バイオ医薬プロジェクト PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 T T PD-1 PD-L1 T PD-L1 T PD-1/PD-L1 T PD-1/PD-L1 T T T PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay PD-1/PD-L1

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しじんいしなみ
6 years ago
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1 Promega KAWARABA 216 年夏号プロメガは発光テクノロジーで創薬がん研究をサポートします二頁免疫チェックポイントをレポーターで定量PD-1/PD-L1 三頁グルコースの取込みとエネルギー代謝四頁エピジェネティクス酵素の発光アッセイ五頁 anoluc ってすごい!: より高感度なレポーターアッセイ六頁実験をすすめるためのRentaMAX 活用術七頁細胞内タンパク質相互作用の高感度バイオセンサー FRET とBRET の活用高感度検出装置GloMax Discover ystem プロメガ株式会社

バイオ医薬プロジェクト PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 T T PD-1 PD-L1 T PD-L1 T PD-1/PD-L1 T PD-1/PD-L1 T T T PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay PD-1/PD-L1 T FAT FAT T FAT PD-1 Jurkat artificial antigen

1 6 1.5 1 6 1. 1 6 5. 1 5 9 8 7 6 5 4 Log 1 [pembrolizumab] g/ml B. T PD-1 PD-L2 CTLA-4 TIGIT/CD155 Co-inhibitory GITR CD4 4-1BB X4 Co-stimulatory Luminescence (RLU) 2.5 1 6 2. 1 6 1.5 1 6 1. 1 6 5. 1 5 9 8 7 6 5 4 Log 1 [nivolumab] g/ml 3.

44 µg/ml ; B thaw-and-use 1349MA Ide IdeZ FAT-RE Luciferase Glo ignal Recovery PD-1 イベント 2 PD-1:PD-L1 による FAT シグナルの阻害イベント 3 抗 PD-1 または抗 PD-L1 抗体による FAT シグナルの回復 PD-L1 138MA Ide IdeZ?

2 バイオ医薬プロジェクト PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 T T PD-1 PD-L1 T PD-L1 T PD-1/PD-L1 T PD-1/PD-L1 T T T PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay PD-1/PD-L1 T FAT FAT T FAT PD-1 Jurkat artificial antigen presenting cells, aapc PD-L1 CH-K1 1 PD-1 Effector Cell PD-L1 aapc Cell イベント 1 TCR(T 細胞受容体 ) を介した FAT の活性化 ADCC Reporter Bioassay Thaw-and-Use T HT PD-1/PD-L1 3 A. Luminescence (RLU) Log 1 [pembrolizumab] g/ml B. T PD-1 PD-L2 CTLA-4 TIGIT/CD155 Co-inhibitory GITR CD4 4-1BB X4 Co-stimulatory Luminescence (RLU) Log 1 [nivolumab] g/ml 3. PD-1 PD-L1 aapc/ch-k PD-1 A B 37 6 Bio-Glo Reagent GloMax Discover ystem GraphPad Prism oftware 4PL curve EC5.25 µg/ml ; A.44 µg/ml ; B thaw-and-use 1349MA Ide IdeZ FAT-RE Luciferase Glo ignal Recovery PD-1 イベント 2 PD-1:PD-L1 による FAT シグナルの阻害イベント 3 抗 PD-1 または抗 PD-L1 抗体による FAT シグナルの回復 PD-L1 138MA Ide IdeZ? Ide IdeZ Ide 4 IdeZ Ide IgG2a IgG3 ADCC ADCP Ide IdeZ Ide IdeZ IgG F(ab')2 Fc 24 Cells 時間以内 as reagents : (PD-1/PD-L1 Frozen, thaw-and-use Blockade cells (3-24hr) Bioassay) Ide or IdeZ lgg1 Hinge equence: -C-D-K-T-H-T-C-P-P-C-P-A-P-E-L-L-G-G-P--V Ide or IdeZ cleavage site キットに添付の細胞 ( 解凍してそのまま使用 ) バッファーに懸濁プレートに播種測定約 1~2 週間 ( 従来法 ) PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay 1 kit J , 5 kit J , 2 調達した細胞培養細胞数カウント回収バッファーに懸濁プレートに播種測定 1252MA IdeZ Protease, Frozen 2 u V , Ide Protease, Frozen 2 u V , 8

3 高次元細胞プロジェクト 1 Glucose Uptake-Glo Assay Add to Measure 1 tep 1. 2DG の取り込み 2DG 2DG 6PDG G6PDH ls as reagents : Frozen, 2DG thaw-and-use cells (3-24hr) ADP + tep 2. 細胞溶解 ADPH + reductase tep 3. 発光による取り込みの量の測定 1 min 1. Glucose Uptake-Glo proluciferin luciferin ATP Ultra-Glo rluciferase 6 min Light GloMax 2- (2-DG) 7 Glucose Uptake-Glo Assay MCF7 MDA-MB-231 HIF1 グルコース乳酸グルタミングルタミン酸 AD(P)H ルシフェリン前駆体 AD(P) ルシフェリン Light ルシフェラーゼデヒドロゲナーゼレダクターゼ 2. as reagents : Frozen, thaw-and-use cells (3-24hr) Cells as reagents : Frozen, thaw-and-use cells (3-24hr) Cells MDA-MB MDA-MB-231 MCF7 2% 2 3% 2 MCF7 MDA-MB-231 Glucose Uptake-Glo Assay ATP CellTiter-Glo RealTime-Glo 1 Web RLU Glucose Lactate Hypoxia ormoxia Hypoxia ormoxia MDA-MB-231 MCF7 RI RI Add to Measure 5 ml J , Glucose Uptake-Glo Assay 1 ml J , 5 ml J , CellTiter-Glo 2. Assay 1 ml G , PC 1 ml G , RealTime-Glo MT Cell Viability, 1 1 G9711 2, 1 1 G , 8 PC 8 Glucose Detection assay Lactate Detection assay Glutamate Detection assay Glutamine Detection assa 3Promega KAWARABA

アカデミア創薬サポートプロジェクト HDAC 26 AHA HDAC HDAC 11 Class I 1 2 3 8 Class II 4 5 6 7 9 1 Class IV 11 HDAC HDAC HDAC-Glo Assay 1 A. B.

HDAC HDAC-Glo I/II ubstrate H Boc-XX H HDAC Ultra-Glo Luciferase ATP, Mg CH 3 ペプチドヒストンコアヒストン 2 本鎖オリゴヌクレオチド DA ヌクレオソーム AH H 2 HATs HDACs H H 2 MTase-Glo Reagent Developer Reagent H ADP アセチル化クロマチン H

4 アカデミア創薬サポートプロジェクト HDAC 26 AHA HDAC HDAC 11 Class I Class II Class IV 11 HDAC HDAC HDAC-Glo Assay 1 A. B. Boc-XX H 脱アセチル化クロマチン H H DA DA DA 4 MTase-Glo Methyltransferase Assay DA - AH MTase-Glo AH 2 ペプチドヒストンコアヒストンメチルトランス 2 本鎖オリゴヌクレオチド DA フェラーゼヌクレオソーム AM 遺伝子発現なし Glow-type luminescence 1. HDAC HDAC-Glo I/II ubstrate H Boc-XX H HDAC Ultra-Glo Luciferase ATP, Mg CH 3 ペプチドヒストンコアヒストン 2 本鎖オリゴヌクレオチド DA ヌクレオソーム AH H 2 HATs HDACs H H 2 MTase-Glo Reagent Developer Reagent H ADP アセチル化クロマチン H 1548MA 遺伝子発現 A. HDAC HAT B. HDAC- Glo I/II Assay 1 MTase-Glo Detection olution Light 13146MA 2 Jumonji C-domain JHDM uccinate-glo 3 JHDM uccinate JHDM ヒストンまたはペプチド 3. uccinate-glo DA MTase-Glo Methyltransferase-Glo: a universal, bioluminescent and homogenous assay for monitoring all classes of methyltransferases Epigenomics (216) 8(3), Characterization of the histone methyltransferase PRDM9 using biochemical, biophysical and chemical biology techniques Biochem. J., Jul 214; 461: Quantitative profiling of the activity of protein lysine methyltransferase MYD2 using ILAC-based proteomics Mol. Cell. Proteomics, Mar 216; 15: abstract Jmjc 2-G コハク酸 + 脱メチル化基質コハク酸ステップ 1: コハク酸の変換試薬 I 中間体ステップ 2: 中間体から ATP と光への変換中間体試薬 II ルシフェラーゼ / ルシフェリン MTase-Glo Methyltransferase Assay 4 V761 85, 2 V762 32, HDAC-Glo I / II Assay 1 ml G642 77, HDAC-Glo Class IIa Assay 1 ml G956 77, HDAC-Glo 2 Assay 1 ml G959 77, uccinate-glo & MethylEdge Bisulfite Conversion ystem , PC 8 PC 8 Light 2. MTase-Glo 4

5 ありのままの細胞解析 anoluc anoluc ip PPI Protein Reporter Genetic Reporter 2 Protein Reporter PPI anobret anobit Genetic Reporter ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay Dual ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay anoluc luciferase 2 anoluc Luciferase 15 1 Dual-Glo Luciferase Assay Dual-Luciferase Reporter Assay Dual-Glo Luciferase Assay ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay anoluc Dual-Glo Luciferase Assay Dual-Luciferase Reporter Assay Relative Luminescence (RLU) Luc in anodlr FLuc in anodlr 1 5 FLuc in Dual-Glo RLuc in DLR RLuc in Dual-Glo FLuc in DLR Time After Reagent Addition (minutes) 1. anodlr anodlr TK-RLuc TK-FLu c DA TK-Luc anoluc TK-FLuc DA HEK293 anodlr DLR Dual-Glo Dual-Luciferase Assay ystem anodlr Assay Luc Fluc anoluc Luciferase anoluc Luciferase 2 anoluc Luciferase anoluc PET % activity 1 5 HEK293 LucP Luc t[min] FLuc FLuc-P anoluc anoluc-p % activity 1 5 HeLa LucP 12881MA Luc t[min] 2. anoluc HEK293 luc lucp Fluc FlucP Cell line FLuc FLucP Luc LucP HEK-293 >6 h 2..4 h >6 h min HeLa h h >6 h 2 6 min U2 n=1 >6 h 2.8 h >6 h 36 min FLucP LucP PET anoluc anoluc Luciferase ATP anoluc Luciferase ATP ph AC Chem. Biol., 212, 7 (11), pp plcoi Vectors Coincident mra luc2 PET anoluc lucp anoluc 2 8 Fold Induction 1 5 one 1 ng/well 5 ng/well Reporter 1 p2a Reporter 2 True Hit 1 ng/well 25 ng/well 5 ng/well luc tabilization 1 ng/well 2 ng/well Fluc Fluc tabilization 3. mra anoluc 2 P2A 2 DA Luciferase Assay ystem anoluc 4 DA 15 HuTlR9/HuUnc93B1 4. DA 8 luc HEK293 pl3.2.f-κ B-RE Vector Toll like receptor 9/ Unc93B1 ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay Fold Induction 12519MA 5Promega KAWARABA

6 RentaMAX RentaMAX? RentaMAX GloMax /Maxwell RC / RentaMAX RentaMAX RA Maxwell RC Instrument RA 12 4 RA 1 RA RA RA RentaMAX 4 + RA 1 RA qpcr RA Maxwell RC RA Maxwell RC RentaMAX Dual-Luciferase Reporter Assay ystem GloMax 2/2 Luminometer RentaMAX GloMax 2/2 Luminometer GloMax 2/2 Luminometer or Wnt TGF β 6% ( ) 2 / RA 6 4 RA 6 Maxwell RC 12 / RA 4 4 RA 4 RentaMAX RentaMAX RentaMAX RentaMAX 6 RentaMAX 3 4 RentaMAX 1 RentaMAX RA anoluc RentaMAX RentaMAX

7 FRET BRET GloMax Discover ystem Co-IP: Co-immunoprecipitation FRET BRET FRET FRET BRET FRET BRET / BRET FRET BRET FRET 励起光 BRET 基質シグナル蛍光蛍光シグナル蛍光発光酵素 Prot X Prot Y Prot X Prot Y 励起光シグナルシグナル生体成分バックグラウンドシグナル試験化合物 FRET FRET 1 FRET 1 1 FRET BRET BRET BRET BRET FRET BRET BRET GloMax Discover ystem BRET/FRET GloMax Discover ystem BRET Preliminary GloMax Discover ystem BRET FRET/BRET FRET BRET FRET BRET FRET / BRET FRET GloMax Discover ystem / UV / GloMax Dual Injectors with Pumps 1 GM3 4,6, 1 GM33 9, PC moles > 9 anobret / BRET 7Promega KAWARABA

8 ID ID ~9 3 3 Glucose Uptake-Glo Assay 5 ml J , 44,1 2 PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay 1 kit J , 12,8 2 IdeZ Protease, Frozen 2 u V , 6,2 4 MTase-Glo Methyltransferase Assay 4 V761 85, 59,5 4 HDAC-Glo I/II Assay, 1ml 1 ml G642 77, 53,9 4 HDAC-Glo Class IIa Assay, 1ml 1 ml G956 77, 53,9 4 HDAC-Glo 2 Assay, 1ml 1 ml G959 77, 53,9 5 plcoi1[luc2-p2a-lucp/hygro] Vector 2 µg , 7, 5 plcoi2[luc2-p2a-lucp/minp/hygro] Vector 2 µg , 7, 5 plcoi3[luc2-p2a-lucp/cmv/hygro] Vector 2 µg , 7, 5 plcoi4[luc2-p2a-lucp/pgk/hygro] Vector 2 µg , 7, URL CellTiter-Glo 2. Assay 1 ml G , 9, ano-glo Luciferase Assay 1 ml , 18, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay/pL1.1.TK Bundle , 4, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay/pL1.1.PGK Bundle , 4, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay/pGL4.54 [luc2/tk] Bundle , 4, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay/pGL4.53 [luc2/pgk] Bundle , 4, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay ystem 1 ml , 31, MethylEdge Bisulfite Conversion ystem , 2, Web site Tel / Fax prometec@jp.promega.com プロメガ株式会社本社東京都中央区日本橋大伝馬町マツモトビル Tel /Fax 販売店大阪事務所大阪市淀川区西中島花原第 8 ビル 74 号室 Tel /Fax 製品の仕様価格については 216 年 7 月現在のものであり予告なしに変更することがあります PK167-1B

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160720_BRO_プロメガ機器カタログ.indd 2016-2017 INTEGRATED SOLUTIONS page 4 GloMax Discover page 4 GloMax Explorer page 6 GloMax Navigator page 7 GloMax 20/20 page 10 Maxwell RSC page 12 Quantus Fluorometer S/N Cell based assay NanoLuc GloMax