[各種動物の拡散防止措置の要件]②

カイコ [ 遺 伝 子 組 換 え 動 物 の 拡 散 防 止 措 置 の 例 ]2 協 力 : 九 州 大 学 大 学 院 農 学 研 究 院 准 教 授 伴 野 豊 先 生 京 都 工 芸 繊 維 大 学 工 芸 科 学 研 究 科 応 用 生 物 学 部 門 教 授 森 肇 先 生 東 京 大 学 大 学 院 農 学 生 命 科 学 研 究 科 教 授 嶋 田 透 先 生 1. 動 物 の 特 性 と 拡 散 防 止 措 置 の 概 要 カイコは 卵 幼 虫 蛹 成 虫 と 形 体 を 変 化 させるので 成 長 に 合 った 拡 散 防 止 措 置 をとる 必 要 が ある 卵 と 蛹 の 時 期 であるが この 時 期 は 先 天 的 に 全 く 移 動 する 能 力 はないので 後 述 する1 重 の 拡 散 措 置 で 良 い 但 し 卵 から 幼 虫 へと 孵 化 する 時 期 と 蛹 から 羽 化 する 時 期 は 後 述 する 幼 虫 成 虫 と 同 様 な 措 置 を 講 じることとする 幼 虫 時 期 と 成 虫 時 期 には 移 動 能 力 を 有 するが 家 畜 化 が 最 も 進 んだ 生 物 であるカイコは 自 ら 餌 を 見 つけ 出 してそれを 食 べて 成 長 することはないこと 成 虫 ( 蛾 )は 飛 翔 することができないことから 幼 虫 成 虫 とも 後 述 する2 重 の 拡 散 防 止 措 置 の 方 法 とれ ばよい カイコの 幼 虫 は 餌 を 探 しての 移 動 がなく 成 虫 は 飛 翔 能 力 がないとはいえ 逃 亡 の 可 能 性 がゼ ロではないので 飼 育 室 実 験 室 では 扉 と 窓 は 必 ず 閉 めておくこと 開 口 部 があればふさいでおく などカイコが 逃 亡 できないような 構 造 にしておくことが 必 要 である また 実 験 者 への 付 着 の 可 能 性 があり そのまま 飼 育 室 実 験 室 外 に 持 ち 出 してしまう 危 険 性 があるため 飼 育 室 実 験 室 では 必 ず 実 験 着 と 専 用 の 履 物 を 着 用 し 退 出 時 に 実 験 着 や 履 物 に 付 着 がないことを 確 認 した 上 で ロ ッカー 等 に 保 管 することが 肝 要 である 実 験 後 の 遺 伝 子 組 換 えカイコは 死 滅 させてから 廃 棄 する が 遺 伝 子 組 換 えウイルス 等 の 接 種 の 場 合 は ウイルス 接 種 カイコ 人 工 飼 料 排 泄 物 使 用 飼 育 容 器 などをオートクレーブなどで 滅 菌 し 遺 伝 子 組 換 えウイルス 等 を 死 滅 させることが 必 要 であ る なお 本 マニュアルにおける 例 示 は P1A 及 び P2A の 拡 散 防 止 措 置 を 対 象 としている したがっ て P3A 以 上 の 拡 散 防 止 措 置 が 必 要 な 実 験 においては それに 対 応 した 適 切 な 拡 散 防 止 措 置 の 要 件 が 必 要 とされる さらに 実 験 計 画 において 拡 散 防 止 措 置 が 不 明 である 場 合 には 大 臣 確 認 申 請 を 行 う 必 要 がある 1

2. 拡 散 防 止 措 置 の 要 件 (1) 施 設 等 の 要 件 (ハード 要 件 ) [ 遺 伝 子 組 換 えカイコの 飼 育 ] 幼 虫 や 成 虫 蛹 が 外 部 に 出 ることはカイコの 生 物 特 性 からその 危 険 性 は 低 いが 指 定 された 実 験 室 (1 重 )において 飼 育 容 器 (2 重 )を 用 いた 拡 散 防 止 措 置 で 飼 育 すること 前 室 あるいはインキ ュベーター*など(3 重 )を 設 置 すればさらに 拡 散 防 止 措 置 は 向 上 する P1A P2A 1 飼 育 室 実 験 室 (1 重 ) 通 常 の 飼 育 室 実 験 室 の 構 造 を 有 すること 窓 には 網 戸 を 設 置 ** ドアは 閉 じた 際 に 隙 間 が ない 構 造 であること 2 飼 育 容 器 (2 重 ) 遺 伝 子 組 換 えカイコの 幼 虫 や 成 虫 ( 蛹 )の 飼 育 保 管 はカイコが 逃 亡 しない 程 度 の 空 気 穴 を 用 い 容 易 に 蓋 が 開 かない 飼 育 容 器 で 行 うこと 大 きさ 規 格 材 質 は 特 に 指 定 しないが 内 部 が 目 視 出 来 ること その 後 の 不 活 化 の 必 要 性 を 考 え それに 適 した 材 質 にすることが 望 ま しい 3 オートクレーブ 飼 育 室 実 験 室 に 設 置 することが 望 ましい 異 なる 場 所 に 設 置 する 場 合 は 逃 亡 しないような 容 器 に 入 れて 持 ち 運 ぶこと なお P2A の 場 合 は オートクレーブは 同 じ 建 物 内 に 設 置 され ていること 4 排 泄 物 の 回 収 カイコは 尿 を 排 出 しないため 糞 の 回 収 を 行 う カイコの 糞 は 給 餌 した 桑 葉 や 人 工 飼 料 の 残 さと 共 に 回 収 する 齢 に 関 わらず 廃 棄 の 際 は 残 さをすべて 冷 凍 庫 で 半 日 (カイコが 完 全 に 死 滅 する6 時 間 程 度 )の 冷 凍 処 理 の 後 に 廃 棄 する なお 遺 伝 子 組 換 えウイルス 等 が 接 種 されている 場 合 は 必 ずオートクレーブ 処 理 し 冷 凍 処 理 での 死 滅 は 行 わないこと * インキュベーター(3 重 ) 特 に 機 種 等 は 指 定 しないが 内 部 や 扉 にカイコが 逃 亡 できる 穴 や 隙 間 などがないこと 2

[ 遺 伝 子 組 換 えウイルス 等 の 接 種 ] 本 項 は カイコへの 遺 伝 子 組 換 えバキュロウイルス 接 種 によるタンパク 質 の 生 産 の 場 合 にのみ 限 定 して 適 用 する その 他 の 遺 伝 子 組 換 えウイルス 等 の 接 種 の 場 合 には 別 途 拡 散 防 止 措 置 のハ ード 要 件 を 検 討 する 必 要 がある P1A 1 飼 育 室 実 験 室 遺 伝 子 組 換 えカイコの 飼 育 に 用 いられる 場 合 と 同 様 の 飼 育 室 実 験 室 2 インキュベーター(2 重 ) 特 に 機 種 等 は 指 定 しないが 内 部 や 扉 にカイコが 逃 亡 できる 穴 や 隙 間 などがないこと 3 飼 育 容 器 (3 重 ) 遺 伝 子 組 換 えウイルスをカイコに 接 種 する 実 験 を 行 う 場 合 密 閉 容 器 での 飼 育 に 限 定 するこ と 飼 育 容 器 は 4%のホルマリンないしは 200 倍 の 次 亜 塩 素 酸 ソーダを 用 いてウイルスの 不 活 化 を 行 うこと 4 オートクレーブ 飼 育 室 実 験 室 に 設 置 することが 望 ましい 異 なる 場 所 に 設 置 する 場 合 はカイコが 逃 亡 せず 遺 伝 子 組 換 えウイルスが 飛 散 しないような 密 閉 容 器 に 入 れて 持 ち 運 ぶこと 遺 伝 子 組 換 えウイルス 接 種 時 及 び 接 種 後 に 使 用 した 人 工 飼 料 はオートクレーブ 処 理 を 行 う こと 遺 伝 子 組 換 えウイルスを 接 種 したカイコからの 排 泄 物 も 上 記 人 工 飼 料 と 同 様 にオートクレー ブ 処 理 を 行 うこと 5 排 泄 物 の 回 収 保 管 遺 伝 子 組 換 えバキュロウイルス 接 種 によるカイコでのタンパク 質 の 生 産 の 場 合 は 密 閉 容 器 の 中 で 遺 伝 子 組 換 えウイルスを 接 種 したカイコを 飼 育 し 1 週 間 以 内 にそのカイコから 発 現 タンパク 質 を 回 収 する その 間 に 排 出 されたカイコの 糞 は 給 餌 した 桑 葉 や 人 工 飼 料 の 残 さと 共 に 回 収 し オートクレーブ 処 理 を 行 う それより 長 期 にわたる 場 合 は 別 途 回 収 保 管 す 3

る 容 器 や 設 備 を 検 討 する 必 要 がある P2A 1 飼 育 室 実 験 室 遺 伝 子 組 換 えカイコの 飼 育 に 用 いられる 場 合 と 同 様 の 飼 育 室 実 験 室 2 インキュベーター(2 重 ) 特 に 機 種 等 は 指 定 しないが 内 部 や 扉 にカイコが 逃 亡 できる 穴 や 隙 間 などがないこと 3 飼 育 容 器 (3 重 ) 遺 伝 子 組 換 えウイルスをカイコに 接 種 する 実 験 を 行 う 場 合 密 閉 容 器 での 飼 育 に 限 定 するこ と 飼 育 容 器 は 4%のホルマリンないしは 200 倍 の 次 亜 塩 素 酸 ソーダを 用 いてウイルスの 不 活 化 を 行 うこと 4 安 全 キャビネット エアロゾルが 発 生 しやすい 操 作 を 行 う 場 合 には 安 全 キャビネットを 設 置 すること 5 オートクレーブ オートクレーブは 同 じ 建 物 内 に 設 置 されていること 飼 育 室 実 験 室 に 設 置 することが 望 まし い 異 なる 場 所 に 設 置 する 場 合 はカイコが 逃 亡 せず ウイルスが 飛 散 しないような 密 閉 容 器 に 入 れて 持 ち 運 ぶこと 遺 伝 子 組 換 えウイルス 接 種 時 及 び 接 種 後 に 使 用 した 人 工 飼 料 はオートクレーブ 処 理 を 行 う こと 遺 伝 子 組 換 えウイルスを 接 種 したカイコからの 排 泄 物 も 上 記 人 工 飼 料 と 同 様 にオートクレー ブ 処 理 を 行 うこと 6 排 泄 物 の 回 収 保 管 遺 伝 子 組 換 えバキュロウイルス 接 種 によるカイコでのタンパク 質 の 生 産 の 場 合 は 密 閉 容 器 の 中 で 遺 伝 子 組 換 えウイルスを 接 種 したカイコを 飼 育 し 1 週 間 以 内 にそのカイコから 発 現 4

タンパク 質 を 回 収 する その 間 に 排 出 されたカイコの 糞 は 給 餌 した 桑 葉 や 人 工 飼 料 の 残 さと 共 に 回 収 し オートクレーブ 処 理 を 行 う それより 長 期 にわたる 場 合 は 別 途 回 収 保 管 す る 容 器 や 設 備 を 検 討 する 必 要 がある ** 3 ヶ 月 に 1 回 くらいホルマリン 薫 蒸 するので その 後 の 排 気 で 飼 育 室 の 窓 を 開 ける 際 外 部 から 昆 虫 類 が 入 らないようにするために 必 要 通 常 は 閉 鎖 5

(2) 実 施 上 の 遵 守 事 項 (ソフト 要 件 ) [ 遺 伝 子 組 換 えカイコの 飼 育 ] 1 P1 レベル(P1A レベルの 場 合 ) P2 レベル(P2A レベルの 場 合 )の 実 施 上 の 遵 守 事 項 2 実 験 中 及 び 飼 育 中 は 窓 を 閉 め 飼 育 室 への 出 入 り 以 外 では 扉 を 閉 じておくこと 3 遺 伝 子 組 換 えカイコの 死 滅 にはオートクレーブ 処 理 することが 望 ましい あるいは3 時 間 以 上 冷 凍 して 凍 死 させることでもよい ただし 後 述 の 遺 伝 子 組 換 えウイルス 接 種 の 場 合 は 必 ずオ ートクレーブ 処 理 で 接 種 カイコ 及 び 遺 伝 子 組 換 えウイルスの 死 滅 を 行 うこと 4 オートクレーブもしくは 冷 凍 庫 が 飼 育 室 実 験 室 とは 別 の 場 所 にある 場 合 は カイコが 逃 亡 しな いような 容 器 入 れて 持 ち 運 ぶこと 5 遺 伝 子 組 換 えカイコに 産 卵 させる 場 合 も 通 常 のカイコと 同 様 に 台 紙 の 上 に 蛾 の 移 動 を 防 ぐ 金 属 製 やプラスチック 製 のふたをかぶせて 行 う 遺 伝 子 組 換 えカイコの 産 卵 時 には 金 属 製 や プラスチックのふたに 卵 の 付 着 がないか 確 認 を 行 う 付 着 があった 場 合 には 除 去 しオートクレ ーブまたは 凍 結 処 理 で 死 滅 させる 6 飼 育 容 器 には 必 ず 種 類 ごとに 識 別 できる 表 示 を 行 うこと 7 室 内 では 実 験 着 実 験 室 内 専 用 の 履 物 を 着 用 する 実 験 従 事 者 にカイコが 付 着 して 室 外 に 持 ち 出 されることがないよう 実 験 着 は 室 内 もしくは 前 室 のロッカー 等 に 保 管 すること 特 に 実 験 着 実 験 室 内 専 用 の 履 物 の 脱 衣 の 際 は 実 験 着 に 遺 伝 子 組 換 えカイコの 付 着 がないか 十 分 な 確 認 を 行 った 上 で 保 管 すること 8 インキュベーターがある 場 合 には 遺 伝 子 組 換 えカイコが 飼 育 中 であることが 分 かるような 表 示 があることが 望 ましい 9 実 験 室 入 り 口 に 組 換 え 動 物 等 飼 育 中 (P1A レベルの 場 合 ) 組 換 え 動 物 等 飼 育 中 (P2) (P2A レベルの 場 合 )と 表 示 すること 6

[ 遺 伝 子 組 換 えウイルスの 接 種 ] 1 本 マニュアルは 遺 伝 子 組 換 えバキュロウイルス 感 染 によるカイコでのタンパク 質 の 生 産 のみ に 限 って 適 用 する 上 記 の 遺 伝 子 組 換 えカイコの 飼 育 の 場 合 の 要 件 に 加 え 遺 伝 子 組 換 えウ イルス 接 種 の 場 合 は 必 ずカイコおよび 飼 育 容 器 などをオートクレーブ 処 理 し 接 種 ウイルスを 死 滅 すること バキュロウイルス 以 外 の 遺 伝 子 組 換 えウイルスを 使 用 する 場 合 には 別 途 拡 散 防 止 措 置 のソフト 要 件 を 検 討 する 必 要 がある 2 すべての 操 作 においてエアロゾルの 発 生 を 最 小 限 に 留 めること 3 P2 レベルの 遺 伝 子 組 換 えバキュロウイルスを 接 種 において エアロゾルが 生 じやすい 操 作 を 行 う 場 合 は 必 ず 安 全 キャビネットを 用 いること 4 実 験 従 事 者 は 遺 伝 子 組 換 えバキュロウイルスの 付 着 を 防 止 するために 実 験 後 は 手 洗 等 の 必 要 な 措 置 を 講 じること (3)その 他 1 保 管 遺 伝 子 組 換 えカイコの 卵 の 保 管 は 容 易 に 蓋 の 開 かない 容 器 で 行 うこと 容 器 の 外 側 の 見 えやすい 箇 所 に 遺 伝 子 組 換 えカイコの 卵 である 旨 を 表 示 すること 容 器 は 所 定 の 場 所 に 保 管 すること 容 器 の 保 管 場 所 が 冷 蔵 庫 等 の 設 備 である 場 合 には 設 備 の 見 えやすい 箇 所 に 遺 伝 子 組 換 えカイコを 保 管 している 旨 を 表 示 すること 2 運 搬 遺 伝 子 組 換 えカイコの 運 搬 を 行 う 際 には 受 け 渡 し 簿 への 記 録 および 管 理 を 行 うこと 輸 送 中 にカイコが 逃 亡 できず かつ 容 易 に 破 損 しない 構 造 の 容 器 に 入 れて 輸 送 する なお 輸 送 中 の 容 器 の 破 損 を 防 ぐための 措 置 をとること 最 も 外 側 の 容 器 の 見 えやすい 箇 所 に 取 扱 に 注 意 を 要 する 旨 を 表 示 すること 7

遺 伝 子 組 換 えカイコの 拡 散 防 止 措 置 のイメージ ( 通 常 の 飼 育 室 等 での 使 用 ) 1 重 :カイコ 飼 育 室 実 験 室 2 重 : 飼 育 箱 (カイコが 逃 亡 しない 程 度 の 空 気 穴 容 易 に 蓋 が 開 か ない 構 造 ) カイコ 飼 育 室 実 験 室 排 気 用 窓 と 網 戸 (ホルマリン 薫 蒸 後 の 排 気 で 外 部 から 昆 虫 が 入 らな いため 通 常 は 閉 鎖 ) カイコ 死 滅 用 オートク レーブあるいは 冷 凍 庫 は 同 じ 室 内 にある ことが 望 ましいが 別 の 場 所 に あ る 場 合 は カイコが 逃 亡 しな いような 容 器 入 れて 持 ち 運 ぶこと も し くは 冷 凍 庫 オー ト クレ ーブ 飼 育 箱 ( 容 易 に 蓋 が 開 か ない 構 造 内 部 が 目 視 で きること) 種 類 表 示 飼 育 表 示 実 験 着 ロッカー( 実 験 着 は 室 内 でのみ 着 用 ) 8

1 重 :カイコ 飼 育 室 実 験 室 2 重 : 飼 育 箱 (カイコが 逃 亡 しない 程 度 の 空 気 穴 ) 3 重 : 前 室 あるいはインキュベーター ( 必 須 要 件 ではない) 遺 伝 子 組 換 えカイコの 拡 散 防 止 措 置 のイメージ ( 前 室 のあるいはインキュベーターのある 飼 育 室 等 での 使 用 ) カイコ 飼 育 室 実 験 室 前 室 排 気 用 窓 と 網 戸 (ホルマリン 薫 蒸 後 の 排 気 で 外 部 から 昆 虫 が 入 らな いため 通 常 は 閉 鎖 ) カイコ 死 滅 用 オートクレ ーブあるいは 冷 凍 庫 は 同 じ 室 内 にあることが 望 ましいが 別 の 場 所 にある 場 合 は カイコが 逃 亡 しないような 容 器 入 れて 持 ち 運 ぶこと も し くは 冷 凍 庫 オー ト クレ ーブ 飼 育 箱 ( 容 易 に 蓋 が 開 か ない 構 造 内 部 が 目 視 で きること) 種 類 表 示 飼 育 表 示 インキュベーターなど 組 換 え 表 示 実 験 着 ロッカー( 実 験 着 は 室 内 でのみ 着 用 ) 9

遺 伝 子 組 換 えカイコの 拡 散 防 止 措 置 のイメージ ( 遺 伝 子 組 換 えウイルス 接 種 の 場 合 ) 1 重 :カイコ 飼 育 室 実 験 室 2 重 :インキュベーター 3 重 : 飼 育 箱 ( 密 閉 容 器 ) カイコ 飼 育 室 実 験 室 排 気 用 窓 と 網 戸 (ホルマリン 薫 蒸 後 の 排 気 で 外 部 から 昆 虫 が 入 らな いため 通 常 は 閉 鎖 ) カイコ 死 滅 用 オートク レーブあるいは 冷 凍 庫 は 同 じ 室 内 にある ことが 望 ましいが 別 の 場 所 に あ る 場 合 は カイ コが 逃 亡 せ ず ウイルスが 飛 散 し ないような 密 閉 容 器 入 れて 持 ち 運 ぶこと オー ト クレ ーブ 飼 育 箱 ( 密 閉 容 器 内 部 が 目 視 できること) 種 類 表 示 飼 育 表 示 インキュベーターなど 組 換 え 表 示 10 実 験 着 ロッカー( 実 験 着 は 室 内 でのみ 着 用 )

参 考 九 州 大 学 大 学 院 農 学 研 究 院 遺 伝 子 資 源 開 発 研 究 センター 家 蚕 遺 伝 子 開 発 分 野 図 1. 飼 育 室 全 体 図 2. 前 室 がある 場 合 の 飼 育 ( 上 ) 前 室 ( 下 ) 飼 育 の 状 況 図 3. インキュベーターがある 場 合 の 飼 育 ( 上 )インキュベーター ( 下 )インキュベーター 内 の 飼 育 容 器 11

参 考 九 州 大 学 大 学 院 農 学 研 究 院 遺 伝 子 資 源 開 発 研 究 センター 家 蚕 遺 伝 子 開 発 分 野 図 4. 飼 育 容 器 の 例 ( 左 ) 小 さな 虫 ( 体 長 1センチ 未 満 ) 用 のふた 付 きプラスチック 容 器 で 密 閉 型 ( 右 ) 大 きな 虫 蛹 蛾 等 のふた 付 き 飼 育 容 器 ( 編 み 目 ザル) 編 み 目 は4ミリ 12