記載例 : 大腸菌 ウイルス ( 培養細胞 ) ( 注 )Web システム上で承認された実験計画の変更申請については 様式 A 中央の これまでの変更 申請を選択し 承認番号を入力すると過去の申請内容が反映されます さきに内容を呼び出してから入力を始めてください 加齢医学研究所 分野東北太郎教授 ヒト HSP90 cdna 発現アデノウイルスの作製 および哺乳動物細胞への組換えウイルス感染実験 2012 5 2015 3 部分一致で検索可能です 配置ボタンで確定してください
紙媒体で承認された申請については 検索ウィンドウの右上の フリー入力 を選択し 承認番号を入力ください 変更箇所への印 ( 赤下線等 ) は不要となりましたので具体的内容の記載をお願いします 1) 実験実施期間の延長 : 研究進展のため 2) 実験実施場所の変更 :22 組換実 -010 は研究室の移転により廃止となるため削除し 新たな実験場所として 22 〇組換実 -001 を追加鵜する 3) 供与核酸の追加 :X 遺伝子の発現調節因子として HSC70 遺伝子の関与を明らかにするため供与核酸として追加する 組換え大腸菌はプラスミド回収後 -20 で保管 TA クローニングで使用した大腸菌はプラスミド回収後廃棄した 東北太郎 加齢医学研究所 022-717-xxxx 教授 分野 gene@xxx.tohoku.ac.jp 20 大腸菌 20 Adenovirus 3 東北太郎加齢医学研究所 分野教授 20 大腸菌 10 宮城太郎加齢医学研究所 分野准教授 10 大腸菌 10
加齢医学研究所 分野 教授東北太郎 ヒト HSP90 cdna 発現アデノウイルスの作製 および哺乳動物細胞への組換えウイルス感染実験 2012 5 2015 3 21 加組換実 -002 分野 P1 実験室 P1 21 加組換実 -005 共同実験室 () ヒト熱ショックタンパク質 HSP90 の機能を明らかにする HSP90 は哺乳動物のストレス応答機構の解明は様々な原因を起因とする病態を理解する為に必須である ストレスや細胞外シグナルに応答し 伝達経路や転写因子の活性制御等に重要な役割を果たす蛋白質で この機能を明らかにすることはストレス応答の理解に与えるインパクトは大きい また 培養細胞に効率よく導入するためにアデノウイルスベクターを利用することは科学的知見に照らして合理的である 実験 1 ヒトHSP90 cdnaをプラスミドベクターに組込み P1 大腸菌内で増幅する 実験 2-1 ヒトHSP90 cdnaをアデノウイルス作製用シャトル ベクターに組込み大腸菌内で増幅する 実験 2-2 作製したプラスミドをHEK293 細胞にトランスフェクションし 遺伝子組換えアデノウイルスを産生する 実験 3 実験 2で作製したHSP90 発現アデノウイルスを哺乳動物 の培養細胞に感染させて表現型を確認する 注 ) 実験 2-1 のように アデノウイルス全長を含むプラスミドベクターを大腸菌に導入する実験は レベルとしています アデノウイルスゲノムの配列は決定されていますが 複合的な影響等 毒性が無いとは言い切れないと判断しています 一方 一般的なレンチウイルスベクターやレトロウイルスベクター作製用プラスミドで 部分的な領域のみから構成されている場合は P1 レベルと判断しています
2 番を選択した場合は 実験効果と危険度の点等で比較し 代替可能な実験方法より今回申請された実験方法のほうが優れていると判断される理由を簡潔に記載してください 科学的知見に照らして 培養細胞やマウス個体に当該実験に供する目的で遺伝子を導入するためには遺伝子導入組換えウイルスを作製して用いることが必須である ストレス応答機構の解明は 様々なストレスに起因する病態を理解しそれを解決する方法を見出すことにつながり その研究成果が人類の健康の維持の方法論の開発に与えるインパクトははかり知れない 大腸菌 アデノウイルス 及びこれらの生物を含む培養細胞 培地 器具類 実験で使用したガラス器具類
( 入力画面 ) 別紙 1< 遺伝子組換え生物等の特性及び拡散防止措置一覧表 > マスタデータから検索できない生物 及びベクターについては 直接空欄をクリックし 名称を手入力してください なお 生物名はすべて学名で登録されております 実験の概要に対応する番号を記入してください 同じ組換え生物を使用する場合は 該当するすべての番号を入力ください 組換え生物の特徴を示す名称 ( 容器やラベルに記載している名称等 ) を入力ください 識別可能な名称であれば審査の可否には影響しません 宿主は 1 種に限ります 名称検索のマスタは学名登録されていますのでご留意願います 目的遺伝子の由来する生物名を選択してください 目的遺伝子が複数ある場合 核酸供与体と供与核酸が対応する表を別途添付ください ゲノムライブラリー等 目的遺伝子が限定できない場合はまとめての記載が認められます 必要に応じ 入手や作製に係る資料を添付ください 入力欄が不足する場合は 別途一覧を添付ください ベクターの構成が明瞭な図であれば ベクターマップの添付のみで詳細情報の入力は省略可能です 組換えウイルスの場合は 自己増殖力 及び感染力の有無を必ず記載してください 組換えウイルス 細菌等の微生物を感染させた動植物 ( 培養細胞を含む ) の特性を記載してください ウイルスでは 消失に要する期間等についても記載願いま 実験室の承認番号は末尾が 3 ケタで登録されております 入力ボタンから検索し 入力ください 別紙 2 のみ 実験番号 遺伝子組換え生物等の名称 宿主等の特性 ( 名称 / 実験分類 / 特性等 ) 目的遺伝子に係る核酸供与体の特性 ( 実験分類 特性 ) 目的遺伝子に係る供与核酸の特性 ( 種類 機能 大きさ及び構成 Ac. No.) ベクター等の特性 ( 構成 名称 伝達性 宿主特異性 ) 遺伝子組換え生物等の特性 ( 宿主との相違 ) 保有動植物等の特性 ( 移入方法 存在状態 形質 増殖等 ) 拡散防止措置の区分 ( 区分 選択理由 第二種使用等の根拠 ) 目的と実験室名 ( 拡散防止措置のレベル ) 実験 1 大腸菌でプラスミドを構築する過程で 実験レベルが同じ場合に限っては 複数のベクターをまとめて入力することを可とする 右欄の組換え生物を使用する全ての実験番号を記載してください 大腸菌 (pcdna3.1-hsp90) (pshuttle2-hsp90) (pcdna3.1-hsc70) (pshuttle2-hsc70) 実験で使用する組換え生物ごとに記載してください 認定宿主ベクター系の宿主 マウス ラット ウサギ ニワトリ ゼブラフィッシュ 線虫 ショウジョウバエ イネ アラビドプシス は特性の記載を省略できます (? 備考参照 ) (1) 名称および実験分類 実験分類 Escherichia coli クラス 1 (2) 自然環境における分布状況及び生息又は生育が可能な環境 (3) 繁殖又は増殖の様式 (4) 病原性 有害物質の生産性その他の特性 (5) 栄養要求性 薬剤耐性及び至適成育条件 ( 微生物 ) (1) 核酸供与体の名称 実験分類 Homo sapiens クラス 1 (2) 病原性 有害物質の生産性その他の特性 哺乳動物に対する病原性なし (1) 種類及び一般名称 a) HSP90(cDNA) b) HSC70(cDNA) (2) 大きさ 構成及び塩基配列情報又はアクセッションナンバー a) 2.7 kbp, (3) 機能及び毒性 病原性等の有無 哺乳動物に対する 病原性なし Ac. No. xxxxx b) 1.9 kbp, Ac. No. yyyyy (1) 名称 (2) 構成 pshuttle2 Ad-06 pcdna3.1 M2-06 添付資料のベクターマップ参照 (3) 伝達性及び宿主特異性 異宿主への伝達性なし (1) 特性 アンピシリン耐性を 獲得する (2) 入手先の実験計画書承認番号 研研総 76-21-900 マスタ登録されたベクターを入力すると参照データが自動表示され 情報を確認できます その他 資料等の添付は 画面左下の添付ボタンから操作願います 該当なし 学内の他研究分野から譲り受ける組換え体は その作製 使用に係る実験計画の承認番号を入力してください (1) 区分 P1 (2) 大臣確認申請に該当しない旨の根拠 ( 区分選択理由 ) 宿主及び核酸供与体の実験分類がクラス 1 であり かつ 病原性 毒性等がないため (3) クロスコンタミネーションを防止する方法 レベル実験室内のインキュベーターも使用するが 時差的に行う等して クロスコンタミを防止する (1) 目的 プラスミドの構築 (2) 実験室承認番号 名称 拡散防止措置レベル 分野 P1 実験室 21 加組換実 -002 21 加組換実 -005 共同実験室 () P1
実験 2-1 右欄の組換え生物を使用する全ての実験番号を記載してください 大腸菌 (Adeno-X Viral DNA) 実験で使用する組換え生物ごとに記載してください (1) 名称および実験分類 実験分類 Escherichia coli クラス 1 (2) 自然環境における分布状況及び生息又は生育が可能な環境 (3) 繁殖又は増殖の様式 (4) 病原性 有害物質の生産性その他の特性 (5) 栄養要求性 薬剤耐性及び至適成育条件 ( 微生物 ) (1) 核酸供与体の名称 実験分類 Homo sapiens クラス 1 (2) 病原性 有害物質の生産性その他の特性 哺乳動物に対する病原性なし (1) 種類及び一般名称 a) HSP90(cDNA) b) HSC70(cDNA) (2) 大きさ 構成及び塩基配列情報又はアクセッションナンバー a) 2.7 kbp, Ac. No. xxxxx b) 1.9 kbp, Ac. No. yyyyy (3) 機能及び毒性 病原性等の有無 哺乳動物に対する 病原性なし (1) 名称 (2) 構成 Adeno-X Viral DNA 添付資料のベクターマップ参照 (3) 伝達性及び宿主特異性 異宿主への伝達性なし (1) 特性 アンピシリン耐性を 獲得する (2) 入手先の実験計画書承認番号 該当なし (1) 区分 (2) 大臣確認申請に該当しない旨の根拠 ( 区分選択理由 ) 宿主及び目的遺伝子にかかる核酸供与体はクラス 1 だが ベクターの構成にアデノウイルス全長が含まれるため 複合的な影響により毒性がないとは言えないため レベルが妥当と考えられる (3) クロスコンタミネーションを防止する方法 (1) 目的 アデノウイルスベクタープラスミドの構築 (2) 実験室承認番号 名称 拡散防止措置レベル 21 加組換実 -005 共同実験室 () 実験 2-2 実験 3 右欄の組換え生物を使用する全ての実験番号を記載してください HSP90 又は HSC70 発現 Adenovirus 実験で使用する組換え生物ごとに記載してください (1) 名称および実験分類 実験分類 Adenovirus クラス 21 (2) 自然環境における分布状況及び生息又は生育が可能な環境 哺乳動物細胞に感染 (3) 繁殖又は増殖の様式 哺乳動物細胞内で増殖 (4) 病原性 有害物質の生産性その他の特性 咽頭炎 胃腸炎等を引き起こす (1) 核酸供与体の名称 実験分類 Homo sapiens クラス 1 (2) 病原性 有害物質の生産性その他の特性 哺乳動物に対する病原性なし (1) 種類及び一般名称 a) HSP90(cDNA) b) HSC70(cDNA) (2) 大きさ 構成及び塩基配列情報又はアクセッションナンバー a) 2.7 kbp, Ac. No. xxxxx b) 1.9 kbp, Ac. No. yyyyy (3) 機能及び毒性 病原性等の有無 哺乳動物に対する 病原性なし (1) 名称 (2) 構成 Adeno-X Viral DNA pcdna3.1 M2-06 添付資料のベクターマップ参照 (3) 伝達性及び宿主特異性 異宿主への伝達性なし (1) 特性 HSP90 または HSC70 を感染細胞内で発現する E1 領域を完全に欠損しているため 自己増殖能はない 感染細胞において HSP90 を一過的に発現する HSP90 の発現により病原性を付与することはない (2) 入手先の実験計画書承認番号 HEK293 細胞で組換えアデノウイルスを産生する 組換えウイルスは 複製して培養液上清中に産生される ヒト神経細胞 Y に感染させた場合は 自己増殖能がないため 3 日程度で消失する (1) 区分 (2) 大臣確認申請に該当しない旨の根拠 ( 区分選択理由 ) 核酸供与体はクラス 1 で 供与核酸は同定済みかつ病原性がない 宿主がクラス 2 であるため レベルを選択する なお 組換えウイルスの自己増殖能は欠損しているため大臣確認実験には該当しない (3) クロスコンタミネーションを防止する方法 (1) 目的 HSP90 発現アデノウイルスベクターの産生と感染実験 (2) 実験室承認番号 名称 拡散防止措置レベル 21 加組換実 -005 共同実験室 () 3 添付ファイル 1 2 添付ファイル削除添付ファイル削除添付ファイル削除添付ファイル削除添付ファイル削除添付ファイル削除添付ファイル削除添付ファイル削除 手順 ) 1 資料を添付する項目をプルダウンから選択 2 参照ボタンから添付資料を検索 3 添付ボタンで該当項目の下に添付完了 ( 重要 ) 入力が完了したら 必ず 配置ボタン で内容を確定させてください 一時保存ボタンは仮登録のため 申請時に入力エラーとして表示されます