518 蛍光酵素免疫測定法による Thyroglobulin 測定試薬の基礎的検討山本晶子 1) 矢野美沙紀 1) 江藤恭紀 1) 太田希美 1) 丸田淳子 1) 医療法人野口記念会野口病院 1) はじめに Thyroglobulin(Tg) は甲状腺ホルモン合成に関わるタンパクで濾胞細胞にて合

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れいがほうねん
5 years ago
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1 518 蛍光酵素免疫測定法による Thyroglobulin 測定試薬の基礎的検討山本晶子 1) 矢野美沙紀 1) 江藤恭紀 1) 太田希美 1) 丸田淳子 1) 医療法人野口記念会野口病院 1) はじめに Thyroglobulin(Tg) は甲状腺ホルモン合成に関わるタンパクで濾胞細胞にて合成されるそのため甲状腺分化癌の腫瘍マーカーや再発および転移の指標として測定されており感度の向上が求められている今回蛍光酵素免疫測定法 (FEIA) を測定原理とする Tg 測定試薬について基礎的検討を行ったので報告する対象および方法当院患者 250 例の残余検体を対象とした測定機器は AIA-2000ST( 東ソー ) 試薬には E テスト TOSOH II サイログロブリン (AIA-Tg) を用いた比較対照には測定機器 cobas 8000 e602 ( ロシュ ) とエクルーシス試薬 Tg(ECL-Tg) を用いた結果 1. 再現性 :3 濃度のプール血清を用いて求めた同時再現性 (n=10) の CV は 2.4~2.7% 日差再現性 (n=10) の CV は 3.1~3.6% であった 2. 希釈直線性 : 専用希釈液および生理食塩水を用いた希釈の結果それぞれ 935.3ng/mL 969.1ng/mL まで直線性が認められた 3. 共存物質の影響 : 3 濃度のプール血清で干渉チェック A プラスを用いて確認した結果いずれも共存物質の影響を認めなかった 4. 実効感度 :20 検体を各 2 重測定で 5 日間測定して求めた実効感度は CV20% で 0.08ng/mL CV10% で 0.17ng/mL であった 5. 相関 :ECL-Tg との相関は TgAb 陰性 102 例では y=1.02x-3.0 r=0.99 TgAb 陽性 100 例では y=0.95x-1.9 r=0.99 であった 6. プロゾーン現象 : 甲状腺穿刺液 ( ng/ml) を希釈測定した結果 AIA-Tg は ng/ml 以上 ECL-Tg は ng/ml 以上でプロゾーン現象を示した 7. 穿刺吸引細胞診と穿刺液 Tg: リンパ節転移確認のため実施された 23 例の細胞診判定をもとにその穿刺針の生食洗浄液中の Tg 値 ( 穿刺液 Tg) を両試薬で比較した AIA-Tg では良性判定は 0.6ng/mL 以下悪性判定は 1.0ng/mL 以上を示した ECL-Tg では良性判定は 1.0~ 6.0ng/mL とばらつきを認め悪性判定の最小値は 4.8 ng/ml で Tg 値による判別は困難であったまとめ本試薬の基礎的検討結果は良好であったまた穿刺液 Tg の測定値が良悪性判定の補助として有用である可能性が示唆された連絡先 (2400)

2 519 全自動化学発光酵素免疫測定装置 AIA-CL2400 による Tg 測定試薬の基礎的検討早川明子 1) 山口ひろ子 1) 奥山恵理子 1) 大竹奈都子 1) 下坂浩則 1) 大久保滋夫 1) 矢冨裕 1) 東京大学医学部附属病院 1) はじめにサイログロブリン(Tg) は甲状腺濾胞細胞で作られる甲状腺ホルモンの合成に関与している分子量約 66 万の糖蛋白質である甲状腺腫瘍の良性悪性に関わらず多くの甲状腺疾患で上昇するため甲状腺の腫瘍マーカーとなっており特に甲状腺分化癌に対しては治療経過の判定において有用な検査である今回化学発光酵素免疫測定法 (CLEIA 法 ) を測定原理とする新たな Tg 測定試薬の基礎的検討を行ったので報告する対象と方法研究倫理審査において承認を受けた計画に基づき, 当検査部に測定依頼があった患者検体を対象とした測定機器は全自動化学発光酵素免疫測定装置 AIA- CL2400( 東ソー ) を用い測定試薬には専用サイログロブリン測定試薬 ( 以下本試薬 ) を使用した基礎的検討は同時日差再現性感度希釈試験共存物質の影響添加回収試験相関について評価した相関試験の対照試薬は E テスト TOSOH Ⅱ( サイログロブリン )( 以下従来法 ) 測定機器は AIA-2000( 東ソー ) を用いた結果 1) 再現性 (3 濃度の血清試料 ): 同時再現性の CV は 1.5~2.9% 日差再現性の CV は 2.9~3.6% であった 2) 感度 :2SD 法による最小検出感度は ng/ml 実効検出感度は CV10% で ng/ml CV20% で ng/ml であった 3) 希釈試験 ( 自動希釈 10,100,625 倍 ): 回収率は 91~103% であった 4) 共存物質の影響 : 溶血ヘモグロビン遊離型ビリルビン抱合型ビリルビン乳びの影響は見られなかった 5) 添加回収試験 (3 濃度の血清試料 ): 回収率は 97~103% であった 6) 相関 : 従来法 (x) と本法 (y) との相関は n=244,y=0.98x+1.51,r=1.00 であったまた抗サイログロブリン抗体陰性群と陽性群による差は見られなかったまとめ AIA-CL2400 を用いた Tg 測定試薬の基礎的検討において良好な結果が得られた本試薬は従来法と比較して検体量の少量化および高感度化が図られ測定時間においては約 15 分と短縮されており甲状腺疾患の診察前検査を含めた日常検査に有用性が高い試薬と考えられた連絡先 : ( 内線 35023)

3 520 炎症像を伴う甲状腺の病理組織学的特徴と抗サイログロブリン抗体との関連性前田幸子 1) 猪俣啓子 1) 安藤朋子 1) 花田和子 1) 山下弘幸 2) 覚道健一 3) 医療法人福甲会やましたクリニック臨床検査科 1) 同外科 2) 近畿大学医学部病理学 3) はじめに甲状腺自己抗体である抗サイログロブリン抗体 (TgAb) は橋本病をはじめとする自己免疫性甲状腺疾患の診断鑑別に有用であるまた炎症像を伴う甲状腺疾患の組織ではリンパ球浸潤リンパ濾胞形成線維化などの組織変化を認める今回われわれは測定原理の異なる 2 種類の TgAb 診断薬を検討する機会を得炎症像を伴う甲状腺の病理組織学的特徴と TgAb 濃度との関連性について検索を行ったので報告する対象および機器試薬対象は当院受診の橋本病バセドウ病および甲状腺腫瘍性疾患の各患者 136 名であった測定試薬は 1 エクルーシス試薬 Anti-Tg(E-TgAb) 2 アーキテクト Tg 抗体 (A-TgAb) でそれぞれの専用分析器を用いて測定した方法 1)E-TgAb と A-TgAb との相関 : 両測定法にて TgAb を測定し相関性を確認した 2) 病理組織学的特徴 ( 組織所見 ) と TgAb の関係性 : 手術により摘出した甲状腺組織の特徴を 1 リンパ球浸潤 2 リンパ濾胞形成 3 線維化の 3 項目に分類しその進行度と TgAb 濃度を比較した結果 1) 両測定法による TgAb 濃度を比較すると相関性のある症例群 ( 相関群 ) と乖離する群 ( 乖離群 ) とに分かれていた 2) 相関群と乖離群における組織所見と TgAb 濃度との関係性では 3 項目ともに有意な差はみられなかった次に各組織所見と E-TgAb A-TgAb 各濃度の関係性をみるとリンパ濾胞形成においては濾胞形成数の増加に伴い抗体濃度が上昇する傾向が認められたがリンパ球浸潤および線維化と抗体濃度との間に有意な関係性は認められなかったまた E-TgAb が 4,000IU/mL 以上を示した 2 症例では甲状腺機能低下が認められた考察今回検討した 2 種類の TgAb 測定方法間では TgAb 濃度に相関群と乖離群とが存在することが分かったが組織所見と各症例群との関連性は認められなかった組織所見のうちリンパ濾胞形成数の増加に伴い TgAb 濃度の上昇が認められたことからリンパ濾胞形成により抗体産生能が上昇していると考えられ血中の TgAb 濃度の推移から組織炎症の進行度を推察できる可能性が示唆された連絡先 092(281)1300

4 521 CLEIA 法を用いた抗 dsdna 抗体キットステイシア MEBLux テスト dsdna の基礎的性能評価宮原悠太 1) 岡山直子 1) 小島奈緒美 1) 水野秀一 1) 山口大学医学部附属病院 1) 目的抗 dsdna 抗体は全身性エリテマトーデス (SLE) の診断基準の 1 つで診断及び経過観察に用いられている現在当院では用手法による ELISA 法で測定しており結果報告まで長時間を要している化学発光酵素免疫測定法 (CLEIA 法 ) を用いた抗 dsdna 抗体測定試薬ステイシア MEBLux テスト dsdna ( 以下ステイシア dsdna) が発売され約 19 分での測定が可能になった今回本試薬について検討の機会を得たので報告する方法対象は 2014 年 5~9 月に当院で抗 dsdna 抗体測定依頼があった 69 検体とし全検体の自己免疫疾患診断及び治療の有無を調査した試薬はステイシア dsdna(mbl 社 ) 機器は全自動臨床検査システム STACIA( 三菱化学メディエンス ) を用いた検討内容は 1 添付陽性コントロールによる同時再現性及び日差再現性 2400IU/mL 以上の高値を示した検体を用いた希釈直線性 3 現行法である MESACUP DNA-Ⅱテスト ds (MBL 社 ) との相関性及び一致率の検討を行った結果同時再現性及び日差再現性(n=5) の CV は 3.9% 3.5% と良好な結果だった希釈直線性は 2 n 倍の希釈系列を作製して測定を行い 343 IU/mL まで直線性を認めた相関性は相関係数 r= 回帰式 y=0.8125x でステイシア dsdna が低値傾向を示した全検体の一致率は 52.2 %(36 / 69 検体 ) 陽性一致率 34.0 %(17 / 50 検体 ) 陰性一致率 100.0%(19 / 19 検体 ) であった陽性検体の中で SLE と診断されている 28 検体について両法の詳細な比較を行ったところステイシア dsdna の陰性化が 21 検体で認められたその 71.4%(15 / 21 検体 ) は CRP の増加が無く CH50 C3 C4 の低下を認めなかったため安定期の状態と考えられたさらに治療経過観察としてステイシア dsdna が現行法よりも早期に低値化していた症例があった考察ステイシア dsdna を用いた本法は大幅な時間短縮が可能であり診療前検査が可能になれば早期診断早期治療に繋がると思われたさらに現行法よりも SLE の疾患活動性をより反映し病態の変化を早期に捉えられる可能性が示唆された連絡先 :

5 522 CLEIA 法を用いた抗 DNA 抗体測定におけるプロゾーン様現象小原丈裕 1) 菊池良枝 1) 豊巻和司 1) 谷藤えみ子 1) 諏訪部章 2) 岩手医科大学附属病院中央臨床検査部 1) 岩手医科大学医学部臨床検査医学講座 2) はじめに抗 dsdna 抗体 ( 以下 dsdna) および抗 ssdna 抗体 ( 以下 ssdna) は全身性エリテマトーデス (SLE) の診断や病態把握に有用な指標として用いられている当検査部では平成 26 年 5 月にこれらの院内検査項目について従来の ELISA 法を原理とした方法に替えて CLEIA 法による方法を導入した導入前の基礎検討時および導入後に一部の高値検体においてプロゾーン ( 以下 PZ) 様現象が疑われる検体を認めたここでの PZ 様現象とは希釈測定において測定上限以上の高値であるにもかかわらず原液測定では測定範囲内の偽低値を示す現象をいう今回これらの検体を解析することにより PZ 様現象の見逃し防止策について検討を行ったので報告する対象当院にて dsdna および ssdna の検査依頼があった患者血清のべ 2,555 検体を対象とした測定機器試薬測定機器は全自動臨床検査システム STACIA (( 株 )LSI メディエンス ) 測定試薬はステイシア MEBLux テスト dsdna およびステイシア MEBLux テスト ssdna ( ともに ( 株 ) 医学生物学研究所 ) を用いた方法測定値が dsdna で 100 IU/mL 以上 ssdna で 100 AU/mL 以上の検体において 10 倍および 100 倍希釈測定を行ったまた BF 洗浄後の粒子濁度 BF 測光 OD 値 2( 以下 OD 値 ) のデータも併せて解析を行った結果 dsdna:1 例 ssdna:7 例において希釈測定値が測定上限以上で原液測定値が測定範囲内の偽低値を示したこれらの検体は dsdna では原液測定値が 200 IU/mL 以上 ssdna では原液測定値が 25.0 AU/mL 以上かつ OD 値が以下であったまたいずれも OD 値が 97% 信頼区間下限以下となったまとめ dsdna は測定値が 200 IU/mL 以上 ssdna は測定値が 25.0 AU/mL 以上かつ OD 値が以下あるいは測定値が 25.0 AU/mL 以上かつ OD 値が 97% 信頼区間下限以下を当検査部での要希釈再検領域と設定したこの条件設定により PZ 様現象に起因する偽低値の見逃しを防止することが可能であると考えられた連絡先 ( 内線 3739)

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研究報告59通し.indd 技術報告 41 全自動化学発光酵素免疫測定装置 AIA CL2400 の開発バイオサイエンス事業部開発部システムグループ蔦永曉男山岸茂夫高橋実吉田聖史 1. はじめに免疫診断検査用の AIA システムは 1986 年にビジネスを開始して以降市場のニーズに応じた装置試薬項目を上市することで販売を伸ばしている AIA システム装置は大型 / 中型 / 小型の 3 機種のラインナップからなり蛍光法でありながら化学発光法に迫る高感度