524 CLEIA 法によるサイトメガロウイルス抗体測定試薬の基礎的検討 川原宏惠 1) 今井重良 1) 髭野泰博 1) 日野雅之 2) 大阪市立大学医学部附属病院 1) 大阪市立大学大学院医学研究科血液腫瘍制御学 2) はじめに サイトメガロウイルス( 以下 CMV) は 成人の 60~90% に

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1 523 新規試薬 エリア SmDp の基礎的検討 西森まどか 1) 永友利津子 1) 下坂浩則 1) 大久保滋夫 1) 矢冨裕 1) 東京大学医学部附属病院 1) はじめに 抗 Sm 抗体は全身性エリテマトーデス (SLE) に対する疾患特異抗体である 対応する Sm 抗原は 複数のポリペプチドにより複合体を形成しているが なかでも SmD は その対応抗体が高い疾患特異性を示すことから 国内外の臨床診断薬の固相化抗原として採用されている しかし 現在の技術では構造上の理由から SmB/B' が残存し RNP-A RNP-C との交差反応を起こすため偽陽性になることが報告されている そこで今回 SmD 合成ペプチド抗原を固相化した抗 Sm 抗体検査キット エリア SmDp が開発され その基礎的検討を行ったので報告する 方法 当院検査部に抗 Sm 抗体検査の依頼があった 335 検体を対象に 全自動蛍光酵素免疫測定装置ファディア 250 を用いて 新規試薬 エリア SmDp の同時再現性 日差再現性 希釈直線性および検出感度を測定した また従来試薬 エリア Sm との陽性 偽陽性 陰性の判定について比較した 判定不一致検体についてはウェスタンブロット法による追 加試験を実施した 結果 1) 再現性 : 異なる濃度の 3 検体及び陽性コントロールを用い 同時再現性は n=10 で測定し CV は 3.65~6.69 % であった 日差再現性は n=2 で 5 日間連続測定し CV は 3.52~9.12 % であった 2) 希釈直線性 : 濃度の異なる 2 検体について 10 段階希釈系列を作成し測定したところ 良好な直線性を示した 3) 検出感度 : 低濃度検体を用い 2SD 法で検討を行ったところ 0.1 U/mL で良好であった 4) 従来試薬との比較 :335 検体を用いて従来試薬と比較したところ 陽性一致率が 88.0 % 陰性一致率が 96.1 % 判定一致率は 94.6 % となった まとめ 新規試薬の基礎性能は良好で 高い特異性を示し 従来試薬よりも SLE に対する感度の向上がみられた 従来試薬との乖離検体についてはウェスタンブロット法による追加試験を実施し解析中である 連絡先 ( 内腺 35026)

2 524 CLEIA 法によるサイトメガロウイルス抗体測定試薬の基礎的検討 川原宏惠 1) 今井重良 1) 髭野泰博 1) 日野雅之 2) 大阪市立大学医学部附属病院 1) 大阪市立大学大学院医学研究科血液腫瘍制御学 2) はじめに サイトメガロウイルス( 以下 CMV) は 成人の 60~90% に感染既往があるとされているが 通常健常人が CMV に感染しても ほとんどが不顕性感染である しかし 妊婦が妊娠初期に CMV に初感染した場合 胎児に重篤な母子感染症を引き起こす恐れがある また臓器移植後 AIDS 患者 先天性免疫不全症候群などの免疫抑制条件化で CMV に初感染および再活性化すると症状が重篤となることが多く 抗体の有無を検査しておくことが重要である 今回我々は CMV-IgG 抗体および CMV-IgM 抗体を化学発光酵素免疫測定法 ( 以下 CLEIA 法 ) にて基礎的検討および現行法である酵素免疫蛍光測定法 ( 以下 ELFA 法 ) (Sysmex 社 VIDAS) と比較検討する機会を得たので報告する 方法 1) 同時再現性 (n=10) は CMV-IgG CMV- IgM について 2 濃度の専用コントロールを用いた 2) 日差再現性は CMV-IgG CMV-IgM について 2 濃度の専用コントロールを用い 6 日間測定を行った 3) 陽性陰性一致率の比較は ELFA 法において CMV-IgG では陽性 50 検体 陰性 10 検体 判定保留 1 検体を用いた CMV-IgM では陰性 54 検体を用いて比較検討を行った 結果 1) 同時再現性の CV は CMV-IgG は 2.7~ 3.0% CMV-IgM は 3.1~3.8% であった 2) 日差再現性の CV は CMV-IgG は 2.8~5.7% CMV-IgM は 4.4~6.2% であった 3)ELFA 法との陽性陰性一致率の比較は CMV- IgG では陽性陰性ともに 100% 一致し 判定保留 1 検体は陽性となった CMV-IgM では陰性 54 検体中 49 検体陰性 3 検体陽性 2 検体判定保留となった まとめ 今回の検討により 同時再現性は CMV-IgG CMV-IgM ともに良好な結果が得られた 日差再現性においても概ね良好な結果であった しかし 現行法との比較では CMV-IgG での乖離率 1.6% CMV-IgM での乖離率 9.3% であり 現在乖離検体については 病態や投薬などの患者背景および測定系の影響因子について症例数を増やして検討予定である 連絡先 : ( 直通 )

3 525 尿中 BJP のスクリーニング法 (Putnam 法 ) の感度と特異性の検証 井本真由美 1) 前田和成 1) 森嶋祥之 1) 中江健市 1) 近畿大学医学部附属病院 1) はじめに 尿中 Bence Jones Protein(BJP) の検出は BJP の熱凝固反応性を利用した Putnam 法 1) が活用されてきたが その感度と特異性は良くないとされている 今回 Putnam 法の感度と特異性について検証した 材料および検討方法 1 検出感度:BJP が確認されている患者尿で 尿中アルブミン (ALB) 定量値が 10mg/dL 以下 尿中 IgG 値が 3mg/dL 以下 IFE および尿蛋白分画で BJP 単一バンドが確認された 4 検体を使用した 患者尿を生理食塩水で 10 段階希釈 尿蛋白値 (U-TP) を測定し Putnam 法を実施 目視とともに濁度を測定 (660nm) 後 検出感度を求めた また Putnam 法陽性検体 40 検体について U-TP を測定した 2 特異性:Putnam 法陽性で IEP や IFE で BJP が確認されており ALB が検出されない 5 検体を使用し Putnam 法の温度と反応バッファの ph を変えて反応性をみた さらに Phast System(GE) により等電点電気泳動を実施した 3 Putnam 法の反応温度と ph の違いによる反応性 : ヒト ALB 液とグロブリン液を調整 (0-1000mg/dL) し反応性を観察した 結果 1 検出感度:U-TP 値として 10-15mg/dL あれば目視で白濁が観察された 2 特異性: 反応温度は BJP 蛋白量にもよるが 39 あたりから白濁が観察され ph が酸性であるほど低温度から検出された 等電点は 個々の検体でさまざまであり pi4.0 付近から pi7.3 まで認められた しかし 反応バッファを変えて反応性をみると個々の等電点には関係なく Putnam 法原法である ph4.9±0.1 で最も強い白濁が観察された 3 ヒト ALB 液では 800mg/dL 以上になると原法の 56 でも陽性となり 58 では 400mg/dL で陽性となった グロブリン液では 1000mg/dL でも 60 までみたが反応を認めなかった まとめ Putnam 法の感度は 15mg/dL 前後であった 等電点と関係なく原法の ph4.9±0.1 で最も強く反応した さらに我々が提案している U-ALB/U-TP 比と合わせて活用すれば 尿中 BJP のスクリーニング法として有用であると考える 文献 1)Putnam FW.et al:arch Biochem Biophys,83: ,1959 連絡先 ( 内線 2182))

4 526 抗 TP 抗体測定試薬 Elecsys Syphilis の基礎的検討 増戸梨恵 1) 永友利津子 1) 渡邉奈緒美 1) 大久保滋夫 1) 池田均 1) 矢冨裕 1) 東京大学医学部附属病院 1) はじめに 梅毒血清反応には,STS 法と TP 抗原法が用 いられており, 手術前, 内視鏡検査前や, 人間ドック, 妊 婦検診, 輸血前後などの感染症スクリーニング検査として 実施されているため, 簡便かつ迅速に多数検体処理が可能 な自動分析装置による測定が主流となっている 今回, 高感度, 高特異性で迅速測定が可能な抗梅毒トレ ポネーマ パリーダム抗体 ( 抗 TP 抗体 ) 測定試薬 Elecsys Syphilis ( ロシュ ダイアグノスティックス株式会社 ) が開発され, 性能評価を行ったのでその成績を報告する. 方法および対象 測定機器は全自動電気化学発光免疫 測定装置 Cobas e411( ロシュ ダイアグノスティックス株 式会社 ) で, 測定原理は電気化学発光免疫測定法 (ECLIA 法 ) を原理とした 1 ステップサンドイッチ法である. 対象は, 本院検査部に提出された入院 外来患者血清 (1103 検体 ) を用いた. 対照試薬は, アーキテクト TP Ab, セロディア TP-PA, エスプライン TP, ラピディアオート TP で, 確認法として FTA-ABS テスト -SG-KIT を用いた. なお, 本検討については東京大学大学院医学系研究科医 学部倫理委員会の承認を得て行った. 結果 1) 再現性 : 同時再現性 (n = 21) は,CV(%)=0.9 ~ 8.5, 日差再現性 (n = 10) は,CV(%)=4.1 ~ 9.2 であった.2) 干渉物質の影響 : 干渉チェックおよび患者血清 (IgG,IgA,IgM, 乳び,RF) の影響は一般に臨床で経験する濃度域まで認められなかった.3) 他法との判定一致率 : vs. アーキテクト TP Ab 99.4 %,vs. セロディア TP-PA 99.4 %,vs. エスプライン TP %,vs. ラピディアオート TP 99.6 %.4) 乖離検体 : 対照試薬と乖離した検体は 14 例で,FTA-ABS が実施できた 11 例はいずれも陰性あるいは判定保留であった. また, 本試薬単独で陽性または陰性となる例はみられなかった. まとめ 今回, 抗 TP 抗体測定試薬である Elecsys Syphi lis について基礎的検討を行ったところ, 良好な結果が得られた. 本試薬は全自動で測定され, 約 20 分で結果報告が可能であり, 日常検査に有用であると思われた. ( 増戸梨恵 )

5 527 T- スポットにおける PBMC 調整法工夫による検査不可の低減 四方瑛理 1) 藤本一満 1) ファルコバイオシステムズ総合研究所 1) 結核感染診断検査 T- スポットは 標準化のために結核抗 原刺激時に末梢血単核球 (PBMC) を 1 ウェルあたり 25 万個 4 ウェルとしている そのため PBMC 規定値 (100 万個 ) 未満では検査不可となる 今回 検査不可の低減を目的と して PBMC 調整時の少量化を検討した 材料および検査手順 PBMC 浮遊液調整 : ヘパリン血 5 ml から PBMC を分離 洗浄後 700μL の液体培地に浮遊させ PBMC 数を自動血 球分析装置 (XE-2100) で計測する PBMC 調整法 : 現行法は PBMC 浮遊液 700μL のうち 200μL を試料とし マニュアルモードで計測する PBMC 値が /μl 以上で /μl 残 500μL=100 万個となり検査可能 検討法は PBMC 浮遊液 700μL の うち 50μL をセルパック 200μL で 5 倍希釈し その溶液 を試料とし キャピラリモード ( 希釈法 ) で計測する PBMC 値が /μl 残 650μL 100 万個となり検査可能 両方法において PBMC 規定値未満では残ヘパリン血の再 処理を行う 再処理をしても規定値に満たない場合は検査 不可となる 方法および結果 1. 希釈再現性 : セルパック 5 倍希釈溶液の 3 種を各 10 回測定したところ 全て CV9% 以内であった 2. 希釈直線性 : セルパックで 5 倍希釈した低濃度域の試料にて直線性をみたところ /μl 以上で理論値 ± 5% 以内であった 3.PBMC 値の相関 : 患者試料 40 検体を 現行法 (x) と希釈法 (y) で相関をみたところ y=1.06x+0.5 r= であった 4. 検査不可低減率 :1 ヶ月間に検査を実施した 2830 検体を対象に 現行法から希釈法に変更した場合の検査不可数は 14 から 9 検体 (36% 減 ) となり 再処理数は 48 から 10 検体 (79% 減 ) となった 結語 T-スポットにおいて 希釈による PBMC の調整は 現行法と遜色ない性能であり PBMC 規定値未満による検査不可および再処理の低減効果が期待できる 連絡先 :