病理コラボ

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1 東北大学大学院医学系研究科実験動物病理プラットフォーム

2 東北大学大学院医学系研究科共通機器室管理運営委員会委員長赤池孝章実験動物病理プラットフォーム責任者古川徹大和田祐二同コンサルテーション担当者古川徹同技術担当者上田麻衣子田澤智香伊達文子本間悠香吉澤美季同事務担当者佐藤真希山下恒雄 ( 平成 31 年 4 月 1 日現在 )

3 実験動物病理標本作製支援業務について平成 21 年 7 月 1 日平成 31 年 4 月 1 日共通機器室管理運営委員会委員長赤池孝章実験動物病理プラットフォーム責任者古川徹大和田祐二同技術担当代表田澤智香 brc-path@brc.med.tohoku.ac.jp 電話 : 東北大学大学院医学系研究科共通機器室では平成 20 年 6 月 23 日から実験動物を対象とした病理標本作製 ( 光顕および電顕 ) の研究支援業務を目的とする実験動物病理プラットフォームを開設致しておりますこの支援業務では研究現場の意見を積極的に取り入れサービスの充実を図るとともに新しい技術手法への対応も行っていく方針ですのでご利用のほどよろしくお願い致しますなお経費は利用者負担とさせて頂きますのでご了承ください利用方法 1 受付 : 標本作製を依頼する場合は実験動物病理プラットフォーム利用依頼書 ( 共通機器室予約管理システム下方病理標本作製支援からダウンロード ) に必要事項を入力し添付で brcpath@brc.med.tohoku.ac.jp へ送信または1 号館 11 階実験動物病理プラットフォームに検体とともに提出して下さい 2 組織の搬入 : 組織は摘出後直ちに充分量の固定液 ( 組織の 10 倍量以上 ) に入れできるだけ早急に1 号館 11 階実験動物病理プラットフォーム ( 内線 7584) に搬入して下さい組織の切り出し面の指定など詳細については搬入時にご相談下さい 3 標本受領 : 標本完成のメール連絡を受けた後組織の搬入場所 ( 上記 2) で受領のサインをして標本ブロックおよび残りの組織などをお受け取り下さい 4 経費負担 : 別に定める運用取り決めおよび運用細目 ( 後記 ) を参照して下さい 1

4 実験動物病理プラットフォーム運用取り決め平成 20 年 6 月 23 日施行平成 30 年 4 月 1 日改正実験動物病理プラットフォームは東北大学大学院医学系研究科の研究教育活動を支援するために以下の項目についての支援サービスを提供する 1 支援項目 A 光顕標本 ( 以下組織標本とする ) の作製 (1) 組織標本作製 ( パラフィンブロック凍結ブロック作製と HE 染色および未染スライド作製 ) (2) 持ち込みブロックの薄切染色および持込みスライドの染色 (3) 特殊染色 (4) 免疫染色 ( 一次抗体は持ち込み ) (5) 自動染色装置 ( ディスカバリー ) を用いたISH (In situ hybridization) 及び TUNEL (6) 実験動物病理プラットフォーム機器使用および染色などのための部屋使用 (7) その他各種要望に応じた対応 B 電顕標本 ( 透過型 ) の作製 (1) 電顕標本作製 (2) 電子顕微鏡観察 (3) 写真撮影 (4) 標本作製の技術指導電子顕微鏡観察および写真撮影の操作指導 2 登録と経費支援項目の利用にあたっては共通機器室への登録 ( 含む実験動物病理 PF への分室登録 ) が必要で標本作製料以外に別途共通機器室利用の分野負担金分室登録料個人登録料を負担しなければならない以上の支払い財源は運営交付金または寄附金に限るが該当年度の4 月から1 月までに依頼を受けその間に完成引き渡した標本の作製料だけは科研費などの外部資金も使用できる請求時期は7ページ参照 2

5 3 依頼標本作製依頼に関しては依頼書及び検体の提出をもって受付ける 4 試料保存標本作製後は依頼者に試料をすべて返却し保管の責任は負わない 5 不可抗力により生じた試料の損害に対しては一切責任を負わない 6 機器および染色等のために部屋を使用する際の注意事項 1) 病理プラットフォーム室利用の際は事前に電話もしくはメールで予約する 2) 使用するスライドガラスなど消耗品は持ち込みとする 3) 機器使用した場合は使用記録ノートに下記の必要事項を記入する 1 使用日 2 分野名 3 使用者名 ( 複数の場合は全員 ) 4 使用時間 5 使用内容 ( 機器名消耗品名数量染色の種類など ) 6 その他 ( トラブルなど ) 4) 使用後は使用前の状態に整理整頓し汚した場合は掃除をする 5) 使用時間は平日の午前 9 時から午後 5 時 (12 時 ~13 時を除く ) までとする 7 この運用取り決めに定めるもののほか必要な細目は共通機器室管理運営委員会委員長が別に定める 3

6 運用細目 1 組織材料 1) 実験動物の器官組織に限る ( 関連の培養細胞も可 ) 2) 未固定や凍結の感染性試料肝炎ウイルスエイズ結核梅毒 P3およびP4 レベルを要件とする病原体は受け付けないプリオン感染が疑われる組織細胞は固定されたものでも受付けない 2 ヘマトキシリンエオジン染色 (HE) すべてのブロックについて行う 3 特殊染色 HE 染色以外の特殊染色を必要とする場合は固定法染色条件ならびに目的など事前に打ち合わせを要するエラスチカマッソントリクローム染色 (EM) 過ヨウ素酸シッフ染色 (PAS) マッソントリクローム染色 (MT) その他特殊染色 4 免疫染色固定法染色条件目的など事前に打ち合わせを要するなお一次抗体は持ち込みとし所見が得られない場合も課金する 5 自動染色装置 ( ディスカバリー ) 使用 ISH(In situ hybridization) 1) 固定法染色条件など事前に打ち合わせを要する 2) プローブ : 各自作製精製する 3) 薄切したスライド標本の持ち込み : スライドガラスは機器専用かマツナミAPSコート付きを使用する 4) 標本作製 : 薄切から染色までは組織標本作製に準ずる 5) 条件設定 : 各自条件検討を行いハイブリダイゼーションの条件を設定する自動染色装置で条件検討を行う場合必要経費は依頼者が負担する 6) バーコード印刷および貼付プローブの分注は依頼者が行う 7) 費用は実費相当額とし所見が得られない場合も課金する 4

7 6 電子顕微鏡 1) 灌流固定 : 灌流固定後組織の摘出は依頼者が行い残りの組織は持帰る 2) 固定脱水包埋 : 作製するブロック数は通常 5~10 個 (1 サンプル当たり ) とするブロック数に増減がある場合は事前に打合せを要する 3) 準超薄切片作製トルイジン青染色 : 依頼者はトルイジン青染色標本を光学顕微鏡で観察し電顕標本作製部位を指定する 4) 超薄切片作製電子染色 5) 免疫染色 : 固定法染色条件目的など事前に打合せを要する尚一次抗体は持ち込みとし所見が得られない場合も課金する 6) 観察写真撮影 ( デジタル画像 ): 各自ウイルスチェックを済ませたUSBメモリを持込み画像を保存する 7 利用負担額の算定 1) 組織標本の算定根拠は1ブロックまたは1スライド当たりとする動物組織は組織の大きさあるいは目的により複数臓器が1ブロックに包埋されることもあるまた 1 臓器が複数になる場合もある 2) 電顕標本の算定根拠は 1 組織検体当たりとするたとえば腎皮質腎髄質および右心室などはそれぞれ 1 組織検体とする 8 標本作製にかかる時間受付順に標本作製を行うため期日の指定には応じない一般的に組織標本は約 1~2 週間電顕標本は約 2~3 週間であるが依頼内容や混雑状況に応じて前後する場合もある 9 コンサルテーション希望によりコンサルテーションを病理医が行う事前のコンサルテーションおよび組織標本や電顕標本 ( 標本や写真 ) を観察しながらのコンサルテーションがありどちらも無料とする 10 マッペスライドケース完成した標本を受渡しする際依頼者がマッペ等用意するやむを得ず当室のマッペを持出す場合は速やかに返却する凍結標本の場合は必要に応じて依頼者がスライドケースを用意する 5

8 利用負担額平成 30 年 4 月 1 日改正 1 分野負担金 30,000/ 分野 / 年 ( 医学部外 ; 50,000/ 分野 / 年 ) 2 個人登録料 1,000/ 人 / 年 ( 医学部外 ; 3,000/ 人 / 年 ) 3 分室登録料 10,000/ 人 / 年 4 標本作製料組織標本作製 ( 消費税抜き ) パラフィンブロック作製 352 / ブロックパラフィンブロック作製 ( 再包埋 ) 54 / ブロックパラフィン切片作製 ( 未染スライド ( コーティング無 )) 108 / スライドパラフィン切片作製 ( 未染スライド ( コーティング有 )) 121 / スライド凍結ブロック作製 386 / ブロック凍結切片作製 ( 未染スライド ( コーティング有 )) 270 / スライドギ酸脱灰 760 / ブロック EDTA 脱灰 4,700 / ブロック HE 染色 306 / スライド特殊染色 EM 523 / スライド特殊染色 PAS 314 / スライド特殊染色 MT 703 / スライドその他特殊染色実費相当額免疫染色 ( 抗原賦活なし ) 955 / スライド免疫染色 ( 抗原賦活あり ph6 又は ph9 使用時 ) 1,158 / スライドその他免疫染色実費相当額 TUNEL 9,779 / スライド TUNEL( キット持ち込み時 ) 3,632 / スライド ISH 実費相当額 ISH( キット持ち込み時 ) 実費相当額 * 免疫染色の一次抗体は持込みとする * 所見が得られなくても課金する * 上表に記載のない項目については事前に打合せを要し標本作製を行う場合は実費相当額を請求する *TUNEL は基本的にミリポア社の ApopTaq Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit を用いて自動染色装置 ( ディスカバリー ) で染色する 6

9 電顕標本作製 : 透過型 ( 消費税抜き ) 灌流固定 \911 / 匹 ( 灌流固定液のみ ) \9 /ml 固定 ~ 包埋 \5,769 / サンプル ( エポン樹脂追加分 ) \1,036 / 回準超薄切片トルイジン青染色 \1,265 / ブロック超薄切片電子染色 \4,121 / ブロックその他電子染色実費相当額免疫電顕 (pre 培養細胞 ) \7,746 / スライド免疫電顕 (pre 凍結切片 ) \8,404 / スライド観察 ( 写真撮影も含む ) \1,028 / 時間 * 作製するブロック数は通常 5~10 個 / サンプルだが依頼者の希望によりブロック数が増えた場合はエポン樹脂を追加調整する毎に \1,050 を加算する * 準超薄切片トルイジン青染色超薄切片電子染色は通常 1ブロック / サンプルから標本作製を行うただし担当者が固定不良など不適と判断した場合あるいは依頼者の希望により複数のブロックより標本作製を行う場合は作製したブロック数に応じて料金が加算される * 免疫染色の場合一次抗体は持込みとし所見が得られなくても課金する尚条件検討が必要な場合は実費相当額を請求する * 観察料金について 1 時間未満の観察時間が生じた際は 1 時間に切り上げる標本作製料金の負担方法該当年度の4 月から1 月までに依頼を受けその間に完成引き渡した標本の作製料は分野ごと集計して同年度 2 月に請求し支払い財源は運営交付金寄附金科学研究費補助金受託研究費受託事業費預り補助金等の外部資金を含む全ての財源とするまた同年度 2 月以降に完成引き渡した分は次年度 10 月に請求するこの場合の支払い財源は運営交付金寄附金のみとする 7

標本作製依頼から受取りまでの流れ組織標本および電顕標本の依頼は原則として下記の流れに従って行う依頼書のダウンロード共通機器室予約管理システムHPのTOP 画面下方病理標本作製支援よりダウンロード https://www.brc.med.tohoku.ac.jp/ 依頼書の提出依頼書に必要事項を入力メールに添付し件名標本作製依頼としてbrc-path@brc.med.tohoku.ac.jpへ送信または検体とともに提出電顕標本のご依頼の場合は事前連絡必須検体の搬入と依頼受付 ( 依頼 No.

10 標本作製依頼から受取りまでの流れ組織標本および電顕標本の依頼は原則として下記の流れに従って行う依頼書のダウンロード共通機器室予約管理システムHPのTOP 画面下方病理標本作製支援よりダウンロード依頼書の提出依頼書に必要事項を入力メールに添付し件名標本作製依頼または検体とともに提出電顕標本のご依頼の場合は事前連絡必須検体の搬入と依頼受付 ( 依頼 No. の押印 ) 組織標本 9:00~17:00 電顕標本 9:00~17:00 ( 組織 ) 9:00~11:00 ( 培養細胞 ) 搬入前の固定液の受取りホルマリン 9:00~17:00 電顕用固定液 9:00~17:00 1 号館 11 階実験動物病理プラットフォームにて標本の受取り標本は完成後各依頼者にメール連絡標本の受取り 9:00~17:00 1 号館 11 階実験動物病理プラットフォームにて但し 12:00 から 13:00 を除く 8

11 実験動物病理プラットフォーム病理標本作製手順 ( 依頼者と事前に打合せ ) 凍結切片パラフィン切片電顕標本未固定または4%PFA (4%PFA 固定の場合は 10 30% sucrose/pbs の後処理必要 ) 10% ホルマリン固定脱水中間剤パラフィン浸透 4%PFAによる灌流固定グルタールオスミウムの二重固定脱水プロピレンオキシド置換エポン浸透凍結ブロック作製パラフィンブロック作製エポンブロック作製クリオスタットで凍結切片作製ミクロトームでパラフィン切片作製ウルトラミクロトームで準超薄切片作製一般染色 (HE 染色 ) 特殊染色脂肪染色免疫染色蛍光抗体法酵素抗体法酵素組織化学エステラーゼ ATPase など ISH 一般染色 (HE 染色 ) 特殊染色結合組織フィブリングリコーゲン多糖類脂肪アミロイド無機物金属病原菌真菌内分泌生体内色素神経組織生体内血液細胞生体内酵素など免疫染色 ISH TUNEL 光学顕微鏡で観察チェックウルトラミクロトームで超薄切片作製電子染色電子顕微鏡観察写真撮影 9

12 組織標本並びに ISH における切り出し固定の注意事項 ( 各依頼者は下記の注意に従って組織を固定した後実験動物病理プラットフォームに搬入する ) 1. 摘出した組織は自家融解をできるだけ早く阻止するため直ちに切り出しをし固定液に入れる柔らかく切り出しにくい組織は大きいまま固定し硬くなってから再度切り出すとよい 2. 組織の厚さは固定液の浸透を考慮して5mm 以下とし大きさはスライドガラス (76 26mm) におさまることとする 3. 切り出しには鋭利な刃物を用い組織が損傷挫滅しないようにする 4. 観察したい部位面については担当者に説明する 5. 固定液は少なくとも組織の5 10 倍以上の充分量を用いるまた血液や組織液により濁った場合は交換する 6. 腎臓脾臓リンパ節など被膜で覆われている組織は固定液が浸透しにくいので割を入れてから固定する 7. 固定は充分に行なう固定時間は組織の大きさにもよるが 1 日から1 週間以内が望ましい電顕標本における切り出し固定の注意事項 1. 電顕標本にする場合は灌流固定することが望ましい 2. 灌流固定後目的の組織は素早く傷をつけないように摘出しプラチック板の上で切り出して前固定液へ浸漬する前固定液は凍結保存し常温 ~37 で使用する 3. 組織を細切する際は両刃カミソリを下図のように折り両手に持ち左右に引いて細切するまたはピンセットで軽く組織を押さえてピンセットの間にカミソリの刃を入れカミソリを引いて細切する大きさは約 1mm 角数は通常 5~10 個 (1サンプル当たり) とする刃カミソリはあらかじめアセトンにつけておいたものを使用する組織は乾燥させない ( 前固定液を滴下して細切する ) 押し切りはしない 4. 細切した試料は前固定液に浸漬し 11 階実験動物病理プラットフォームに搬入する固定時間は約 2 時間 ( 常温 ) であるが保存する場合は冷蔵庫で約 1 週間保存可能 10

大学院博士課程共通科目ベーシックプログラム

大学院博士課程共通科目ベーシックプログラム平成 30 年度医科学専攻共通科目共通基礎科目実習 ( 旧コア実習 ) 概要 1 ). 大学院生が所属する教育研究分野における実習により単位認定可能な実習項目 ( コア実習項目 ) 1. 組換え DNA 技術実習 2. 生体物質の調製と解析実習 3. 薬理学実習 4. ウイルス学実習 5. 免疫学実習 6. 顕微鏡試料作成法実習 7. ゲノム医学実習 8. 共焦点レーザー顕微鏡実習 2 ). 実習を担当する教育研究分野においてのみ単位認定可能な実習項目