Large Particle Flow Cytometry 大きなサンプルのためのフローサイトメトリー解析 大きなサンプルのためのフローサイトメトリー解析 従来のフローサイトメトリーは シングルセルが主な解析対象となっており 大きすぎたり壊れやすかったりしたサンプルには対応していませんでした このようなサンプルは多く存在しますが フローサイトメトリーに対する代替え法としては 顕微鏡を用いたマニュアルでのソーティングになってしまい実験の規模や範囲が制限されてしまいます ユニオンバイオメトリカ社が発売している COPAS もしくは BioSorter は 大きなサンプルを解析することが可能なフローサイトメーターで これらの問題を解決することが可能です 今までマニュアルで行っていたソーティング操作を自動化できるため 操作に要する時間が格段に短縮されます また ヒューマンエラーを除くことができるため より高感度かつ定量的な客観的データを得ることが可能です COPAS BioSorter 解析の対象 解析可能なサイズ :20-1500 μ m 主なサンプル : 小さなモデル生物 (Zebrafish, C.elegans) 大きな細胞 (hepatocyte) 細胞のクラスター (Embryoid Bodies) 種 花粉 ビーズなど
ソーティングのメカニズム COPAS および BioSorter のソーティングは従来のフローサイトメトリーの基本原理に基づいていますが大きな違いとして以下の 2 点があります 1. 大口径の流体力学とフローセルを採用していることにより従来よりも大きな 20-1500 μ m サイズのサンプルを解析することができます 2. エアの吹き出しによってサンプルをソーティングするメカニズムを採用しているので 従来よりもはるかに穏やかな条件 ( 従来の約 1/20 の圧力 ) でソーティングすることが可能です 従来のフローサイトメーターでは機械的なソーティングや静電気的なチャージをソーティング原理に用いているため細胞へのダメージが大きくなってしまいます サンプル導入 シースフロー シースフロー フローの収束 レーザー励起 蛍光検出 光学密度とサイズの検出 不要なサンプルの回収 ソーティングサンプルの回収 24, 48, 96, 384 ウェルマイクロプレート データの解析 ユーザーは 特異的なアッセイファイルや実験データを作成 保存 回収することが可能です 解析によって集められた生データはテキストファイルおよび List Mode Data(LMD) フォーマットの両方で保存されます LMD フォーマットは多くのフローサイトメトリー解析用ソフトウェアと互換性があります 数値的な生データは 種々の解析プログラム ( スプレッドシートプログラムなど ) に容易にインポートすることが可能なので 複雑な解析や微妙な生物学的観察の統計処理 数値データから導かれる結論の増強を行うことができます 2
機器ラインナップ COPAS と BioSorter の 2 種類の機種がございます COPAS は解析する対象のサイズに応じて 4 種類のモデルからお選びいただけます BioSorter は フローセルを交換することで全てのサイズレンジに対応することが可能な汎用モデルです COPAS 製品仕様 製品名本体サイズ重量設置スペース ( 推奨 ) 価格 * COPAS 0.5m(W)x0.6m(D) 40kg 2.0m(W)x0.6m(D) お問合せください * カスタム製品のため価格は仕様によって異なります COPAS の 4 つのモデルの違い BIOSORT SELECT PLUS XL フローセルのサイズ 250 μ m 500 μ m 1000 μ m 2000 μ m 解析対象のサイズ 40-200 μ m 40-350 μ m 40-700 μ m 100-1500 μ m 解析速度 * 35 (150) eps 25 (100) eps 15 (100) eps NA (20) eps バルク容器への分注速度 * 15 (25) eps 10 (20) eps 5 (10) eps NA (2) eps 96 ウェルへの分注時間 (1 object/well) 1.5-2 分 /plate 1.5-2 分 /plate 1.5-2 分 /plate 1.5-2 分 /plate 分注精度 (1/well) ウェルの 98%(XL のみ 95%) 以上に一つ以上の対象が分注される 2 つもしくはそれ以上の対象がウェルに含まれる割合は 5% 以下 1well あたりの最大滴下数 最大 570/well 最大 400/well 最大 40/well 最大 10/well 回収タイプ 24, 48, 96 ウェルプレート (BIOSORT は 384 にも対応 ) 静置バルク容器 励起レーザーオプション ** 488/514nm マルチラインアルゴンイオン 670(or 635)nm ダイオード 405 488 561nm 固体レーザー UV325nm および 375nm レーザー 検出光学 吸光 + 3PMTs (Green, Yellow, Red) その他も可能 eps: events per second *() 内は Advanced Acquisition Package 実装機器でのデータ ** 機種によっては一部使用できないレーザーもございます 3
BioSorter 製品仕様 製品名本体サイズ重量設置スペース ( 推奨 ) 価格 * BioSorter 1.15m(W)x0.54m(D) 70kg 1.8m(W)x0.9m(D) お問合せください * カスタム製品のため価格は仕様によって異なります BioSorter は 1 台で幅広いサンプルサイズに対応した汎用タイプの機器なので共通機器として複数の研究者が異なるサンプルを解析することも可能です 解析対象のサイズは 10-1500 μ m の範囲になります サンプル溶液は 50mL のコニカルチューブに入れます ( オプションで 1L もしくは 2L に変更可能 ) システムの操作は Windows ベースのソフトウェア FlowPilot で行います FlowPilot ソフトウェアでは 測定パラメータのリアルタイム解析をソーティングの決定に使用します ユーザーの選択したソーティング基準に合った対象物のみがマイクロタイタープレートやチューブに分取されます また基準を外れた対象物は エアの吹き出しにより別のコンテナに穏やかに回収されます X-Y-Z ステージにより 24 48 96 ウェルマイクロタイタープレートに分注することができます 異なる高さのプレートも z 方向を調節することで対応可能です 製品の選択方法 測定したいサンプルの違いにより推奨の機器が異なります 詳細は技術担当とのディスカッションによりご提案いたしますのでご相談ください フローセルのサイズ ( μ m) 250um 500um 1000um 2000um 測定対象のサイズ (μ m) 10-200 20-400 30-750 30-1500 サンプルタイプ 対象のステージ C. elegans embryo to adult synchronized adult embryo to 1st instar 小型モデル生物 D. melanogaster 1st and 2nd instar 3rd instar D. rerio embryo to hatching Zebrafish embryo to larva (6days) 植物 Arabidopsis & tobacco seeds, early seedlings Adipocytes Duct Cells 大きな細胞と Hepatocytes 細胞クラスター Pancreatic islets Stem Cells Embryoid Bodies Beads Beads 4
アプリケーションの紹介 ユニオンバイオメトリカ社のフローサイトメーターを用いることで以下のようなアプリケーションが実際に確立されています ご興味あるアプリケーションがございましたら弊社までご連絡ください モデル生物 1.C.elegans を用いた HTS と Target validation 14,100 もの低分子のスクリーニングを C.elegans で行っています 2. Zebrafish:embryos と hatchlings のソーティング 3. Zebrafish を用いたドラッグスクリーニングと毒性試験の自動化 4. COPAS を用いたマラリアコントロール研究 Zebrafish を用いた毒性試験の自動化に関するアプリケーションです 蚊の幼虫の雌雄を初期の段階でハイスループットソーティングすることにより様々な研究に役立っています 細胞およびクラスター 5. Pancreatic Islet のソーティングと QC サイズに基づいて Pancreatic Islet を定量的にソーティングしています 移植等の研究に応用可能なアプリケーションです 6. マウス肝細胞 viability とサイズ分布の解析などを行うことが可能です 7. Embryoid Bodies のソーティング EB のような細胞の集合体の状態でも YFP 発現や抗体染色によりプロファイリングすることが可能です ビーズ 8. 1 日で行うビーズを用いた 1,000,000 化合物ライブラリのスクリーニング ビーズに化合物を結合したライブラリを利用することでハイスループットのスクリーニングを実現することが可能です 9. 細胞のマイクロカプセル化によるクローン解析 細菌や細胞をマイクロカプセル化することで1クローンを含むビーズのプロファイリングやソーティングが可能になります 他にも多数のアプリケーションがあります! 応用例にご興味ある方はウェブページでご確認ください http://www.veritastk.co.jp/ 5
アクセサリー ユニオンバイオメトリカ社では顧客毎のニーズに併せて最適なプラットフォームを提供することが可能です バルクディスペンサーから完全自動化システムまでをカスタマイズした光学フィルター レーザー ハードウェア ソフトウェアなどと共にご提案することができます ReFLx Sampler 最初の解析で 96 ウェルマイクロタイタープレートにソーティングされたサンプルを再解析するための組み込み型サンプルインジェクションシステムです 96 ウェルプレートの振とうやサンプルの吸引を行いフローセルで解析します 解析されたサンプルはユーザーがセットした基準に基づき新しいプレートに分注されます Advanced Acquisition Package (AAP) より優れたデータ解像度や取得率を得るためのパッケージです ハードウェアおよびソフトウェアのアップデートを含みます 16 ビットのデータ解像度で得られるより高解像度のシグナルにより 標準のシステムよりも 32 倍詳細なデータが得られます これにより 小さな対象の検出や 5 μ m 以下のサイズの違いの識別 より低い蛍光シグナル強度の検出なども可能になります データ取得率の向上による解析の時間は通常よりも 4 倍早くなります 6
Profiler II 標準のソフトウェアでは 一つの解析対象に対して各パラメータあたり一つのシグナルを取得するだけですが Profiler II では 1 サンプルあたり最大で 8000 のデータポイントをそれぞれ 4 つの光学パラメータ ( 吸光および 3 つの蛍光チャンネル ) に対して検出および記録することが可能です 連続したピークとして対象をデジタル化して表示しますので フローセルを通過する対象の蛍光強度を直接トレースすることができます こちらのシステムには Advanced Acquisition Package を含んでいます グラフィックおよび数値によるイメージングにより対象の長さと蛍光および吸光の強度を組み合わせて表示でき 微妙な変化を観察することができます ソーティングは ユーザーが定義した基準に基づきそれぞれのパラメータのピークの高さ 幅 位置 数などで行うことができます 7
AUBC-12-0151