Promega KAWARABA 216 年夏号プロメガは 発光テクノロジーで 創薬 がん研究を サポートします 二頁 免疫チェックポイントをレポーターで 定量PD-1/PD-L1 三頁 グルコースの取込みとエネルギー代謝四頁 エピジェネティクス酵素の発光アッセイ五頁 anoluc ってすごい!: より高感度なレポーターアッセイ六頁 実験をすすめるためのRentaMAX 活用術七頁 細胞内タンパク質相互作用の高感度バイオセンサー FRET とBRET の活用 高感度検出装置GloMax Discover ystem プロメガ株式会社
バイオ医薬プロジェクト PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 PD-1/PD-L1 T T PD-1 PD-L1 T PD-L1 T PD-1/PD-L1 T PD-1/PD-L1 T T T PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay PD-1/PD-L1 T FAT FAT T FAT PD-1 Jurkat artificial antigen presenting cells, aapc PD-L1 CH-K1 1 PD-1 Effector Cell PD-L1 aapc Cell イベント 1 TCR(T 細胞受容体 ) を介した FAT の活性化 ADCC Reporter Bioassay Thaw-and-Use T 1 1 2 HT PD-1/PD-L1 3 A. Luminescence (RLU) 2.5 1 6 2. 1 6 1.5 1 6 1. 1 6 5. 1 5 9 8 7 6 5 4 Log 1 [pembrolizumab] g/ml B. T PD-1 PD-L2 CTLA-4 TIGIT/CD155 Co-inhibitory GITR CD4 4-1BB X4 Co-stimulatory Luminescence (RLU) 2.5 1 6 2. 1 6 1.5 1 6 1. 1 6 5. 1 5 9 8 7 6 5 4 Log 1 [nivolumab] g/ml 3. PD-1 PD-L1 aapc/ch-k1 16-2 PD-1 A B 37 6 Bio-Glo Reagent GloMax Discover ystem GraphPad Prism oftware 4PL curve EC5.25 µg/ml ; A.44 µg/ml ; B thaw-and-use 1349MA Ide IdeZ FAT-RE Luciferase Glo ignal Recovery PD-1 イベント 2 PD-1:PD-L1 による FAT シグナルの阻害 イベント 3 抗 PD-1 または抗 PD-L1 抗体による FAT シグナルの回復 PD-L1 138MA Ide IdeZ? Ide IdeZ Ide 4 IdeZ Ide IgG2a IgG3 ADCC ADCP Ide IdeZ 1. 4. Ide IdeZ IgG F(ab')2 Fc 24 Cells 時間以内 as reagents : (PD-1/PD-L1 Frozen, thaw-and-use Blockade cells (3-24hr) Bioassay) Ide or IdeZ lgg1 Hinge equence: -C-D-K-T-H-T-C-P-P-C-P-A-P-E-L-L-G-G-P--V Ide or IdeZ cleavage site キットに添付の細胞 ( 解凍してそのまま使用 ) バッファーに懸濁 プレートに播種 測定 約 1~2 週間 ( 従来法 ) PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay 1 kit J125 151, 5 kit J1255 68, 2 調達した細胞 培養 細胞数カウント 回収 バッファーに懸濁 プレートに播種 2. 1-2 1 測定 1252MA IdeZ Protease, Frozen 2 u V8342 86, Ide Protease, Frozen 2 u V7512 81, 8
高次元細胞プロジェクト 1 Glucose Uptake-Glo Assay 2- -6- Add to Measure 1 tep 1. 2DG の取り込み 2DG 2DG 6PDG G6PDH ls as reagents : Frozen, 2DG thaw-and-use cells (3-24hr) ADP + tep 2. 細胞溶解 ADPH + reductase tep 3. 発光による取り込みの量の測定 1 min 1. Glucose Uptake-Glo proluciferin luciferin ATP Ultra-Glo rluciferase 6 min Light GloMax 2- (2-DG) 7 Glucose Uptake-Glo Assay 2 3 2 MCF7 MDA-MB-231 HIF1 グルコース 乳酸 グルタミン グルタミン酸 AD(P)H ルシフェリン前駆体 AD(P) ルシフェリン Light ルシフェラーゼデヒドロゲナーゼレダクターゼ 2. as reagents : Frozen, thaw-and-use cells (3-24hr) Cells as reagents : Frozen, thaw-and-use cells (3-24hr) Cells MDA-MB-231 1 3. MDA-MB-231 MCF7 2% 2 3% 2 MCF7 MDA-MB-231 Glucose Uptake-Glo Assay ATP CellTiter-Glo RealTime-Glo 1 Web RLU 7 6 5 4 3 2 1 Glucose Lactate Hypoxia ormoxia Hypoxia ormoxia MDA-MB-231 MCF7 RI RI Add to Measure 5 ml J1341 63, Glucose Uptake-Glo Assay 1 ml J1342 11, 5 ml J1343 44, CellTiter-Glo 2. Assay 1 ml G9241 15, PC 1 ml G9242 59, RealTime-Glo MT Cell Viability, 1 1 G9711 2, 1 1 G9712 97, 8 PC 8 Glucose Detection assay Lactate Detection assay Glutamate Detection assay Glutamine Detection assa 3Promega KAWARABA
アカデミア創薬サポートプロジェクト HDAC 26 AHA HDAC HDAC 11 Class I 1 2 3 8 Class II 4 5 6 7 9 1 Class IV 11 HDAC HDAC HDAC-Glo Assay 1 A. B. Boc-XX H 脱アセチル化クロマチン H H DA DA DA 4 MTase-Glo Methyltransferase Assay DA - AH MTase-Glo AH 2 ペプチド ヒストン コアヒストン メチルトランス 2 本鎖オリゴヌクレオチド DA フェラーゼヌクレオソーム AM 遺伝子発現なし Glow-type luminescence 1. HDAC HDAC-Glo I/II ubstrate H Boc-XX H HDAC Ultra-Glo Luciferase ATP, Mg CH 3 ペプチド ヒストン コアヒストン 2 本鎖オリゴヌクレオチド DA ヌクレオソーム AH H 2 HATs HDACs H H 2 MTase-Glo Reagent Developer Reagent H ADP アセチル化クロマチン H 1548MA 遺伝子発現 A. HDAC HAT B. HDAC- Glo I/II Assay 1 MTase-Glo Detection olution Light 13146MA 2 Jumonji C-domain JHDM uccinate-glo 3 JHDM uccinate JHDM ヒストンまたはペプチド 3. uccinate-glo DA MTase-Glo Methyltransferase-Glo: a universal, bioluminescent and homogenous assay for monitoring all classes of methyltransferases Epigenomics (216) 8(3), 321 339. http://www.futuremedicine.com/doi/abs/1.2217/epi.15.113 Characterization of the histone methyltransferase PRDM9 using biochemical, biophysical and chemical biology techniques Biochem. J., Jul 214; 461: 323-334. http://www.biochemj.org/content/461/2/323 Quantitative profiling of the activity of protein lysine methyltransferase MYD2 using ILAC-based proteomics Mol. Cell. Proteomics, Mar 216; 15: 892-95. http://www.mcponline.org/content/early/216/1/1/mcp.m115.5328. abstract Jmjc 2-G コハク酸 + 脱メチル化基質 コハク酸 ステップ 1: コハク酸の変換 試薬 I 中間体 ステップ 2: 中間体から ATP と光への変換 中間体 試薬 II ルシフェラーゼ / ルシフェリン MTase-Glo Methyltransferase Assay 4 V761 85, 2 V762 32, HDAC-Glo I / II Assay 1 ml G642 77, HDAC-Glo Class IIa Assay 1 ml G956 77, HDAC-Glo 2 Assay 1 ml G959 77, uccinate-glo & MethylEdge Bisulfite Conversion ystem 5 131 4, PC 8 PC 8 Light 2. MTase-Glo 4
ありのままの細胞解析 anoluc anoluc ip PPI Protein Reporter Genetic Reporter 2 Protein Reporter PPI anobret anobit Genetic Reporter ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay Dual ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay anoluc luciferase 2 anoluc Luciferase 15 1 Dual-Glo Luciferase Assay Dual-Luciferase Reporter Assay Dual-Glo Luciferase Assay ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay anoluc Dual-Glo Luciferase Assay Dual-Luciferase Reporter Assay Relative Luminescence (RLU) 1 8 1 7 1 6 Luc in anodlr FLuc in anodlr 1 5 FLuc in Dual-Glo RLuc in DLR RLuc in Dual-Glo FLuc in DLR 1 4 2 4 6 8 1 12 Time After Reagent Addition (minutes) 1. anodlr anodlr TK-RLuc TK-FLu c DA TK-Luc anoluc TK-FLuc DA 1 1 8 HEK293 anodlr DLR Dual-Glo Dual-Luciferase Assay ystem anodlr Assay Luc Fluc anoluc Luciferase anoluc Luciferase 2 anoluc Luciferase anoluc PET % activity 1 5 HEK293 LucP Luc 1 2 3 t[min] FLuc FLuc-P anoluc anoluc-p % activity 1 5 HeLa LucP 12881MA Luc 1 2 3 t[min] 2. anoluc HEK293 luc lucp Fluc FlucP Cell line FLuc FLucP Luc LucP HEK-293 >6 h 2..4 h >6 h 18 11 min HeLa 3.8 1.3 h 1.4.2 h >6 h 2 6 min U2 n=1 >6 h 2.8 h >6 h 36 min FLucP LucP PET anoluc anoluc Luciferase ATP anoluc Luciferase ATP ph AC Chem. Biol., 212, 7 (11), pp 1848 1857 plcoi Vectors Coincident mra luc2 PET anoluc lucp 2 3 1 anoluc 2 8 Fold Induction 1 5 one 1 ng/well 5 ng/well Reporter 1 p2a Reporter 2 True Hit 1 ng/well 25 ng/well 5 ng/well luc tabilization 1 ng/well 2 ng/well Fluc Fluc tabilization 3. mra anoluc 2 P2A 2 DA Luciferase Assay ystem anoluc 4 DA 15 HuTlR9/HuUnc93B1 4. DA 8 luc HEK293 pl3.2.f-κ B-RE Vector Toll like receptor 9/ Unc93B1 ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay Fold Induction 12519MA 5Promega KAWARABA
RentaMAX RentaMAX? RentaMAX GloMax /Maxwell RC / RentaMAX RentaMAX RA Maxwell RC Instrument RA 12 4 RA 1 RA RA RA RentaMAX 4 + RA 1 RA qpcr RA Maxwell RC RA Maxwell RC RentaMAX Dual-Luciferase Reporter Assay ystem GloMax 2/2 Luminometer RentaMAX GloMax 2/2 Luminometer GloMax 2/2 Luminometer or Wnt TGF β 6% ( ) 2 / 2 12 2 4 RA 6 4 RA 6 Maxwell RC 12 / 2 12 8 4 RA 4 4 RA 4 RentaMAX RentaMAX RentaMAX RentaMAX 6 RentaMAX 3 4 RentaMAX 1 RentaMAX RA anoluc RentaMAX RentaMAX www.promega.co.jp/rentamax/
FRET BRET GloMax Discover ystem Co-IP: Co-immunoprecipitation FRET BRET FRET FRET BRET FRET BRET / BRET FRET BRET FRET 励起光 BRET 基質 シグナル 蛍光 蛍光 シグナル 蛍光 発光酵素 Prot X Prot Y Prot X Prot Y 励起光 シグナル シグナル 生体成分 バックグラウンドシグナル 試験化合物 FRET FRET 1 FRET 1 1 FRET BRET BRET BRET BRET FRET BRET BRET GloMax Discover ystem BRET/FRET GloMax Discover ystem BRET Preliminary GloMax Discover ystem BRET FRET/BRET FRET BRET FRET BRET FRET / BRET FRET GloMax Discover ystem / UV / GloMax Dual Injectors with Pumps 1 GM3 4,6, 1 GM33 9, PC 3 1-21 moles > 9 anobret / BRET 7Promega KAWARABA
ID ID www.promega.co.jp/promegaclub.html 216 7 11 ~9 3 3 Glucose Uptake-Glo Assay 5 ml J1341 63, 44,1 2 PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay 1 kit J125 151, 12,8 2 IdeZ Protease, Frozen 2 u V8342 86, 6,2 4 MTase-Glo Methyltransferase Assay 4 V761 85, 59,5 4 HDAC-Glo I/II Assay, 1ml 1 ml G642 77, 53,9 4 HDAC-Glo Class IIa Assay, 1ml 1 ml G956 77, 53,9 4 HDAC-Glo 2 Assay, 1ml 1 ml G959 77, 53,9 5 plcoi1[luc2-p2a-lucp/hygro] Vector 2 µg 1461 1, 7, 5 plcoi2[luc2-p2a-lucp/minp/hygro] Vector 2 µg 1471 1, 7, 5 plcoi3[luc2-p2a-lucp/cmv/hygro] Vector 2 µg 1481 1, 7, 5 plcoi4[luc2-p2a-lucp/pgk/hygro] Vector 2 µg 1491 1, 7, URL CellTiter-Glo 2. Assay 1 ml G9241 15, 9, ano-glo Luciferase Assay 1 ml 111 23, 18, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay/pL1.1.TK Bundle 1 1521 8, 4, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay/pL1.1.PGK Bundle 1 1531 8, 4, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay/pGL4.54 [luc2/tk] Bundle 1 1541 8, 4, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay/pGL4.53 [luc2/pgk] Bundle 1 1551 8, 4, ano-glo Dual-Luciferase Reporter Assay ystem 1 ml 161 39, 31, MethylEdge Bisulfite Conversion ystem 5 131 4, 2, Web site www.promega.jp Tel. 3-3669-798 / Fax. 3-3669-7982 E-Mail : prometec@jp.promega.com プロメガ株式会社本社 13-11 東京都中央区日本橋大伝馬町 14-15 マツモトビル Tel. 3-3669-7981/Fax. 3-3669-7982 販売店 大阪事務所 532-11 大阪市淀川区西中島 6-8-8 花原第 8 ビル 74 号室 Tel. 6-639-751/Fax. 6-639-752 製品の仕様 価格については 216 年 7 月現在のものであり予告なしに変更することがあります PK167-1B