[PDF] ゲノム編集ツール Edit-R CRISPR-Cas9
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- おさむ さわなか
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1 imagination at work ゲノム編集 RNAi 遺伝子発現 ゲノム編集ツール Edit-R CRISPR-Cas9 テクニカル マニュアル Dharmacon ダーマコン
2 1 CRISPR-Cas CRISPR-Cas...3 CRISPR-Cas Edit-R CRISPR-Cas Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid Cas9...4 Edit-R trans-activating CRISPR RNA tracrrna...5 Edit-R CRISPR RNA crrna...5 crrna...6 Dharmacon CRISPR RNA Configurator crrna...6 crrna Edit-R CRISPR-Cas Edit-R CRISPR-Cas Edit-R CRISPR-Cas Appendix...12 Blast R Edit-R CRISPR-Cas9 Nuclease Expression Plasmid Dharmacon Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid Dharmacon Edit-R tracrrna crrna Dharmacon DharmaFECT Duo Transfection Reagent FAQ Evrogen...19
3 1 CRISPR-Cas9 CRISPR-Cas CRISPR clustered regularly interspaced palindromic repeats -Cas CRISPR-associated proteins DNA DNA CRISPR CRISPR CRISPR CRISPR RNA CRISPR RNA crrna crrna CRISPR RNA crrna RNA crrna DNA crrna CRISPR-associated Cas DNA protospacer-adjacent motif PAMBhaya, 2011 CRISPR-Cas9 CRISPR-Cas Cas Streptococcus pyogenes S. Pyogenes CRISPR-Cas9 S. pyogenes DNA PAM 3 Jinek, Cas9 2 crrna CRISPR CRISPR RNA 3 trans-activating CRISPR RNA CRISPR RNA crrna 1 tracrrna Deltcheva, 2011 DNA NHEJ HR NHEJ Mali, 2014; Sampson, 2014 DNA S. pyogenes CRISPR-Cas9 ゲノムDNA PAM crrna tracrrna 1 Cas9 tracrrna crrna crrna DNA PAM 5' 3
4 2 Edit-R CRISPR-Cas9 Edit-R CRISPR-Cas9 3 1 Cas tracrrna 3 crrna S.pyogenes CRISPR-Cas9 DharmaFECT Duo Transfection Reagent 3 2 ターゲットcrRNA の 設 計 crrnaの 配 列 を 1 遺 伝 子 あたり3~5 種 類 カスタム 設 計 します Webで 注 文 1. カスタム 設 計 したcrRNA 2. tracrrna 3. Cas9ヌクレアーゼを 発 現 用 プラスミド 4. DharmaFECT Duo トランスフェクション 試 薬 納 品 後 トランスフェクション Cas9ヌクレアーゼ 発 現 用 プラスミド tracrrna:crrna 2 Edit-R CRISPR-Cas9 培 養 2~3 日 間 ゲノムが 編 集 された 細 胞 を FACS 法 で 濃 縮 培 養 3~4 日 間 ゲノムが 編 集 された 細 胞 を 抗 生 物 質 選 択 で 濃 縮 dharmacon.gelifesciences.co.jp > SMARTCas9 Expression Plasmid (mkate2) 使 用 時 SMARTCas9 Expression Plasmid (Puro R ) 使 用 時 Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid Cas9 S. pyogenes Cas9 Csn1 mkate2 Evrogen Puro R Cas9 3A Cas9 3' 5' mkate2 Puro R C Cas9 3B SMARTCas9 Expression Plasmid DNA 4
5 mkate2 T2A Cas9 pa Edit-R SMARTCas9 SMARTCas9 (mkate2) Expression Plasmid SMARTchoice プロモーター hcmv mcmv hef1α mef1α PGK CAG SMARTchoice プロモーター hcmv mcmv hef1α mef1α PGK CAG mkate2 T2A Cas9 pa Puro R T2A Cas9 pa SMARTCas9 (mkate2) Expression Plasmid SMARTCas9 (Puro R ) Expression Plasmid SMARTchoice プロモーター Cas9 mkate2 T2A pa hcmv mcmv hef1α mef1α PGK CAG Puro R SMARTCas9 (Puro R ) Expression Plasmid T2A S. pyogenes Cas9 tracrrna crrna 588 nm 653 nm Cas9 pa mkate2 Cas9 BGH 3A Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid Cas9 Puro R T2A pa S. pyogenes Cas9 tracrrna crrna Puro R Cas9 BGH hcmv mcmv hef1α mef1α PGK CAG 1α 1α β 3B Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid hcmv Cas9 12 Appendix Edit-R trans-activating CRISPR RNA tracrrna S. pyogenes tracrrna Jinek, 2012 HPLC RNA Edit-R CRISPR RNA crrna DNA 20 tracrrna S. pyogenes RNA DNA DNA PAM S. pyogenes PAM NGG 4 5
6 crrna crrna DNA PAM S. pyogenes NGG 5' 20 DNA RNA U6 5' G DNA 4 PAM 5' DNA Fu, 2013; Hsu, 2013; Wang, 2013 PAM 3 DNA Cas9 Dharmacon CRISPR RNA Configurator crrna crrna Dharmacon CRISPR RNA Configurator dharmacon. gelifesciences.com/gene-editing/edit-r/custom-crrna/ "I want to design a crrna" crrna crrna PAM 5' crrna crrna 20 crrna dharmacon.gelifesciences.com/gene-editing/edit-r/custom-crrna/ "Use my own crrna sequence" crrna 20 Dharmacon CRISPR RNA Configurator S. pyogenes 3' 42 crrna 4 4 PPIB chr PAM 5' crrna 20 Dharmacon CRISPR RNA Configurator DNA RNA 22 S. pyogenes 3' 42 crrna crrna 6
7 3 Edit-R CRISPR-Cas9 Edit-R CRISPR-Cas9 3 Cas9 Expression Plasmid DNA tracrrna crrna DharmaFECT Duo Transfection Reagent Edit-R CRISPR-Cas9 Edit-R CRISPR-Cas9 Web dharmacon.gelifesciences.com Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid 120 µg SMARTCas9 Expression Plasmid mkate2 Edit-R hcmv_mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R mcmv_mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R hef1α_mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R mef1α_mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R PGK_mKate2-Cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R CAG_mKate2-Cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) SMARTCas9 Expression Plasmid Puro R Edit-R hcmv_puro R -Cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R mcmv_puro R -Cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R hef1α_puro R -Cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R mef1α_puro R -Cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R PGK_Puro R -Cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R CAG_Puro R -Cas9 Expression Plasmid DNA (cat #U ) Edit-R CRISPR Cas9 Nuclease Expression Plasmid Blast R 120 µg Dharmacon U Appendix mkate2 Transfection Optimization Plasmid 120 g Dharmacon U Appendix tracrrna 5 nmol 120 µg Dharmacon U crrna 20 nmol Dharmacon CTM-XXXXXX-XXX dharmacon.gelifesciences.com/gene-editing/ edit-r/custom-crrna/ DharmaFECT Duo Transfection Reagent Dharmacon T ml T ml T ml T ml 5 7
8 CellTiter-Blue Cell Viability Assay Promega G8081 Fisher Scientific BP S Fisher Scientific BP mm Tris ph 7.4 Edit-R CRISPR-Cas9 DharmaFECT Duo Transfection Reagent Cas9 Expression Plasmid DNA tracrrna crrna HEK293T ,000 HEK293T 100, ml ml % CO 2 1 Cas9 Expression Plasmid DNA Cas9 Expression Plasmid DNA tracrrna crrna RNA Cas9 RNA Cas ph mm Tris 1.2 ml Cas9 Expression Plasmid DNA 120 µg 100 ng/ µl Cas9 260 nm DNA 100 ng/µl 7. ph mm Tris 500 µl tracrrna 5 nmol 10 µm tracrrna 260 nm RNA 10 µm 8
9 8. ph mm Tris 2 ml crrna 20 nmol 10 µm crrna 260 nm RNA 10 µm ml tracrrna crrna 50 nm Cas9 Expression Plasmid DNA 1 1 µg mg/ml DharmaFECT Duo Transfection Reagent 120 µl 2 ml 60 µg/ml DharmaFECT Duo tracrrna 10 µm crrna 10 µm Cas9 100 ng/µl DharmaFECT Duo 60 µg/ml 1 Cas9 Expression Plasmid DNA Cas9 Expression Plasmid DNA tracrrna crrna HEK293T µl DharmaFECT Duo 50 µl DharmaFECT Duo 1 3 µg DharmaFECT Duo 100 µl µl 500 µl µl % CO Cas9 2 SMARTCas9 Expression Plasmid a. mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA FACS mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA FACS mkate2 3 9
10 mkate2 588 nm 633 nm Omega Optical QMAX-Red XF102-2 Texas Red b. Puro R -Cas9 Expression Plasmid DNA Puro R -Cas9 Expression Plasmid DNA % SURVEYOR Mutation Detection Kit Integrated DNA Technologies T7 Endonuclease Guschin, 2010; Reyon, 2012; Cong, 2013 DNA Reyon, Edit-R CRISPR-Cas9 Edit-R mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA 588 nm 633 nm 70% 96 DharmaFECT Duo Transfection Reagent RNA RNA % DharmaFECT Duo Transfection Reagent DharmaFECT Duo Transfection Reagent µg/ml µl ng
11 µg/well A 100 ng 200 ng 100 ng 200 ng 0.3 B 100 ng 200 ng 100 ng 200 ng 0.4 C 100 ng 200 ng 100 ng 200 ng 0.5 D 100 ng 200 ng 100 ng 200 ng 0.6 E 100 ng 200 ng 100 ng 200 ng 0.7 F 100 ng 200 ng 100 ng 200 ng 0.8 G 100 ng 200 ng 100 ng 200 ng H DharmaFECT Duo Transfection Reagent A G ng 200 ng ng ng H % ph mm Tris 1.2 ml 120 µg 100 ng/µl Cas9 260 nm DNA 100 ng/µl 3. 7 DharmaFECT Duo µg/ml 1 mg/ml DharmaFECT Duo Transfection Reagent 10 µl 15 µl 20 µl 25µl 30 µl 35 µl 40 µl 500 µl DharmaFECT Duo µg 5 4. Cas9 10 µl 4 DharmaFECT Duo 10 µl 20 µl DharmaFECT Duo 20 DharmaFECT Duo 4 96 Cas9 100 ng/lµl DharmaFECT Duo µg/ ml 1 Edit-R mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA 100 ng Edit-R mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA 200 ng µl µl 100 µl µl 11
12 7. mkate2 mkate2 a b % DharmaFECT Duo 70% 9 8. SMARTCas9 Nuclease Expression Plasmid tracrrna crrna tracrrna crrna nm 25 nm mkate2 Edit-R mkate2-cas9 Expression Plasmid DNA tracrrna crrna 5 Appendix Blast R Edit-R CRISPR-Cas9 Nuclease Expression Plasmid S. pyogenes Cas9 Csn1 hcmv 40 SV40 Blast R Cas9 5 DNA Vector elements of the Edit-R Cas9 Nuclease Expression plasmid hcmv Cas9 phcsvblast-cas9 Blast R SV40 hcmv Cas9 SV40 Blast R hcmv mkate2 S. pyogenes Cas9 phcsvblast-mkate tracrrna crrna 40 Blast R Blast R SV40 5 Edit-R BlastR-Cas9 Nuclease Expression Plasmid 12
13 Vector elements of the Edit-R Cas9 Nuclease Expression plasmid hcmv Cas9 Edit-R CRISPR-Cas9 Nuclease Expression Plasmid Cas9 mkate2 mkate2 Transfection Optimization Plasmid 6 phcsvblast-cas9 Blast R mkate2 Transfection Optimization Plasmid SV40 hcmv mkate2 phcsvblast-mkate Blast R SV40 hcmv mkate2 588 nm 653 nm SV40 40 Blast R Blast R 6 Edit-R mkate2 Transfection Optimization Plasmid Dharmacon Edit-R SMARTCas9 Expression Plasmid ph mm Tris Dharmacon Edit-R tracrrna crrna ph mm Tris Dharmacon DharmaFECT Duo Transfection Reagent Web dharmacon.gelifesciences.com Service & Support Documents & Downloads Technical Resources RNAi & RNA Accell Stability Product Bulletin
14 FAQ tracrrna crrna Edit-R tracrrna MALDI-TOF HPLC crrna RNA 260 nm Dharmacon 2 -ACE crrna Dharmacon 2 -ACE RNA crrna 2 crrna crrna RNA tracrrna crrna RNA Edit-R Plasmid tracrrna crrna 4 5 tracrrna crrna RNA ph 7.4 RNA 4 5 Edit-R Cas9 Nuclease Expression Plasmid mkate Transfection Optimization Plasmid tracrrna crrna 2 4 RNA DNA Edit-R Gene Engineering System Edit-R Cas9 Expression plasmid DNA mkate2 Transfection Optimization plasmid DNA tracrrna crrna RNA RNA 260 nm = cm crrna tracrrna nm cm 10 mm 1 2 mm
15 Edit-R Cas9 Expression Plasmid DNA DNA DharmaFECT Duo Transfection Reagent DharmaFECT Web dharmacon.gelifesciences.com Edit-R Cas9 Gene Engineering Cas9 Edit-R Cas9 Expression Plasmid 1) Cas9 CMV Blast R Cas9 U ) FACS SMARTCas9-mKate2 Expression Plasmid 6 3) FACS SMARTCas9-Puro R Expression Plasmid 6 Cas9 Cas9 Cas9 mkate2 Cas9 Edit-R Cas9 Expression Plasmid SMARTCas9-mKate2 Expression Plasmid mkate2 15
16 Edit-R mkate2 Transfection Optimization Plasmid Edit-R Cas9 Nuclease Expression Plasmid Cas9 mkate2 Edit-R mkate2 Trasfection Optimization Plasmid SMARTCas9 Expression Plasmid SMARTCas9-mKate2 Expression Plasmid Edit-R tracrrna crrna Cas9 tracrrna crrna Edit-R Cas9 Expression Plasmid Cas9 crrna tracrrna (Streptococcus pyogenes) CRISPR-Cas9 Cas9 Cas9 Cas9 DNA tracrrna crrna 1 RNA sgrna RNA tracrrna crrna Edit-R crrna Edit-R sgrna DNA DharmaFECT Duo Edit-R DharmaFECT Duo DNA RNA DharmaFECT Duo Edit-R DNA Surveyor(IDT) T7EI(NEB) DNA DNA PCR CRISPR-Cas9 1. Cas9 NHEJ DNA 2. DNA PCR 3. CRISPR-Cas9 16
17 Edit-R Edit-R Edit-R Cas9 Edit-R RNA crrna tracrrna Streptococcus pyogenes CRISPR-Cas9 Cas9 Cas9 Cas9 DNA tracrrna crrna Edit-R RNA Cas9 mrna Cas9 tracrrna crrna Edit-R Cas9 Expression Plasmid Cas9 Cas9 mrna crrna tracrrna Streptococcus pyogenes CRISPR-Cas9 Cas9 Cas9 Cas9 Cas9 mrna DNA tracrrna crrna CRISPR-Cas9 CRISPR-Cas9 SNP B crrna SNP 17
18 D. Bhaya, M. Davison, et al. CRISPR-Cas systems in bacteria and archaea: versatile small RNAs for adaptive defense and regulation. Annu. Rev. Genet. 45, (2011). L. Cong, F. A. Ran, et al. Multiplex Genome Engineering Using CRISPR/Cas Systems. Science. 339(6121), (2013). E. Deltcheva, K. Chylinski, et al. CRISPR RNA maturation by trans-encoded small RNA and host factor Nuclease III. Nature. 471(7340), (2011). Y. Fu, J. D. Sander, et al. Improving CRISPR-Cas nuclease specificity using truncated guide RNAs. Nat. Biotechnol. (2014). D.Y. Guschin, A. J. Waite, et al. A rapid and general assay for monitoring endogenous gene modification. Methods Mol. Biol. 649, (2010). F. Heigwer, G. Kerr, et al. E-CRISP: fast CRISPR target site identification. Nat. Methods. 11(2), (2014). P.D. Hsu, D. A. Scott, et al. DNA targeting specificity of RNA-guided Cas9 nucleases. Nat. Biotechnol. 31(9), (2013). M. Jinek, K. Chylinski, et al. A Programmable Dual-RNA-Guided DNA Endonuclease in Adaptive Bacterial Immunity. Science. 337(6096), (2012). P. Mali, L. Yang, et al. RNA-guided human genome engineering via Cas9. Science. 339(6121), (2013). N. K. Pyzocha, F. A. Ran, et al. RNA-Guided Genome Editing of Mammalian Cells. Methods Mol. Biol. 1114, (2014) D. Reyon, C. Khayter, et al. Engineering designer transcription activator-like effector nucleases (TALENs) by REAL or REAL-Fast assembly. Curr. Protoc. Mol. Biol. 100, (2012). T. R. Sampson, D. S. Weiss. Exploiting CRISPR/Cas systems for biotechnology. Bioessays. 36(1), (2014). T. Wang, J. J. Wei, et al. Genetic screens in human cells using the CRISPR-Cas9 system. Science. 343(6166), (2014). 18
19 6 Evrogen Evrogen Evrogen JSC Evrogen 1 2 Evrogen Evrogen Evrogen Evrogen Licensing Department, Evrogen JSC Miklukho-Maklaya street 16/10, Moscow,117997, Russian Federation E-mai license@evrogen.com
20 FAQ Q&A Web FAQ Web FAQ Q&A 9:00 17: Life Sciences Academy lifesciences-ac.com GE Life Sciences Academy
Microsoft PowerPoint - 資料6-1_高橋委員(公開用修正).pptx
第 1 回遺伝子治療等臨床研究に関する指針の見直しに関する専門委員会 平成 29 年 4 月 12 日 ( 水 ) 資料 6-1 ゲノム編集技術の概要と問題点 筑波大学生命科学動物資源センター筑波大学医学医療系解剖学発生学研究室 WPI-IIIS 筑波大学国際睡眠医科学研究機構筑波大学生命領域学際研究 (TARA) センター 高橋智 ゲノム編集技術の概要と問題点 ゲノム編集とは? なぜゲノム編集は遺伝子改変に有効?
Alt-R CRISPR-Cas9 System sgrna( シングルガイドRNA) はこれまで その長さのために一度に合成することが出来ませんでした Alt-R CRISPR-Cas9 Systemは sgrnaを元来のcrrna( シーアールRNA) とtracrRNA( トレイサー RNA)
Alt-R CRISPR-Cas9 System sgrna( シングルガイドRNA) はこれまで その長さのために一度に合成することが出来ませんでした Alt-R CRISPR-Cas9 Systemは sgrnaを元来のcrrna( シーアールRNA) とtracrRNA( トレイサー RNA) の2 種に分けることで grnaを2 本の化学合成 RNAで納品するサービスです sgrna complexの作製も5
/ N /C / / Flexi Vector N2391, N2401, N2411 MCS Vector N2361, N2371, N2381 Flexi ORF Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System A9281 LigaFast Rapid DNA Li
プロメガ株式会社 / N /C / / Flexi Vector N2391, N2401, N2411 MCS Vector N2361, N2371, N2381 Flexi ORF Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System A9281 LigaFast Rapid DNA Ligation System M8221 1 2 1 1 10 1 1 10 / /
Type-it Mutation Detect PCR プロトコールとトラブルシューティング (2301449 11/2008)
June 2008 Type-it Mutation Detect PCR PCR SNPs 2 3 QIAxcel Agilent 2100 Bioanalyzer 8 13 17 Sample & Assay Technologies MSDS material safety data sheet Operon Biotechnologies www.operon.com TE 100 µm 20
PAXgene Tissue DNA Kitプロトコールとトラブルシューティング(2301605 06/2009)
January 2009 PAXgene Tissue DNA Kit PAXgene Tissue Containers DNA PAXgene Tissue Container PAXgene DNA 3 PAXgene DNA 6 PAXgene DNA 9 13 2 PAXgene Tissue DNA Kit 01/2009 PAXgene DNA DNA PAXgene Tissue Containers
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Edit-R CRISPR-Cas9 ゲノム編集試薬選択ガイド Horizon Discovery 社では 下記 3 つのアプリケーションに合わせて CRISPR-Cas9 システムによるゲノム編集に必要なコンポーネントであるガイド RNA(guide RNA) Cas9 ヌクレアーゼ ドナー DNA(donor DNA) をご用意しています 遺伝子ノックアウトガイド RNA と Cas9 ヌクレアーゼを使用して
CRISPR/Cas9 Genome Engineering 独自の NickaseNinja All-in-One ベクターで CRISPR/Cas9 技術を用いたゲノム編集をさらに簡単に! ゲノム編集 (Genome Editing) とは CRISPR/Cas システムや Transcript
CRISPR/Cas9 Genome Engineering All-in-One NickaseNinja vector CRISPR/Cas9 Genome Engineering 独自の NickaseNinja All-in-One ベクターで CRISPR/Cas9 技術を用いたゲノム編集をさらに簡単に! ゲノム編集 (Genome Editing) とは CRISPR/Cas システムや
PowerPoint プレゼンテーション
2015.7.22 メディカルサイエンス推進研究所技術セミナー ゲノム編集技術が与える 医学へのインパクト 遺伝子改変マウス作製への応用を中心に メディカルサイエンス推進研究所遺伝子実験センター中島修 1 ゲノム編集は PCR 以来のゲームチェンジャー (game changer: 世論の動向を大きく変える出来事 ) 2 20 NATURE VOL 522 4 JUNE 2015 20 NATURE
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Dharmacon 製品検索 WEB 注文マニュアル 製品検索 WEB 注文の流れ STEP 1: 製品検索 注文ページへのアクセスからユーザー認証まで ホームページ (dharmacon.horizondiscovery.com) へアクセス (2 ページ ) ユーザー認証 (2-3 ページ ) E-mail アドレスおよびパスワードを入力 STEP 2: 製品の検索 選択からカートへの移動まで
IDT テクニカルレポート vol.2 CRISPR/Cas9 を用いた効率的なノックインラット マウスの作製 ~ 一塩基置換や GFP 等の導入 ~ 国立遺伝学研究所系統生物研究センターマウス開発研究室助教吉見一人大阪大学大学院医学系研究科附属動物実験施設准教授真下知士 はじめに ゲノム編集技術は
IDT テクニカルレポート vol. CRISPR/Cas9 を用いた効率的なノックインラット マウスの作製 ~ 一塩基置換や GFP 等の導入 ~ 国立遺伝学研究所系統生物研究センターマウス開発研究室助教吉見一人大阪大学大学院医学系研究科附属動物実験施設准教授真下知士 はじめに ゲノム編集技術は 様々な生物種において自由な遺伝子操作を可能にし 基礎から応用まで多岐にわたるメディカル ライフサイエンス研究に影響をもたらしている
17-05 THUNDERBIRD SYBR qpcr Mix (Code No. QPS-201, QPS-201T) TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN A4196K
17-05 THUNDERBIRD SYBR qpcr Mix (Code No. QPS-201, QPS-201T) TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN A4196K - 18 - [1] 1 [2] 2 [3] 3 [4] 5 [5] : RNA cdna 13 [6] 14 [7] 17 LightCycler TM Idaho
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ゲノム編集の医学への応 田中光一 東京医科歯科大学 難治疾患研究所 ゲノム編集とは? 遺伝子の配列を自在に改変する技術 A と T C と G がペア ( 相補性 ) 染色体と DNA 遺伝子から形質までの過程 ゲノム編集は 相同組換えを利用する 外来遺伝子 標的遺伝子非標的遺伝子 相同組み換え ランダムな挿入 外来遺伝子の分解 標的遺伝子の改変 非標的遺伝子の改変 遺伝子の改変無し DNA の 2
能書単頁9[1].5(2)
![能書単頁9[1].5(2)](/thumbs/87/96620151.jpg "能書単頁9[1].5(2)")
ips CytoTune -ips ver.1.0 1 I CytoTune ips 3 II 3 3 4 5 III CytoTune ips ips 6 6 6 6 7 1) 2) ips 8 ips 8 SeV 9 SeV 10 IV Q&A 11 V 12 12 VI...13 13...13 2 I CytoTune ips CytoTune ips 4 OCT3/4SOX2 KLF4c
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shrna 発現用レンチウイルスベクター選択ガイド shrna の誘導的な発現を希望しますか?( ターゲット遺伝子の恒常的な発現抑制が細胞に悪影響を与える場合など ) YES NO プロモーターと蛍光レポーターを選択できる最上位製品を希望しますか? プロモーターと蛍光レポーターを選択できる最上位製品を希望しますか? YES NO YES NO SMARTvector Inducible Lentiviral
Agilent Microarray Total Solution 5 5 RNA-Seq 60 mer DNA in situ DNA 5 2 QC 4200 TapeStation 2100 / mirna CGHCGH+SNP ChIP-on-chip 2 mirna QC
Microarray Agilent Microarray Total Solution Agilent Microarray Total Solution 5 5 RNA-Seq 60 mer DNA in situ DNA 5 2 QC 4200 TapeStation 2100 / mirna CGHCGH+SNP ChIP-on-chip 2 mirna QC RNA / mirna total
ゲノム編集 ターゲティングゲノム編集システムの分類 すべてのゲノム編集システムは エンドヌクレアーゼによる特異的配列切断に依存しています 特異的配列ターゲティングのメカニズムには DNA ガイドと RNA ガイドの 2 種類があります 最も一般的に使用される DNA 誘導系は メガヌクレアーゼ (M
Targeted Genome Editing 1. ターゲティングゲノム編集 概要ゲノム編集は遺伝子機能の研究 ゲノム改変による欠陥遺伝子の修正 または新しい機能獲得のため強力なゲノムツールとなっています ゲノム編集の機構は標的 DNA の配列特異的切断を含み その修復を行う間に組み込まれた編集を行います ゲノム編集は遺伝子ノックアウト 遺伝子活性化の制御 創薬スクリーニング およびゲノム遺伝子座の画像化を含む様々な用途に使用されます
NanoVuePlus_H1-4_CC2014.indd
NanoVue Plus 71-3327-34 ... 2... 2... 2... 3... 4... 5... 6 NanoVue Plus...6 NanoVue Plus Sample... 7 Life Science... 9 1. DNA/RNA... 10 2. CyDye... 12 3.... 15 3-1Protein UV UV Protein A280 A280... 15
研究成果報告書
(P Pleurodeles Dev (ck waltl) v. Growth Di CRE-l KO) cko ffer., 2013 loxp DNA TALEN D cko TA loxp Dev. Growth ck O CR TALEN Differ., 2014 cko KO (cko) CDK1 cko RE 4 O 10 ) cko 1 cko O loxp TALEN CRISPR
13:00 13:1513:25 13:2514:40 14:5015:35 15:4516:45 16:4516:50 i 2 AF ii 3 AF AF I 1 1 iii AF (+)- 1. AF +++ +++ +++ +++ +++ +++ + AF I AF II AF III 1. AF AF I AF IIAF I 1. 2. 植 物 病 原 糸 状 菌 のゲノム 解 析 法
表紙／１５１７０８Ｈ
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HVJ Envelope siRNA/miRNA transfection KIT GenomONE - Si 浮遊系免疫細胞へのsiRNA/miRNA導入 データ集
HVJ Envelope sirna/mirna transfection KIT GenomONE-Si 浮遊系免疫細胞への sirna/mirna 導入 データ集 石原産業株式会社 0-0002 大阪市西区江戸堀 1 丁目 3 番 1 号 URL : https://www.iskweb.co.jp/products/hvj-e/ 1808GS3 HVJ Envelope sirna/mirna
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July 2007 AllPrep DNA/RNA Micro DNA RNA 5 x 10 5 5 mg Sample & Assay Technologies DNA RNA 3 DNA RNA 11 DNA RNA 19 24 2 AllPrep DNA/RNA Micro 07/2007 DNA RNA RNA AllPrep DNA Spin Column DNA RNeasy MinElute
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HVJ Envelope sirna/mirna transfection KIT GenomONE-Si 浮遊系免疫細胞への sirna/mirna 導入 データ集 石原産業株式会社 0-0002 大阪市西区江戸堀 1 丁目 3 番 1 号 フリーダイヤル 0120-409-816 FAX : 06-6444-7183 URL : https://www.iskweb.co.jp/products/hvj-e/
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StepOnePlus /StepOne PCR PCR PCR StepOnePlus StepOne PCR PCR Features At A Glance StepOne StepOnePlus / 48 96 FAM /SYBR Green dyes VIC /JOE dyes ROX dyes 1. NED /TAMRA dyes VeriFlex Block StepOnePlus StepOne
ゲノムを紡ぐ
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Agilent 2100 1 DNA RNA Lab-on-a-Chip Agilent 2100 1999 Agilent 2100 Lab-on-a-Chip Agilent 2100 RNA DNA SDS-PAGE Agilent 2100 Agilent 2100 Agilent 2100 : (1 4 µl) 30 21 CFR Part 11 Agilent 2100 Agilent
背景 人工 DNA 切断酵素である TALEN や CRISPR-Cas9 を用いたゲノム編集技術により 遺 伝性疾患でみられる一塩基多型を導入または修復する手法は 疾患のモデリングや治療のた めに必須となる技術です しかしながら一塩基置換のみを導入した細胞は薬剤選抜を適用で きないため 正確に目的
本件リリース先 文部科学記者会 科学記者会 広島大学関係報道機関 京都大学記者クラブ NEWS RELEASE 本件の報道解禁につきましては 平成 30 年 3 月 5 日 ( 月 ) 午後 7 時以降にお願いいたします 平成 30 年 3 月 2 日国立大学法人広島大学 国立大学法人京都大学 京都大学 ips 細胞研究所 ゲノム編集技術を用いたヒト ips 細胞での正確な一塩基置換技術 (MhAX
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GeneArt ... 2 GeneArt...... 3 GeneArt... 4 GeneArt Gene Synthesis... 5 GeneArt Strings DNA Fragments Libraries... 7... 9... 11 &... 12 GeneArt Elements Vector Construction... 13 GeneArt Elements Combinatorial
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2006 Chlamydomonas reinhardtii RNA 1070010 2007 3 20 p.3 p.3 p.4 p.7 p.8 p.8 p.9 p.9 2 [ ] RNA RNA RNA aada RNA RNAi-37 aph DNA Tag RNA Tag RESDA-PCR Tag Chlamydomonas reinhardtii Tag RNAi 176-10G Tag
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(nod/nol/noe) Nod 1B Nod 1B Nod Nod 2) Nod Nod Ca 2+ 3,4) 7,000 5) Myc Nem nod, exo nif, fix 2000 Mesorhizobium loti 2002 Bradyrhizobium japonicum DNA
63 110 1) 1A 1980 1BC (nod/nol/noe) Nod 1B Nod 1B Nod Nod 2) Nod Nod Ca 2+ 3,4) 7,000 5) Myc Nem nod, exo nif, fix 2000 Mesorhizobium loti 2002 Bradyrhizobium japonicum DNA 6, 7) (Symbiosis island) t-rna
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Ion PGM Heterogeneity * 1 * 1 * 2 * 2 * 2 * 2 * 2 * 1 *1 * 2 DNA DNA DNA ArcturusXT LCM Laser Capture Microdissection LCM A Workflow for Cancer Profiling Applied Biosystems ViiA7 PCR qpcr QC Assay Ion
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130603 (1-3) C 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) C 1) 2) 3) DNA 4) DNA RNA 5) 6) PCR 7) DNA C Cyclops Odlilon Redon, The Cyclops, 1914 WAGR www.wagr.org WAGR www.wagr.org Cell 126, 663-676, 2006 Wikipedia
1) a) b) CRP c) d) e) a,b b,c c,d d,e a,e b,d 2) CKD a) ACE ARB b) 2mg/dL ACE ARB c) 2mg/dL d) e) ACE ARB a,b b,c c,d d,e a,e b,d 3) a) 130/85mmHg b)
2010.1.13 1) 4) 2 18 1) 1 2 3 4 2) 1 2 85 3 3) 1 metabolizer 2 metabolizer 3 metabolizer 4 metabolizer 4) CYP 1 2 metabolizer 3 metabolizer 4 5 6 4 7 2 5 (PPI) 1 2 PPI 2 3 2 3 3 3 3 PPI 3 1 ph 4 5 1) 5)
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. 23 3 2 1 2 3 21 21 22 9 1 23 18 4 5 6 5 40 20 7 1 1 8 9 10 11 12 50cm 13 10 11 14 2011 3 11 15 16 ml mm tel 079-557-0039 & fax 079-557-1888 17 248-240- 98-48- 170-98- 98- ml 85-1,085-18 19 20 21 22 23
(DHA) 1 4 6 µg/ml 2,3 4 DHA AOAC 967.22 DHA C UVDHA 22 nm ph 244 265 nm 5 AOAC 994.11 UV UV HPLC Milli Q (Millipore Elix 1 ) Lab-Scan ( ) Fluka () o-
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36 No. ( 2017 9 ) RNA 2017 RNA 19 7 19 21 7 8 JR RNA RNA 20 RNA RNA RNA RNA 10 50 13 26% 40 RNA RNA-SEQRNAiCRISPRCLIP RNA RNA - 1 - 3 29 8-2 - ips - 3 - - 4 - - 5 - RNA 29 RNA RNA 5 microrna trna? RNA
- 1 - - 2 - 320 421 928 1115 12 8 116 124 2 7 4 5 428 515 530 624 921 1115 1-3 - 100 250-4 - - 5 - - 6 - - 7 - - 8 - - 9 - & & - 11 - - 12 - GT GT - 13 - GT - 14 - - 15 - - 16 - - 17 - - 18 - - 19 - -
82_4 GGS 2007... 3... 3... 3... 7... 8... 8... 9... 11... 11... 11... 12... 16... 16... 16... 17... 18... 18... 19... 19 2
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Ⅱ 1.4 atsushi_doi@cell-innovator.com 812-8582 3-1-1 8 806 http://www.cell-innovator.com BioGPS Connectivity Map The Cancer Genome Atlas (TCGA); cbioportal GO DAVID, GSEA WCGNA BioGPS http://biogps.org/
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平成26年度 学生要覧
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January 2011 QIAamp Circulating Nucleic Acid DNA RNA mirna Sample & Assay Technologies 1 ml 2 ml 3 ml 3 4 ml 5 ml 7 1 ml 2 ml 3 ml 11 4 ml 15 1 ml 2 ml 3 ml microrna 19 22 2 QIAamp Circulating Nucleic
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06-12 KOD - Plus- Mutagenesis Kit (Code No. SMK-101) TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN 0 [ ]...1 [ ] Inverse PCR...2 [ ]...3 [ ]...4 Plasmid.....4 PCR Primer...4 PCR...5 PCR 2nd-site
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0.45m1.00m 1.00m 1.00m 0.33m 0.33m 0.33m 0.45m 1.00m 2
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Tweet OK 統合データベース講習会 AJACSこまち 塩基配列解析のための データベース ウェブツールと CRISPRガイドRNA設計 ライフサイエンス統合データベースセンター (DBCLS) 内藤雄樹 自己紹介 内藤 雄樹 ないとう ゆうき @meso_cacase ライフサイエンス統合データベース センター DBCLS 特任助教 過去に RNAi メカニズム等の研究 sirna設計サイト:
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thermofisher.com mirvana mirna mimics/inhibitors 検索マニュアル 2018 年 10 月版 The world leader in serving science mirna mimics/inhibitors 製品ラインナップ mirna mimics / inhibitors の製品ライナップ : Mimics : Gain-of-function
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(2) (2) (3) (3) (5) ABI PRISM 7700 (5) Roche LightCycler TM (7) BioFlux LineGene (9) 1 RT-PCR (10) (12) (13) F. Hoffmann-La Roche Ltd. Roche Molecular
05-8 SYBR Green Realtime PCR Master Mix (Code No. QPK-201, QPK-201T) TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN A3314K (2) (2) (3) (3) (5) ABI PRISM 7700 (5) Roche LightCycler TM (7) BioFlux
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Vol.1 C ontents 1 2 cell-free EMBO J Proc. Natl. Acad. Sci. USA NatureEMBO J 3 RNA NatureEMBO J Nature EMBO J 4 5 HCV HCV HCV HCV RNA HCV in situ 6 7 8 Nat Struct Mol Biol J Biol Chem Nat Commun J Virol
In vivo へのトライ
アデノウイルスベクターによる RNAi 特長 高い感染能を利用し 効率よく一過性の RNAi 実験が行える 広い動物種に用いることができ 増殖細胞だけでなく静止期の細胞にも感染 発現できる 神経系を含む多くの分化 未分化動物培養細胞をターゲットにすることができ さらに動物個体への直接注入 投与による遺伝子発現が可能である 原理説明 アデノウイルスは最もよく研究されているウイルスのひとつである
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Dharmacon sirna 製品についてよくある質問 Q 製品ラインアップ (sigenome ON-TARGETplus Accell sirna Lincode sirna) の違いを教えてほしい A 製品の特徴を以下にまとめました sigenome sirna: スタンダードな sirna です タンパク質をコードするターゲット遺伝子を低コストでノックダウンしたい場合に最適です ON-TARGETplus
新技術説明会 様式例
1 ヘルペスの再発を防ぐ ワクチンを提供するために 福岡大学 アニマルセンター 准教授 田中聖一 平成 30 年 12 月 11 日 ヘルペスウイルスの潜伏感染 再活性化 2 2 3 Crispr-Cas9 システムを用いた UL41 ノックアウトによる潜伏感染 α ヘルペスウイルス再活性化の抑制 α ヘルペスウイルスの一種で豚を宿主とするオーエスキー病ウイルス (PRV) は 宿主域が広いのでマウスにも容易に感染させることができる
CiRA ニュースリリース News Release 2014 年 11 月 20 日京都大学 ips 細胞研究所 (CiRA) 京都大学細胞 物質システム統合拠点 (icems) 科学技術振興機構 (JST) ips 細胞を使った遺伝子修復に成功 デュシェンヌ型筋ジストロフィーの変異遺伝子を修復
News Release 2014 年 11 月 20 日京都大学 ips 細胞研究所 (CiRA) 京都大学細胞 物質システム統合拠点 (icems) 科学技術振興機構 (JST) ips 細胞を使った遺伝子修復に成功 デュシェンヌ型筋ジストロフィーの変異遺伝子を修復 ポイント ヒトゲノムの中で 1 カ所しかない塩基配列のデータベースを構築した注 TALEN および CRISPR 1) を用いてデュシェンヌ型筋ジストロフィー
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上原記念生命科学財団研究報告集, 22(2008) 113. アテローム動脈硬化に関与する単球 / マクロファージ特異的 microrna 群の同定 深尾太郎 Key words: 動脈硬化,microRNA, マクロファージ, 炎症, マウス * 東京大学大学院工学系研究科化学生命工学専攻 緒言動脈硬化は, 先進国における死因群の主たる原因となる重大な疾患である. 加齢や生活習慣がその発症や程度に大きく関わることから,
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3D PCR 3D PCR PCR 2, 3D PCR PCR 3D PCR PCR PCR PCR 1 PCR PCR Ct CNV mrna mirna GMO サンプル調製サンプルの分配 DNA の増幅結果 コピー数 / µl サンプルを多数の反応に分配します ポジティブ反応ネガティブ反応 1. PCRPCR 1 PCR PCR Ct 3D PCR PCR 3D PCR 1 /µl 2 3D
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2009 7 29-30 1 2 + + = 1 = 1 ( = = 0) 3 Eb (, T ) exp[ C C 2 1 5 /( T )] 1 [ W/(m2μm)] : [ m] T : [K] C 1 = 3.743 10 8 [W m 4 /m 2 ] C 2 = 1.439 10 4 [ m K] 4 E b max max T 2897 m m K = 10 m 5 E E b E
< > Introduction to Basic Physical Chemistry 1,2 2 [ advanced [ [ [ [ [ KULASIS
< > Introduction to Basic Organic Chemistry 1,2 [ 2 [ 10 11 12 13 14 15 [ [ [ [ KULASIS < > Introduction to Basic Physical Chemistry 1,2 2 [ advanced [ 11 12 14 15 [ [ [ [ KULASIS < > Introduction to Basic
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171718 Proceedings of the Society A novel dicentric ring chromosome in Arabidopsis thaliana The CE1 elements enhance the adjacent gene expressions and bind transcription factors and chromatin recognition
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