フローラ解析による微生物汚染源の 迅速推定システムの活用と効果 アース環境サービス株式会社 総合分析センターセンター長猪野毅
製品の微生物汚染源の迅速推定 システムの目的 同定せずに集団で存在する微生物をフローラ解析により 製品の微生物汚染源や汚染経路を探索し迅速かつ効率的に適切な対策を講じることで 製品汚染クレームを削減する サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
製品の微生物汚染源の迅速推定システム (1) ラピコムRapicom 大腸菌群 (MACキット) 乳酸菌群(MALキット) 芽胞菌群 (MABキット) 特長 : 工場検査室でも可能 滅菌ガーゼによる拭き取り 増菌培養埼玉県産業技術総合センター コージンバイオ ( 株 ) アース環境サービス( 株 ) の共同開発経済産業省のサポイン事業支援 サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
製品の微生物汚染源の迅速推定システム (2) ジェノゲート GENOGATE DNAチップを用いたカビの遺伝子検査システム ラピコム のカビバージョン東洋製罐グループホールディングス ( 株 ) が開発アース環境サービス ( 株 ) が採用共同でバージョンアップを サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
製品汚染源の迅速推定システム Rapicom ( ラピコム ) とは Rapicom: Rapidly detect a Contaminated Origin by Microflora ( 商標登録第 5237105 号 ) サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
Rapicom シリーズ専用培地 大腸菌群用 MAC キット 芽胞菌群用 MAB キット 乳酸菌群用 MAL キット
バイオフィルム形成する主な細菌 食中毒起因菌 Salmonella Typhimurium Yersinia enterocolitica Listeria monocytogenes Escherichia coli Staphylococcus aureus 腐敗微生物他 Alcaligenes faecalis Bacillus subtilis Enterobacter sp. Klebsiella pneumoniae Flavobacterium meningosepticum Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus sp. サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
ラピコム Rapicom の特長 (1) バイオフィルムを考慮した 滅菌ガーゼ によるサンプリングと増菌培養を採用 4 種類の専用培地キットを用いたフローラパターン解析 同定検査が不要なため 汚染源 汚染経路の推定が 検査から1 ー 3 日で サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
ラピコム Rapicom の特長 (2) 大掛かりな機器を必要としないため工場の検査室でも可能 清掃の重大管理ポイントが明確になることで製造現場の負担も軽減 製造現場でのデータベース構築で汚染予防管理が可能に クレーム削減や資源の有効活用など経営メリットも サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
ラピコム Rapicom の適用事例 大腸菌群ゆでめん 弁当惣菜 和洋菓子 冷凍食品 魚肉練り製品 豆腐など 乳酸菌群食肉製品 惣菜 和洋菓子 豆腐など 芽胞菌群和菓子 発酵食品 惣菜 食品添加物 飲料 医薬原料など サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
ラピコム Rapicom の活用場面 微生物汚染源 汚染経路の推定による製品汚染対策 洗浄消毒バリデーションや洗浄消毒計画の見直し 製造現場での従業員教育 訓練のツール HACCPPプランの妥当性の確認など 微生物のクレームの削減や衛生管理のレベルアップに寄与 サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
DNA チップを利用した カビの一括同時検査
DNA チップとは? 64 スポット 3 mm 東洋鋼鈑 ( 株 ) 社製 : シ ーンシリコン 3mm 高密度なDNA 断片が配置 ( プローブ ) 各スポットに 検出したいカビの特異的な DNA 配列を配置 色々な種類のカビを一括同時に検査することが可能 弊社 DNA チップの特徴 シリコン基板表面に DLC (Diamond-Like Carbon) コーティング 化学修飾が可能 DNA が強固に結合 炭素密度が高い DNA 固定化量が多い 高シグナル, 低ノイズ 高感度な検出が可能
DNA チップによる一括同時検査 一括同時検査とは? 従来の同定手順 ( 形態同定 シークエンス解析 ) 個々に検査検体 (5cfu) 形態同定 シークエンス解析 AGGCTC DNA チップ検査 一括で検査 DNA チップ解析
DNA チップによる検査フロー サンプリング 培養 カビの一括回収 DNA 一括抽出 DNA 増幅 & 蛍光標識 DNA 液を滴下 励起光 レーザー光 アオカビ アカカビ Before DNA チップを拡大 After コウジカビ クロカビ アカカビ コウジカビを検出 3mm 検出イメージ DNA チップと反応 ( ハイブリダイゼーション ) 蛍光検出
ジェノゲートバージョンアップの特徴 東洋製罐 GH( 株 ) と共同で 検出対象菌種の拡大に取り組む ver.2.3に カテゴリーは13から32に 検査対象カビ種が363 種から637 種に拡大 好乾性 II 類 耐乾性 II 類 好湿性 IV 類を細分 12カテゴリーを新規開発 ( 耐熱性カビ 好冷性カビ等追加 ) 耐乾性 3-aでByssochlamys fulva 対象に サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
GENOGATE カビ検査用 [ver.2.3] カテゴライズ表 好乾性 湿度特性 分類代表的なカビ種名大小属種 耐熱性 好冷性 カビ毒産生 a penicillioides 1 b Aspergillus restrictus 好乾性 c vitricola 2 Eurotium herbariorum 3 Wallemia sebi
GENOGATE カビ検査用 [ver.2.3] カテゴライズ表 耐乾性 湿度特性 耐乾性 分類 代表的なカビ種名 大小属種 1 2 3 a 耐熱性 好冷性 カビ毒産生 flavus b fumigatus c ochraceus Aspergillus d niger e terreus f versicolor a expansum b implicatum Penicillium c glabrum d citrinum a b Paecilomyces variotii lilacinus
GENOGATE カビ検査用 [ver.2.3] カテゴライズ表 好湿性 湿度特性 好湿性 分類 代表的なカビ種名 大小属種 1 a b c Acremonium butyri charticola strictum 2 Alternaria alternata 3 a b Arthrinium phaeospermum japonicum 耐熱性 好冷性 4 Aureobasidium pullulans 5 Chaetomium globosum 6 Cladosporium cladosporioides 7 Curvularia lunata 8 a solani カビ毒産生 b Fusarium graminearum c oxysporum 9 Phoma exigua 10 Stachybotrys chartarum
特徴 2 3: 迅速 低コスト 例 ) 工場内のカビの菌叢をモニタリングしたい 工場の各ポイントで 5 検体 50 コロニー のカビを検査 日数 ( 納期 ) 形態同定 DNA チップ検査 2 週間程度 * 1 ヶ月程度 * 費用 形態同定 DNA チップ検査 25 万円 70 万円以上 *: 培養日数込み 迅速 & 低コストな理由分離培養工程の省略可能 複数カビを一括検査 迅速 低コスト
4 高精度 計 323 菌株の野生のコロニーにおいて 配列解析による同定結果に対する形態同定および DNA チップ検査の一致率を算出 判定方法 高精度のカビ種識別性能 高精度な理由 胞子未形成のカビも検査可能 配列解析との一致率 形態同定 ( 従来法として ) 88% DNAチップ検査 92% マルチプレックス PCR を利用した 1 菌種 2 領域 * 判定 の採用 (*2 領域 リボソーム RNA 遺伝子 ITS 領域 β-tubulin 領域 )
DNAチップによるカビの一括検査の活用法 (1) 考え方 カビのスクリーニング検査である ラピコムのカビバージョンで対策重視のシステムである例 1. 飲料 ( 果汁 ) 工場でカビ毒パツリンを産生するカビを確認したいパツリン産生カビは 耐乾性 2-a~d に5 種 サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
DNAチップによるカビの一括検査の活用法 (2) 例 2. 問題 ( クレーム ) の耐熱性カビのネオサルトリアがどこにいるのか調査したいネオサルトリアは 耐乾性 1-b に含まれている例 3. 環境 工程にどのようなカビがいるか 製品に問題を起こす可能性のあるカビがいるかバイオバーデンの把握危害分析管理 ( 洗浄消毒 保管方法など ) の見直し サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
システムの活用と効果 ( まとめ ) ゆで麺 惣菜 豆腐 食肉製品 汚染源 汚染経路の特定 飲料 和洋菓子などの食品 医薬原料など とくに加熱工程 を含む製品で採用 包材でも 洗浄消毒バリデーション HACCP プランの検証 従業員教育などに活用 効果的な対策で製品クレームの削減や衛生管理の向上に寄与 今後ともシステムのバージョンアップと精度向上に努め 製造事業所 での微生物管理体制の充実化とクレーム削減に大いに寄与したい
参考文献 富永達矢 猪野毅 大川三郎 関根正裕 : マイクロフロ - ラ解析によるアドバンスドサニタリ - システムの開発 食品工業 Vol.51 No.16,pp27-33(2008) 吉田充裕 :DNA チップを利用したカビの一括検査法 食品と開発 Vol.47,No.1 (2011) アース環境サービス ( 株 ) 東洋製罐グループホールディングス ( 株 ): 短時間 低コスト 高精度で微生物汚染状況を一括検査月刊 HACCP Vol.19,No.5,pp40-43(2013) アース環境サービス ( 株 ) 東洋製罐グループホールディングス ( 株 ): クレームの原因対策で技術協力 月刊食品工場長 Vol. 17,No.1,pp44-45(2013) アース環境サービス ( 株 ) 東洋製罐グループホールディングス ( 株 ):GENOGATE( ジェノゲート ) の視点で探るカビの分類と対策のポイント 月刊食品工場長 Vol.17,No.4,pp26-27(2013) 猪野毅 : 微生物汚染源の迅速推定システム ラピコム クリーンテクノロジー Vol.23,No.8,pp70-73(2013)
猪野毅 : 微生物汚染源迅速推定システムを活用した製品へのカビ汚染防止対策 ジャパンフードサイエンスVol.53 No.4 pp65-70 (2014) アース環境サービス : 微生物汚染源の迅速推定システム, 微生物の簡易迅速検査法 p699 テクノシステム,(2013) 東洋製罐グループホールディングス : 遺伝子検査システム GENOGATE: ジェノゲート ( 受託検査 ) 微生物の簡易迅速検査法 p720 テクノシステム (2013)
ジェノゲート活用に関する詳細情報 月刊食品工場長 2014 年 7-9 月号カビ汚染対策として仮説 計画 ~ 検査 対策立案 ~ 対策 検証 月刊 HACCP 2014 年 7 月号衛生検査 点検を現場改善に活用 サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
工場内危害地図の作成 現場からの情報源 現場の声を吸い上げるしくみ 危害分析に利用
アンケート例 1. 清掃しにくいところはどこですか 2. 清掃できない所はどこですか 3. 製造ラインで溶接部分はありますか それはどこですか 4. 製造ラインの上 ( 高所 ) で ほこりがたまりやすいところはありますか それはどこですか 5. 塗装がはげたり さびがついたりしているところはありますか
これからの総合的衛生管理 工場での衛生管理のニーズの多様化に対応 品質保証システム (HACCP GMP ISO) 導入 製品事故 クレームの削減 作業者の衛生意識レベルの向上 検査の精度向上と自主検査態勢の充実化 など 汚染源など危害ポイントの抽出 ( バイオバーデン ) 作業の簡素化 標準化 効率化 迅速化の推進データの信頼性の確保 ( 不確かさの要因の排除 ) 潜在的危害への予防管理 サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.
製造事業所の衛生管理 まとめ キーワード : 科学的根拠 再現性 現場主義 微生物管理 検査 キーワード : 量レベル ( 菌数 ) から 質レベル ( 危害菌 ) フローラ解析による製品の微生物汚染源迅速推定システム ラピコム ジェノゲートの活用をお奨めします ご清聴ありがとうございました サービス株式会社 Earth Environmental Service Co.,Ltd.