mL 23, セルファイン ETクリーンS 50mL 43, セルファイン ETクリーンL 50mL 43, セルファイン ETクリーンS 500mL 257, セルファイン ETクリーンL 500mL 257, ミニカラムセルファイン ETクリーンS 1mL 5 22,700 ムスタング E アクロディスク コード No. 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) MSTG25E3 ムスタング Eアクロディスク 10 個 19, ミニカラムセルファイン ETクリーンL 1mL 5 22, ミニカラムセルファイン ETクリーンS 5mL 1 22, ミニカラムセルファイン ETクリーンL 5mL 1 22,

17 エンドトキシン 試 験 関 連 器 材 バイオクリーンチップ ワコー シリーズ エンドトキシン 試 験 機 材 サーモステーション TS-37S/24 エンドトキシンフリー (ご 要 望 により 試 験 成 績 書 を 発 行 ) 個 別 包 装 包 装 フィルムから 粉 塵 が 出 ないのでクリーンルームで 安 心 して 使 用 可 能 γ 線 照 射 済 み コード No. 品 名 規 格 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) バイオクリーンチップワコー 200(エンドトキシンフリー) 200μL 100 本 3, バイオクリーンチップワコー 1000(エンドトキシンフリー) 1000μL 100 本 3, バイオクリーンチップワコー エクステンド S(エンドトキシンフリー) 200μL 100 本 6,000 局 方 エンドトキシン 試 験 法 のゲル 化 法 に 最 適 なエンドトキシン 試 験 法 のゲル 化 転 倒 法 に 最 適 な 電 子 式 ドライバスです 37 に 設 定 済 みで 面 倒 な 温 度 調 整 やキャリブレーションの 作 業 が 不 要 当 社 シングルタイプのライセート 試 薬 にジャストフィット 軽 量 コンパクトで 持 ち 運 びが 簡 単 電 源 さえあればどこでも 設 置 可 能 最 大 24 検 体 まで 同 時 に 試 験 可 能 測 定 温 度 は 一 目 で 分 かるLEDデジタル 表 示 保 温 のために 水 を 必 要 としないドライタイプ ゲル 化 転 倒 法 ヒートブロック 方 式 なので 温 度 が 均 一 で 振 動 やコンタミを 気 にせずにエンドトキシン 試 験 が 実 施 可 能 直 径 12mm 75mm の 試 験 管 中 でライセート 試 薬 と 試 料 を 混 合 し 分 間 反 応 させた 後 これを 180 度 転 倒 させ ゲル 形 成 の 有 無 を 判 定 します エンドトキシン 試 験 関 連 器 材 コード No. 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) サーモステーション TS-37S/24 1 台 180,000 エンドトキシン 試 験 用 試 験 管 アルミキャップ 及 びホールピペット コード No. 品 名 規 格 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) リムルステストチューブ-S(アルミキャップ 付 ) φ12 75mm 10 本 8 16, リム ルステストチューブ - S( エンドトキシンフリー) φ12 75mm 100 本 12, アルミキャップ - S( エンドトキシンフリー) φ mm 10 個 10 11, ホール ピペット( エンドトキシン フリー) 5.2mL 用 5 本 20,000 ピペッター コードNo. 品 名 可 変 ステップ 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) フィンピペット F2 2 20μL 0.1μL 1 本 29, フィンピペット F μL 1.0μL 1 本 29, フィンピペット F μL 1.0μL 1 本 29,800 スターターキット コード No. 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) エンドトキシン 試 験 スターターキット 1セット 65,000 ( 内 容 ) フィンピペットデジタル20 200μL 1 フィンピペットデジタル μL 1 バイオクリーンチップ ワコー 200(100 本 入 ) 1 バイオクリーンチップ ワコー 1000(100 本 入 ) 1 試 験 管 立 て(50 穴 ) 1 な お 本 キットには 測 定 用 試 薬 は 含 まれておりません エンドトキシン 試 験 機 材 VIAL TUBE MIXER VTM-252/VIAL ADAPTER SASAETE30 スイッチボタンを 押 すだけで 簡 単 に 攪 拌 攪 拌 速 度 の 変 更 が 可 能 専 用 のアダプター(SASAETE30)を 使 用 す る こ と で 長 時 間 の 攪 拌 も 手 で 支 え る 必 要 なし 平 板 アタッチメントを 標 準 付 属 多 数 の 試 験 管 マイクロチューブのミキシングが 容 易 仕 様 型 名 VTM-252 スイッチ 方 式 手 動 - 自 動 可 変 定 格 電 力 100V-40W 50/60Hz 回 転 数 (rpm) MAX2,500(50Hz)/ 可 変 重 量 (kg) 2.0 外 寸 法 (mm) W105 D130 H160 コード No. 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) バイアルチューブミキサー VTM 台 40, バイアルチューブミキサー VTM-252(アダプター 付 ) 1 台 52,000 周 辺 機 器 / 機 器 30 31

18 エンドトキシン 測 定 システム トキシノメーター ET-6000 操 作 性 拡 張 性 に 優 れたパソコン 制 御 タイプの 新 型 トキシノメーター システムです 検 体 数 に 応 じモジュールの 増 設 が 可 能 なため 少 検 体 から 多 検 体 まで 幅 広 い 分 野 の エンドトキシン 測 定 に 適 用 可 能 です さらに 37 /30 の 温 度 切 り 替 えにより (1 3)- β-d-グルカンやペプチドグリカンの 試 験 研 究 にもご 利 用 いただけます ER/ES 対 応 のみに 付 加 される 機 能 電 子 署 名 機 能 制 限 オーディットトレイル( 監 査 証 跡 ) ライセート 試 薬 の 選 択 により 同 一 シス テムで 比 濁 法 比 色 法 ゲ ル 化 法 の 3 法 に 適 応 1モジュールで16 検 体 最 大 8モジュール 増 設 で 128 検 体 の 同 時 測 定 が 可 能 日 本 薬 局 方 FDAガイドライン 準 拠 のソフトウェアを 標 準 搭 載 厚 生 労 働 省 ER/ES 指 針 FDA21 CFR Part11 対 応 のシステムも 準 備 専 用 ソフトウェア トキシマスター QC7 または トキシマスター QC7 ER/ES を 標 準 装 備 しています プロトコル 設 定 タイムコース 検 量 線 測 定 レポート 各 種 試 験 項 目 に 準 拠 した 処 理 プロトコル の 設 定 登 録 デ ー タ 解 析 や ル ー チ ン 作 業 の 省 力 化 をサポートします リアルタイムに 全 ポジションのタイム コースを 確 認 試 験 結 果 を 予 測 し 次 の 工 程 への 対 応 を 早 めることが できます パソコンは メーカーや 機 種 等 が 実 際 と 異 なる 場 合 がございます 測 定 終 了 後 に 必 要 な 試 験 結 果 を 表 示 プリ ントアウト 日 本 薬 局 方 や FDA ガイドラインに 準 拠 したレポートを 作 成 できます 電 子 署 名 によるログイン 機 能 で 登 録 ユーザー のみの 利 用 に 制 限 記 録 と 署 名 をデータ ベース 内 でリンクさせることで データの 不 正 改 ざんや 偽 装 を 防 ぎます システム 使 用 やアクセスの 許 可 範 囲 を 複 数 の 権 限 グ ル ープ と し て 管 理 登 録 ユ ー ザ ー は 所 属 するグループに 許 可 された 範 囲 内 で 機 能 を 使 用 できます 主 要 な 操 作 内 容 は コンピュータが 自 動 生 成 するタイムスタンプ 付 きで 記 録 データ 変 更 時 には 上 書 きされずに 新 たなリビジョンとして 記 録 登 録 されます トキシノメーター の 測 定 原 理 と 測 定 本 装 置 はエンドトキシンとライセート 試 薬 との 反 応 を 430nm にお ける 透 過 光 量 の 変 化 として 捉 えるものです 透 過 光 量 は 反 応 開 始 後 しばらく 一 定 であり 反 応 の 進 行 に 伴 って 透 過 光 量 は 減 少 し 反 応 完 了 と 共 に 減 少 変 化 も 止 まります 透 過 光 量 l(t)の 反 応 初 期 の 透 過 光 量 loに 対 する 割 合 をR(t)とし この 透 過 光 量 比 の 変 化 に 対 してしきい 値 R(th) を 設 定 し 反 応 開 始 からR(t) が Rth になるまでの 時 間 をゲル 化 時 間 Tg あるいは 活 性 化 時 間 Ta として 読 み 取 るものです R(t)= l(t)/lo 100% ER/ESシステム 定 量 エンドトキシン 濃 度 とゲル 化 時 間 Tgとの 間 には 検 量 関 係 が 得 られ 検 体 のゲル 化 時 間 からエンドトキシン 濃 度 を 算 出 します コードNo. 品 名 トキシノメーター ET-6000/J ER/ESセット ( 内 容 ) ET-6000/J 本 体 内 容 量 1 式 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) 3,000, トキシマスター QC7 ER/ES(5ライセンス) パ ソコン( サーバー 兼 クライアント) 検 証 資 料 専 用 ソフトウェアの 各 種 測 定 画 面 IQOQ 作 業 ER/ES 非 対 応 システム トキシノメーター ET-6000/J 標 準 セット 1 式 1,800, ( 内 容 ) ET-6000/J 本 体 トキ シ マ スター QC7 パソコン 増 設 用 モジュール トキシノメーター ET-6000/J 1 台 1,400,000 オプション トキシノメーター ET-6000/J ER/ESアップグレードセット 1 式 1,650,000 ( 内 容 ) ト キ シ マ ス ター QC7 ER/ES(5ライセンス) パソコン(サーバー 兼 クライアント) 検 証 資 料 IQOQ 作 業 トキシノメーター ET-6000 専 用 架 台 1 台 42,000 機 器 32 33

19 マイクロプレートリーダー 法 エンドトキシン 測 定 システム MPRエンドトキシン 測 定 システム 簡 易 型 エンドトキシン 測 定 システム Endosafe -PTS TM チ ャ ールス リバ ー ラボ ラトリーズ CHARLES RIVER LABORATORIES 96 ウェルマイクロプレート 専 用 の 吸 光 マイクロプレートリーダーを 用 いた マイクロプレートリーダー 法 システムです 37 温 度 制 御 および37 カイネティック 測 定 により 高 精 度 高 感 度 にエンドトキシン 測 定 が 行 えます ライセート 試 薬 の 選 択 により 同 一 システムで 比 濁 法 比 色 法 に 適 応 多 検 体 同 時 測 定 に 最 適 日 本 薬 局 方 FDA ガイドライン 準 拠 のソフトウェアを 標 準 搭 載 厚 生 労 働 省 ER/ES 指 針 FDA21 CFR Part11 対 応 のシステムも 準 備 ソフトウェアの 各 種 測 定 画 面 測 定 中 はトキシマスター MPR 画 面 で 全 測 定 ポイントのカイネティックグラフやオンセット 時 間 データ 濃 度 値 などの 数 値 データをプレートイメージでモニターできます また カイネティックグラフ 画 面 では ウェルを 選 択 してズームボタンを 押 すことで 同 時 に 最 大 16 ウェルま で グ ラフ を 拡 大 表 示 す る こ と が で き ま す レポート 表 示 測 定 中 に 表 示 切 替 が 可 能 グラフ 表 示 測 定 中 に 表 示 切 替 が 可 能 拡 大 表 示 ER/ES システム コード No. 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) MPR エンドトキシン 測 定 システム ER/ES セット 1 式 2,800,000 ( 内 容 ) サンライズサーモ RC-R(1 台 ) トキシマスター QC7 ER/ES MPR(5 ライセンス) パソコン(サーバー 兼 クライアント) 検 証 資 料 IQOQ 作 業 ER/ES 非 対 応 システム MPR エンドトキシン 測 定 システム 標 準 セット 1 式 1,600, ( 内 容 ) サンライズサーモ RC-R(1 台 ) トキシマスター QC7 MPR パソコン 消 耗 品 コーニング 3370 ポリスチレン 製 96 穴 プレート 100 枚 42,000 平 底 フタ 付 滅 菌 済 もっと 簡 単 で 短 時 間 に どこにでも 持 ち 運 べる 小 型 のエンドトキシン 測 定 装 置 が あれば という 研 究 者 の 要 望 に 応 えて 開 発 されました サンプルを 直 接 扱 う 技 術 者 や 研 究 者 がリアルタイムにその 場 で そ の 手 で 測 定 し すぐ に 結 果 を 得 ら れ ま す アメリカ 食 品 医 薬 品 局 (Food and Drug Administration : FDA) 認 可 を 取 得 したことで 信 頼 性 の 高 い 製 品 で あ る こ と が 証 明 さ れ 米 国 で は 医 薬 品 や 医 療 機 器 の 最 終 製 品 試 験 に 使 用 することができます 持 ち 運 びに 便 利 なコンパクトボディー 試 薬 等 が 封 入 済 みのカートリッジ 極 めて 短 い 測 定 時 間 4 種 類 の 測 定 レンジ FDA 認 可 製 品 (2006 年 7 月 ) EU/mLはFDAタイプのみ 原 理 2つのサンプルラインと2つのスパイクラインがあり 各 々の ラインにはライセート 試 薬 合 成 発 色 基 質 およびエンドトキシン 標 準 品 ( ス パイク ラ イ ン の み )が 封 入 済 み で す 1カートリッジで1サンプルのエンドトキシン 測 定 (n=2)と 添 加 回 収 測 定 (n=2)を 測 定 できます 測 定 時 PTS TM リーダーの 内 部 は 適 切 な 温 度 に 保 たれ 光 学 密 度 (OD)の 読 み 取 りの 完 了 で 1 サンプルの 測 定 が 終 了 します PTS リーダー コード No. メーカーコード 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) PTS100 Endosafe -PTS リーダー 1 台 760,000 PTS カートリッジ コード No. メーカーコード 品 名 ( 感 度 ) 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) PTS2001JP PTS カートリッジ JP(1-0.01EU/mL) 10 枚 / 箱 53, PTS2005JP PTS カートリッジ JP(5-0.05EU/mL) 10 枚 / 箱 53, PTS201JP PTS カートリッジ JP(10-0.1EU/mL) 10 枚 / 箱 53, PTS2001F PTS カートリッジ FDA(1-0.01EU/mL) 10 枚 / 箱 53, PTS2005F PTS カートリッジ FDA(5-0.05EU/mL) 10 枚 / 箱 53, PTS201F PTS カートリッジ FDA(10-0.1EU/mL) 10 枚 / 箱 53, PTS20005F PTS カートリッジ FDA( EU/mL) 10 枚 / 箱 53, PTS220 PTS 条 件 検 討 用 カートリッジ 10 枚 / 箱 65, RMMGS1000 PTS グルカン 測 定 用 カートリッジ( pg/mL) 10 枚 / 箱 49, LRMMGI100M PTS グラム ID カートリッジ 10 枚 / 箱 29,500 PTS オプション コード No. メーカーコード 品 名 内 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) 年 間 キャリブレーション(2 年 目 以 降 ) 1 回 100,000 IQOQPQ サービス 1 回 150, PTS 用 プリンター /EP(プリンターケーブル 付 ) 1セット 75, PTS400 PTS 用 ミニピペッター 1 個 2, PTS600 PTS 用 リーダーケース 1 個 26, PTS108 PTS 用 PC ケーブル 1 個 4, BT103 PTS 用 0.1M トリスバッファー (30mL) 12 バイアル 33, BT101 PTS 用 0.25M トリスバッファー (5mL) 6 バイアル 12, BC1000 PTS 用 0.5M MgSO4 1M トリスバッファー (4mL) 6 バイアル 12, BD100 PTS 用 エンドトキシン 抽 出 溶 液 12 バイアル 33,000 本 体 購 入 時 には 標 準 付 属 しておりますが 別 途 必 要 な 場 合 はご 購 入 ください 機 器 34 35

20 リムルス 関 連 試 薬 機 材 消 耗 品 価 格 表 エンドトキシン 測 定 システム 用 バ リデ ー ション サ ポ ート サ ー ビ ス コンプライアンスのためのベストソリューション さらに 厳 しさを 増 す 規 制 当 局 の 要 求 事 項 を 満 たしたラボ 運 営 のためにお 役 立 ていただける 各 種 サ ポート サ ービ ス 商 品 で す 品 名 内 容 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) IQ/Standard OQ サービス 設 置 場 所 確 認 電 源 電 圧 確 認 環 境 温 度 確 認 外 観 検 査 接 続 確 認 初 期 動 作 確 認 システム 構 成 確 認 1システム 200,000 トレ ー サ ビ リティー 証 明 書 ( 電 圧 計 ) IQドキュメント( 計 画 書 実 施 手 順 書 実 施 報 告 書 ) Standard OQサービス( 内 容 の 詳 細 は 下 段 参 照 ) Standard OQ サービス 2 外 観 確 認 初 期 動 作 確 認 タッチパネル / スイッチ 動 作 確 認 光 学 系 性 能 確 認 温 度 制 御 機 能 確 認 タイマー 精 度 確 認 トレ ー サ ビ リティー 証 明 書 ( 温 度 計 ストップ ウ ォッ チ ) O Q ド キュ メント( 計 画 書 実 施 手 順 書 実 施 報 告 書 ) 1システム 150,000 2 システム 1 250,000 Enhanced OQ サービス 3 Standard OQサービス( 内 容 の 詳 細 は 上 段 参 照 ) ライセート 試 薬 (リムルス ES-IIシングルテストワコー(コード: ) および 代 替 試 薬 ( 硫 酸 ヒド ラ ジ ニ ウム ヘ キサメチレンテトラミン)を 用 い て 1 シ ステム 250,000 装 置 設 置 場 所 での 動 作 性 能 の 検 証 2システム 1 350,000 検 証 規 格 : 検 量 線 (3 点 n=3 IrI 0.980) 再 現 性 (CV 3.0%) Blank(n=2)= NG OQドキュメント( 計 画 書 実 施 手 順 書 実 施 報 告 書 ) 年 間 保 守 サービス 年 1 回 のStandard OQサービス 実 施 故 障 時 の 代 替 装 置 優 先 レンタル 修 理 無 償 サービス( 部 品 代 を 含 む 但 し 消 耗 品 は 除 き ま す ) 基 本 システム 250,000 (サービ ス 詳 細 は 別 途 定 め る 条 件 書 にてご 確 認 ください) サ ー ビ ス 対 象 機 種 :ET-2000 ET-5000 ET-5000part 11 ET-6000 MPR 1: O Q サ ー ビ ス の 2 シ ス テ ム 価 格 は 同 一 施 設 において 同 一 日 実 施 の 場 合 に 限 ります 2:MPRエンドトキシン 測 定 システムのサービス 内 容 についてはお 問 い 合 わせください 3:MPRエンドトキシン 測 定 システムについてはEnhanced OQの 設 定 はございません 料 金 詳 細 は 下 記 の 表 をご 参 照 ください 年 間 保 守 サービス 料 金 体 系 Enhanced OQ へのアップグレード: 下 記 料 金 + 10 万 円 1 台 2 台 3 台 4 台 5 台 6 台 7 台 8 台 ET ,000 円 300,000 円 350,000 円 400,000 円 450,000 円 500,000 円 550,000 円 600,000 円 ET-5000 基 本 システム 4 2 台 3 台 4 台 ET-5000part ,000 円 400,000 円 450,000 円 500,000 円 本 体 拡 張 アナリシス 付 ET ,000 円 400,000 円 基 本 システム MPR 300,000 円 4:コントロールモジュール 1 台 + アナリシスモジュール 1 台 です サービス 料 金 は 予 告 なく 変 更 させていただく 場 合 がございます あらかじめご 了 承 ください コード No. 品 名 感 度 (EU/mL) 容 量 希 望 納 入 価 格 ( 円 ) ライセート 試 薬 カブトガニ 血 球 抽 出 物 J 回 用 18, カブトガニ 血 球 抽 出 物 HS-J 回 用 19, カブトガニ 血 球 抽 出 物 F 回 用 18, カブトガニ 血 球 抽 出 物 HS-F 回 用 19, カブトガニ 血 球 抽 出 物 ES-II 回 用 55, カブトガニ 血 球 抽 出 物 ES-III 回 用 55, PYROSTAR TM ES-F 回 用 140,000 マルチテストキット(ライセート 試 薬 + CSE) リムルス J テストワコー 回 用 23, リムルス HS-J テストワコー 回 用 24, リムルス HS-F テストワコー 回 用 24, リムルス ES-II テストワコー 回 用 35, リムルスカラー KY テストワコー 60 回 用 54, PYROSTAR TM ES-F 回 用 90, PYROSTAR TM ES-F/Plate 160 回 用 56,000 シングルテストキット( 試 験 管 入 ライセート 試 薬 + CSE ただし PS には CSE 添 付 無 ) リムルス J シングルテストワコー 回 用 26, リムルス HS-J シングルテストワコー 回 用 30, リムルス F シングルテストワコー 回 用 26, リムルス HS-F シングルテストワコー 回 用 30, リムルス HS-T シングルテストワコー 回 用 30, リムルス ES-II シングルテストワコー 回 用 33, リムルスカラー KY シングルテストワコー 25 回 用 50, リムルス PS シングルテストワコー 20 回 用 98, PYROSTAR TM ES-F シングル 回 用 39,000 ペプチドグリカン β- グルカン 検 出 用 試 薬 SLP 試 薬 セット 3mL 39, SLP-HS シングル 試 薬 セット 20 回 用 51,000 標 準 品 エンドトキシン 標 準 品 照 会 USP 標 準 エンドトキシン 10,000units 照 会 CSE E.coli UKT-B 株 製 500ng 6, カードラン((1 3)-β-D グルカン) 生 化 学 用 1g 1, ペプチドグリカン(Micrococcus luteus 由 来 ) 生 化 学 用 2mL 5,400 エンドトキシンインジケーター エンドトキシンインジケーター2,000EU (EVV2K) 12 バイアル 32, エンドトキシンインジケーター 10,000EU (EVV10K) 12 バイアル 32, エンドトキシンインジケーター100,000EU (EVV100K) 12 バイアル 32, エンドトキシンインジケーター 1million EU (EVV1M) 1 バイアル 8, エンドトキシンインジケーター2.5million EU (EVV2.5M) 1 バイアル 12, エンドトキシンインジケーター 10million EU (EVV10M) 1 バイアル 12,500 エンドトキシンフリー 緩 衝 液 M トリス 塩 酸 緩 衝 液 (ライセート 試 薬 溶 解 用 ) ph7.3 at 30 5mL 10 12,500 エンドトキシン 検 出 用 抽 出 液 エンドトキシン 検 出 用 抽 出 液 20 倍 濃 縮 液 10mL 4 15,000 ライセート 試 薬 用 試 験 管 リムルステストチューブ -S アルミキャップ 付 φ12 75mm 10 本 8 16, リムルステストチューブ -S φ12 75mm 10 本 10 12, アルミキャップ -S φ mm 10 個 10 11,200 エンドトキシンフリーチップ バイオクリーンチップ ワコー μL 用 100 本 3, バイオクリーンチップ ワコー μL 用 100 本 3, バイオクリーンチップ ワコー エクステンド S 200μL 用 100 本 6,