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とよみかわらい
5 years ago
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1 黒毛和種における牛白血病ウイルスの母子感染状況およびまん延防止対策の検討中央家畜保健衛生所山下将哉大城守津波修野中克治地方病型牛白血病は牛白血病ウイルス ( 以下 BL V) に起因する致死性のリンパ肉腫で発症率は 5 % 以下といわれているしかし近年沖縄県を含め全国的に発生件数が増加傾向にあり感染拡大が懸念されている ( 図 1 ) 地方病型牛白血病 (EBL) < 原因 > 牛白血病ウイルス < 病態 > 致死性リンパ肉腫 < 発症率 > <5% < 発生件数 > 28 年全国 1,4 件 (825 戸 ) 沖縄 25 件 (25 戸 ) 生後早期に感染したの多くは持続性リンパ球増多症となり感染源になることや発病までに至る期間が短いとされることからへの感染防御が極めて重要となっている本病のまん延防止対策として様々なことが提唱されており当所もそれらをもとに管内の対策に取り組んでいるところである対策の一つに母牛の初乳のへの給与中止があるがそのいっぽうで BLV 感染牛の初乳中には BLV 感染細胞と同時に高力価の抗 BLV 抗体が含まれているため生後 2 ~ 3 ヵ月の間は感染が防御されるともいわれている ( 図 3) 全国沖縄県発生頭 587 数 H1 H11 H12 H13 H14 H15 H16 H17 H18 H19 H 発生 2 頭数 H1 H11 H12 H13 H14 H15 H16 H17 H18 H19 H 家畜衛生統計における感染生後早期に感染すると多くのは PL 牛となり感染源になる発症までに至る期間も短くなる初乳中の移行抗体により生後 2,3 ヶ月は感染が防御される図 1 地方病型牛白血病の概要母牛 BLV BLVは除角や直腸検査吸血昆虫乳汁などによる水平感染や垂直感染によって伝播される BLV に感染した牛の多くは長期間無症状キャリアーとなり約 3 % が一時的に持続性リンパ球増多症を呈するそして無症状期をへて 5 % 以下が発症するといわれている ( 図 2 ) Y BLV 抗原抗 BLV 抗体図 3 Y Y Y Y Y Y Y Y における感染 BLV 感染発症感染牛の 5% 以下 BLV の伝播経路感染牛眼球突出図 2 持続性リンパ球増多症健康感染牛削痩約 3% 感染源リンパ肉腫 BLV の伝播経路水平感染直検除角吸血昆虫乳汁同居牛垂直感染出生前感染黒毛和種は初乳中の免疫グロブリン含量がホルスタイン種よりも高いという報告があるまた平成 19 年度に行われた地域別 BLV 浸潤状況調査では率は乳牛で35% 肉牛の繁殖牛で12% であり 1 歳以下では乳牛で16% 肉牛で数% と報告されている疫学的解析では抗体に関連する要因として肉牛では外部からの導入乳牛ではプール初乳があげられているこの他にも黒毛和種とホルスタイン種では様々な違いがあるがこれまでの調査や研究は乳牛が中心となっている ( 図 4)

2 黒毛和種 ( 肉牛 ) とホルスタイン種 ( 乳牛 ) の違い初乳中免疫グロブリン多い (16.1mg/ml) 少ない (73.1mg/ml) 率 12% ( 繁殖雌牛 ) 35% 1 歳以下の率数 % 16% 抗体に関連する要因外部からの導入プール初乳検査方法抗体検査材料 : 母子 64 組を含む 14 戸 33 頭 ( 母牛 258 頭 72 頭 ) 方法 :PHA( 受身赤血球凝集反応 ) 遺伝子検査法 nested PCR (Fechnerらの報告に従いBLVenv 遺伝子 gp51 領域を標的とした ) 北海道畜産試験場 : 小原平成 19 年度地域別 BLV 浸潤状況調査 ( 動物衛生研究所 : 村上ら ) 3 ヶ月齢未満ので nested PCR のものは移行抗体と判断しとした図 4 黒毛和種とホルスタイン種の違いまた沖縄県は全国有数の黒毛和種生産出荷県であり牛白血病のまん延防止対策が急務となっているそこで今回初乳給与の是非について注目し自然哺乳を主体とする黒毛和種における BLV 母子感染の実態を調査を行いまん延防止対策について検討したので報告する材料および方法抗体検査は発症牛のあった農家を中心として母子 64 組を含む 14 戸 33 頭の血清を用いて受身赤血球凝集反応 ( PHA ) にて行った遺伝子検査はフェシュナーらの報告に従い nested PCR を行ったなお 3 ヵ月齢未満のについては PHA であっても PCR のものは移行抗体と判断しとしたまたより高精度で効率的な検査方法の検討をするため今年の4 月に発売されたエライサ方法による検査をおこない PHA の結果と比較したまたより高精度で効率的な検査方法の検討をするためエライサ方法による検査をおこない PHA の結果と比較したエライサは感度特異度ともに従来の抗体検査方法より高いといわれ PHAに比べ安価で多検体処理が容易となっている ( 図 5) 抗体検査方法の比較検査方法 2 材料 : 14 戸 33 頭のうち 2 戸 21 頭 ( 母牛 153 頭 57 頭 ) 方法 : ELISA(PHA の結果と比較 ) <ELISA 法の特徴 > 感度特異度ともに高い PHA と比べ安価多検体処理が容易図 5 検査方法結果と考察全体での抗体率は母牛で 49.2% で 13.9% であったまた 1 歳を越えたあたりから抗体率が急激に上がっているのが確認できる ( 図 6)

3 感染状況 1 抗体率 (14 戸 33 頭 : うち母子 64 組 ) 母牛 49.2%(127/258) 13.9%(1/72) % 年齢と抗体率の推移 ~1 1~2 2~3 3~4 4~5 5~6 6~7 7~8 8< 46.4 年齢感染状況 3 母牛ののうち無症状牛の子の率 :1%(4/4) うち3ヶ月齢未満 :4.3%(1/23) 3ヶ月齢以上 :17.6%(3/17) EBL 牛と PL 牛の子の率 : 8%(4/5) 図 6 抗体率図 8 抗体母牛のの感染状況母子における感染状況については母牛 64 頭のうち抗体母牛は 45 頭抗体母牛は 19 頭であった抗体母牛ののうち8 頭が 37 頭がであった ( 図 7) 図 7 感染状況 2 < 母子 64 組 > 母牛 64 頭中 45 頭が母牛ののうち 37 頭が 8 頭が母 64 頭母牛の母子 64 組の抗体率別の視点から見ると母牛ののうち無症状牛の子の率は 1.%(4/4) でそのうち3ヶ月齢未満では 4.3%(1/23) 3ヶ月齢以上で 17.6%(3/17) であったまた発症牛とリンパ球増多症牛の子の率は 8%(4/5) であった ( 図 8) 母牛ののうち 3ヶ月齢未満では高い抗体価を示すものが多く見られるが 3 ヶ月齢を過ぎたでは抗体価が低い傾向が見られた BLVに感染牛した (PCR ) のうち 3 ヶ月齢以降のものは本来移行抗体がなくっていく時期であるのに高い抗体価を示しているまた 3 ヶ月齢以下のものでは感染していないの多くが移行抗体により高い抗体価をしめしているまた感染も高い抗体価を示している ( 図 9) 抗体価 4, 図 9 感染状況 4 母牛のの月齢と抗体価月齢移行抗体 (+) 移行抗体 (-) PCR(+) 母牛のの月齢と抗体価これら 3 ヶ月齢以下の感染については母牛の抗体価も高いため初乳を摂取して以降は高い移行抗体により感染はなかったと思われるので出生前の垂直感染が疑われるまた図 1の表中 1のは抗体測定不可であったがPCR であったため感染としているこのは発症牛剖検時に胎児を検査したため子宮内感染と思われる

4 3 ヶ月齢未満の感染 1EBL の子 2EBL の子 3EBL の子 4PL の子 5 無症状牛の子胎齢 239 日図 1 日齢 12 日 48 日 82 日 48 日感染状況 5 抗体価検査不能 4,96 1,24 4,96 母の抗体価 4,96 4,96 1,24 3 ヶ月齢未満の感染抗体検査方法の比較については母における一致率は 98.7 % では 7.2% であった PHAがでエライサがのものはなく逆にPHAがでエライサがのものがで多く見られた ( 図 11) 子宮内感染垂直感染の可能性に感染がみられたとの報告感染牛の初乳中には高力価の抗 BLV 抗体が含まれているため感染が防御されるという報告もあることなどから総合的に考えて EBL 及び PL 牛のでは垂直感染の可能性が高いと考えられた以上より初乳による感染は低いと考えられる牛の初乳からの感染予防として初乳の凍結や発酵処理によりBLVを失活させてから給与する方法があるが黒毛和種では一般に搾乳は行われないので現実的ではないまた粉末初乳の給与という方法もありますが BLVに対する抗体のない状態を作るため逆に水平感染の機会を増やすとも考えられるこれらのことから黒毛和種の場合は初乳給与を基本とし移行抗体が消失するまでに離乳隔離すべきであると思われるまた発症牛やリンパ球増多症牛においてはへの感染リスクが高いことからできるだけ早期に検査しの場合は淘汰を励行すべきとおもわれる ( 図 12) 母牛母牛における一致率 98.7% における一致率 7.2% ELISA(+) PHA(+) 8 21 抗体検査方法の比較一致 ELISA(-) PHA(-) ELISA(+) PHA(-) 2 17 不一致 ELISA(-) PHA(+) まとめ及び考察 1) 無症状キャリアーでは初乳を介した感染はリスクは低く移行抗体が消失した以降の感染が多いことが示唆された 2)EBL 及び PL 牛のでは子宮内および産道における垂直感染の可能性が高いと考えられた 3) 黒毛和種の場合は初乳給与を基本とし移行抗体が消失するまでに離乳隔離すべき図 11 抗体検査方法の比較 4) EBL 牛 PL 牛のはできるだけ早期に検査しの場合は淘汰を励行まとめ無症状キャリアーから直接初乳を飲んだの感染率は低いといわれている今回 1 歳以降での急激な抗体率の上昇がみられたことなどから無症状キャリアーからへの感染率が低いことが示唆されたとくに 3 ヶ月齢未満での感染率が低かったことから垂直感染や初乳を介したへの感染リスクは低く移行抗体が消失した以降の感染のほうが多いことが示唆されたこれは黒毛和種の初乳中の免疫グロブリン含量がホルスタイン種よりも高いことに関連すると推察される経口的に摂取された感染リンパ球は感染源になることは少ないと言われている発症牛の胎児では 3 % 図 12 まとめ及び考察 ELISAは母子ともに感度が高いことが示唆されたにおいてはPHAよりも多く移行抗体に反応していると思われる面があるが PCRの結果と比較しても感染牛の見逃しはなかったので ELISA は有用であると思われるまたこれまでの抗体検査と同様感染を確実に摘発するにはスクリーニング的にエライサを使用しPCRで判定することが必要かと思われる終わりに今後もこれまでどおり吸血昆虫の駆除直腸検査手袋の 1 頭ごと交換牛の分離飼育など基本的対策を指導していきながら今回のように新たな対策の検討にも取り組み本病のまん延防止に努め

5 たいまとめ及び考察 2 5)ELISA 法は感度が非常に高いことが示唆された感染の確実な摘発おいては ELISAとPCRの併用が有効 6) 基本的対策とともに新たな対策の検討にも取り組み本病のまん延を防止図 13 まとめ及び考察 2

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<4D F736F F D AAE90AC94C B835794D48D8682C882B5816A915395B68CB48D652E646F63> 管内酪農場における牛白血病対策の取り組み県央家畜保健衛生所大屋祥子浅川祐二荒木尚登石原凡子亀井勝浩和泉屋公一はじめに牛白血病は地方病性牛白血病 (EBL) と散発性牛白血病に分類される牛の届出伝染病である散発性牛白血病の発生原因は未だに不明であるが EBLは牛白血病ウイルス (BLV) 感染により引き起こされる 1) BLVは牛のリンパ球に感染し抗体が産生された後も排除されず