遺伝子検査キットカタログ

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1 PCR リアルタイム PCR 関連製品 2018 年 5月改訂

2 タカラバイオの 検査システム 試薬キット qpcr 装置 検査システム 試薬キット qpcr 装置 厚生労働省通知収載の 検査システム 腸管出血性大腸菌 腸管出血性大腸菌 O26 O103 O111 O121 O145 及び O157 の検査法について 厚労省医薬食品局 食品安全部監視安全課長通知 食安監発 1120 第1号 腸管出血性大腸菌 ノロウイルス ノロウイルスの検出法について 厚労省医薬食品局 食品安全部監視安全課長通知 食安監発第 号別添 最終改正 平成 25 年10月22日付食安監発 1022 第1号 ノロウイルス レジオネラ レジオネラ 第 4 版 レジオネラ症防止指針 平成 29 年 8月 公益財団法人日本建築衛生管理教育 センター発刊 循環式浴槽におけるレジオネラ症防止対策マニュアル の改正について 厚労省健康局 生活衛生課長通知 健衛発 0331第 7号 クリプトスポリジウム ジアルジア クリプトスポリジウム ジアルジア 水道に関するクリプトスポリジウム等の検出のための検査方法の見直し等について 厚労省健康局 水道課長通知 健水発 0302 第 2 4 号 -1- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

3 トータルサポート 1. システム ならではの安心サポート! 試薬 と 装置 を提供するタカラバイオは システムとしての性能を保証します システムなら お問合せ窓口も一本で安心です 2. 初心者でも楽々かんたん! 簡単操作のプレミックス試薬 日本語表記のソフトウェアの組合せで 初心者の方でもスムーズにご利用いただけます 3. 装置一台で 様々な検査項目に対応! 幅広い項目の検査に対応する試薬キットを準備しています カタログに無い項目は カスタムで承ります ターゲット 製品名 掲載ページ 試薬と装置が通知法に収載されています CycleavePCR O-157 (VT gene)screening Kit Ver 腸管出血性大腸菌 CycleavePCR EHEC (O157/O26)Typing Kit CycleavePCR EHEC (O111/O121)Typing Kit 14 CycleavePCR EHEC (O103/O145)Typing Kit クリプトスポリジウム Cycleave RT-PCR Cryptosporidium (18S rrna)detection Kit ジアルジア Cycleave RT-PCR Giardia (18S rrna)detection Kit 31 通知法に収載されたプライマー / プローブ配列を採用した試薬です ノロウイルス TaKaRa qpcr Norovirus (GI/GII)Typing Kit 11 第 4 版レジオネラ症防止指針に収載されています レジオネラ属菌 CycleavePCR Legionella (16S rrna)detection Kit 30 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -2-

4 タカラバイオ遺伝子検査キットカタログ 目次 掲載ページ タカラバイオの検査システム トータルサポート 検便検査 5 ノロウイルス 7 腸管系病原細菌 食中毒検査 11 ノロウイルス 12 クドアセプテンプンクタータ 13 腸管出血性大腸菌( ベロ毒素 (VT) 遺伝子 ) 14 腸管出血性大腸菌(O 抗原型遺伝子 ) 15 サルモネラ 腸炎ビブリオ セレウス菌 カンピロバクター リステリアモノサイトゲネス 黄色ブドウ球菌 19 QuickPrimer(Real Time) シリーズ 20 MORA シリーズ 21 特殊細菌 Primer Set Positive Controlシリーズ 衛生指標菌検査 22 一般細菌 23 腸内細菌科菌群 品種判別 24 コメ判別 25 肉種判別 水質検査 27 レジオネラ属菌( 生菌検出 生菌死菌検出 ) 31 クリプトスポリジウム属 ジアルジア ヒト感染症検査 34 呼吸器感染症起因菌 起因ウイルス 35 B 群溶血性レンサ球菌 (GBS) 36 サイトメガロウイルス EB ウイルス 37 ヒトパピローマウイルス ヒトゲノムタイピング 38 ALDH2 FLT3/ITD 動物感染症検査 39 ウシ白血病ウイルス サルモネラ血清型 細胞検査 41 HIV HTLV HCV HBV ParvoB19 EBV CMV WNV 42 再生医療等製品のマイコプラズマ否定試験 43 マイコプラズマ 微生物推定解析 細菌叢解析 45 サンガーシーケンスによる微生物推定解析 47 次世代シーケンスによる細菌叢解析 カスタム対応 49 リアルタイムPCR 検出系のカスタム設計 51 カスタムキット製造 核酸抽出 53 DNA 簡易抽出 54 スピンカラム精製 装置 58 リアルタイムPCR 装置 59 サーマルサイクラー 技術紹介 60 PCRキャリーオーバー防止 61 EMA-PCR 法 ( グラム陽性菌 グラム陰性菌 ) 遺伝子検出について 63 食品 環境検査における各種検査法について 64 遺伝子検出 遺伝子検査の用途 PCR qpcrの原理 65 蛍光検出法 付録 66 遺伝子検査を始めるにあたって 68 製品一覧 2018 年 5 月発行 -3- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

5 検便検査 検出ターゲット ノロウイルス 腸管系病原細菌 ( 腸管出血性大腸菌 サルモネラ 赤痢菌 ) タカラバイオの検便検査システム 試薬キット 判定ツール リアルタイム PCR 装置 オールインワンキットですぐに検査可能 内部コントロールにより偽陰性をモニター チューブの蓋の色分けで取り違いを防止 客観的な判定をサポート 出力ファイルをそのまま読み込み可能 ひと目で判る判定結果 日本語ソフトウェアの搭載で楽々操作 検査用途に適した純正のチューブをご用意 システムならではの安心サポート! ǀ 遺伝子検査キットカタログ -4-

6 検便検査 リアルタイム PCR リアルタイム PCR 法 によるノロウイルス検便検査用キット TaKaRa ノロウイルス GⅠ/GⅡ 検出キット Ver.2 RR297A 100 回 128,000 大量調理施設衛生管理マニュアル に則った検査が可能! < キットの内容 > ターゲット遺伝子 GⅠ 遺伝子 GⅡ 遺伝子インターナルコントロール (IC) リアルタイム PCR 装置の蛍光検出フィルター Cy5 ROX FAM 簡易抽出試薬 1. Lysis Buffer (NV) 5 リアルタイム PCR 試薬 2. PCR Buffer (NV) 6 3. Enzyme Mix (NV) 6 4. NV Primer/Probe Mix 6 5. NV Positive Control DNA 4 リアルタイム PCR 法 で 大量調理施設衛生管理マニュアル 1 に則った検査が可能です 厚生労働省通知法 2 に収載されたプライマー プローブ配列を採用した検査キットです 大量調理衛生管理マニュアルに記載された 概ね便 1g 当たり 10 5 オーダーのノロウイルスを検出できる検査法 に対応しています 1: 大量調理施設衛生管理マニュアル ( 平成 9 年 3 月 24 日付け衛食第 85 号別添最終改正 : 平成 29 年 6 月 16 日付け生食発 0616 第 1 号 ) 2: ノロウイルスの検出法について 厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課 ( 平成 15 年 11 月 5 日付け食安監発第 号別添最終改正 : 平成 25 年 10 月 22 日付け食安監発 1022 第 1 号 ) 反応時間約 47 分 で完了 各種装置で使用可能 Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific 社 ) の場合の反応時間です Thermal Cycler Dice Real Time System III の場合 反応時間は 53 分です 各社機種に対応しております 詳しくはお問合せください カラム精製 熱処理は不要! 鋳型の調製は簡単な前処理だけで OK Lysis Buffer (NV) 5に検便検体懸濁液を添加するだけで 鋳型の簡易調製が完了します カラムによる精製は不要 PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性を防止 PCRは非常に高感度な検出方法であるため 以前に行った PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性が生じる場合がありますが UNG 処理を追加することで偽陽性を簡単に防止できます UNG を利用してキャリーオーバーの影響を防止する原理については 60 ページをご覧ください 1 チューブで GⅠ 遺伝子 GⅡ 遺伝子 インターナルコントロールを検出 判定イメージ GⅠ(Cy5) GⅡ(ROX) の増幅曲線を確認します ともに増幅が無い場合は IC(FAM) の増幅結果を確認し 偽陰性をモニターします GⅠ(Cy5) GⅡ(ROX) IC(FAM) -5- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

7 検便検査 リアルタイム PCR 1ステップリアルタイム RT-PCR の採用により1時間半以内に結果判定 即日報告の可能性が広がります サンプル 反応液の調製 反応時間 判定を含めても 最短で 1 時間半以内の結果報告が可能となりました 検体準備 簡易抽出 1ステップリアルタイム RT-PCR 解析 PCR 反応液 調製 PCR 反応液を添加する Lysis Buffer を 5 µl ずつ分注 採取した便を水等に懸濁 検便懸濁液 遠心済 10,000 15,000rpmで 5 分間遠心分離 上清をサンプルとして使用 検便懸濁液の上清1 µl を 分注した Lysis Buffer に添加 カラムによる 精製は不要 熱処理不要 検出例 ポジティブコントロールの段階希釈反応 GⅠ Cy5) GⅡ ROX) GⅠ/GⅡポジティブコントロールを 1/10 の希釈率 で段階希釈したサンプルを調製した TaKaRa ノロウイルスGⅠ/GⅡ検出キットVer.2 を用 いてリアルタイム PCR 検出を実施した結果 濃度依 存的に検出することができた 迅速判定を強力にサポート 判定用ツールを準備しております 本製品で取得した増幅曲線データから 陰性ま たは陽 性 + 陽 性 + + 陽 性 を判定する ツールをご用意しています 本 製品をご購入の方に無償でご提 供いたしま す 詳しくはお問合せください ǀ 遺伝子検査キットカタログ -6-

8 検便検査 PCR 検便プール検体からの腸管系病原細菌遺伝子の迅速スクリーニング < 遺伝子検査のメリット> その日のうちに陰性報告が可能 培養検査における目視判定の手間削減 培地の廃棄コスト削減 <1 日目 > 50 検体プールの検便懸濁液 95 5 分 約 10 分 2 タイプの製品をご用意! 8,000~15,000 rpm 5 分間遠心 PCR 反応 ( 融解曲線分析 プローブ法 ) 約 37 分 ~ 陰性 ( プール検体 ) 陽性 ( プール検体 ) 陰性 報告 分離培養 <2 日目以降 > 生化学的性状試験 + 血清型試験 結果報告 TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット RR139A TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット (Probe 検出用 ) RR165A 原理 融解曲線分析 プローブ法 反応時間 約 37 分 Thermal Cycler Dice Real Time System III の場合 約 50 分 CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad 社 ) の場合 対応機種 Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ StepOnePlus Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific 社 ) CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad 社 ) Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific 社 ) CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad 社 ) LightCycler 96 / 480 システム (Roche Diagnostics 社 ) タカラバイオのリアルタイム PCR 装置では対応しておりません 各ターゲットのシングル検査キットもご用意しています お問合せください -7- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

9 検便検査 PCR 融解曲線分析 PCR 融解曲線分析により最短約 37 分でスクリーニング TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット 容 量 価格 税別 RR139A 200回 150,000 腸管出血性大腸菌 サルモネラ 赤痢菌由来の 遺伝子を迅速スクリーニング 検出対象菌種 ターゲット遺伝子 腸管出血性大腸菌 EHEC VT 遺伝子 サルモネラ属菌 inva 遺伝子 赤痢菌 ipah 遺伝子 PCR 阻害の有無の確認 インターナルコントロール IC 腸管出血性大腸菌 サルモネラ 赤痢菌の遺伝子を 1チューブでマルチプレックス PCR PCR 増幅産物を TB Green による融解曲線分析で検出 自社開発の高速 PCR 試薬を採用し 反応時間を最速 37 分まで短縮 スクリーニング検査の迅速化を実現しました DNA 精製不要 鋳型の調製は 熱処理と遠心だけの簡易抽出で OK 検便懸濁液を 95 5 分の熱処理後 8,000 15,000 rpmで 5 分間遠心するだけで完了です 便利なオールインワンキット 検便懸濁液さえ準備すれば検査できます 実験例 Thermal Cycler Dice Real Time System II による検出 検出対象遺伝子は VT 遺伝子 EHEC inva 遺伝子 サルモネラ ipah 遺伝子 赤痢菌 の三種類 PCR 阻害の有無を確認するためのインターナルコントロールも同時に検出します 腸管出血性大腸菌 インターナルコントロール サルモネラ 赤痢菌 検出対象菌種 Tm 値 2 EHEC サルモネラ属菌 赤痢菌 インターナルコントロール Thermal Cycler Dice Real Time System II で 測定した場合の参考値 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L65 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -8-

10 検便検査 リアルタイム PCR プローブ法により結果判定が容易に TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット (Probe 検出用 ) 容量価格 ( 税別 ) 検出対象菌種 ターゲット遺伝子 リアルタイム PCR 装置の蛍光検出フィルター RR165A 200 回 150,000 EHEC VT1/2 遺伝子 HEX サルモネラ属菌 赤痢菌 (PCR 阻害の有無の確認 ) inva 遺伝子 ipah 遺伝子 インターナルコントロール (IC) ROX FAM Cy5 < キットの内容 > Probe qpcr Mix-UNG Primer/Probe Mix (VT/ipaH/invA) H2O Positive Control Mix 腸管出血性大腸菌 サルモネラ 赤痢菌の遺伝子を 1 チューブでマルチプレックス PCR プローブ法を採用! 判定が容易に 特異性の高いプローブ法の採用により 増幅曲線による明瞭な判定が可能となりました プローブ法による結果 4 波長同時検出対応リアルタイム PCR 装置にて検出 反応時間は約 50 分 CFX96 Touch TM Deep Well Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad 社 ) の場合です Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific 社 ) にも対応しています ご注意 タカラバイオの Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズには対応しておりません DNA 精製不要! 鋳型の調製は 熱処理と遠心だけの簡易抽出で OK 検便懸濁液を 95 5 分の熱処理後 8,000~15,000 rpm で 5 分間遠心するだけで完了です 便利なオールインワンキット! 検便懸濁液さえ準備すれば検査できます PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性を防止 PCR は非常に高感度な検出方法であるため 以前に行った PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性が生じる場合がありますが UNG 処理を追加することで偽陽性を簡単に防止できます UNG を利用してキャリーオーバーの影響を防止する原理については 60 ページをご覧ください 実験例 : CFX96 Touch TM Deep Well Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad 社 ) による検出例 検出対象遺伝子は VT1/2 遺伝子 (EHEC) inva 遺伝子 ( サルモネラ ) ipah 遺伝子 ( 赤痢 ) で PCR 阻害の有無を確認するためのインターナルコントロールも同時に検出します VT1/2(HEX) inva(rox) ipah(fam) IC(Cy5) -9- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

11 食品検査 検出ターゲット 食中毒 ノロウイルス 腸管出血性大腸菌 衛生指標菌 一般細菌 腸内細菌科菌群 カンピロバクター サルモネラ 腸炎ビブリオ セレウス菌 品種判別 コメ品種 肉種 黄色ブドウ球菌 リステリアモノサイトゲネス クドアセプテンプンクタータ その他 検査フローのイメージ リアルタイム PCR 解析 食品 前培養液 コロニーなど DNA 調製 エンドポイント PCR 解析 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -10-

12 食中毒検査 リアルタイム PCR 通知法収載のプライマー プローブ配列によるノロウイルス検出キット TaKaRa qpcr Norovirus (GⅠ/GⅡ)Typing Kit 通知法に収載されたプライマー プローブ配列で定量解析! RR250A 90,000 RR250B 2 360,000 厚生労働省からの通知法 ( ) と相関性の高い定量解析が可能 公定法で用いられるコントロールプラスミド DNA と同等の定量結果が得られることを確認しています コンポーネントは使いやすいプレミックス 面倒な試薬調製は一切不要 初心者でも簡単に使用できます 逆転写反応はわずか 15 分で完了! 独自開発の逆転写酵素の採用により 反応時間の短縮が実現しました 本製品は 群馬県衛生環境研究所との共同研究の成果に基づき製品化しました 厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課より通知された ノロウイルスの検出法について ( 食安監発第 号別添 )( 最終改正 : 平成 25 年 10 月 22 日付食安監発 1022 第 1 号 ) 検体 RNA 調製 逆転写反応 ( 約 15 分 ) リアルタイム PCR 解析 逆転写 ~qpcr に要する時間は約 100 分! 実験例 : Positive Control DNA を用いた検量線の作成 方法 本キットに含まれる GI / GII Positive Control DNA からそれぞれ調製した段階希釈液を用いて検量線を作成した GI 検出系 増幅曲線 検量線 R2:0.998 Eff = 110.5% GII 検出系 増幅曲線 検量線 R2:0.999 Eff = 105.1% (Thermal Cycler Dice Real Time System II 使用 ) 結果 GI / GII 遺伝子とも 10 copies ~ copies の範囲で 精度よく検量線が作成できることを確認しています (25 µl 反応系 n=3) 通知法で求められる定量試験と同等の精度での解析にご利用いただけます < キットの内容 > 逆転写試薬 1. 5 PrimeScript Buffer(NV) 2. PrimeScript RT Enzyme Mix (NV) 3. Random 6 mers リアルタイム PCR 試薬 4. Premix Ex Taq ( NV ) 5. GI Primer Mix 6. GII Primer Mix 7. GI Probe Mix 8. GII Probe Mix 9. ROX Reference Dye 10. ROX Reference Dye II 11. RNase Free dh2o 定量用 Positive Control DNA 12. GI Positive Control DNA ( copies/µl) 13. GII Positive Control DNA ( copies/µl) 14. EASY Dilution(for Real Time PCR) 注 検便サンプルからの検出には 5~6 ページ掲載の TaKaRa ノロウイルス GI/GII 検出キット Ver.2( RR297A) をご利用ください -11- ǀ 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください :L56

13 食中毒検査 リアルタイム PCR 通知法収載の配列によるクドアセプテンプンクタータ検出キット Kudoa septempunctata (18S rrna)qpcr Detection Kit 通知法に収載されたプライマー プローブ配列で定量解析! RR260A 66,000 厚生労働省からの通知法 ( ) と相関性の高い定量解析が可能 コンポーネントは使いやすいプレミックス 面倒な試薬調製は一切不要 初心者でも簡単に使用できます キット添付の Positive Control DNA で定量可能 厚生労働省医薬 生活衛生局生活衛生 食品安全部監視安全課長通知 ( 平成 28 年 4 月 27 日 ) Kudoa septempunctata の検査法について ( 生食監発 0427 第 3 号 ) 検体 DNA 調製リアルタイム PCR 解析 実験例 :Positive Control DNA を用いた検量線作成 キット添付の Kudoa Positive Control を EASY Dilution (for Real Time PCR) で段階希釈し copies/µl の溶液を用いて検量線を作成しました 各反応系での最終コピー数はぞれぞれ です 増幅曲線 検量線 (Thermal Cycler Dice Real Time System II 使用 ) < キットの内容 > リアルタイム PCR 試薬 1. Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) 2. Kudoa Primer/Probe Mix 3. dh2o 4. ROX Reference Dye 5. ROX Reference Dye II 定量用 Positive Control DNA 6. Kudoa Positive Control ( copies/µl) 7. EASY Dilution (for Real Time PCR) 検査法フローチャート ( 通知法より引用 ) 1) スクリーニング法として リアルタイム PCR を行う場合 ( 注 ) 遺伝子検査法 陽性 顕微鏡検査 陽性 総合判定 陽性 ヒラメ検体 (Kudoa rdna コピー数 10 7 以上をスクリーニング陽性とする ) 陰性 国立衛生研に送付 陰性 陰性 注 試験法については 1) スクリーニング検査から行う場合 および 2) 顕微鏡検査から行う場合 が併記されています ǀ 遺伝子検査キットカタログ -12-

14 食中毒検査 リアルタイム PCR 腸管出血性大腸菌 (EHEC) ベロ毒素 (VT) 遺伝子検出キット CycleavePCR O-157 (VT gene)screening Kit Ver.2.0 通知法収載 厚生労働省より通知の方法に収載本製品は 厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知 ( 平成 26 年 11 月 20 日 ) 腸管出血性大腸菌 O26 O103 O111 O121 O145 及び O157の検査法について ( 食安監発 1120 第 1 号 ) に収載されました 1 チューブでインターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 反応測定イメージ VT 遺伝子 (FAM) 抽出試薬も含んだオールインワンキット! アルカリ熱抽出試薬も添付 検体さえ準備すれば検査ができます FAM と ROX を検出できる幅広い装置で使用可能 IC (ROX) 容量価格 ( 税別 ) CY217A CY217B < キットの内容 > 100 回 52,000 96,000 リアルタイム PCR 試薬 1. 2 Cycleave Reaction Mixture 2. VT Primer/Probe Mix (FAM, ROX) 3. dh2o アルカリ熱抽出試薬 4. NaOH Solution (50 mm) 5. Tris-HCl Buffer ph7.0(1 M) 6. dh2o(for Dilution) Positive Control DNA 7. VT1 Positive Control 8. VT2 Positive Control < インターナルコントロール (IC) による偽陰性チェック > VT 遺伝子 (FAM) IC (ROX) 培養液 反応阻害なし DNA 抽出 VT 陰性 VT 遺伝子検査 VT 遺伝子 (FAM) IC (ROX) 陽性 陰性 終了 反応阻害あり O 抗原遺伝子検査 判定不能 陰性 終了 V T 遺伝子検査の D N A 抽出には 陽性 アルカリ熱抽出法通知法収載 カラム精製法通知法収載食品の増菌培養液からの精製に! - NucleoSpin Tissue ( /.50/.250) * 通知法収載食品衛生検査指針収載 * 食品衛生検査指針微生物編 2015(2015 年 3 月末発刊 ) 専用プロトコールをご用意しています 分離培養法 結果判定 腸管出血性大腸菌 O26 O103 O111 O121 O145 及び O157 の検査法について 厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知 ( 食安監発 1120 第 1 号 ) より引用 チョコレートなど 抽出が困難な食品からの精製に! - NucleoSpin Food ( /.50/.250) NucleoSpin 各種はマッハライ ナーゲル社の製品です -13- ǀ 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください :L4

15 食中毒検査 リアルタイム PCR 腸管出血性大腸菌 (EHEC)O 抗原型遺伝子タイピングキット CycleavePCR EHEC (O157/O26)Typing Kit CycleavePCR EHEC (O111/O121)Typing Kit CycleavePCR EHEC (O103/O145)Typing Kit 通知法収載 通知法収載 通知法収載 厚生労働省より通知の方法に収載 本製品は 厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知 ( 平成 26 年 11 月 20 日 ) 腸管出血性大腸菌 O26 O103 O111 O121 O145 及び O157 の検査法について ( 食安監発 1120 第 1 号 ) に収載されました 主要な 6 種をタイピングできる試薬キットをラインナップ 1 チューブで 2 種の O 抗原型遺伝子を判定できます 組み合わせてお使いいただくことで主要な O 抗原型遺伝子のタイピングが可能です CY237 CY238 CY 回 20 回 20 回 28,000 28,000 28,000 O165 を検出する CycleavePCR EHEC(O165)Typing Kit ( CY241: 69,000) もご用意しています FAM と ROX を検出できる幅広い装置で使用可能 例 )CycleavePCR EHEC (O157/O26)Typing Kit O157 (FAM) O157 (FAM) 陽性 O26 (ROX) O26 (ROX) 陰性 < キットの内容 : CY237> リアルタイム PCR 試薬 1. 2 Cycleave Reaction Mixture 2. O157/O26 Primer/Probe Mix 3. dh2o Positive Control DNA 4. O157 Positive Control 5. O26 Positive Control 6. EASY Dilution (for Real Time PCR) O 抗原型遺伝子検査の D N A 抽出には アルカリ熱抽出法 カラム精製法食品の増菌培養液からの精製に! - NucleoSpin Tissue ( /.50/.250) 専用プロトコールをご用意しています 製品名 CycleavePCR EHEC (O157/O26) Typing Kit CycleavePCR EHEC (O111/O121) Typing Kit CY237 CY238 ターゲット遺伝子 O157 O26 O111 O121 蛍光検出波長 FAM ROX FAM ROX チョコレートなど 抽出が困難な食品からの精製に! - NucleoSpin Food ( /.50/.250) CycleavePCR EHEC (O103/O145) Typing Kit CY239 O103 O145 FAM ROX NucleoSpin 各種はマッハライ ナーゲル社の製品です CycleavePCR EHEC (O165) Typing Kit CY241 O165 FAM ベロ毒素遺伝子 ( V T 1 / V T 2 遺伝子 ) のタイピングには CycleavePCR O-157 (VT1/VT2)Typing Kit インターナルコントロールによる偽陰性をモニターしながら VT1/VT2 遺伝子のタイピングが可能です CY222 容量 VT1, VT2 各 25 回 価格 ( 税別 ) 69,000 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください :L4 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -14-

16 食中毒検査 リアルタイム PCR サルモネラを検出 CycleavePCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0 ほとんどすべてのサルモネラ菌が保有している侵入性因子関連遺伝子 inva をターゲット として リアルタイム PCR で検出します CY205 容量 価格 ( 税別 ) 69,000 腸炎ビブリオを検出 CycleavePCR Vibrio (tdh gene)detection Kit 腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒遺伝子 ( tdh 遺伝子 ) をターゲットとして リアルタイム PCR で検出します 容量価格 ( 税別 ) CY220 69,000 セレウリド産生性セレウス菌を検出 CycleavePCR Bacillus cereus (CRS gene)detection Kit 分離培養培地から得られたセレウス菌のセレウリド合成酵素 (CRS) 遺伝子をターゲットとして リアルタイム PCR で迅速かつ確実に検出します 容量価格 ( 税別 ) CY221 69,000 カンピロバクタージェジュニ / コリをタイピング CycleavePCR Campylobacter (jejuni/coli)typing Kit カンピロバクター属菌の Cytolethal distending toxin 遺伝子 (cdt genes) の C サブユニット遺伝子 ( cdtc gene) をターゲットとして C. jejuni C. coli の 2 菌種の検出および同定を行います CY225 C. jejuni, c. coli 各 25 回 69,000 リステリアモノサイトゲネスを検出 CycleavePCR Listeria monocytogenes (inla gene) Detection Kit Listeria monocytogenes が細胞内に侵入する際に関与する分子 Internalin A(inlA) をコードする遺伝子配列領域をターゲットとして リアルタイム PCRで検出を行います CY223 69,000 黄色ブドウ球菌を検出 CycleavePCR Staphylococcus aureus (DnaJ gene) Detection Kit ハウスキーピング遺伝子の 1つであり 菌種間でも多様性を持つ DnaJ 遺伝子をターゲットとして 黄色ブドウ球菌をリアルタイム PCR で検出します CY228 69,000 食中毒検査用 CycleavePCR シリーズはすべて同じ反応条件なので 複数の項目を一度に検査可能! インターナルコントロールで自動的に偽陰性をチェック! FAM ROX ターゲット インターナルコントロール プレミックス試薬なので 初心者でもかんたん! 2 CycleavePCR Reaction Mix dh2o 各 Primer/Probe Mix (5 ) Positive Control DNA -15- ǀ 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください : L4 L34(CY221 のみ ) L42(CY225 のみ )

17 食中毒検査 リアルタイム PCR 便利なオールインワン検査キットシリーズ CycleavePCR Kit シリーズ リアルタイム PCR 検査に必要なコンポーネントがすべて含まれたオールインワンキットです 通知法収載の腸管出血性大腸菌シリーズをはじめ 多数のラインナップを取り揃えています プレミックス試薬なので面倒な試薬調製は一切不要 初心者でも簡単に使用できます! 品質保証されたキットなので すぐに検査ができます キットとして性能保証されており 試薬管理の手間が省けます インターナルコントロールで自動的に偽陰性をチェック! ターゲット遺伝子とは無関係な配列を有する DNA を同時に増幅し PCR 阻害の有無をチェックできます FAM ROX ターゲット インターナルコントロール FAM と ROX を検出できる幅広い装置で使用可能 Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ ( タカラバイオ ) Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific 社 ) などの幅広いリアルタイム PCR 装置で使用できます 反応時間はわずか 90 分! 食中毒菌シリーズはすべて同じ反応条件なので 複数のキットで一度に検査することができます 検体 DNA 調製リアルタイム PCR 解析 検出対象 製品名容量 価格 ( 税別 ) 掲載ページ 腸管出血性大腸菌 (EHEC) ベロ毒素遺伝子 O 抗原型遺伝子 CycleavePCR O-157(VT gene)screening Kit Ver.2.0 CycleavePCR O-157(VT1/VT2)Typing Kit CycleavePCR EHEC(O157/O26)Typing Kit CycleavePCR EHEC(O111/O121)Typing Kit CycleavePCR EHEC(O103/O145)Typing Kit CY217A CY217B CY222 CY237 CY238 CY 回 *1 20 回 20 回 20 回 52,000 96,000 69,000 28,000 28,000 28, CycleavePCR EHEC(O165)Typing Kit CY241 69,000 サルモネラ CycleavePCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0 CY205 69,000 腸炎ビブリオ CycleavePCR Vibrio(tdh gene)detection Kit CY220 69,000 セレウス CycleavePCR Bacillus cereus(crs gene)detection Kit CY221 69,000 カンピロバクター リステリアモノサイトゲネス CycleavePCR Campylobacter(jejuni/coli)Typing Kit CycleavePCR Listeria monocytogenes(inla gene) Detection Kit CY225 CY223 *2 69,000 69, 黄色ブドウ球菌 CycleavePCR Staphylococcus aureus(dnaj gene) Detection Kit CY228 69,000 : 通知法収載 *1 VT1 VT2 各 25 回 *2 C. jejuni C. coli 各 25 回 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください : L4 L34(CY221 のみ ) L42(CY225 のみ ) ǀ 遺伝子検査キットカタログ -16-

18 食中毒検査 PCR 腸管出血性大腸菌 (EHEC) ベロ毒素 (VT) 遺伝子検出キット One Shot PCR Kit シリーズ 各製品の価格 容量については 71 ページ ( 裏表紙 ) の製品一覧をご確認ください 腸管出血性大腸菌 (EHEC) ベロ毒素遺伝子の検出とタイピングを簡便かつ迅速に行うための One Shot PCR キットです PCR に必要な試薬全てが 0.2 ml PCR tubeに分注されており サンプル DNAを加えるだけで PCR を行うことができます 製品名 特長 製品に含まれるプライマー ( 別売り ) ベロ毒素 1 型遺伝子 ベロ毒素 2 型遺伝子 検出できる遺伝子 ベロ毒素 2 型の変異型遺伝子 ターゲット DNA 増幅サイズ O-157( ベロ毒素遺伝子 ) One Shot PCR Screening Kit Ver.2 ( RR102A) サンプルを加えるだけの Ready-to-Use タイプ EVC-1/2 (S008) VT1 VT2 VT2vha VT2vhb VT2vp1 171 bp O-157( ベロ毒素 1 型 2 型遺伝子 )One Shot PCR Typing Kit Ver.2 ( RR106A) 1 型 2 型の判別が可能な Ready-to-Use タイプ VT1/VT2 用プライマー VT1 VT2 VT2vha VT2vhb VT2vp1 VT2vp2 349 bp 112 bp PCR Kit シリーズ One Shot PCR Kit 以外にも PCR 法を用いた迅速なベロ毒素遺伝子検出キットを用意しています 製品名 特長 通知法収製品に含まれるプライマー ( 別売り ) ベロ毒素 1 型遺伝子 ベロ毒素 2 型遺伝子 検出できる遺伝子 ベロ毒素 2 型の変異型遺伝子 O-157 由来遺伝子 ターゲット DNA 増幅サイズ EHEC (VT gene)pcr Screening Set ( RR120A) インターナルコントロールを含んだキット EVC-1/2 (S008) VT1 VT2 VT2vha VT2vhb VT2vp1 171 bp O-157( ベロ毒素 1 型 2 型遺伝子 )PCR Typing Set ( RR105A) 毒素の 1 型 2 型の判別を安価に EVT-1/2 (S006) EVS-1/2 (S007) VT1 VT2 VT2vha VT2vhb VT2vp1 349 bp 404 bp O-157( ベロ毒素 1 型 2 型遺伝子 )PCR Typing Set Plus ( RR122A) 検出できる変異型遺伝子が増えてさらに便利 EVT-1/2 (S006) EVS-1/ EVC-2 VT1 載腸管出血性大腸菌 (EHEC)O 抗原型遺伝子検出キット VT2 VT2vha VT2vhb VT2vp1 VT2vp2 349 bp 112 bp EHEC (O antigens)pcr Typing Kit 容量価格 ( 税別 ) RR133A 77,000 主要な 7 種の O 抗原型遺伝子をマルチプレックス PCR でタイピング 1 チューブで O157 O26 O111 O121 O103 O145 O165 をタイピング O165 O103 ベロ毒素 1 型 ベロ毒素 2 型 eae 遺伝子も同時に検出 本キットの開発には 宮崎大学農学部畜産草地科学科衛生微生物学分野井口純先生にご協力いただききました O111 O157 O26 O121 O ǀ 遺伝子検査キットカタログ

19 食中毒検査 PCR セレウリド産生性セレウス菌の検出キット Bacillus cereus (CRS gene)pcr Detection Kit 分離培養培地から得られたセレウス菌およびその類似菌 ( 例 : Bacillus thuringiensis B. anthracis など ) とセレウリド産生性セレウス菌を迅速かつ確実に検出するための PCR キットです RR132A 88,000 偽陰性チェックが可能 インターナルコントロールを含んだマルチプレックス検出系 コンポーネントはプレミックス PCR が初めてでもスムーズに使用できます ターゲット遺伝子セレウリド合成酵素遺伝子 (CRS) レシチナーゼ遺伝子 ( L E ) インターナルコントロール遺伝子 (IC) <キットの内容 > 増幅サイズ 426 bp 227 bp 134 bp 検出例 M bp 227 bp 134 bp 1 : Bacillus subtilis 2 : Bacillus thuringiensis 3 : 嘔吐毒素 ( セレウリド ) 非産生性 Bacillus cereus 4 : 嘔吐毒素 ( セレウリド ) 産生性 Bacillus cereus M : 100 bp Ladder Marker 低分子分析用アガロースを使用 1. 5 PCR Premix 2. CRS Primer Mixture ( セレウリド合成酵素遺伝子検出用 ) 3. LE Primer Mixture ( レシチナーゼ遺伝子検出用 ) 4. I.C. Primer Mixture ( インターナルコントコール検出用 ) 5. CRS Positive Control Template 6. LE Positive Control Template 本キットの開発には 名古屋市衛生研究所安形則雄先生にご協力いただきました カンピロバクターの迅速な検出 同定キット Campylobacter (cdt gene)pcr Detection and Typing Kit カンピロバクター属菌が保有する Cytolethal distending toxin 遺伝子 (cdt genes) の B サブユニット遺伝子 (cdtb gene) または C サブユニット遺伝子 (cdtc gene) をターゲットとして PCRにより C. jejuni C. coli C. fetus のタイピングを行うためのキットです RR134A 50 検体 88,000 世界初 C. jejuni, C. coli, C. fetusをタイピング! コンポーネントはプレミックス PCR が初めてでもスムーズに使用できます 検出例 < キットの内容 > 1. Premix Ex Taq HS 2. cdtb Primer Mix 3. cdtc Primer Mix 4. dh2o 5. C. jejuni Positive Control 6. C. coli Positive Control 7. C. fetus Positive Control cdt B cdt C M M M 鋳型 : ゲノム DNA(5 pg) 1 : C. jejuni 2 : C. fetus 3 : C. coli M : 100 bp ラダー 本キットの製品化には 大阪府立大学生命環境科学研究科獣 医国際防疫学研究室山崎伸二先生および扶桑薬品工業株式会 社のご協力をいただきました 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください : L34(RR132A) L42(RR134A) ǀ 遺伝子検査キットカタログ -18-

20 食中毒検査 リアルタイム PCR Tm 解析による食中毒菌関連遺伝子のスクリーニング用プライマー QuickPrimer (Real Time) シリーズ 主な食中毒病原菌および下痢性病原菌を TB Green TM を用いたインターカレーター法によるリアルタイム PCR で検出するためのプライ マーシリーズです 各プライマーは 特定の菌または病原因子の遺伝子の極めて特異的な配列部分に相補するよう設計されています Ct 値と Tm 値に基づいて結果を判定 サンプルの増幅曲線より得られたCt 値 ならびに融解曲線のパターンおよびTm 値が 判定基準に一致するかどうかで目的遺伝子検出の判定を行います 検体 TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) ( RR420A) と組合せて使用 専用試薬との組合せで至適化されています 豊富なラインナップから自由に組合せて使用可能 反応条件は全て同一なので 自由な組合せで使用できます 反応時間はわずか約 90 分 1 反応あたり約 260 円なので 安価なスクリーニング検出に好適 DNA 抽出 リアルタイム PCR ( 融解曲線分析 ) サンプルの増幅曲線より得られた Ct 値 融解曲線のパターンおよび Tm 値が 判定基準に一致するかどうかで目的遺伝子検出の判定を行う Thermal Cycler Dice Real Time System での解析例 A: 陽性コントロール DNA B: 陰性コントロール 病原因子遺伝子検出用 製品名 検出対象遺伝子 陽性コントロール QuickPrimer InvE 遺伝子 QuickPrimer IpaB 遺伝子 QuickPrimer IpaH 遺伝子 QuickPrimer Shiga I 遺伝子 QuickPrimer Shiga II 遺伝子 QuickPrimer LT 遺伝子 QuickPrimer STI 遺伝子 QuickPrimer Tdh 遺伝子 QuickPrimer CdtA 遺伝子 QuickPrimer InvA 遺伝子 QuickPrimer Enterotoxin (Clostridium perfringens) 遺伝子 QuickPrimer Nhe 遺伝子 MR101 MR102 MR103 MR104 MR105 MR106 MR107 MR109 MR110 MR111 MR112 MR113 細胞侵入性因子 InvE 遺伝子細胞侵入性因子 IpaB 遺伝子細胞侵入性因子 IpaH 遺伝子志賀毒素 ( ベロ毒素 )I 型 Shiga I 遺伝子志賀毒素 ( ベロ毒素 )II 型 Shiga II 遺伝子易熱性毒素 LT 遺伝子ヒト耐熱性毒素 STI 遺伝子 (STh 遺伝子 ) 耐熱性溶血毒 Tdh 遺伝子細胞膨張化致死毒素 CdtA 遺伝子細胞侵入性因子 InvA 遺伝子腸管毒 Enterotoxin 遺伝子非溶血性腸管毒 Nhe 遺伝子 MR401 MR402 MR401 MR403 MR404 MR405 MR406 MR407 MR408 MR409 MR410 MR415 病原菌遺伝子検出用 製品名 検出対象遺伝子 陽性コントロール QuickPrimer Escherichia/Shigella group (16S rdna) QuickPrimer Staphylococcus spp. (16S rdna) QuickPrimer Clostridium perfringens (16S rdna) QuickPrimer Yersinia spp. (16S rdna) QuickPrimer Campylobacter spp. (16S rdna) QuickPrimer Listeria spp. (16S rdna) QuickPrimer Bacillus cereus group (16S rdna) MR201 MR202 MR203 MR204 MR205 MR207 MR208 16S rdna 遺伝子 16S rdna 遺伝子 16S rdna 遺伝子 16S rdna 遺伝子 16S rdna 遺伝子 16S rdna 遺伝子 16S rdna 遺伝子 MR405 MR411 MR410 MR412 MR408 MR414 MR415 プライマーシリーズ MR101~MR208 各 100 回各 15,000 コントロール DNA MR401~MR415 各 30 回各 12,500 専用解析ツール 便利な Tm 値自動判定ツール QuickPrimer 結果判定用エクセルシート をウェブカタログの製品ページでダウンロードできます Tm 値判定用ポジティブコントロール DNA 各 QuickPrimer にそれぞれ専用のポジティブコントロール DNA( MR401~ MR415) を用意しています 本製品は 岐阜大学大学院医学系研究科病原体制御学分野教授江崎孝行先生のご協力のもとに開発いたしました -19- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

21 食中毒検査 PCR 下痢性病原菌遺伝子スクリーニング用プライマーセット MORA-Primer Diarrheal Pathogens 8 連チューブの各ウェル (1~8) に充填されたプライマーセットで PCR を行い 主要な病原菌を網羅的に検出します ウェル 病原菌名 和名 検出対象 増幅サイズ 1 Enteroinvasive E. coli/shigella 腸管侵入性大腸菌 / 赤痢菌 I n v E( virb) 127 bp Enterotoxigenic E. coli Enteroinvasive E. coli/shigella Vibrio parahaemolyticus 腸管毒素原性大腸菌 (ETEC) 腸管侵入性大腸菌 / 赤痢菌腸炎ビブリオ菌 LT ipab tdh 297 bp 137 bp 368 bp Enterohemorrhagic E. coli/shigella Enterohemorrhagic E. coli Escherichia coli 腸管出血性大腸菌 (EHEC) 腸管出血性大腸菌 (EHEC) 腸管毒素原性大腸菌 (ETEC) Shiga 1 (stx-1) Shiga 2 (stx-2) ST1 376 bp 272 bp 171 bp 5 Vibrio cholerae コレラ菌 C T ( ctxa) 494 bp 6 Yersinia group エルシニア属菌群 16S rdna 316 bp Campylobacter jejuni キャンピロバクター ジェジュニ cdta 107 bp 7 Enteroinvasive E. coli/shigella 腸管侵入性大腸菌 / 赤痢菌 ipah 117bp 8 Salmonella spp. サルモネラ属菌 inva 422 bp Enteroaggregative E. coli 腸管凝集性大腸菌 EAST1 173 bp 製品名容量価格 ( 税別 ) MORA-Primer Diarrheal Pathogens 各 192 pmol(24 回分 ) 37,500 MORA-DNA Diarrheal Pathogens 回分 26,000 食品病原菌遺伝子スクリーニング用プライマーセット MORA-Primer Food Pathogens 8 連チューブの各ウェル (1~8) に充填されたプライマーセットで PCR を行い 主要な病原菌を網羅的に検出します ウェル 病原菌名 和名 検出対象 増幅サイズ 1 2 Staphylococcus spp. Vibrio parahaemolyticus ブドウ球菌群腸炎ビブリオ菌 ( 溶血毒 ) 16S rdna Hemolysin (tdh) 414 bp 368 bp Clostridium perfringens Clostridium perfringens ウェルシュ菌ウェルシュ菌 ( 腸管毒 ) 16S rdna Enterotoxin 257 bp 230 bp 3 Campylobactor jejuni キャンピロバクター 16S rdna 107 bp Vibrio cholerae Listeria monocytogenes Salmonella spp. コレラ菌 ( 下痢毒素 ) リステリア菌サルモネラ菌 ( 侵入因子 ) CT (ctxa) 16S rrna inva 494 bp 411 bp 422 bp Clostridium botulinum AB(F)group Bacillus cereus Bacillus cereus group ボツリヌス菌群 AB(F) 型セレウス菌 ( 非溶血性腸管毒 ) セレウス菌群 16S rrna NHENT 16S rdna 390 bp 152 bp 143 bp 7 Escherichia/Shigella group 大腸菌 / 赤痢菌群 16S rdna 413 bp 8 Bacterial universal 細菌一般 16S rdna 510 bp Fungal universal カビ一般 18S rdna 380 bp 製品名容量価格 ( 税別 ) MORA-Primer Food Pathogens 各 192 pmol(24 回分 ) 37,500 MORA-DNA Food Pathogens 回分 26,000 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -20-

22 食中毒検査 PCR ラインナップ豊富なプライマーシリーズ特殊細菌検出用 Primer Set TaKaRa Taq ( R001A) TaKaRa Taq Hot Start Version( R007A) と組合わせて使用いただけます 腸炎ビブリオ 毒素原生大腸菌 腸管出血性大腸菌 (EHEC) 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌 (EIEC) サルモネラ菌 ウェルシュ菌 ボツリヌス 製品名 容量 耐熱性溶血毒遺伝子検出用 Primer Set VPD-1&2 S001 耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子 (trh1) 検出用 Primer Set VPS-1&2 S002 耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子 (trh1&2) 検出用 Primer Set VPR-1&2 S028 LT 遺伝子検出用 Primer Set ELT-1&2 S003 STh 遺伝子検出用 Primer Set ESH-1&2 S004 STp 遺伝子検出用 Primer Set ESP-1&2 S005 VT1 遺伝子検出用 Primer Set EVT-1&2 S006 VT2 遺伝子検出用 Primer Set EVS-1&2 S007 VT 遺伝子検出用 Primer Set EVC-1&2 S008 エンテロトキシン A 遺伝子検出用 Primer Set SEA-1&2 S009 エンテロトキシン B 遺伝子検出用 Primer Set SEB-1&2 S010 黄色ブドウ球菌 エンテロトキシン C 遺伝子検出用 Primer Set SEZ-1&2 S011 エンテロトキシン D 遺伝子検出用 Primer Set SED-1&2 S012 エンテロトキシン E 遺伝子検出用 Primer Set SEE-1&2 S013 毒素性ショック症候群毒素遺伝子検出用 Primer Set TST-1&2 S015 コレラ 毒素遺伝子検出用 Primer Set VCT-1&2 S014 inve 遺伝子検出用 Primer Set INV-1&2 ipah 遺伝子検出用 Primer Set IPA-1&2 inva 遺伝子検出用 Primer Set SIN-1&2 エンテロトキシン遺伝子検出用 Primer Set STN-1&2 毒素遺伝子検出用 Primer Set CPE-1&2 A 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BAS-1&2 B 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BBS-1&2 C 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BCS-1&2 D 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BDS-1&2 E 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BES-1&2 F 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BFS-1&2 G 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BGS-1&2 S016 S017 S018 S019 S020 S021 S022 S023 S024 S025 S026 S027 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 1,000 pmol 各 1,000 pmol 価格 ( 税別 ) 各 33,000 各 33,000 各 33,000 各 33,000 33,000 各 33,000 各 33,000 33,000 各 34,000 S001~S020, S028 は ( 株 ) 島津製作所で製造されたものです 製品内容 : 10 PCR Buffer 600 µl Primer F/R (19 pmol/µl) 各 1,000 pmol ウェブカタログに下記の参考データ集を掲載しています ご参照ください UNG 処理によるキャリーオーバーコンタミネーションの防止 専用ポジティブコントロール特殊細菌検出用 Positive Control Template S031 S046 S032 S033 S034 製品名 VP1 VP2 EC1 EC2 EC3 対応する Primer Set ( ) VPD(S001) VPS(S002) VPR(S028) ELT(S003) ESH(S004) ESP(S005) EVT(S006) EVS(S007) EVC(S008) 増幅 DNA (bp) S035 S036 S037 S038 S039 S040 製品名 SE1 SE2 ST SS VC SN 対応する Primer Set ( ) SEA(S009) SEB(S010) SEZ(S011) SED(S012) SEE(S013) TST(S015) INV(S016) IPA(S017) VCT(S014) SIN(S018) STN(S019) 増幅 DNA (bp) S041 S042 S043 S044 S045 製品名 CP BS1 BS2 BS3 BS4 対応する Primer Set ( ) CPE(S020) BAS(S021) BBS(S022) BCS(S023) BDS(S024) BES(S025) BFS(S026) BGS(S027) 増幅 DNA (bp) 容量 : 各 50 µl (100 pg/µl) 価格 : 各 12,000 ( 税別 ) -21- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

23 衛生指標菌検査 リアルタイム PCR 一般細菌数 の定量をその日のうちに Bacteria (tuf gene)quantitative PCR Kit RR240A 容量 100 回 価格 ( 税別 ) 65,000 細菌を対象とした PCR 検出系では16S rrna 遺伝子を利用したものが知られていますが 菌種間でコピー数が異なるため 細菌数の正確な定量には適していません 本キットでは 菌種間での保存性が高く 染色体上に低コピー (1または 2コピー ) で存在しているタンパク質伸長因子 T u( tuf) 遺伝子を検出対象としているため 広範囲な菌種を偏りなく測定することができます 本キットの開発には 東京海洋大学木村凡先生 高橋肇先生 ならびに東洋水産株式会社田中悠一郎氏にご協力いただきました < キットの内容 > リアルタイム PCR 試薬 1. TB Green Premix Ex Taq GC 2. TUF Primer Mix 3. dh2o 4. ROX Reference Dye 5. ROX Reference Dye II Positive Control DNA 6. TUF Positive Control 7. EASY Dilution (for Real Time PCR) その日のうちに結果判定 培養法では判定に 2~4 日を要しますが 遺伝子検査はその日のうちに判定できます 消費期限が短い 生鮮食品 においても 出荷前判定 が可能になります DNA 抽出 ( 約 30 分 ) リアルタイム PCR 解析 ( 約 90 分 ) キット添付のポジコンによる定量 NucleoSpin Tissue (54 ページ ) その日のうちに結果判定! 食材懸濁液 試料液の調製 標準寒天培地にて培養 (48 時間 ~) コロニーの計数 広範囲に検出できる遺伝子検査で自主検査の効率アップ 3 日目 検体によって含まれる菌種は異なり 従来法では培地組成や培養温度を工夫する必要がありますが 菌種間での保存性が高い タンパク質伸長因子 T u( tuf) 遺伝子 * を対象とした遺伝子検査なら 一度に広範囲な細菌種を検出することができます * 参考文献 Design of a new universal real-time PCR system targeting the tuf gene for the enumeration of bacterial counts in food. J. Food Prot Apr;73(4): 遺伝子検査なら 食材の細菌汚染履歴も調査できます 例えば 加熱食品を対象とした細菌汚染履歴の調査にも活用できます 培養検査では不検出となる検体についても 過去に細菌汚染があった場合には 遺伝子検査で検出することが可能です 実験例 : コピー数と菌数の相関について 方法 野菜類 9 種 サラダ類 ( カット野菜含む )6 種 肉類 8 種について 10% 懸濁液を調製し TSA 塗沫培養 (30 48 時間 ) による菌数測定と本製品によるリアルタイム PCR 解析を実施した 結果 TSA 塗沫培養の結果 ( 菌数 ; CFU/g) を横軸に リアルタイム PCR の結果 ( コピー数 ; copies/g) を縦軸にプロットしたところ TSA 塗沫培養とリアルタイム PCR の結果はよく相関していました なお リアルタイム PCR では検体に含まれる死菌や培養で増殖しにくい菌種も検出している可能性があるため リアルタイム P C R によるコピー数の方が TSA 塗沫培養による菌数よりも 1~2 オーダー高めに算出される傾向にあったと考えられます Real Time PCR (log copies/g) TSA (log cfu/g) 野菜サラダ類肉類標準線 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -22-

24 衛生指標菌検査 リアルタイム PCR 腸内細菌科菌群 の検出 定量をその日のうちに Enterobacteriaceae (rplp gene)quantitative PCR Kit 本キットでは リアルタイム PCR により rplp(50s ribosomal protein L16) 遺伝子を検出対象として 腸内細菌科菌群を検出および定量します 従来法では判定に6 日間ほどを要しますが リアルタイム PCR ならその日のうちに結果判 RR241A 容量 100 回 価格 ( 税別 ) 65,000 定が可能なため 自主検査の効率アップに有効です < キットの内容 > 腸内細菌科菌群は サルモネラ 赤痢菌 エルシニアのような腸管系食中毒菌も含み 大腸菌群よりも広い腸管系食中毒菌をカバーしています 従来 食品衛生における衛生指標菌としては 大腸菌群や糞便大腸菌群が対象とされてきましたが 欧州連合 (EU) の食品微生物基準では 大腸菌群に代わる衛生指標菌として腸内細菌科菌群が汎用されています 本キットの開発には 東京海洋大学木村凡先生 高橋肇先生にご協力いただきました リアルタイム PCR 試薬 1. TB Green Premix Ex Taq GC 2. rplp Primer Mix 3. dh2o 4. ROX Reference Dye 5. ROX Reference Dye II Positive Control DNA 6. rplp Positive Control 7. EASY Dilution(for Real Time PCR) その日のうちに結果判定 培養法では判定に6 日ほどを要しますが 遺伝子検査はその日のうちに判定できます 消費期限が短い 生鮮食品 においても 出荷前判定 が可能になります DNA 抽出 ( 約 30 分 ) リアルタイム PCR 解析 ( 約 90 分 ) キット添付のポジコンによる定量 NucleoSpin Tissue (54 ページ ) その日のうちに結果判定! 食材懸濁液 試料液の調製 標準寒天培地にて培養 (48 時間 ~) コロニーの計数 6 日目 実験例 : コピー数と菌数の相関について 方法 肉類 6 種 野菜類 5 種 サラダ類 5 種について 生理食塩水または BPW を用いて 10% 懸濁液を調製し VRBG 混釈培養 (37 48 ~96 時間 ) による菌数測定と本製品によるリアルタイム PCR 解析を実施した 結果 VRBG 混釈培養の結果 ( 菌数 ; CFU/g) を横軸に リアルタイム PCR の結果 ( コピー数 ; copies/g) を縦軸にプロットしたところ VRBG 混釈培養とリアルタイム PCR の結果はよく相関していました V R B G は胆汁末などの選択剤を含む培地であるため 殺菌工程などで損傷を受けた細菌がうまく培養されない可能性があり その結果 リアルタイム P C R によるコピー数の方が V R B G 混釈培養による菌数よりも 1~2 オーダー高めに算出される傾向にあったと考えられます そこで 10% 懸濁液調製の際に 生理食塩水の代わりに BPW を用いることにより損傷回復を試みたところ ( 図中では で示す ) VRBG 混釈培養とリアルタイム PCR の結果がほぼ一致しました Real Time PCR (log copies/g) VRBG (log CFU/g) 標準線精肉野菜サラダ -23- ǀ 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください :L60

25 品種判別 PCR 特徴的なバンドパターンやバンドが検出されないことでコシヒカリ * を判別コメ判別用 PCR Kit I/ コメ判別用 PCR Kit II 4 種類のプライマー対を用いるマルチプレックス PCR を行い コシヒカリを判別します コメ判別用 PCR Kit I( RR211A) ではコシヒカリと他の 60 品種について Kit II( RR213A) ではコシヒカリと他の 48 種について確認済みです 本キットにより 遺伝子レベルでの種籾の管理や精米 米飯の品質管理が可能となります RR211A 100 回 57,000 RR213A 100 回 57,000 マルチプレックス PCR のバンドパターンでコシヒカリ * を判別 Kit I: 他の品種とは異なる特徴的なバンド出現パターンで判別 Kit II: 識別バンドが検出されないことで判別 コシヒカリ * と他の 6 0 品種 ( I ) 4 8 品種 ( I ) について確認済 Kit I ではコシヒカリ以外の 60 品種 ( 下表 ) について コシヒカリとは異なるパターンになることを確認しています Kit II の確認済みの 48 品種についてはウェブカタログをご覧ください * コシヒカリBLを除く コメ判別用 PCR Kit I で確認済みのコシヒカリ以外の 60 品種 ひとめぼれヒノヒカリあきたこまちきらら 397 キヌヒカリほしのゆめはえぬきむつほまれ日本晴ササニシキつがるロマンハナエチゼン夢つくしハツシモ朝の光 月の光あいちのかおり祭り晴あきほゆきまるむつかおりまなむすめかけはしキヨニシキどまんなか越路早生ゆきの精ほほほの穂ゆめあかり能登ひかり アキツホアケボノ朝日ヤマホウシヤマヒカリ黄金錦コガネマサリレイホウミネアサヒふさおとめかりの舞どんとこいアキニシキながのほまれフクヒカリ ゴロピカリ初星中生新千本森のくまさんゆめさんさ加賀ひかりきらり宮崎ゆめみのりたかねみのりあさひの夢ニシホマレチヨニシキヒヨクモチヒメノモチはくちょうもち 注 全国 33 都道府県のコシヒカリ原種について 同一パターンであることを確認していますが 遺伝的変異のために異なる結果が出る可能性があります また コシヒカリ以外の 60 品種 ( 左表 ) につき コシヒカリとは異なるパターンになることを確認していますが これらの品種においても遺伝的変異により コシヒカリと同じパターンを示す可能性があります ( 左表に記載のない品種については 確認しておりません ) なお コシヒカリ BL については前記コシヒカリと異なる結果を示す場合があります コメ検体 DNA 抽出 PCR+ 電気泳動 コメ DNA 抽出キット ( 精米 玄米 1 粒スケール ) 未加熱の精米または玄米 1 粒から DNA サンプルを調製 回分 63,000 磁性粒子に DNA を吸着させて精製 コメ DNA 抽出キット ( 精米 20 粒スケール ) 未加熱の精米 20 粒から DNA サンプルを調製 スピンカラムによる遠心分離操作で精製 9103 容量 価格 ( 税別 ) 26,400 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください : L26(RR211A) L27(RR213A) ǀ 遺伝子検査キットカタログ -24-

26 品種判別 ウシ ブタ ニワトリなどの 6 肉種を判別 CycleavePCR 肉種判別キット 6 種 リアルタイム PCR 容 量 価格 税別 CY218 20サンプル分 79,000 リアルタイム PCR により 原料肉のウシ ブタ ニワトリ ウマ ヒツジ ウサギの 6 種の種判別を行うためのキットです ミトコンドリア DNA 上にある cytochrome c oxidase subunit I (cox I) 遺伝子領域の動物種間の多型をもとに cox I 領域におい てそれぞれの動物種を特異的に増幅するようにプライマーを設計し さらにそれぞれの動物種の増幅産物に特異的にハイブリダイズす るプローブを用いて検出を行います キットの内容 6 種の肉種判定が可能 Tube FAM ROX Tube 1 ウシ インターナルコントロール Tube 2 ブタ インターナルコントロール Tube 3 ニワトリ インターナルコントロール Tube 4 ウサギ インターナルコントロール Tube 5 ウマ インターナルコントロール Tube 6 ヒツジ インターナルコントロール インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 リアルタイム PCR 試薬 1. 2 CycleavePCR Reaction Mix 2. Primer Probe Mix-1 (for beef) 3. Primer Probe Mix-2 (for pork) 4. Primer Probe Mix-3 (for chicken) 5. Primer Probe Mix-4 (for rabbit) 6. Primer Probe Mix-5 (for horse meat) 7. Primer Probe Mix-6 (for mutton) 8. dh 2O Positive Contorol DNA 9. Control DNA for beef 10. Control DNA for pork 11. Control DNA for chicken 12. Control DNA for rabbit 13. Control DNA for horse meat 14. Control DNA for mutton 実験例 ドライソーセージサンプルの肉種判別 方法 パッケージの表示に 畜肉 豚肉 マトン 牛肉 鶏肉 と記載されているドライソーセージ 10 mg から 24.4 ng/µl の濃度で DNA サンプルを得た これを 2 ng/µl 濃度に調整し CycleavePCR 肉種判別キット 6 種 の反応に 5 µl を使用し 10 ng/ 反応 肉種 判別を行った FAM ターゲット pork ROX IC 遺伝子 mutton beef chicken horse meat rabbit 左図 増幅曲線 FAM 4 種類の肉種について検出された 右図 増幅曲線 ROX インターナルコントロール遺伝子は すべて検出された PCR 反応阻害は無し 結果 今回の実験では 4 種類の肉種のシグナルが確認されました これらはドライソーセージ製品に食肉原材料として記載があった豚肉 マトン 牛肉 鶏肉と一致していました -25- ǀ 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L4

27 水質検査 検出ターゲットレジオネラ属菌 生菌検出法 (LC EMA-qPCR 法 EMA-qPCR 法 ) 生菌死菌検出法 (qpcr 法 ) クリプトスポリジウム属 ジアルジア 検査フローのイメージ レジオネラ属菌 第 4 版レジオネラ症防止指針収載 生菌検出法 検査開始 2 日目 LC EMA-qPCR 法 検体濃縮 液体培養 (LC) (18 時間 ) EMA 処理 ( 約 30 分 ) DNA 抽出 ( 約 30 分 ) リアルタイム PCR ( 約 50 分 ~) EMA-qPCR 法 検体濃縮 検査開始 1 日目 EMA 処理 DNA 抽出リアルタイム PCR 生菌死菌検出法 qpcr 法 検体濃縮 DNA 抽出 検査開始 1 日目 リアルタイム PCR クリプトスポリジウム属 ジアルジア 厚生労働省通知法収載 環境水 10 L 10 ml に濃縮 オーシスト シスト 核酸抽出 リアルタイム RT-PCR 解析 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -26-

28 水質検査 LC EMA-qPCR 18時間 濃縮 液体培養 酸処理 Liquid Culture レジオネラ属菌 生菌検出法 LC EMA-qPCR 法 採水翌日に 確実な生菌選択的検出が可能 LC EMA-qPCR 法は 液体培養による生菌の選択的増殖 と EMA 処理による死菌由来 DNA からの PCR 増幅の抑制 を組み合わ せた生菌遺伝子検査法です 2 つの技術の組合せにより 確実かつ高感度に生菌選択的な検出を行うことができ 浴槽水を対象とし た場合に 培養法と高い相関性を示します 液体培養 液体培養に使用する培地のベース Legionella LC Medium Base 容 量 価格 税別 ml 16,500 より確実な生菌の選択的検出に MWY 液体培地で 時間培養することで生菌のみが増殖し 相対的に生菌の選択性が向上します 定量性を保った状態で増菌させ 定量的な解析を行うために 一定時間 18 時間 の培養を行います 注 Legionella LC Medium Base を使用する際には下記のサプリメントが必要です レジオネラ BCYEα 発育サプリメント 関東化学 Oxoid Code SR110 レジオネラ MWY 選択サプリメント 関東化学 Oxoid Code SR118 EMA処理 EMA 試薬キット Viable Legionella Selection Kit for LC EMA-qPCR LC EMA-qPCR 法に至適化された専用の EMA 試薬です 光照射装置 LED Crosslinker 12 EMA 処理検体 1.5 ml チューブ 12 本を一度に光照射できます 死菌由来の PCR 増幅を抑制し 生菌由来 DNA を選択的に検出 容 量 価格 税別 7730S 25回 18, ,000 容 量 価格 税別 EM200 一式 107,800 EMA で修飾された死菌 DNA が PCR 増幅できない状態となることを利用して 生菌 DNA を選択的に検出します EMA 処理の詳細は p61 62 を参照 DNA抽出 レジオネラ属菌専用の DNA 抽出試薬 Lysis Buffer for Legionella 容 量 価格 税別 ,000 試薬を加えて 分間加熱後 4 で遠心分離し さらに 5 分間氷冷するだけです 簡便な操作で DNA 抽出 界面活性剤と PCR 阻害物質吸着樹脂からなり 遠心後は吸着樹脂の上にゲル層が 形成される仕組みで 初心者でも簡便に DNA 溶液の回収が可能です -27- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

29 30分 EMA 処理 30分 50分 DNA 抽出 リアルタイム PCR リアルタイム PCR レジオネラ属菌検出キット CycleavePCR Legionella 16S rrna Detection Kit 広範囲なレジオネラ属菌を検出可能 容 量 価格 税別 L. londiniensis を含む 48 菌種 74 株で増幅を確認しています CY240S 25回 31,000 インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 CY240 57,000 レジオネラ16S rrna 遺伝子 FAM インターナルコント ロール IC 遺伝子 ROX 検出結果の判断基準について 厚生労働科学研究費補助金 健康安全 危機管理対策総合研究事業 公衆浴場等におけるレジオネラ属菌 対策を含めた総合的衛生管理手法に関する研究 平成 24 年度分担研究報告書 より引用 LC EMA-qPCR 法におけるレジオネラ1 CFU あたりの 16S Positive Control コピー数の決定 35 Ct 値 アメーバ培養レジオネラ属菌の10 倍希釈系列を用い それぞれ 2 連で LC EMA-qPCR を行い 検量線を作成した この回帰式の切 片と 16S Positive Control の回帰式の切片の差から レジオネ ラ属菌1 CFU 当りの16S Positive Control コピー数が以下の通 り算出された 40 0h EMA- y = x R² = h EMA- y = x R² = h EMA+ y = x R² = y = x 死菌 EMA+ R² = プラスミド y = x 時間培養 EMA 処理後のコピー数 レジオネラ属菌1 CFU 当り = コピー log CFU/5 µl log copies/5 µl 6 アメーバ培養レジオネラ属菌の LC EMA-qPCR 検量線 厚生労働科学研究費補助金 健康安全 危機管理対策総合研究事業 レジオネラ検査の標準化及び消毒等 に係る公衆浴場等における衛生管理手法に関する研究 平成 年度分担研究報告書 より引用 LC EMA-qPCR による浴槽水等における検査結果 全国 6 か所の地方衛生研究所において 平成 年度に浴用 施設から採取された 518 検体の試料について 平板培養法と LC EMA-qPCR 法の比較を行った 平板培養法では140/518 検体 27.0% から10 CFU/100 ml 以上のレジオネラ属菌が検出され た 一方 LC EMA-qPCR 法では カットオフ値を1 CFU/100 ml 相当とした場合 207/518 検体 40.0% の検体からレジオネ ラ属菌の遺伝子が検出された LC EMA-qPCR 法の平板培養法に 対 する 感 度 は % 12 5 /14 0 検 体 特 異 度 は % 296/378 検体 であり 高い相関を示した LC EMA-qPCR 法のカットオフ値 1 CFU/100 ml 相当 平板培養法 LC EMA qpcr 法 計 計 感度 89.3 特異度 78.3 平板培養法と LC EMA-qPCR 法との比較 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L4 CY240S CY240 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -28-

30 水質検査 EMA-qPCR レジオネラ属菌 生菌検出法 EMA-qPCR 法 採水当日に 迅速な生菌検出が可能 EMA-qPCR 法は 液体培養を行わず ろ過濃縮検体をそのまま EMA 処理し リアルタイム PCR により検出します LC EMA-qPCR 法に比べ 18 時間の液体培養が必要ないためより迅速であることがメリットです 採水当日に判定可能 30分 濃縮 EMA 処理 30分 DNA 抽出 50分 リアルタイム PCR < 検出結果の判断基準について EMA-qPCR 法 > Viable Legionella Selection Kit for PCR Ver の取扱説明書において 厚生労働科学研究費補助金 健 康安全 危機管理対策総合研究事業 公衆浴場等施設の衛生管理におけるレジオネラ症対策に関する研究 平成 年度分担研 究報告書 からの引用を参考情報としてご紹介しています EMA処理 EMA 試薬キット Viable Legionella Selection Kit for PCR Ver.2.0 EMA-qPCR 法に至適化された専用の EMA 試薬です 光照射装置 LED Crosslinker 12 容 量 価格 税別 ,000 容 量 価格 税別 EM200 一式 107,800 容 量 価格 税別 DNA抽出 簡易抽出法 9181 Lysis Buffer for Legionella or カラム精製法 NucleoSpin Tissue XS 容 量 11,000 価格 税別 回 7, , , 簡易抽出法 カラム精製法から選択可能 簡易抽出法は 操作が簡便で抽出効率も高いことから 塩素消毒が施された循環式浴槽水など汚染の少ない検体に適して おり 泉質による PCR 反応阻害が予想される検体にはカラム精製法が適しています リアルタイム PCR レジオネラ属菌検出キット CycleavePCR Legionella 16S rrna Detection Kit FAM ROX レジオネラ属菌 16S rrna 遺伝子 -29- インターナル コントロール IC 遺伝子 ǀ 遺伝子検査キットカタログ 容 量 価格 税別 CY240S 25回 31,000 CY240 57,000 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L4 CY240S CY240

31 水質検査 リアルタイム PCR レジオネラ属菌生菌死菌検出法 (qpcr 法 ) CycleavePCR Legionella (16S rrna)detection Kit 採水当日に 死菌も含めたリスク評価が可能 レジオネラ属菌の 16S rrna 遺伝子をターゲットとして レジオネラ属の広範囲な菌種をリアルタイム PCR により検出します 生菌死菌検出法では 死菌の存在も潜在的なリスクとして評価できます 30 分 CY240S 25 回 31,000 CY240 57, 分 ~ 濃縮 DNA 抽出リアルタイム PCR < 検出結果の判断基準について (qpcr 法 )> CycleavePCR Legionella (16S rrna) Detection Kit( CY240) の取扱説明書において 厚生労働科学研究費補助金 ( 健康安全 危機管理対策総合研究事業 ) 公衆浴場等におけるレジオネラ属菌対策を含めた総合的衛生管理手法に関する研究 ( 平成 24 年度分担研究報告書 ) からの引用を参考情報としてご紹介しています 広範囲なレジオネラ属菌の検出をカバー L. londiniensisを含む 48 菌種 74 株でターゲット遺伝子の増幅を確認しています 検出可能な菌種リストは 取扱説明書を参照してください DNA 抽出は 簡易抽出 or カラム精製法から選択可能 簡易抽出法 (Lysis Buffer for L e g i o n e l l a ) は 塩素消毒が施された循環式浴槽の検体など汚染の少ない検体に適し 一方 泉質による PCR 反応阻害が予想される検体にはカラム精製法 ( NucleoSpin Tissue XS) が適しています < キットの内容 > 2 Cycleave Reaction Mixture 16S Primer/Probe Mix Solution E 16S Positive Control EASY Dilution (for Real Time PCR) 定性検査 定量検査どちらにも使用可能 インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 レジオネラ属菌の遺伝子検査法について レジオネラ属菌の遺伝子検査法には 菌の生死に関わらず遺伝子を検出する方法 ( 生菌死菌検出法 ) と 生菌由来の遺伝子のみを検出する方法 ( 生菌検出法 ) の 2 種類があります 平成 29 年 8 月に改訂発行された 第 4 版レジオネラ症防止指針 ( 公益財団法人日本建築衛生管理教育センター ) には 従来の qpcr 法に加えて 迅速検査法のひとつとして 生菌のみを検出する遺伝子検査法 が収載され LC EMA-qPCR 法や EMA-qPCR 法が紹介されています 各手法には 下表のような特長があります 第 4 版レジオネラ症防止指針 ( 平成 29 年 8 月 公益財団法人日本建築衛生管理教育センター ) P 生菌のみを検出する遺伝子検査法より引用 (1) EMA-qPCR 法本法は リアルタイム PCR の前に EMA(ethidium monoazide) 処理を行うことで 死菌由来 DNA の増幅を抑制し 生菌由来の DNA を選択的に増幅させる方法である 専用の EMA 処理試薬キットが市販されているので リアルタイム PCR 試薬キットと組み合わせて使用する EMA 処理により 培養法不検出でリアルタイム PCR 陽性となる結果の不一致を減ずることができる 検体が浴槽水の場合は有効だが 冷却水の場合は EMA 処理の効果が見られず本法は適していない (2) LC EMA-qPCR 法本法は 濃縮検体を液体培地 (Liquid Culture:LC) に添加して 18 時間培養を行った後に 上記と同様の EMA 処理を行う方法である 上記の方法に比べ 迅速性に劣るものの EMA 処理がより効果的に働く 浴槽水を対象とした場合 培養法と高い相関性を示す 分類手法概要結果判定検査法の特長 生菌検出法 LC EMA-qPCR EMA-qPCR 液体培養 (18 時間 ) 後に EMA 処理および qpcr 検出を行う 液体培養を行わず ろ過濃縮検体をそのまま EMA 処理し qpcr 検出を行う 検査開始 2 日目 検査開始 1 日目 液体培養と EMA 処理の組合せにより 確実かつ高感度に生菌選択的な検出ができる LC EMA-qPCR 法に比べ 18 時間の液体培養が必要ないためより迅速であることがメリット ( 採水当日に判定可能 ) 生菌死菌検出法 qpcr 菌の生死にかかわらず遺伝子を検出する 検査開始 1 日目 死菌の存在も潜在的な汚染リスクとして評価できる 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください :L4 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -30-

32 水質検査 リアルタイム PCR クリプトスポリジウム属 ジアルジアの遺伝子検査 Cycleave RT-PCR Cryptosporidium 18S rrna Detection Kit Cycleave RT-PCR Giardia 18S rrna Detection Kit 容 量 価格 税別 CY230 69,000 容 量 価格 税別 CY231 69,000 厚生労働省からの通知法に収載 厚生労働省健康局水道課長通知 水道に関するクリプトスポリジウム等の検出のための検査方法の見直し等について 健水発 0302 第 2 4 号 平成 24 年 3 月 2 日発付 において 遺伝子検出法 のひとつとして リアルタイム PCR 法 が収載されました 試料水中の1個のオーシスト等を検出する感度が求められることから 基本的に逆転写 PCR RT-PCR 法が推奨されています オールインワンキット 磁気ビーズ法で精製したオーシスト シストがあれば すぐに検査ができます リアルタイム PCR 試薬に加え 核酸抽出試 薬 逆転写試薬も含まれています インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 一本のチューブでインターナルコントロールを同時検出するので 常に偽陰性のモニターが可能です 定性検査 定量検査どちらにも使用可能 キット添付のポジティブコントロール DNA を段階希釈して検量線を作成することにより 定量解析が可能です 厚生労働省からの通知法の付録には 遺伝子検査法におけるオーシスト等の定量 が収載されています キットの内容 CY230 の場合 実験例 ポジティブコントロール DNAを用いた検量線 逆転写試薬 1. 5 PrimeScript RT Master Mix リアルタイム PCR 試薬 2. 2 Cycleave Reaction Mixture 3. Crypto. Primer/Probe Mix FAM, ROX 4. RNase Free dh 2O R Eff 核酸抽出試薬 5. Lysis Buffer 6. Proteinase K 7. dh 2O for Dilution 定量用 Positive Control 8. Crypto. Positive Control copies/µl 9. EASY Dilution for Real Time PCR キット CY230 に含まれる Crypto. Positive Control copies/µl) の10 倍希釈系列を用いて検量線を作成した 蛍光抗体染色 フィルター吸引濾過法など 環境水 10 L 10 ml に 濃縮 オーシスト シスト 分離 精製 免疫磁気ビーズ法 等 -31- 顕微鏡観察 ǀ 遺伝子検査キットカタログ 核酸抽出 リアルタイム RT-PCR 解析 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L4

33 Memo ǀ 遺伝子検査キットカタログ -32-

34 ヒト 動物感染症検査 検出ターゲット ヒト感染症 呼吸器系感染症起因菌 呼吸器系感染症起因ウイルス B 群溶血性連鎖球菌 (GBS) サイトメガロウイルス (CMV) EBウイルス (EBV) Human Papillomavirus(HPV) ヒトゲノムタイピング ALDH2 FLT3/ITD 動物感染症 ウシ白血病ウイルス サルモネラ血清型 検査フローのイメージ 検体 コロニー or 前培養液 アルカリ熱抽出 or RNA/DNA 精製 リアルタイム PCR 解析 PCR+ 電気泳動 -33- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

35 ヒト感染症検査 リアルタイム PCR 呼吸器系感染症起因菌 起因ウイルスの迅速検出に CycleavePCR 呼吸器系感染症起因菌検出キット Ver.2 CycleavePCR 呼吸器系感染症起因ウイルス検出キット Ver.3 CY 反応 96,000 CY 反応 108,000 呼吸器系感染症は 様々な病原菌やウイルスによって引き起こされます 呼吸器系感染症に対して適切な治療を行うためには 原因となる病原菌 ウイルスを特定する必要がありますが ウイルスに関しては臨床症状だけで同定することは困難です また 同定のためのウイルス分離や血清学的検査は時間がかかるため 早急な対応には対処できません 本キットは 慶応義塾大学医学部感染症学教室生方公子先生監修の元 リアルタイム PCR 装置を用いて迅速に呼吸器感染症の起因菌 起因ウイルスを検出するためのキットとして開発されました 呼吸器系感染症の起因菌 6 種 / 起因ウイルス 11 種を検出 呼吸器系感染症の原因となる細菌あるいはウイルスを網羅的に検出します 感度 特異性に優れたサイクリングプローブ法を採用 検出対象微生物 ( CY214) ターゲット起因菌 ターゲット遺伝子 プローブ蛍光色素 肺炎球菌 : Streptococcus pneumoniae LytA 遺伝子 FAM インフルエンザ菌 : Haemophilus influenzae マイコプラズマ : Mycoplasma pneumoniae クラミジア : Chlamydophila pneumoniae レジオネラ菌 : Legionella pneumophila A 群溶血性レンサ球菌 : Streptococcus pyogenes 起因ウイルス 16S rrna 遺伝子 16S rrna 遺伝子 16S rrna 遺伝子 mip および 16S rrna 遺伝子 16S rrnaおよび SLO 遺伝子 検出対象ウイルス ( CY216) RS ウイルス A 型 : Human respiratory syncytial virus subtype A RSウイルス B 型 : Human respiratory syncytial virus subtype B パラインフルエンザウイルス 1 Human parainfluenza virus 1 パラインフルエンザウイルス 2 Human parainfluenza virus 2 メタニューモウイルス Human metapneumovirus パラインフルエンザウイルス 3 Human parainfluenza virus 3 インフルエンザウイルス A Influenza A virus インフルエンザウイルス B Influenza B virus アデノウイルス Human adenovirus ボカウイルス Human bocavirus ライノウイルス Human rhinovirus ウイルスの種類 RNA ウイルス RNA ウイルス RNA ウイルス RNA ウイルス RNA ウイルス RNA ウイルス RNA ウイルス RNA ウイルス DNA ウイルス DNA ウイルス RNA ウイルス FAM FAM FAM FAM および ROX FAM および ROX プローブ蛍光色素 FAM ROX FAM ROX FAM ROX FAM ROX FAM ROX FAM < キットの内容 ( CY214)> リアルタイム PCR 試薬 1.2 CycleavePCR Reaction Mixture(60 反応分 ) 2.Probe/Primer Mix-1 (10 反応分 ) 3.Probe/Primer Mix-2 (10 反応分 ) 4.Probe/Primer Mix-3 (10 反応分 ) 5.Probe/Primer Mix-4 (10 反応分 ) 6.Probe/Primer Mix-5 (10 反応分 ) 7.Probe/Primer Mix-6 (10 反応分 ) 8.dH2O Positive Control DNA 9.Positive Control 1-FAM 10.Positive Control 2-FAM 11.Positive Control 3-FAM 12.Positive Control 4-FAM 13.Positive Control 5-FAM 14.Positive Control 5-ROX 15.Positive Control 6-FAM 16.Positive Control 6-ROX < キットの内容 ( CY216)> リアルタイム PCR 試薬 1.2 RT Buffer Mix (10 反応分 ) 2.PrimeScript RT Enzyme Mix I (10 反応分 ) 3.2 CycleavePCR Reaction Mix (60 反応分 ) 4.Probe/Primer Mix-1 (10 反応分 ) 5.Probe/Primer Mix-2 (10 反応分 ) 6.Probe/Primer Mix-3 (10 反応分 ) 7.Probe/Primer Mix-4 (10 反応分 ) 8.Probe/Primer Mix-5 (10 反応分 ) 9.Probe/Primer Mix-6 (10 反応分 ) 10.RNase-free dh2o Positive Control DNA 11.Positive Control 1-FAM 12.Positive Control 1-ROX 13.Positive Control 2-FAM 14.Positive Control 2-ROX 15.Positive Control 3-FAM 16.Positive Control 3-ROX 17.Positive Control 4-FAM 18.Positive Control 4-ROX 19.Positive Control 5-FAM 20.Positive Control 5-ROX 21.Positive Control 6-FAM 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください :L4 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -34-

36 ヒト感 染 症 検 査 リアルタイム PCR B 群溶血性レンサ球菌 GBS を特異的に検出 CycleavePCR Streptococcus agalactiae GBS Detection Kit B 群溶血性レンサ球菌 Streptococcus agalactiae GBS は出生直後の新生児の敗 血症や生後 3 か月までに見られる髄膜炎 高齢者の侵襲性感染症等の主な原因菌です 本製品は GBS を網羅的 特異的かつ迅速にリアルタイム PCR で検出します ROX dlts 遺伝子 サンプル調製 スワブ 混釈 価格 税別 69,000 リアルタイム PCR 試薬 1. 2 CycleavePCR Reaction Mixture 2. dlts Primer/Probe Mix FAM, ROX 3. dh 2O インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 FAM 容 量 CY233 キットの内容 GBS を網羅的かつ特異的に検出 GBS 由来のヒスチジンキナーゼをコードする dlts 遺伝子をターゲットとし て GBS を遺伝子レベルで迅速に検出します Positive Control DNA 4. dlts Positive Control インターナルコントロール DNA 抽出 Mutanolysin EXTRAGEN II リアルタイム PCR 解析 莢膜型 Ia 型 Ib 型 III 型をタイピング CycleavePCR GBS Capsular Typing Kit CycleavePCR Streptococcus agalactiae (GBS) Detection Kit CY233 を用いた検出で GBS が陽性であったサンプルについて 莢膜型をコードする cps Ia cps Ib) cps III 遺伝子を検出します 莢膜型 Ia 型 Ib 型 III 型は 新生児の 重篤な髄膜炎や敗血症に関与することが報告されています GBS 検出 陽性なら 容 量 価格 税別 CY234 69,000 莢膜型 Ia 型 Ib 型 III 型タイピング キットの内容 2 反応で莢膜型 Ia 型 Ib 型 III 型をタイピング FAM FAM cps (III) 遺伝子 cps (Ia) 遺伝子 ROX リアルタイム PCR 試薬 1. 2 CycleavePCR Reaction Mixture 2. cps Ia cps Ib Primer/ Probe Mix FAM, ROX 3. cps III Primer/Probe Mix FAM 4. dh 2O Positive Control DNA 5. cps Ia Positive Control 6. cps Ib Positive Control 7. cps III Positive Control cps (Ib) 遺伝子 本シリーズは 慶應義塾大学医学部感染症学教室 生方公子先生監修の元 リアルタイム PCR キットとして開発されました -35- ǀ 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L4

37 ヒト感 染 症 検 査 リアルタイム PCR サイトメガロウイルスの検出 定量に CycleavePCR Cytomegalovirus CMV Detection Kit 本製品は 免疫不全 免疫抑制状態で発生する日和見感染の原因としてよく知られているサイトメガロウイ ルス CMV の DNA を 前初期 IE 遺伝子を標的としたリアルタイム PCR 法で迅速に検出するキットです 本キットは 名古屋大学大学院医学系研究科ウイルス学 木村宏先生のご協力の元 検証いただきました カスタム製造品です 詳しくは弊社へ お問合せください キットの内容 国際標準物質を用いた試薬によるキャリブレーション済 CMV の国際標準物質によるキャリブレーションの結果 試薬の測定値を 4.0 倍することで 国際単位 IU に換算されることが確認されました インターナルコントロールで偽陰性をモニター可能 FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能 リアルタイム PCR 試薬 1. 2 Cycleave Reaction Mixture 2. CMV Primer/Probe Mix FAM, ROX 3. dh 2O Positive Control DNA 4. CMV Positive Control 5. EASY Dilution for Real Time PCR 反応例 CMV 検出 ROX FAM CMV 遺伝子 インターナルコントロール 検量線 EBウイルスの検出 定量に CycleavePCR Epstein-Barr virus EBV Detection Kit 本製品は 免疫不全 免疫抑制状態で発生する日和見感染の原因としてよく知られている EB ウイルス EBV の DNA を ウイルス DNA ポリメラーゼをコードする BALF5 遺伝子を標的としたリアルタイム PCR 法により迅速に検出するキットです 本キットは 名古屋大学大学院医学系研究科ウイルス学 木村宏先生のご協力の元 検証いただきました カスタム製造品です 詳しくは弊社へ お問合せください キットの内容 国際標準物質を用いた試薬によりキャリブレーション済 EBV の国際標準物質によるキャリブレーションの結果 試薬の測定値を 2.8 倍することで 国際単位 IU に換算されることが確認されました インターナルコントロールで偽陰性をモニター可能 FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能 リアルタイム PCR 試薬 1. 2 Cycleave Reaction Mixture 2. EBV Primer/Probe Mix FAM, ROX 3. dh 2O Positive Control DNA 4. EBV Positive Control 5. EASY Dilution for Real Time PCR 反応例 EBV 検出 ROX FAM EBV 遺伝子 インターナルコントロール 検量線 検査フロー サンプル調製 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L4 DNA 抽出 リアルタイム PCR 解析 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -36-

38 ヒト感染症検査 PCR ヒトパピローマウイルスの悪性型 (16, 18, 33 型 ) の検出に TaKaRa PCR Human Papillomavirus Detection Set ,000 Human Papillomavirus (HPV)16 型 18 型 3 3 型を特異的に検出 子宮頸癌において最も高頻度に検出される型を検出します PCR とドットハイブリダイゼーションによる検出 HPV16 18 および33 型の E6を含む領域を増幅するためのプライマーと 増幅後ハイブリダイゼーションを行うための特異的プローブが含まれています 検体ゲノム DNA 調製 PCR ドットハイブリダイゼーション < セットの内容 > 1. HPVpF( 共通 forward primer) 2. HPVp16R (HPV16 reverse primer) 3. HPVp18R (HPV18 reverse primer) 4. HPVp33R (HPV33 reverse primer) 5. HPVb16 (HPV16 probe) 6. HPVb18 (HPV18 probe) 7. HPVb33 (HPV33 probe) 8. Control Template HPVT16(HPV16) 9. Control Template HPVT18(HPV18) 10. Control Template HPVT33(HPV33) HPVpF HPVp16R, HPVp18R, HPVp33R -HPVb16, HPVb18, HPVb µl 反応 分 50 µl 反応の場合は 100 回分 ヒトパピローマウイルスの悪性型 7 種 良性型 2 種の判別に TaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set 回 57,000 悪性型 HPV b 58 型と良性型 HPV6 11 型の E6 E7 領域を増幅 増幅産物の制限酵素切断パターンにより判別 良性型と悪性型をそれぞれ PCR 増幅し 増幅産物の制限酵素処理と電気泳動により判別します 検体ゲノム DNA 調製 PCR 制限酵素消化電気泳動 < セットの内容 > 1. HPVpU-1M ( 悪性型 forward primer) 2. HPVpU-31B ( 良性型 forward primer) 3. HPVpU-2R ( 共通 reverse primer) 4. Control Template HPV-TM( 悪性型 ) 5. Control Template HPV-TB( 良性型 ) HPV タイピングに HPV タイピング用制限酵素セットをご用意しています セットの内容 : Acc I Enzyme Set A ,000 Afa I BmeT110 I (Ava I) VpaK11B I (Ava II) Bgl II -37- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

39 ヒトゲノムタイピング リアルタイム PCR PCR ALDH2 遺伝子の一塩基多型の検出に Cycleave Human ALDH2 Typing Probe/Primer Set Ver.2 Aldehyde dehydrogenase-2 ALDH2 遺伝子の 一塩基多型を識別 ALDH2 type 1 wild type ALDH2 type 2 mutant type を マルチプレックス検出します FAM / ROX 容 量 価格 税別 CY403 57,000 セットの内容 サイクリングプローブ法による特異性の高い検出 2 完全プレミックスタイプの試薬 CycleavePCR Reaction Mix CY505A と組み合わせて使用します Cycleave ALDH2 PCR Primer Mix Cycleave ALDH2 PCR Probe Mix ALDH2 Positive Control allele 1 ALDH2 Positive Control allele 2 ALDH2 はアルコールの中間代謝物質であるアセトアルデヒドを分解する酵素であり その exon12 には 487Glu GAA Lys AAA の一塩基多型 ALDH2 type 1 (wild type) ALDH2 type 2 (mutant type) が存在することが知られています Mutant Type の解析例 Thermal Cycler Dice Real Time System II 食品環境検査用ソフトウェアの解析画面 Allele 1 (wild type) アレル1 Positive Control のアレル1 の塩基 アレル 2 Positive Control のアレル 2 の塩基 ヘテロ アレル1 およびアレル 2 の両方を持つ ヘテロタイプ OK コントロール反応が正常 反応系が正し く進んでいる Allele 2 (mutant type) FLT3 遺伝子の ITD 変異解析に TaKaRa PCR FLT3/ITD Mutation Detection Set FLT3 遺伝子の ITD 変異を検出 FLT3 FMS-like tyrosine kinase 3 遺伝子の JM Juxtamembrane 領域 周辺に起こる Internal Tandem Duplication ITD 変異の有無を検出します 分子標的薬の研究開発に有用 急性骨髄性白血病 AML において この変異を有する症例は予後不良である ことが報告され FLT3 のキナーゼ活性を特異的に阻害する分子標的薬の開発 が進められています 容 量 価格 税別 ,000 セットの内容 FLT3/ITD-1 Primer FLT3/ITD-2 Primer Control Template Mutant Control Template Normal ゲノム DNA 中の 5 10% の ITD 変異を検出可能 骨髄液 血液 DNA 調製 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L4 CY403 PCR アガロースゲル 電気泳動 Agilent2100 バイオアナライザ ǀ 遺伝子検査キットカタログ -38-

40 動物感染症検査 リアルタイム PCR PCR リアルタイム PCR によるウシ白血病ウイルスの定量にウシ白血病ウイルス検出用 Probe/Primer/Positive control ウシ白血病ウイルスの tax 遺伝子をターゲットとして プロウイルスとして組み込まれたウシ白血病ウイルス ( B L V ) をリアルタイム P C R 装置を用いて検出するために必要な Probe Primer Positive Control です 本製品は国立研究開発法人農業 食品産業技術総合研究機構動物衛生研究所との共同研究及び 国立大学法人岩手大学村上賢二教授のご協力のもとにタカラバイオが製品化しました 特異性の高い検出が可能サイクリングプローブを採用しています 定量が可能製品添付の Positive Control を用いて検量線を作成することができます プレミックス試薬なので操作が簡便初心者でも安心してご利用いただけます 容量価格 ( 税別 ) CY415 31,000 < キットの内容 > 1. Probe/Primer Mix for BLV 2. Positive Control ( copies/µl) 3. EASY Dilution (for Real Time PCR) リアルタイム PCR を行うためには 反応に必要な酵素と最適化されたバッファーが含まれたプレミックスタイプの試薬 (CycleavePCR Reaction Mix SP: CY510) が使用できます 実験例 : 製品添付の Positive Control DNA による検出 増幅曲線 検量線 キットに含まれる Positive Control の段階希釈液を用いて検量線を作成し 検体サンプル中の tax 遺伝子コピー数を算出することができます 7 種類のサルモネラ血清型を迅速にタイピングサルモネラ血清型 PCR 同定キットシリーズ サルモネラの血清型をスクリーニングするための PCR キットです 全 7 種類のキット 組み合わせは自由自在 全キットとも反応条件は同一です マルチプレックス PCR で特異性の高い検出 4つの遺伝子 ( サルモネラの侵入性因子関連遺伝子 inva 各血清型が特異的に保有する 3 遺伝子 ) をターゲットとした検出を行います 操作は極めて簡単 反応終了後はそのまま電気泳動へ 2 PCR Mix は 電気泳動マーカーも含むプレミックス試薬です < キットの内容 > 1. 2 PCR Mix(Red) 2. Primer Mix 3. dh2o 4. Positive Control DNA 製品化には 国立研究開発法人農業 食品産業技術総合研究機構動物衛生研究所のご協力をいただきました サルモネラ血清型 PCR 同定キットシリーズ 製品名容量価格 ( 税別 ) Salmonella serovar Typhimurium Identification Kit Salmonella serovar Choleraesuis Identification Kit Salmonella serovar Enteritidis Identification Kit Salmonella serovar Dublin Identification Kit Salmonella serovar Gallinarum Identification Kit Salmonella serovar Infantis Identification Kit Salmonella serovar Hadar Identification Kit R230A R231A R232A R233A R234A R235A R236A 52,000 52,000 52,000 52,000 52,000 52,000 52, ǀ 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください : L 5 5 a( R A ) L 5 5 b( R A ) L 5 5 c( R A ) L 5 5 d( R A ) L55e(R234A) L55f(R235A) L55g(R236A)

41 細胞検査 検出ターゲット再生医療 細胞医療製品の品質試験 HIV, HTLV, HCV, HBV, ParvoB19 EBV, CMV, WNV マイコプラズマ ( 第十七改正日本薬局方マイコプラズマ否定試験準拠 ) マイコプラズマ ( 簡便検出 ) 検査フローのイメージ 細胞培養上清 または細胞懸濁液 一部を採取 細胞懸濁液 培養上清など DNA/RNA 精製 リアルタイム PCR 解析 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -40-

42 細胞検査 リアルタイム PCR 細胞 血液サンプルからのヒトウイルス試験に Virus Test Kit (HIV, HTLV, HCV, HBV, ParvoB19)Ver.2 Virus Test Kit (EBV, CMV, WNV)Ver.2 再生医療等製品 特定細胞加工物に対して 必要に応じてウイルス混入を検査することが厚生労働省の指針で示されています 本製品は 蛍光標識プローブを用いた 1 ステップリアルタイム RT-PCR により ウイルス DNA RNA を簡便 迅速に検出します RR273A 25テスト 250,000 RR274A 25テスト 146,000 本製品は 東京医科歯科大学再生医療研究センターの清水則夫先生が再生医療実現拠点ネットワークプログラムの公的支援の下で得た研究成果に基づくものであり 清水先生とタカラバイオ ( 株 ) との共同研究によって開発されました 厚生労働省の指針 ( ) 収載の 9 種類のウイルスを検出 ヒト ( 同種 ) 体性幹細胞加工医薬品等の品質及び安全性の確保について ( 平成 24 年 9 月 7 日付け薬食発 0907 第 3 号別添 ) 検出ターゲット ヒト免疫不全ウイルス (HIV1 HIV2) B 型肝炎ウイルス (HBV) サイトメガロウイルス (CMV) 成人 T 細胞白血病ウイルス (HTLV) C 型肝炎ウイルス (HCV) パルボウイルス B19 型 (ParvoB19) エプスタイン バー ウイルス (EBV) ウエストナイルウイルス (WNV) 各種リアルタイム PCR 装置で反応確認済み Thermal Cycler Dice Real Time System III/Lite/II ( TP950/TP700/TP900) など Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific 社 ) StepOnePlus Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific 社 ) LightCycler 96/LightCycler 480 システム (Roche Diagnostics 社 ) 品質検定済みの専用キット プライマー プローブ 酵素 ポジティブコントロールのセットで 品質検定済みのため すぐに検査にご利用いただけます Virus Test Kit (HIV, HTLV, HCV, HBV, ParvoB19) Ver.2 の内容 200 反応 ( 各 Primer/Probe Mix 25 反応 8 種 ) リアルタイム PCR 試薬 4 One Step RT-PCR Buffer-5 Enzyme Mix-6 ROX Reference Dye ROX Reference Dye II H2O HIV1 pol Primer/Probe Mix-2 HIV1 LTR Primer/Probe Mix HIV2 Primer/Probe Mix HBV Primer/Probe Mix HCV Primer/Probe Mix HTLV Primer/Probe Mix pb19 Primer/Probe Mix-2 HPRT1 Primer/Probe Mix Positive Control Positive Control Mix (7)-2 厚生労働省の指針に基づいたウイルス試験を行う場合は Virus Test Kit(HIV, HTLV, HCV, HBV, ParvoB19)Ver.2( RR273A) と Virus Test Kit(EBV, CMV, WNV)Ver.2( RR274A) をセットでお使いください なお Virus Test Kit(EBV, CMV, WNV)Ver.2( RR274A) には HPRT1 Primer/Probe Mix を添付しておりません 内在性遺伝子の検出で核酸抽出操作の確認が可能 多くの細胞に共通して発現する遺伝子である HPRT1(hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1) を内在性コントロールとして別途検出することにより 核酸抽出操作の確認ができます 核酸抽出から検出まで タカラバイオはトータルでサポート! 下記の製品でバリデーション試験を実施済み NucleoSpin RNA ( ) 詳細は 57 ページをご覧ください Virus Test Kit Thermal Cycler Dice Real Time System III with PC ( TP970) 細胞懸濁液 核酸抽出 Proteinase K 処理 ( 約 20 分 ~) 1 ステップ RT-qPCR 解析 ( 約 60 分 ) -41- ǀ 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください :L73

43 細胞検査 リアルタイム PCR 再生医療等製品のマイコプラズマ否定試験に TaKaRa Mycoplasma qpcr Detection Kit 第十七改正日本薬局方マイコプラズマ否定試験準拠 本製品は 第十七改正日本薬局方参考情報の バイオテクノロジー応用医薬品 / 生物起源由来医薬品の製造に用いる細胞基材に対するマイコプラズマ否定試験 C. 核酸増幅法 (Nucleic acid amplification test:nat) に示されているバリデーション ( 以下 日局方バリデーション試験 ) を実施した上で C. 核酸増幅法 (NAT) として利用することが可能です 本製品は 東京医科歯科大学再生医療研究センターの清水則夫先生が国立研究開発法人科学技術振興機構 (JST) および国立研究開発法人日本医療研究開発機構 (AMED) 再生医療実現拠点ネットワークプログラムの公的支援の下で得た研究成果に基づくものであり 清水先生とタカラバイオ ( 株 ) との共同研究によって開発されました RR277A 9 6テスト * 384,000 * マイコプラズマ検出用 192 反応 Spike-in Control DNA 検出用 96 反応 < キットの内容 > リアルタイム PCR 試薬 Probe qpcr Mix Primer/Probe Mix (Myco) Primer/Probe Mix (Spike-in) H2O Positive Control / Spike-in Control Positive Control (Myco) PC Dilution Buffer Spike-in Control DNA 第十七改正日本薬局方バリデーション試験で検出感度 特異性 頑健性を確認済み 右記の7 菌種の Mycoplasma 標準品すべてにおいて 95% 陽性カットオフ値が10 cfu/ml 以下 (M. pneumoniae については1 ccu/ml 以下 ) であり 日本薬局方記載の A 法 ( 培養法 ) の代替法とする場合の検出感度を満たしていることを確認しています マイコプラズマ 7 菌種 M.arginini M. fermentans M. hyorhinis M. pneumoniae M. olare M. salivarium Acholeplasma laidlawii 核酸抽出から検出まで タカラバイオはトータルでサポート! 下記の製品でバリデーション試験を実施済み NucleoSpin Virus ( ) 詳細は 56 ページをご覧ください TaKaRa Mycoplasma qpcr Detection Kit Thermal Cycler Dice Real Time System III with PC ( TP970) バリデーション試験の詳細は 弊社ウェブサイトよりダウンロードしてご覧いただけます バイオ産業支援 TOP ウェブカタログ 検査分野 ( 臨床研究 食品環境 ) 培地 細胞検査 TaKaRa Mycoplasma qpcr Detection Kit Spike-in Control DNA でサンプルからの DNA 抽出操作の確認が可能 細胞溶液にキット付属の Spike-in Control DNA を添加したのち 抽出試薬で DNA を抽出して Primer/Probe Mix (Spike-in) で反応させることで 抽出操作が適切に行われたかを確認することができます 各種リアルタイム PCR 装置にて反応確認済み Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific 社 ) CFX96 Touch TM Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad 社 ) LightCycler 96/LightCycler 480 システム (Roche Diagnostics 社 ) など各社装置で反応確認済みです 細胞懸濁液 Spike-in Control 添加 核酸抽出 Proteinase K 処理 リアルタイム PCR 解析 ( 約 70 分 ) 約 40 分 ~ 参考情報 各手法における判定にかかる日数 A 培養法 28 日間 B DNA 染色法 C NAT(qPCR 法 ) 4~7 日間 1 日 (days) qpcr 法で 1 日で結果判定可能に 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください :L73 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -42-

44 細胞検査 リアルタイム PCR PCR リアルタイム PCR で網羅的 特異的にマイコプラズマ汚染を検出 CycleavePCR Mycoplasma Detection Kit リアルタイム PCR で簡便 迅速に汚染の有無をチェック CY232 57,000 最適化した特異的なプライマー プローブを採用 常在菌の誤検出を抑制しながら Mycoplasma 属 125 種のうち 113 種 を特異的に検出できるよう プライマーおよびプローブを設計しています 培養細胞によく見られる以下の種の汚染を高感度に検出できることを確認しています Mycoplasma 属の 10 種 (M. arginini, M. hominis, M. hyorhinis, M. orale, M. salivarium, M. fermentans, M. bovis, M. arthritidis, M. pirum, M. pneumoniae) および Acholeplasma 属中の 1 種 (A. laidlawii) 高感度検出 1 fg までの検出が可能 < キットの内容 > リアルタイム PCR 試薬 1. 2 CycleavePCR Reaction Mix 2. Myco. Primer/Probe Mix 3. RNase Free dh2o Positive Control 4. Myco. Positive Control ( copies/µl) サンプル調製用 5. Proteinase K マイコプラズマ M. fermentans のゲノム D N A を用いて希釈系列を作製し 1 ng~1 fg を反応液に添加して検出 (Thermal Cycler Dice Real Time System II 使用 ) 培養細胞上清 細胞懸濁液 サンプル調製 Proteinase K 処理 リアルタイム PCR 解析 ( 約 90 分 ) エンドポイント PCR によるマイコプラズマ汚染チェック TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set マイコプラズマを高感度に検出 16S-23Sリボソーム遺伝子間のスペーサー領域にプライマーが設計されており 2 段 PCR 法 (Nested PCR 法 ) により検出します 5 本セットは 別売の TaKaRa Taq TM ( R001A/B/C) または TaKaRa Ex Taq ( R R A / B / C ) との使用により最高の効率が得られるように設計されています F1 16S first PCR F2 spacer region second PCR 23S R2 R 回 57,000 < キットの内容 > 1. MCGp F1 Primer(20 pmol/µl) 2. MCGp R1 Primer(20 pmol/µl) 3. MCGp F2 Primer(20 pmol/µl) 4. MCGp R2 Primer(20 pmol/µl) 5. Control Template(1 ng/µl) マイコプラズマ汚染の確認の重要性について マイコプラズマは培養細胞や培地などの汚染菌としてよく知られ 汚染率は 15% 以上であることを示す報告もあります マイコプラズマの感染は実験結果に多大な影響を及ぼすため 実験を行う前にその感染の有無を知ることは非常に重要です 最小の原核生物であるマイコプラズマは 通常のフィルターを通り抜け またほとんどの抗生物質に抵抗性があるため 除去することが困難です そのため 細胞の継代ごとにマイコプラズマの検査を行い 早急な処置を行うことをお勧めします -43- ǀ 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください :L4(CY232)

45 微生物推定 / 細菌叢解析 検出ターゲットサンガーシーケンスによる微生物推定解析 群集解析 細菌 (16S rdna) 真菌 (ITS1 D1/D2) 次世代シーケンスによる細菌叢解析 細菌 (16S rdna の V3-V4 領域 ) 検査フローのイメージ ゲノム DNA 抽出 PCR 反応 ~ 精製 シーケンス解析サンガーシーケンス / 次世代シーケンス (NGS) 情報解析 G G G C T C C G A T G T A T A A T A A T T ǀ 遺伝子検査キットカタログ -44-

46 微生物推定解析 PCR 遺伝子解析による微生物推定解析 遺伝子解析による微生物推定解析 は 第十七改正日本薬局方に 遺伝子解析による微生物の迅速同定法 として収載され 製造現場での出荷判定や工程管理などに幅広く利用されています DNA 抽出からPCR 増幅 シーケンス解析 相同性解析まで各種ツールを揃えています コロニー DNA 抽出 PCR 反応 (+ 増幅産物の精製 ) シーケンス解析アセンブル相同性検索 DNA 調製 コロニーから簡易抽出 < 細菌 真菌 > SimplePrep TM reagent for DNA( 9180) MightyPrep reagent for DNA( 9182) 難抽出には DNA 精製キット < 細菌 > NucleoSpin Tissue( /.50/.250) < 真菌 > NucleoSpin Plant II ( /.50/.250) PCR Bacterial 16S rdna PCR Kit Fast (800) Fungal rdna (ITS1)PCR Kit Fast Fungal rdna (D1/D2)PCR Kit Fast RR182A RR183A RR184A 42,000 42,000 42,000 第十七改正日本薬局方収載のプライマー配列を採用細菌 16S rdna 用 真菌 ITS 用のプライマーは 局方収載配列を用い それぞれプレミックス化しています PCR 反応時間はわずか40~50 分! 高速タイプの PCR 酵素を採用し 大幅に反応時間を短縮しました 品質保証されたオールインワンキット PCR に必要なコンポーネントと シーケンス用プライマーを含み 品質を保証していますので すぐに検査にご利用いただけます < キットの内容 ( RR182A)> PCR 試薬 1. TaKaRa Taq HS Fast Detect Premix 2. 16S rdna Primer Mix (800) 3. dh2o 4. Positive Control (E. coli DNA) シーケンス用プライマー 5. Sequencing Primer 10F 6. Sequencing Primer 800R ターゲット 解析領域 製品名 局方収載プライマー 細菌 16S rdna 領域の約 0.8 kb Bacterial 16S rdna PCR Kit Fast (800) 10F / 800R 真菌 rdna 領域内の ITS1 領域 (150~500 bp) Fungal rdna (ITS1)PCR Kit Fast ITS1F / ITS1R rdna 領域内の D1/D2 領域 ( 約 0.6 kb) Fungal rdna (D1/D2)PCR Kit Fast - 細菌 16 S r D N A 全長塩基配列解析には Bacterial 16S rdna PCR Kit RR180A 42,000 本キットには 16S rdna の全長領域 ( 約 1.5 kb) を増幅するための PCR コンポーネントに加え PCR 産物のシーケンス用プライマーも添付されています Sequencing Primer F1 Sequencing Primer F2 約 500 bp 増幅産物 約 550 bp 増幅産物 : 約 1.5 kb 約 400 bp Sequencing Primer R2 Sequencing Primer R1 PCR 産物の精製に NucleoSpin Gel and PCR Clean-up PCR 反応液にバッファーを加え 精製カラムにアプライして洗浄するだけの簡単操作で PCR 反応液から酵素 ヌクレオチド 塩類 その他の不純物を迅速 簡単に除去できます 回 2 5,300 13,000 47,500 NucleoSpin はマッハライ ナーゲル社の製品です -45- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

47 サンプルと依頼書を送付解析シーケンス プレミックスシーケンス解析 受託サービス 受入サンプル ( ) でそのまま塩基配列解析を行います 解析データはウェブサイトからダウンロードでき 迅速 簡単に解析結果をご確認いただけます サービス項目参考価格参考納期 プレミックスシーケンス解析 (8 連チューブ ) 8,000/8 連チューブあたり 2 営業日 ( 弊社午前サンプル着から起算 ) W E B 会員登録プレミックスシーケンス解析 (96 ウェルプレート ) 38,400/96 ウェルプレートあたり 3 営業日 ( 弊社午前サンプル着から起算 ) 受入サンプル : 鋳型 DNA とシーケンスプライマーを混合し 8 連チューブまたは 96 ウェルプレートへ分注したもの アセンブル DNA 配列解析ソフトウェア SEQUENCHER データのダウンロー 本製品の取り扱いは ( 株 ) 日立ハイテクノロジーズです DNA 配列を NCBI BLAST などのデーターベースで検索し 細菌 真菌の種類を類推します ドアセンブルされた 相同性検索 NCBI からは BLAST アルゴリズムを実装したプログラムをダウンロードして利用することができます NCBI BLAST や DDBJ はウェブサイト上で使用できます NCBI : NCBI BLAST: DDBJ: 受託サービス 微生物推定解析 のご紹介 リボソーム RNA 遺伝子塩基配列を決定し 相同性検索による推定を行います サンガー法による高品質塩基配列解析による微生物種の推定 最新のNCBIデータベースや DDBJデータベースを利用した in houseでの相同性検索 サービス項目第十七改正日本薬局方準拠 16S rrna 配列部分解析 ( 細菌 ) 16S rrna 配列全長解析 ( 細菌 ) 第十七改正日本薬局方準拠 ITS1 配列解析 ( 真菌 ) 参考価格 (1 検体あたり ) 参考納期 30,000 2 週間 ~ 85,000 2 週間 ~ 30,000 2 週間 ~ サービス内容 細菌の 16S rrna 遺伝子の約 500 塩基の配列を決定し 相同性検索結果より推定される菌種の上位リスト (50 位 ) を納品 細菌の 16S rrna 遺伝子の約 1,500 塩基の配列を決定し 相同性検索結果より推定される菌種の上位リスト (50 位 ) を納品 真菌の 18S rrna と 5.8S rrna 間のスペーサー領域 (ITS1 約 300 塩基 ) の配列を決定し 相同性検索結果より推定される菌種の上位リスト (50 位 ) を納品 リボソーム RNA 配列解析 ( ご希望の領域 ) 別途ご相談 2 週間 ~ 真菌または細菌の rrna 塩基配列を決定し 相同性検索結果より推定される菌種の上位リストを納品 環境中のバクテリアの群集構造の解析に Bacterial 16S rdna Clone Library Construction Kit 環境中のバクテリアの群集構造を解析する手法の1つである16S rdna Clone Library 法を効率良く行うために開発されたキットです 環境中のバクテリア由来のゲノム DNA から16S rdna の特定領域を PCR で増幅し 高効率にクローニングして クローンライブラリーを構築することが可能です R 回 57,000 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -46-

48 細菌叢解析 PCR 次世代シーケンサー (MiSeq) による腸内 口腔内 環境サンプルの細菌叢解析 16S(V3-V4)Metagenomic Library Construction Kit for NGS 本キットは イルミナ社 MiSeqで16S rrna 細菌叢解析を行うための PCR 増幅キットです 16S rrna 遺伝子のV3-V4 領域を増幅するための 1st PCR 用プライマーとPCR 酵素をセットにしてご提供いたします Nextera XT Index Kit( イルミナ社 ) を組み合わせてご使用いただくことで より簡便に安定した解析データを取得できます < キットの内容 > 容量価格 ( 税別 ) R161A 96,000 R161B 100 回 180, Gflex PCR Buffer(Mg 2 +, dntp plus) 2. Tks Gflex DNA Polymerase 3. 16S V3-V4 Primer Mix 4. H2O ( 注 ) ライブラリー作製には 本キットの他 以下の製品をご用意ください Nextera XT Index Kit ( イルミナ社 ) Agencourt AMPure XP (Beckman Coulter 社 ) Tks Gflex の採用で PCR の増幅バイアスを低減 タカラバイオが持つ独自の酵素デザイン技術を駆使した 増幅成功率が極めて高い PCR 酵素です 増幅領域のGC 含量など内部配列の違いによる影響をほとんど受けないため サンプル中の細菌 DNAの構成比を保ったライブラリーを調製できます これにより増幅時のバイアスの少ない より正確な細菌叢構造のデータ取得が可能になりました 品質検定済みの試薬でより安定した解析データに 腸内 口腔内環境の変化による細菌叢構造の変化を正確に把握するには 常に一定品質のライブラリーを調製して解析することが重要です 本製品は プライマーと P C R 酵素をセットにしているため お客様ご自身での試薬の管理や品質チェックが不要となり Nextera XT Index Kit( イルミナ社 ) を組み合わせてご使用いただくことで より簡便に安定した解析データを取得できます MiSeq での解析に最適な 16S rrna 遺伝子 V3-V4 領域を採用 MiSeq 250 bp ペアエンドでシーケンスすることにより リードにエラーが入りにくくフィルタリングで除かれるリード数を削減することができ より多くのリードを情報解析に利用することができます DNA 抽出 糞便試料用ゲノム DNA 精製カラム NucleoSpin DNA Stool 土壌試料用ゲノム DNA 精製カラム NucleoSpin Soil 精製カラムの詳細は ページをご覧ください 本キット使用工程 ターゲット領域の増幅 1st PCR 本キット添付のプライマー遺伝子のV3-V4 領域を増やす で 16S rrna 2nd PCR 1st PCR 産物精製 ライブラリーの増幅 2nd PCR 産物精製 Nextera XT Index Kit( イルミナ社 ) のプライマーで 1st PCR 精製産物にシーケンスアダプターとインデックス配列をつける PCR 産物の精製には Agencourt AMPure XP (Beckman Coulter 社 Code No. A63880/A63881/A63882) を推奨しています ライブラリー混合 定量 一度に複数サンプルを混合可能に 次世代シーケンス解析 受託サービスも承ります 詳しくはお問合せください -47- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

49 カスタム対応 サービス内容リアルタイムPCR 検出系のカスタム設計 インターカレーター法 (TB Green 検出系 ) TaKaRa qpcr Probe サイクリングプローブ カスタムキット製造 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -48-

50 設計に必要なWEB会員登録確認して発注受託サービス カスタム設計 リアルタイム PCR 検出系のカスタム設計 お客様のご要望に応じたリアルタイム PCR 検出系の設計を幅広くサポートいたします スクリーニングにはインターカレーター法 相同性の高い配列同士を区別する場合やSNPsタイピングには蛍光標識プローブによる検出など お客様のご要望に応じて最適な検出系をご提案いたします インターカレーター法 (TB Green 検出系 ) の設計 合成 インターカレーター法 (TB Green 検出 ) によるリアルタイム PCR に最適なプライマーセットを設計いたします カスタムプライマー設計 1. ご指定の Accession ID に基づいて公共データベースから設計対象配列情報を取得します ( ゲノム DNAでの設計追加料金 : 10,000) 2. 弊社独自のアルゴリズムにより リアルタイム PCR 反応条件に適合したプライマー配列を選択します 3. 設計したプライマーに対し 特異性の確認を行います ( 詳細はウェブカタログをご覧ください ) リアルタイム RT-PCR 用プライマーセット ( カスタム設計 ) プライマー 2 本 (Forward Reverse) 脱塩精製 2 OD 保証濃度調整済みTE 溶液品 (50 pmol / µl) 価格 納期 25,000( 税別 )~ 参考納期 : 約 2 週間 オプションサービス 特異性確認基本サービス以外の生物種について ご指定生物の RefSeq データベースを調査し 特異性確認用 DB を作成した上で特異性確認を行います ( 追加料金 : 10,000/1 生物種 ) 遺伝子間の共通領域に設計複数遺伝子の共通領域にプライマーを設計します ( 追加料金 : 10,000/1 領域 ) TaKaRa qpcr Probe Dual Labeled Probe 検出系の設計 合成 プライマー プローブのカスタム設計を承ります 設計後 プライマー プローブの配列情報を確認した上で注文いただけます F クエンチャーが BHQ の場合は Dual Labeled Probe( シグマアルドリッチ社製品 ) となります 1. デザインセット TaKaRa qpcr Probe 1 本 ( または Dual Labeled Probe 1 本 ) HPLC 精製 1.5 OD 保証 凍結乾燥品 プライマー 2 本 (Forward Reverse) カートリッジ精製 4.0 OD 保証 凍結乾燥品 上記 3 本の配列デザイン込み F 情報( )を連絡設計Q サービス項目 クエンチャー 参考価格 ( 税別 ) 納期 TaKaRa qpcr Probeデザインセット Dual Labeled Probeデザインセット TAMRA BHQ 25,000 43,000 1セット 1セット 約 2 週間 Q 設計内容を2. TaKaRa qpcr Probe 単品 ( または Dual Labeled Probe 単品 ) TaKaRa qpcr Probe 1 本 ( または Dual Labeled Probe 1 本 ) HPLC 精製 1.5 OD 保証 凍結乾燥品 合成のみ ( 配列デザインはしておりません ) サービス項目 クエンチャー 参考価格 ( 税別 ) 納期 TaKaRa qpcr Probe 単品 Dual Labeled Probe 単品 TAMRA BHQ 18,000 37,000 1 本 1 本 2 週間以内 遺伝子の Accession No. や配列情報 遺伝子名 生物種 プローブ 標識の情報があれば発注可能です 注 ) 本システムのご利用にはタカラバイオ WEB 会員への登録が必要です ( 無料 ) ( 参考 ) 修飾組合せ例 5 3 FAM TAMRA TET TAMRA HEX TAMRA FAM BHQ-1 TET BHQ-1 HEX BHQ-1 TAMRA BHQ-2 Cy5 BHQ ǀ 遺伝子検査キットカタログ

51 受託サービス カスタム設計 サイクリングプローブ検出系 : プライマー プローブの設計 合成 技術原理 鋳型 DNA SNP point サイクリングプローブ (A 検出用 ) RNA 増幅産物 A RNase H 完全マッチ 完全マッチなら RNasa H による切断が起こる クエンチャーにより制御されていた蛍光強度が増大 PCR 反応 増幅産物 B ミスマッチ ミスマッチとなり切断されない 蛍光は検出されない タカラバイオ独自のリアルタイム P C R 手法である CycleavePCR 法 は サイクリングプローブ を用いて PCR 産物中の 1 塩基の違いを認識し 検出することができる画期的な技術です CycleavePCR Assay Designer(SNPs) は CycleavePCR 法に適した SNP(1 塩基置換 ) 検出用プライマー プローブを設計 オンライン注文するためのシステムです 1. プライマー サイクリングプローブ (1 プローブ ) プライマー 2 本 (Forward Reverse) HQ-SEQ グレード (HPLC 精製 ) 1 OD 保証 濃度調整済み TE 溶液品 (50 µm) サイクリングプローブ 1 本 HPLC 精製 1 OD 保証 濃度調整済み TE 溶液品 (50 µm; 遮光チューブ ) クエンチャーは Eclipse レポーターは FAM HEX ROX から選択 価格 納期 33,000( 税別 ) 参考納期 : 約 4 週間 2. プライマー サイクリングプローブ (2 プローブ ) プライマー 2 本 (Forward Reverse) HQ-SEQ グレード (HPLC 精製 ) 1 OD 保証 濃度調整済み TE 溶液品 (50 µm) サイクリングプローブ 2 本 HPLC 精製 1 OD 保証 濃度調整済み TE 溶液品 (50 µm; 遮光チューブ ) クエンチャーは Eclipse レポーターは FAM HEX ROX から選択 価格 納期 60,000( 税別 ) 参考納期 : 約 4 週間 目的遺伝子の塩基配列 検出対象塩基を指定すれば 設計候補を最大 3 種類設計し 配列 Tm 値 増幅サイズ等の情報を開示します 注 ) 本システムのご利用にはタカラバイオ WEB 会員への登録が必要です ( 無料 ) 実験例 : CYP2C9 (rs ) の検出 NC Hetero Wild 検出由来シグナル (SNP site A) Mutant 検出由来シグナル (SNP site C) Wild homo Mutant homo ǀ 遺伝子検査キットカタログ -50-

52 カスタムキット製造 品質管理された試薬キットは ルーチン検査などに大変便利です すでに検出系をお持ちのお客様はもちろん これから新しく開発をお考えのお客様にも ご要望にあった検出系をご提案の上で 設計から構築までを完全サポートいたします 検出系構築でお困りの方 検討時間を節約したい方にも最適です ご要望のスペックをお伺いしたうえで 製品仕様をご相談いたします 遺伝子検査キット病原微生物 ウイルス検出遺伝子変異検出 (SNP) c t D N A( 循環血中腫瘍核酸 ) 検出 NGSライブラリー作製など工程管理用検査キット各種検出装置専用キット の構築を検討されている場合 カスタムキット開発 製造 ~ 検査系の構築から製造管理までサポート ~ 検査系の至適化 最適な試薬の提案 選定 マルチプレックス反応 試薬のプレミックス化 凍結乾燥による常温保存各種検出装置への適合 ( 迅速微量反応系など ) キットの在庫 配送管理ほか カスタム検査キット 特定ターゲット検出に必要な試薬類をセットにして カスタム検査キット としてお届けします 検査に必要なコンポーネントが揃っており すぐに検査にご使用いただけます 遺伝子検査キットの例 PCR 酵素 反応バッファー プライマー ( プローブ ) 陽性コントロール DNA 反応確認の試験結果を試験成績書として添付して納品することも可能です 核酸抽出試薬を組み込むことも可能です キット構築サービス 検出系のご提案 変異検出 S N P タイピング 病原菌 ウイルスの検出 / 定量などの PCR/ リアルタイム PCRによる遺伝子検査系 反応系の構築 至適化 目的に応じて最適な性能を備えた試薬を選択します ライセンスフリー品をご提案します 試作品にて検証し至適化を行います キット形態での納品 ご使用状況に適した形態でお届けしますので すぐにご使用いただけます パッケージのカスタマイズも可能です 在庫管理 配送 カスタムキット仕様決定 試作キットで性能検証 保存テスト実施 カスタムキット供給 検査性能の最適化からキット構築 在庫管理まで総合的にご提供いたします キット構築の効率化 コスト削減開発期間の短縮検査試薬の品質 在庫管理の省力化 タカラバイオにお任せください! タカラバイオのサポート体制 < 研究開発 > 酵素特性を熟知した研究員が最適な反応系をご提案 弊社での反応検証も可能 < 製造管理 > 確実な原料調達 安定製造 品質マネジメントシステムに基づくトレーサビリティ 少量製造から大量製造まで -51- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

53 核酸抽出 核酸抽出フローのイメージ 簡易抽出 操作フロー 組織など生体試料 コロニー 試薬を添加してボルテックス 分加熱 2 分間遠心 上清 (DNA 抽出液 ) をそのまま PCR/ リアルタイム PCR へ カラム精製 操作フロー サンプルの溶解動物組織 培養細胞 [ 細菌など ] DNA の結合洗浄 乾燥溶出 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -52-

54 核酸抽出試薬 DNA 簡易抽出 PCR 用鋳型 DNA の調製に MightyPrep reagent for DNA 菌体 血液 加工食品 土壌 組織等から 簡便に PCR の鋳型 DNA を調製できます 容量価格 ( 税別 ) ml 14,500 検体に本試薬を添加し 分の加熱だけで DNAを簡易抽出 添加する試薬は1 種類のみで簡便 わずか15 分で調製完了 約 73/ 回のお手頃価格 ( 標準プロトコール ) 操作フロー 組織など生体試料 コロニー 試薬を添加してボルテックス 分加熱 2 分遠心 上清 ( D N A 抽出液 ) をそのまま PCR/ リアルタイム PCR へ 原理 サンプル量 ( 本試薬 100 µl あたり ) 適用可能な細菌 酵母 熱抽出 血液 2~20 µl マウス尾 1~2 mm 植物 1~10 mm 2 土壌 ~0.5 mg など グラム陰性菌 Salmonella enterica var Enteritidis Escherichia coli グラム陽性菌 Enterococcus faecalis Bacillus subtilis Staphylococcus aureus 酵母 Candida boidinii Candida tropicalis Saccharomyces cerevisiae など 作業時間 ~15 分 実験例 A. 各種微生物からの DNA 抽出 方法 プレート培養した各種微生物 ( 細菌 5 種 真菌 3 種 ) のコロニーから 本製品 (MightyPrep reagent for DNA) を用いて DNA 抽出液を調製し 微生物推定解析用の Bacterial 16S rdna PCR Kit Fast (800)( RR182A) または Fungal rdna (ITS1)PCR Kit Fast ( RR183A) を用いて PCR 増幅を行った 結果 試験に供したすべての微生物で良好に増幅産物が得られました M M M1 : 250 bp DNA Ladder 1 : Salmonella enterica var. Enteritidis 2 : Bacillus subtilis 3 : Enterococcus faecalis 4 : Staphylococcus aureus 5 : Escherichia coli M2 : 100 bp DNA Ladder 6 : Candida boidinii 7 : Candida tropicalis 8 : Saccharomyces cerevisiae B. 牛乳中のサルモネラ菌 DNAの抽出 方法 Salmonella enterica var. Enteritidis の菌体懸濁液を牛乳で希釈した試料より 本製品および A 社試薬を用いて DNA 抽出液を調製し CycleavePCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0 ( CY205) を用いてサルモネラ菌を検出した 結果 MightyPrep reagent for DNA を使用した場合 A 社試薬を用いた場合より Ct 値が低くなり良好な検出ができました Ct 値 MightyPrep reagent for DNA A 社試薬 DNA 抽出試薬 MightyPrep reagent for DNA A 社試薬 原液 /10 希釈液 /100 希釈液 希釈率 ( 弊社比較データ ) 1/1000 希釈液 1/10000 希釈液 ǀ 遺伝子検査キットカタログ

55 核酸抽出試薬 ゲノム DNA 精製 ゲノム DN A 精製に NucleoSpin Tissue 回 6, , ,000 さまざまなサンプルに対応した 16 種類以上のプロトコールを用意 サンプル例 マウス尾など動物組織 培養細胞 バクテリア 酵母 糞便 尿 生検サンプルなど臨床検体 血液痕 毛髪 口腔粘膜 タバコの吸い殻など法医学サンプル FFPE 組織切片 NucleoCard など濾紙血 原理形状サンプル量精製サイズ回収量溶出液量精製時間 シリカメンブレン法ミニスピンカラム ~25 mg 組織 10 2 ~10 7 個培養細胞 200 bp~ 約 50 kb 20~35 µg 60~100 µl ~20 分 ( 溶解後 ) 通知法収載 食品衛生検査指針微生物編 2015 収載 NucleoSpin Tissue は 平成 27 年 3 月 24 日発出の厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課の事務連絡により 通知法に収載されました また 食品衛生検査指針にも収載されています 食品における腸管出血性大腸菌 (EHEC) 遺伝子検査において 増菌培養液からの DNA 抽出には本製品をお勧めいたします 1 サンプルを準備増菌培養液 100 µl 10,000 g 10 分上清を除去 2Proteinase K 処理 56 1 h(~o/n) 3 サンプルを溶解 Buffer B3 を加えて攪拌し 分インキュベート 11,000 g 5 分 4 エタノールを添加上清にエタノールを添加し混合 5 カラムへ吸着 NucleoSpin Tissue Column を Collection Tube にセットし 4 を添加 11,000 g 1 分 6メンブレンを洗浄 Buffer BWで洗浄 11,000 g 1 分 Buffer B5で洗浄 11,000 g 1 分 7 メンブレンを乾燥 11,000 g 1 分 8DNA を溶出 70 に温めた Buffer BE を添加し 室温 1 分インキュベート 溶出 11,000 g 1 分 少量サンプルからの精製に NucleoSpin Tissue XS 回 7, , ,000 生検試料や FACS ソート細胞など微量サンプルから高効率な精製が可能 わずか 5 µl で溶出できるため 高濃縮 DNA の調製が可能 少量の液で溶出できます! ファンネル型のリングを採用することで径の小さいシリカメンブレンを保持 効果的に少量 DNAを結合させ さらに5~30 µlという非常に少量の液で溶出できます そのため 得られた DNA 溶液は高濃度となります ǀ 遺伝子検査キットカタログ -54-

56 核酸抽出試薬 ゲノム DNA 精製 加工食品 飼料などからの精製に NucleoSpin Food 回 7, , ,000 加工食品 大豆 ( 豆乳 大豆粉 ) チョコレート 穀類 肉類 飼料などからゲノム D N A を迅速 簡便に精製 PCR 阻害物質を完全に除去した高品質 DNA 調製 少量 DNA 部分分解 DNA も精製可能 原理形状サンプル量精製サイズ回収量溶出液量精製時間 シリカメンブレン法ミニスピンカラム 5~200 mg 300 bp~ 約 50 kb 0.1~10 µg 100 µl 30 分 土壌からの精製に NucleoSpin Soil 回 10, , ,500 4 パターンの抽出システム 2 種類の Lysis Buffer と Enhancer SX を組み合せて使用 微生物を効果的に破砕 セラミックビーズを含む NucleoSpin Bead Tube を添付 フミン酸などの PCR 阻害物質を効果的に除去 NucleoSpin Inhibitor Removal Column を添付 さまざまな土壌サンプルに対応 土壌 汚泥 堆積物中の微生物 ( グラム陽性菌 古細菌 酵母 カビ類 藻類 )DNA 土壌中の遊離 DNA 環境サンプル中の微生物 DNA 原理形状サンプル量回収量溶出液量精製時間 シリカメンブレン法ミニスピンカラム <500 mg 土壌 汚泥 堆積物 2~10 µg 30~100 µl 90 分 植物 真菌からの精製に NucleoSpin Plant II 回 7, , ,000 植物組織 植物細胞 糸状菌からのゲノム D N A 精製 さまざまな植物サンプルに対応可能な 2 種類の Lysis Buffer を添付 (PL1:CTAB 法用 PL2:SDS 法用 ) サンプルライセートのクリーンアップに有用な NucleoSpin Filter を含む DNA 結合用に最適化したシリカメンブレンと改良バッファー系により 高純度 高収量を実現 RNase A も添付 原理形状サンプル量プレフィルター精製サイズ回収量溶出液量精製時間 シリカメンブレン法ミニスピンカラム <100 mg 植物組織 ( 湿重量 ) <20 mg 植物組織 ( 乾燥重量 ) NucleoSpin Filter 50 bp~ 約 50 kb 1~30 µg 100 µl 30 分 -55- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

57 核酸抽出試薬 ゲノム DNA 精製 ウイルス核酸精製 ヒト 動物の糞便から高品質の DNA を抽出 NucleoSpin DNA Stool 回 2 9,500 40, ,000 ヒト糞便からのゲノム DNA 精製の簡易日本語プロトコール完備 NucleoSpin Bead Tubes Type A( セラミックビーズ ) で簡単な操作で効率的に細菌や組織 細胞を破砕 NucleoSpin Inhibitor Removal Columnで サンプル中のPCR 阻害物質を効果的に除去 原理形状サンプル量精製サイズ回収量溶出液量精製時間 シリカメンブレン法ミニスピンカラム 200 mg (180~220 mg) 糞便 ( 新鮮便 凍結便 ) 200 bp~ 約 50 kb 2~10 µg ( サンプルの種類 状態に依存 ) 30~100 µl 60 分 全血からの迅速な DNA 精製に NucleoSpin Blood QuickPure 回 2 6,000 20,500 95,000 操作は 2 0 ~ 2 5 分 ( 実操作 :1 0 分 ) で極めて迅速 洗浄と乾燥工程が1ステップで完了 特殊な処理を行ったシリカメンブレンを採用 200 µl までの血液サンプルに対応 ヒト 動物血液 ( 新鮮血 凍結保存血 ) クエン酸血 E D TA 血 へパリン血 C P D A 血 バフィーコート 血小板 体液 血清 血漿 原理形状サンプル量精製サイズ回収量回収濃度溶出液量精製時間 シリカメンブレン法ミニスピンカラム 5~200 µl 全血 体液 < 個培養細胞 ( リンパ球 ) 200 bp~ 約 50 kb 4~6 µg 80~120 ng/µl 30~50 µl ~25 分 ( 実操作 :~10 分 ) ウイルス RNA/DNA の精製に NucleoSpin Virus 回 2 11,000 31, ,000 血清 血漿など無細胞生体液 ( 最大 400 µl) からウイルス RNA/DNAを精製 添付 Proteinase Kにより DNAウイルスからも効率良く精製 50 分以内に完了する迅速で簡便なプロトコール 原理形状サンプル量精製サイズ溶出液量精製時間 シリカメンブレン法ミニスピンカラム <200 µl 血清 血漿 生体液 2 回ロードにより 400 µl まで可能 100 bp~ 約 50 kb 30 µl 50 分 TaKaRa Mycoplasma qpcr Detection Kit( RR277A 42 ページ ) のサンプル調製にも使用します ǀ 遺伝子検査キットカタログ -56-

58 核酸抽出試薬 RNA 精製 クリーンアップ 動物組織 培養細胞からの R N A 精製 NucleoSpin RNA 回 8, , ,000 動物組織 培養細胞からの total RNA 精製 グラム陰性菌 グラム陽性菌 (~10 9 cells) からの total RNA 精製のサポートプロトコール完備 唾液など体液サンプル (~100 µl) からの total RNA 精製のサポートプロトコール完備 原理形状サンプル量回収量溶出液量精製時間 シリカメンブレン法ミニスピンカラム <30 mg 動物組織 < 個培養細胞 14~70 µg 40~120 µl 30 分 Virus Test Kit Ver.2( 詳細は 41 ページ ) でのサンプル調製に使用 専用プロトコール完備 Virus Test Kit Ver.2 でのサンプル調製 Virus Test Kit Ver.2 のサンプル調製では DNase 処理は行いません 1 サンプルの準備 個の細胞を遠心分離等で回収 2 サンプルの溶解 Buffer RA1 を細胞に添加し 均一に破砕 3Proteinase K 処理 RNase-free H2O と Proteinase K を添加し 室温で 10 分静置後 55 で 10 分インキュベート 10,000 g 3 分 4 エタノール添加 上清にエタノールを添加し混合 5 カラムへ吸着 NucleoSpin RNA Column を Collection Tube にセットし 4 を添加 11,000 g 3 0 秒 ろ液を捨て 残りの 4 を NucleoSpin RNA Column に添加 6メンブレンを洗浄 Buffer RAW2で洗浄 Buffer RA3 で洗浄 Buffer RA3 で洗浄 11,000 g 3 0 秒 11,000 g 3 0 秒 11,000 g 2 分 7 核酸の溶出 RNase-free H 2Oを添加 11,000 g 1 分 溶出された溶液を再度 Column に添加 上清を新しいチューブに回収 11,000 g 3 0 秒 11,000 g 1 分 PCR 産物の精製に NucleoSpin Gel and PCR Clean-up 回 5, , ,500 1 種類のバッファーで PCR 産物の精製にもアガロースゲルからの抽出にも対応 操作時間はわずか10 分 最小溶出液量は 15 µl ph indicator の色で至適 phをチェックできます Yellow, ph<6 Green, ph<6~7 Blue, ph>7 50 bp 以上の DNA 断片を回収 プライマーを効率よく除去 全てのゲル用バッファー (TAE TBE など ) に対応 Binding Buffer に ph indicator を含む サンプルの ph が至適 サンプルの ph が少し高い サンプルの ph が高い ph 調整が必要 -57- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

59 リアルタイム PCR 装置 タカラバイオが送り出す究極の実用機 多波長(Multi) 96ウェルモデル Thermal Cycler Dice Real Time System III TP970 with PC 3,500,000 TP950 本体のみ 3,300,000 TP990 PC Cy5 3,850,000 基本表示もレポート出力も日本語の 完全日本語サポート 検査現場での使いやすさを追求した総合システム 食品環境検査用ソフトウェア搭載 サンプルをセット 食品環境検査用ソフトウェア 価格 税別 検査結果をレポート作成 タカラバイオの 検査キット と組合わせて 3 ステップでかんたん解析 レポート出力も楽々 反応条件設定 サンプル設定 結果 解析 レポート出力 Word PowerPoint EXCEL など様々な形式に対応 反応 設定 決まった 反応条件 サンプル 設定 簡単設定 結果 解析 ワンタッチ 解析 レポート 出力 右クリックで データ出力 専用パソコンからの操作 パソコン付タイプ with PC TP970 をご購入いただけば パソコンで ソフトウェアを操作し 反応から解析までを行うことができます スタンドアローン操作 本体タッチパネルから項目を選択するだけで反応を開始 データは本体に保存されます USB メモリからのデータ読み込み機能付 フィルター2 種搭載タイプ 3 種搭載タイプを用意 TP970 は FAM および ROX / Texas Red フィルターを標準装備 TP990 ではさらに Cy5 フィルターも標準装備しています 検査のためのトータルサポートシステム 試薬 と 装置 を提供するタカラバイオはシステムとしての性能を保証します 1. システム ならではの安心サポート 2. 装置一台で様々な検査項目に対応 食品検査や水質検査など 複数の検査にご使用いただけます 3. リアルタイム PCR サポートライン 専用窓口では リアルタイム PCR の専門スタッフがご質問に丁寧にお答えします 使い勝手のよいコンパクトモデル 多波長 Multi 48ウェルモデル 価格 税別 TP700 本体 PC 2,530,000 Thermal Cycler Dice Real Time System Lite 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L47 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -58-

60 エンドポイント PCR 用サーマルサイクラー A4サイズに収まるコンパクトな 96ウェルサーマルサイクラー TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Touch 価格 税別 TP ,000 新しいソフトウェアで より直感的な操作が可能 大きくて入力しやすい7インチカラータッチパネルを採用 最大 24 の温度勾配が設定可能なグラジエント機能を搭載 横幅 18 cm 奥行 28.5 cm 重量 5.0 kg の超コンパクト設計 プログラムファイルの作成がより簡単に プログラム内容の確認が簡単 信頼と実績の 96ウェルスタンダード サーマルサイクラー TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient 4 段階可動式操作パネルの採用により使いやすい角度に設定 最大 20 の温度勾配が設定可能なグラジエント機能を搭載 価格 税別 TP ,000 消耗品 TP350 TP600 用 製 品 名 容 量 価格 税別 0.2 ml Hi-Tube Dome Cap 1,000本 NJ200 9, ml Single-Tube Dome Cap 1,000本 NJ204 6,600 1,000本 NJ205 6, ml Hi-8-Tube 8 連 125 strips NJ300 16, ml Hi-8-Dome Cap 8 連 125 strips NJ301 4, ml Hi-8-Flat Cap 8 連 125 strips NJ302 4, ml Single-Tube Flat Cap Dice Touch TP350 製 品 名 0.2 ml シングル チューブ 0.2 ml 8 連チューブ & キャップ -59- Dice Gradient TP600 5 µl 10 µl 50 µl 5 µl 10 µl 50 µl 0.2 ml Hi-Tube Dome Cap NJ ml Single-Tube Dome Cap NJ ml Single-Tube Flat Cap NJ ml Hi-8 -Tube NJ ml Hi-8 -Dome Cap NJ ml Hi-8 -Tube NJ ml Hi-8 -Flat Cap NJ302 ǀ 遺伝子検査キットカタログ

61 技術紹介 :PCR キャリーオーバー防止 キャリーオーバーコンタミネーション防止! PCRは非常に高感度な検出方法であるため 以前に行った PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性が生じる場合がありますが Uracil-N-glycosylase(UNG) 処理を追加することで偽陽性を簡単に防止できます UNG を利用してキャリーオーバーの影響を防止する原理 1 回目の PCR 検体由来 DNA PCR 増幅産物 A T C A G T T A G T C A A U C A G U U A G U C A dttp の代わりにdUTPを含むdU plus dntp Mixture を用いて PCR 増幅し ウラシル塩基を取り込ませる 注意 : UNG を利用する場合は TaKaRa Taq TM などの Pol I 型 PCR 酵素を使用してください 校正活性を持つ α 型 PCR 酵素はウラシルを含む鋳型の増幅には適さないため α 型 PCR 酵素や α 型酵素を含むブレンド酵素の使用は推奨しません 2 回目の PCR キャリーオーバーコンタミネーション 検体由来 DNA A U U C A G U A G U C A A T C A G T T A G T C A UNG 処理 (25 10 分 ) 影響なし A C A G A G C A デオキシリボースとウラシル塩基の間のN-グリコシド結合が加水分解を受け 脱塩基部位が生じる 熱処理 (95 2 分 ) A T C A G T T A G T C A 影響なし A C A G A G C A 脱塩基部位でリン酸バックボーンの加水分解が起こる A T C A G T T A G T C A PCR の鋳型にならない du plus dntp Mixture を用いて PCR 増幅 PCR 増幅産物 A U C A G U U A G U C A 2 回目以降もクリアに結果判定が可能 プライマーがあればすぐ利用できる UNG 酵素セット TaKaRa Taq TM HS PCR Kit, UNG plus < キットの内容 > TaKaRa Taq HS(5 U/µl) 10 PCR Buffer for UNG plus du plus dntp Mixture(12.5 ) 1 UNG(2 U/µl) 2 R013S 20,000 R013A 200 回 63,800 お手持ちの検出系に UNG 処理を追加 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit < キットの内容 > UNG(2 U/µl) 2 du plus dntp Mixture (12.5 ) 1 MgCl 2(25 mm) 回 46,000 1: d U T P を含む基質溶液別途単品販売も行っています ( 4035) 2: 熱感受性の U N G 別途単品販売も行っています ( 2820) ǀ 遺伝子検査キットカタログ -60-

62 技術紹介 :EMA-PCR EMA-PCR 法とは EMA(ethidium monoazide) は可視光に暴露すると核酸に共有結合する選択的膜透過性色素です 生菌を含む検体にEMAを含む試薬を添加して光を照射しても 生菌では薬剤が内部に浸透せず DNAの化学修飾は起こりませんが 死菌中のDNAや溶液中に遊離している DNAはEMAと光照射により化学修飾を受けます EMAにより修飾されたDNAはPCR 反応の鋳型とならないため EMA 処理後は生菌由来 DNAのみが PCRの鋳型となり 検出されます EMA-PCR 法とは EMA が死菌由来 DNAを修飾し 修飾を受けた DNA が PCR 増幅できない状態となることを利用して 生菌由来 DNAを選択的に検出する方法です さらに タカラバイオ独自の技術によりリアルタイム PCR でも生菌由来 DNA の選択的検出が可能になりました! タカラバイオの Viable Bacteria Selectionシステムはこの EMA-PCR 法を応用しており さらに独自の技術で死菌由来 DNA の EMA 修飾効果を向上させたことで 増幅サイズが短いリアルタイム PCR でも効果的な生菌由来 DNAの選択的検出が可能です < エンドポイント PCR> < リアルタイム PCR> そこで 短鎖 P C R 増幅にも効果的な EMA 処理法を開発しました! Viable Bacteria Series 増幅サイズが大きい EMA 修飾が多い =PCR 抑制が容易 増幅サイズが小さい (100 bp 前後 ) EMA 修飾が少ない =PCR 抑制が難しい 原理 生菌では EMA が浸透しない 死菌では EMA が浸透する EMAによる DNA 修飾 ( 不活化 ) 参考文献 Biotechniques Apr; 34(4): , 810, Ethidium monoazide for DNA-based differentiation of viable and dead bacteria by 5 -nuclease PCR. Nogva HK, Dromtorp SM, Nissen H, Rudi K. 操作フロー 5~15 分 15 分 ~40 分 ~90 分 EMA 試薬添加 1 光照射 1 DNA 抽出 qpcr/pcr 検出 2 EMA 処理試薬 Solution A Solution B 検体 LED Crosslinker 12 NucleoSpin Tissue XS お手持ちの qpcr/pcr 検出系との組合せ 1 EMA 処理条件は 検出目的の菌種や検体の種類にあわせて最適化します 2 qpcr/pcr 試薬は別途ご用意ください -61- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

63 技術紹介 EMA-PCR ビフィズス菌での検証 検証1 生菌への影響 検証 2 死菌抑制効果 培養したビフィズス菌 Bifidobacterium bifidum を生理食塩水に 懸濁し生菌サンプルとして使用 個の生菌から プロトコールに従って EMA 処理なし EMA 処理ありサンプルをそ れぞれ調製し リアルタイム PCR インターカレーター法 で検出を 行った その結果 EMA 処理あり EMA なしでほぼ同等の結果が 得られ 本キットを用いた EMA 処理によって検出感度には影響がな いことが分かった EMA 処理前 ビフィズス菌 Bifidobacterium bifidum の生菌を 95 で 5 分間 熱処理し死菌サンプルとして使用 個の死菌から プロトコールに従って EMA 処理なし EMA 処理ありサンプルをそ れぞれ調製し リアルタイム PCR インターカレーター法 で検出を 行った その結果 本キットを用いた EMA 処理により 少なくとも 個までの死菌を完全に抑制可能であることが分かった EMA 処理後 EMA 処理前 EMA 処理後 EMA 処理キット グラム陰性菌 グラム陽性菌用 グラム陰性菌専用の EMA 試薬 Viable Bacteria Selection Kit for PCR Gram Negative グラム陽性菌専用の EMA 試薬 Viable Bacteria Selection Kit for PCR Gram Positive 容 量 価格 税別 回 55, 回 55,000 EMA 処理条件を最適化し 目的細菌の生菌由来 DNA を選択的に検出する系を構築することができます キットの内容 7700 Solution A-gn Solution B-gn 7705 Solution A-gp Solution B-gp Dilution Buffer 光照射装置 ルーチン利用をより便利に LED Crosslinker 12 価格 税別 EM ,800 高輝度 LED ランプを搭載した専用装置で 精度の高い安定したデータ取得に有効です 1.5 ml チューブ12 本を同時に処理することが可能です EMA 処理成否の確認用キット 実検体におけるEMA 処理の成否をチェック可能 Control Test Kit Viable Bacteria Selection EMA 処理が正常に行われたかどうかを確認するための工夫が施されており 様々な夾雑物に よる影響が懸念される実検体における検証に便利です Viable Bacteria Selection Kit for PCR シリーズの試薬コンポーネントには反 応確認用のプラスミド DNA が予め添加されてお り 検体に対して EMA 処 理が正しく行われるとこのプラスミド DNA も同時に修飾を受け PCR 増幅できなくなります プラスミド DNA 上の領域をターゲットとして PCR 増幅を行うこ とで 事前に EMA 処理の成否を確認できます 検体の前処理操作が うまくいくと 前処理反応中に プラスミド DNA が共存 EMA プラスミド DNAも 修飾を受ける プラスミド DNA 上の ターゲットは リアル タイム PCR やエンド ポイント PCR で増幅 されない 容 量 価格 税別 CY290 28,000 EMA 処理 OK EMA EMA EMA 処理 OUT EMA EMA 特定細菌に至適化した専用キットもラインナップ Viable Bacteria Selection システムでは レジオネラ属菌 サルモネラ菌 腸管出血性大腸菌 カンピロバクターなど各標的細菌用に 至適化した試薬キットも用意しています 至適化済みの条件で EMA 処理を行い CycleavePCR キット サイクリングプローブ法を利 用したリアルタイム PCR キット と組み合わせて検出を行います EMA PCR 検索 詳しくはウェブカタログをご覧ください 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 70 ページをご覧ください L4 CY290 ǀ 遺伝子検査キットカタログ -62-

64 遺伝子検出について 食品 環境検査における各種検査法について 培養 微生物を人工的な環境下で育てる方法です 細菌を培養するには 液体培地を用いる方法とこれを寒天で固めた固形培地 ( 寒天培地 ) を用いる方法があります 細菌を寒天培地に播いて適当な温度で培養すると やがてコロニーと呼ばれる菌の固まりを作り 目視で確認できるようになります 1 個のコロニーは 1 個の細菌が増えてできた全て同じ遺伝子を持つ集団 すなわちクローンです 少なくとも一晩以上培養に時間がかかり 培養が困難な菌種もあります PCR( エンドポイント PCR) PCR(Polymerase Chain Reaction) 法とは DNA 鎖の熱変性 プライマーのアニーリング ポリメラーゼによる相補鎖の合成を繰り返し行うことにより DNA を増幅する方法です 1サイクルごとに DNA が 2 倍 4 倍 8 倍 と指数関数的に増幅し やがてプラトー ( 一時的に停滞する状態 ) に達します この方法を用いると 数時間で少なくとも 10 5 倍にDNAを増幅できます 反応終了後はアガロースゲル電気泳動に供し 増幅産物のバンドの有無を目視で判定します エンドポイント PCR の実験フロー 核酸抽出試薬の調製 PCR 反応電気泳動 約 30 分 ~ 約 10 分 ~ 約 2 時間 ~ 約 30 分 ~ qpcr( リアルタイム PCR) リアルタイム PCR(qPCR) 法は 反応液の中にあらかじめ蛍光プローブあるいは蛍光色素を添加し 目的遺伝子が 1サイクルごとに指数関数的に増幅する様子をリアルタイムでモニタリングし 解析する方法です PCR 法で必須であった電気泳動が不要となり よりスピーディーでコンタミネーションによるリスクの低い遺伝子検出を実施できます リアルタイム PCRの実験フロー核酸抽出試薬の調製リアルタイム PCR 反応と解析 OK Posi. Nega. 約 30 分 ~ 約 10 分 ~ 約 1 時間半 ~ ELISA ELISA(Enzyme-linked Immunosorbent Assay) 法は 酵素で標識された抗体あるいは抗原を用いて 試料溶液中の抗原あるいは抗体量を定量する方法です 以下のような様々な方法があります 直接法 : 抗原あるいは抗体を固相化し 酵素標識した抗体あるいは抗原で検出する方法 間接法 : 抗原を固相化し 抗原に対する一次抗体 および一次抗体に対する酵素標識ニ次抗体で検出する方法 サンドイッチ法 : 抗原に対する抗体を固相化し 抗原を含む試料溶液を加え 抗原に対する抗体 ( 固相化したものとは別の抗体 ; 一次抗体 ) および一次抗体に対する酵素標識二次抗体で検出する方法 次項では この中から特に PCR リアルタイム PCR をクローズアップします -63- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

65 遺伝子検出について 遺伝子検出 遺伝子検査の用途 P C R 法 リアルタイム P C R 法は 分子生物学のみならず医学を始め生物学全体に広く浸透し 加えて法医学 食品 環境衛生検査 動植物検査等の分野でも簡便迅速な手法として汎用されています 例えば リアルタイム P C R 法は遺伝子組換え食品の検査 ウイルスや病原菌の検出 検体中のウイルス量の解析などさまざまな用途に応用されています 反応後に電気泳動で増幅産物の確認を行う必要がないので簡便 迅速に結果が得られ コンタミネーションリスクも低いといった長所があるためです 近年では 従来の PCR 法で行われていた遺伝子検査がリアルタイム PCR へ移行する例も多数見られます 定性解析におけるリアルタイム PCR の利点 操作が簡便で迅速に結果が得られる 電気泳動が不要で コンタミネーションのリスクが低い 定量解析におけるリアルタイム PCR の利点 操作が簡便で迅速に結果が得られる 電気泳動が不要で コンタミネーションのリスクが低い 広いダイナミックレンジで正確な定量ができる PCR qpcr の原理 PCR( エンドポイント PCR) PCR(Polymerase Chain Reaction) 法とは 以下の 3ステップを繰り返し行うことにより in vitroで D N A を増幅する方法です ( 右図参照 ) PCR の原理 DNA 鎖の熱変性 (denaturation step) プライマーのアニーリング (annealing step) ポリメラーゼによる相補鎖の合成 (extension step) この方法を用いるとことで 数時間以内に DNA の目的領域を少なくとも 10 5 倍に増幅できます qpcr( リアルタイム PCR) PCR では 1 サイクルごとに DNA が 2 倍 4 倍 8 倍 と指数関数的に増幅し やがてプラトーに達します リアルタイム P C R では この増幅の様子を 増幅曲線 ( 得られた蛍光強度の増加量を単位時間ごとにプロットした曲線 ) として画面上でモニタリングします PCR 増幅産物をリアルタイムでモニタリングするため 指数関数的増幅域での正確な検出を行うことができ これはエンドポイントで解析する従来の PCR 産物量 初発 DNA 量が未知のサンプル コピー数 PCR 法と大きく異なる点です 閾値 初発の DNA 量が多いほど 増幅産物量は早く検出可能な量に達するため 増幅曲線 サイクル数 が早いサイクルで立ち上がります したがって 段階希釈したスタンダードサンプル を用いてリアルタイム PCRを行うと 初発 DNA 量が多い順番に等間隔で並んだ増幅曲線が得られます 増幅曲線上に適当な閾値 (Threshold) を設定し 閾値と増幅曲線が交わる点を Ct 値 (Threshold Cycle) として算出します リアルタイム PCR 用キットでは この Ct 値を利用し 結果判定を行っています また C t 値と初期鋳型量の間には直線関係があり 右図のような検量線を作成する 初発 DNA 量 (Log 値 ) 検量線 こともできます 未知サンプルについてもスタンダードサンプルと同様にCt 値を算出し この検量線に当てはめれば 初期鋳型量を求めることが可能です Ct 値 タカラバイオの各種遺伝子検出キットでは 主に +/- 判定による 定性解析法で結果を求めています ある一定のサイクル数の間に 目的の遺伝子が増幅して Ct 値が算出できたものをプラス (Posi) 目的遺伝子が増幅せず Ct 値が算出できなかったものをマイナス (Nega) と判定し 装置画面には右図のように表示されます ǀ 遺伝子検査キットカタログ -64-

66 遺伝子検出について 蛍光検出法 リアルタイム PCRではPCR 増幅産物を蛍光により検出します 蛍光検出法には インターカレーターを用いる方法と蛍光標識プローブを用いる方法の2 種類があります 反応後の解析はソフトウェア上で完結し 迅速でコンタミネーションリスクの低い遺伝子検出を実現できます インターカレーター法 インターカレーターは PCRによって増幅した二本鎖 DNAに結合し 励起光の照射により蛍光を発します この蛍光強度を測定することにより 増幅産物の生成量をモニターできます さらに融解曲線分析を行うことで 適切な増幅産物が得られたかどうかを確認できます 融解曲線分析 PCR 後に PCR 反応液の温度を徐々に上げてインターカレーターの蛍光シグナルをモニタリングすると 最初は PCR 増幅産物の二本鎖 DNA に結合して蛍光シグナルを発しているが ある一定の温度に達すると DNA が一本鎖に解離し 蛍光シグナルの急激な低下が確認される この変化をプロットしたものが融解曲線であり 一本鎖に解離する温度は融解温度 (Tm 値 ) と呼ばれ 増幅産物の配列に固有の値を示す 融解曲線を 1st Derivative で表示すると蛍光強度の変化量を確認でき そのピークが Tm 値である 融解曲線分析 1st Derivative Raw Tm 値 蛍光標識プローブ 蛍光標識プローブには多くの種類がありますが ここでは 2 種類のプローブ検出法を紹介します TaKaRa qpcr Probe TaKaRa qpcr Probe は 5 末端を蛍光物質で 3 末端をクエンチャー物質で修飾したオリゴヌクレオチドである アニーリングステップで鋳型 DNA に特異的にハイブリダイズするが プローブにクエンチャーが存在するため 励起光を照射しても蛍光の発生は抑制されている その後の伸長反応ステップで Taq DNA ポリメラーゼのもつ 5 3 エキソヌクレアーゼ活性により 鋳型にハイブリダイズした TaKaRa qpcr P r o b e が分解されると 蛍光色素がプローブから遊離し クエンチャーによる抑制が解除されて蛍光を発するようになる サイクリングプローブ サイクリングプローブは RNA と DNA からなるキメラオリゴヌクレオチドで 片方の末端が蛍光物質で もう一方の末端がクエンチャー物質で修飾されている インタクトな状態では蛍光を発しないが PCR 増幅産物とハイブリッドを形成すると RNase H により RNA 部分が切断されて蛍光を発する サイクリングプローブの RNA 付近にミスマッチが存在すると RNase H による切断は起こらないので 非常に配列特異性の高い検出が可能であり SNPs タイピングなどに最適である -65- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

67 付録 : 遺伝子検査を始めるにあたって リアルタイム PCR に必要な実験器具 装置 リアルタイム PCR は従来の PCR をベースにした技術であり 専用のリアルタイム PCR 装置のほかは 実験器具なども基本的には同じものが使用できます 装置および主な器具類を紹介します 品名 リアルタイム PCR 装置 チューブ 1 Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ ml 8-strip tube, individual Flat Caps など 鋳型調製用 1 微量高速冷却遠心機 2 ボルテックスミキサー 3 ヒートブロック 4 チューブラック 5 卓上微量遠心機 6 マイクロピペット ( 各種 ) PCR 試薬調製用 1 マイクロピペット ( 各種 ) 2 フィルター付きチップ ml マイクロチューブ 4 手袋 ( パウダーフリー ) 5 チューブラック 6 冷却用アルミ製ラック (1.5 ml 用 ) 7 冷却用アルミ製ラック (0.2 ml 用 ) 8 卓上クリーンベンチ (UVランプ付) 9 ボルテックスミキサー 10 卓上微量遠心機 11 クラッシュアイスまたは保冷剤 / アイスボックス (6,7 の代わりに ) 鋳型添加用 1 マイクロピペット (10 µl 用 ) 2 卓上クリーンベンチ (UVランプ付) 数量 適当量適当量適当量適当量 適当量 1 1 リアルタイム PCR 装置リアルタイム PCR 実験を行うには 専用装置が必要です リアルタイム PCR 装置はターゲット配列を増幅する PCR 装置と リアルタイムにその増幅を蛍光物質でモニタリングする検出器で構成されています 反応チューブ 反応プレート Thermal Cycler Dice Real Time System IIIおよび Liteには 純正品の 8 連チューブ 96( または 48) ウェルプレートをご利用ください 純正品以外のチューブやプレートを使用すると正常な PCR 反応が行われなかったり 装置の故障原因となりますのでご注意ください 検査用途には 独立型フラットキャップ付き 8 連チューブ (0.2 ml 8-strip tube, individual Flat Caps : NJ600) をお勧めします 本製品はフラットキャップが独立しており 1 チューブごとに蓋を開閉できるため コンタミネーション防止に役立ちます また 切り離せばシングルチューブとしても利用でき 大変便利です 0.1 ml 8-strip tube, individual Flat Caps ( NJ902) 0.2 ml 8-strip tube, individual Flat Caps ( NJ600) Thermal Cycler Dice Real Time System シリーズ専用の独立型フラットキャップ付きチューブが 8 連結したタイプ マイクロピペット 検体調製用 PCR 試薬調製用 鋳型添加用 など 用途別に揃えておくことをお勧めします マイクロピペット用チップ エアロゾルによるコンタミネーションを防止するため 疎水性フィルター付きのチップを使用してください リアルタイム P C R はシングルコピーオーダーの鋳型の検出も可能なため 反応液調製時に鋳型となりうる核酸等が混入しないよう細心の注意が必要です 疎水性フィルター付きのチップは 各メーカーのマイクロピペットに対応した滅菌済のものが販売されています 反応チューブ 反応プレート用遠心機通常のPCR 実験で使用する卓上型の1.5 mlチューブ用小型遠心機のほか 8 連反応チューブ用の遠心機や反応プレート用の遠心機があると便利です 反応液を反応チューブやプレートに分注後 チューブ壁などに飛散した反応液をスピンダウンするときに使用します ǀ 遺伝子検査キットカタログ -66-

68 付録 : 遺伝子検査を始めるにあたって 実験環境について 菌体の取り扱いには十分に注意し 必要に応じて安全キャビネットあるいはクリーンベンチ内で操作してください また PCR による検出は非常に高感度です コンタミネーションを防止するために サンプルの調製から PCR 検出まで下記のエリアを設定し 物理的に隔離することを推奨します 正しい結果を得るために 以下の注意点をご確認ください バイオセーフティ規定を順守する 病原微生物感染が疑われる検体を取り扱う際の検査担当者の安全を目的とします 施設内の該当規則を遵守すると共に 適切なバイオセーフティレベルの実験施設で取り扱ってください 核酸分解酵素 ( ヌクレアーゼ ) のコンタミネーションを防止する D N as e R N as e の混入による核酸の分解防止を目的とします 万一 サンプルやプローブ プライマーなどの核酸がヌクレアーゼの混入により分解されると正確な検出ができません 実験者の汗や唾液からもヌクレアーゼが混入する可能性がありますので 作業過程ごとにディスポーザブル手袋の交換およびマスク着用など 操作には細心の注意を払ってください 遺伝子のコンタミネーションを防止する 器具間の核酸クロスコンタミネーションや 増幅産物の混入による誤判定防止を目的とします PCR による検出は非常に高感度なため ごく微量な混入でも増幅の原因となります 作業エリアを物理的に隔離し 実験器具や着衣の取り扱いにも注意してください エリア 1 試薬調製用 ( クリーンベンチ ) エリア 2 専用白衣 エリア 3 鋳型添加用 ( クリーンベンチ ) 通常の実験エリア 安全キャビネット 専用白衣 エリア 4 電気泳動室 エリア 1: 反応試薬のみを扱うエリア PCR 反応液の調製 分注を行う ( 鋳型となるDNA は一切持ち込まない ) エリア 2: 通常の実験エリア検体の取扱いや DNA 調製を行う 必要に応じて安全キャビネットを設置する エリア 3: 高濃度 DNAを扱うエリア分注済みの反応液への鋳型 DNAの添加を行う エリア 4:PCR 産物を取り扱うエリア PCR 後の増幅産物を電気泳動する場合はエリア 1 2 3とは異なる別室で行う コンタミネーション防止のポイント 環境整備について 操作ごとにエリアを分ける エリアごとにマイクロピペット チップ 白衣などを分ける 疎水性フィルター付きチップを用いる PCR 反応後のチューブはオートクレーブ厳禁 専用ゴミ袋へ廃棄する プライマー溶液 反応試薬などを小分けしておく DNA-OFF TM ( 9036) で 実験台や器具をふき取る リアルタイム P C R( 電気泳動不要 ) の使用を推奨 操作について チューブのフタを開ける際は フタの裏に触れないように注意する チューブは静かに開ける 開けておく時間は最小限にする 分注作業は フタを開けたチューブの上で行うことは極力避ける 陰性 ( ネガティブコントール ) 反応による確認を行う 上図の写真のように クリーンベンチ内にピペットやチップを常設し 使用しない時は UV 照射しておくのが便利です 万一コンタミネーションが発生した場合は 考えられる原因に一つ一つ対処してください 試薬へのコンタミネーションが疑われるときは 新しいものに取り替える必要があります 実験台や器具類は洗浄を徹底してください -67- ǀ 遺伝子検査キットカタログ

69 製品一覧 -2 製品のタイプ ; リアルタイム PCR キット エンドポイント PCR キット プライマー 製品タイプ 製品名容量 食中毒検査 (3) サルモネラ CycleavePCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0 サルモネラ菌 (inva gene)one Shot PCR Kit QuickPrimer InvA 遺伝子 サルモネラ菌 inva 遺伝子検出用 Primer Set SIN-1&2 サルモネラ菌エンテロトキシン遺伝子検出用 Primer Set STN-1&2 腸炎ビブリオ CycleavePCR Vibrio(tdh gene)detection Kit 腸炎ビブリオ (tdh gene)one Shot PCR Kit 腸炎ビブリオ (trh gene)one Shot PCR Kit 腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒遺伝子検出用 Primer Set VPD-1&2 腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子 (trh1) 検出用 Primer Set VPS-1&2 腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子 (trh1&2) 検出用 Primer Set VPR-1&2 QuickPrimer Tdh 遺伝子セレウス菌 CycleavePCR Bacillus cereus (CRS gene)detection Kit Bacillus cereus (CRS gene)pcr Detection Kit QuickPrimer Nhe 遺伝子 QuickPrimer Bacillus cereus group (16S rdna) カンピロバクター CycleavePCR Campylobacter (jejuni/coli)typing Kit Campylobacter (cdt gene)pcr Detection and Typing Kit QuickPrimer CdtA 遺伝子 QuickPrimer Campylobacter spp. (16S rdna) リステリアモノサイトゲネス CycleavePCR Listeria monocytogenes (inla gene)detection Kit QuickPrimer Listeria spp. (16S rdna) 黄色ブドウ球菌 CycleavePCR Staphylococcus aureus (DnaJ gene)detection Kit QuickPrimer Staphylococcus spp. (16S rdna) 黄色ブドウ球菌エンテロトキシンA 遺伝子検出用 Primer Set SEA-1&2 黄色ブドウ球菌エンテロトキシン B 遺伝子検出用 Primer Set SEB-1&2 黄色ブドウ球菌エンテロトキシン C 遺伝子検出用 Primer Set SEZ-1&2 黄色ブドウ球菌エンテロトキシン D 遺伝子検出用 Primer Set SED-1&2 黄色ブドウ球菌エンテロトキシン E 遺伝子検出用 Primer Set SEE-1&2 黄色ブドウ球菌毒素性ショック症候群毒素遺伝子検出用 Primer Set TST-1&2 毒素原性大腸菌 毒素原性大腸菌 (STh gene)one Shot PCR Kit 毒素原性大腸菌 (STp gene)one Shot PCR Kit 毒素原性大腸菌 (LT gene)one Shot PCR Kit QuickPrimer LT 遺伝子 QuickPrimer STI 遺伝子 毒素原性大腸菌 LT 遺伝子検出用 Primer Set ELT-1&2 毒素原性大腸菌 STh 遺伝子検出用 Primer Set ESH-1&2 毒素原性大腸菌 STp 遺伝子検出用 Primer Set ESP-1&2 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌 (EIEC) 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌 (EIEC)(invE gene)one Shot PCR Kit QuickPrimer InvE 遺伝子 QuickPrimer IpaB 遺伝子 QuickPrimer IpaH 遺伝子 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌 ( EIEC)invE 遺伝子検出用 Primer Set INV-1&2 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌 ( EIEC)ipaH 遺伝子検出用 Primer Set IPA-1&2 ボツリヌス菌 ボツリヌス A 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BAS-1&2 ボツリヌス B 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BBS-1&2 ボツリヌス C 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BCS-1&2 ボツリヌス D 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BDS-1&2 ボツリヌス E 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BES-1&2 ボツリヌス F 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BFS-1&2 ボツリヌス G 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BGS-1&2 48 回 100 回各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 48 回 48 回各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 100 回 100 回 100 回 (C. jejuni, C. coli 各 25 回 ) 100 回 (50 検体 ) 100 回 100 回 100 回 100 回各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 48 回 48 回 48 回 100 回 100 回 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 48 回 100 回 100 回 100 回 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol CY205 RR115A MR111 S018 S019 CY220 RR116A RR118A S001 S002 S028 MR109 CY221 RR132A MR113 MR208 CY225 RR134A MR110 MR205 CY223 MR207 CY228 MR202 S009 S010 S011 S012 S013 S015 RR104A RR108A RR109A MR106 MR107 S003 S004 S005 RR117A MR101 MR102 MR103 S016 S017 S021 S022 S023 S024 S025 S026 S027 価格 ( 税別 ) 69,000 62,000 15,000 33,000 33,000 69,000 62,000 62,000 33,000 33,000 33,000 15,000 69,000 88,000 15,000 15,000 69,000 88,000 15,000 15,000 69,000 15,000 69,000 15,000 33,000 33,000 33,000 33,000 33,000 33,000 63,000 62,000 62,000 15,000 15,000 33,000 33,000 33,000 62,000 15,000 15,000 15,000 33,000 33,000 34,000 34,000 34,000 34,000 34,000 34,000 34,000 掲載ページ 15 web web web web ǀ 遺伝子検査キットカタログ -68-

70 製品一覧 -3 製品のタイプ ; リアルタイム PCR キット エンドポイント PCR キット プライマー プローブ プライマー コントロール DNA 製品タイプ 食中毒検査 (4) ウェルシュ菌 ウェルシュ菌毒素遺伝子検出用 Primer Set CPE-1&2 コレラ ( コレラ毒素 ) コレラ毒素遺伝子検出用 Primer Set VCT-1&2 その他細菌 QuickPrimer Escherichia/Shigella group (16S rdna) QuickPrimer Enterotoxin (Clostridium perfringens) 遺伝子 QuickPrimer Clostridium perfringens (16S rdna) QuickPrimer Yersinia spp. (16S rdna) クドアセプテンプンクタータ Kudoa septempunctata (18S rrna)qpcr Detection Kit 衛生指標菌 CycleavePCR Bacteria Screening Kit Bacteria (tuf gene)quantitative PCR Kit Enterobacteriaceae (rplp gene)quantitative PCR Kit Bacteria Screening PCR Kit 下痢性病原菌遺伝子 MORA-Primer Diarrheal Pathogens MORA-DNA Diarrheal Pathogens 食品病原菌遺伝子 MORA-Primer Food Pathogens MORA-DNA Food Pathogens キャリーオーバー防止 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit TaKaRa Taq TM HS PCR Kit, UNG plus 製品名容量 品種判別肉種判別 CycleavePCR 肉種判別キット (6 種 ) コメ判別 コメ判別用 PCR Kit I コメ判別用 PCR Kit II 動物感染症検査サルモネラ血清型 Salmonella serovar Typhimurium Identification Kit Salmonella serovar Choleraesuis Identification Kit Salmonella serovar Enteritidis Identification Kit Salmonella serovar Dublin Identification Kit Salmonella serovar Gallinarum Identification Kit Salmonella serovar Infantis Identification Kit Salmonella serovar Hadar Identification Kit ウシ白血病ウイルス ウシ白血病ウイルス検出用 Probe/Primer/Positive control 水質検査 (2) クリプトスポリジウム属 ジアルジア Cycleave RT-PCR Cryptosporidium (18S rrna)detection Kit Cycleave RT-PCR Giardia (18S rrna)detection Kit ヒト感染症検査 (1) 呼吸器系感染症起因菌 ウイルス CycleavePCR 呼吸器系感染症起因菌検出キット Ver.2 CycleavePCR 呼吸器系感染症起因ウイルス検出キット Ver.3 サイトメガロウイルス EB ウイルス CycleavePCR Cytomegalovirus (CMV)Detection Kit CycleavePCR Epstein-Barr virus (EBV)Detection Kit 各 1,000 pmol 各 1,000 pmol 100 回 100 回 100 回 100 回 ( E N T B S 各 2 5 回 ) 100 回 100 回 50 検体分 各 192 pmol 10 回分 各 192 pmol 10 回分 200 回 200 回 20 サンプル分 100 回 100 回 60 反応 60 反応 S020 S014 MR201 MR112 MR203 MR204 RR260A CY208 RR240A RR241A RR114A R013S R013A CY218 RR211A RR213A R230A R231A R232A R233A R234A R235A R236A CY415 CY230 CY231 CY214 CY216 お問合せください 価格 ( 税別 ) 33,000 33,000 15,000 15,000 15,000 15,000 66,000 91,000 65,000 65,000 73,000 37,500 26,000 37,500 26,000 46,000 20,000 63,800 79,000 57,000 57,000 52,000 52,000 52,000 52,000 52,000 52,000 52,000 31,000 69,000 69,000 96, ,000 掲載ページ web web ǀ 遺伝子検査キットカタログ

71 製品一覧 -4 製品のタイプ リアルタイム PCR キット 製 品 タイプ 製 品 名 CycleavePCR Streptococcus agalactiae GBS Detection Kit CycleavePCR GBS Capsular Typing Kit ヒトパピローマウイルス TaKaRa PCR Human Papillomavirus Detection Set TaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set ヒトゲノムタイピング Cycleave Human ALDH2 Typing Probe/Primer Set Ver.2 TaKaRa PCR FLT3/ITD Mutation Detection Set EMA 試薬 容 量 価 格 税別 掲 載 ページ CY233 69,000 CY234 69, , 回 ,000 CY403 57, , 回 , 回 , , , , , CY290 28, ヒ ト 感 染 症 検 査 2 B 群溶血性レンサ球菌 GBS プライマー 生菌由来遺伝子の検出 Viable Bacteria Selection Kit for PCR Gram Negative Viable Bacteria Selection Kit for PCR Gram Positive Viable Salmonella Selection Kit for PCR Viable enterohemorrhagic E. coli Selection Kit for PCR Viable Campylobacter Selection Kit for PCR Viable Legionella Selection Kit for PCR Ver.2.0 EMA 反応チェック用試薬 Control Test Kit Viable Bacteria Selection web ライセンスについて 製品紹介ページでは 各製品に該当する License Notice の記号を付記しています なお License Notice の内容が変更になる場合もありますので 最新のライセンスに関しては弊社ウェブカタログでご確認ください [L4] Quencher This product is for measurement of amplification detection for research use only in life sciences research, industrial and environmental testing (including food industry, but excluding bio-terrorism and bio-warfare), non-human animal diagnostic testing, forensic testing and providing services to third parties who do not use the services for the purpose of (a) providing patient management or care, and in which the results of such services are not included in patient records and (b) providing bio-terrorism or bio-warfare testing; and specifically excluding, without limitation: (I) any human clinical, therapeutic or diagnostic uses and animal clinical and therapeutic uses (including any use of the results of any testing performed with any product for patient management or care, or the use of the results of the services for patient management or care) and (II) any research or services where the results of any test or assay are used for patient management, care or otherwise in making therapeutic or treatment decisions for a patient. A portion of this product is subject to proprietary rights of Epoch Biosciences, Inc. and are made and sold under license from Epoch Biosciences, Inc. under the patents and patent applications (US , WO , WO , US10/113,445, US09/876,830 and corresponding patents issued in other countries).there is no implied license for commercial use with respect to this product. A license must be obtained directly from Epoch Biosciences, Inc. with respect to any proposed commercial use of this product, and commercial use includes but is not limited to (A) the sale, lease, license or other transfer of this product or any material derived or produced from it, (B) the sale, lease, license or other grant of rights to use this product or any material derived or produced from it, and (C) the sale, lease, license or other transfer of kits which include this product. [L26] Rice Identify B 本キットは 独立行政法人食品総合研究所のライセンスを受けて ( 特許出願番号 特願平 ) タカラバイオ ( 株 ) が製造販売しています [L27] Rice Identify C 本 キ ッ ト は 独 立 行 政 法 人 食 品 総 合 研 究 所 の ラ イ セ ン ス を 受 け て ( 特 許 出 願 番 号 特 願 ) タカラバイオ ( 株 ) が製造販売しています [L34] B. cereus This product is covered by the claims of U.S. Patent No. 7,264,959 and its foreign counterpart patent claims. [L42] Campylobacter PCR Detection This product is sold by Takara Bio Inc. under license from Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. and Osaka Prefecture University. This product is covered by the claims of U.S. Patent No. 7,563,594 and its foreign counterparts. [L47] Real-Time PCR Quantification Method The purchase of this product includes a limited, non-transferable license for all fields other than human or veterinary in vitro diagnostics under specific claims of U.S. Patent Nos. 6,174,670, 6,569,627, 6,303,305, and 6,503,720, owned by the University of Utah Research Foundation and licensed to Idaho Technology, Inc. and Roche Diagnostics GmbH. [L55a] Salmonella PCR Detection This product is covered by the claims of JP patent No and [L55b] Salmonella PCR Detection This product is covered by the claims of JP patent No [L55c] Salmonella PCR Detection This product is covered by the claims of JP patent No [L55d] Salmonella PCR Detection This product is covered by the claims of JP patent No [L55e] Salmonella PCR Detection This product is covered by the claims of JP patent No [L55f] Salmonella PCR Detection This product is covered by the claims of JP patent No [L55g] Salmonella PCR Detection This product is covered by the claims of JP patent No [L56] Norovirus Detction 本製品は 株 ビー エム エルより特許第 号および第 号のライセンスを 受け タカラバイオ 株 が製造 販売しています [L60] Intestinal bacteria PCR Detection Licensed under the JP patent No [L65] Intestinal bactria PCR Detection This product is covered by the claims of JP patent No , owned by Shimane. [L73] Quencher (BHQ) The Black Hole Quencher dye and BHQplus probe technologies were developed by and are sold under license from Biosearch Technologies, Inc., Petaluma, California. ǀ 遺伝子検査キットカタログ -70-

72 製品一覧 -1 製品のタイプ リアルタイム PCR キット 製 品 タイプ エンドポイント PCR キット 製 品 名 TaKaRa ノロウイルス GI/GII 検出キット Ver.2 TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット CycleavePCR O-157 VT gene Screening Kit Ver.2.0 CycleavePCR O-157 VT1/VT2 Typing Kit CycleavePCR EHEC O157/O26 Typing Kit CycleavePCR EHEC O111/O121 Typing Kit CycleavePCR EHEC O103/O145 Typing Kit CycleavePCR EHEC O165 Typing Kit O-157 ベロ毒素遺伝子 One Shot PCR Screening Kit Ver.2 O-157 ベロ毒素 1 型 2 型遺伝子 One Shot PCR Typing Kit Ver.2 EHEC VT gene PCR Screening Set O-157 ベロ毒素 1 型 2 型遺伝子 PCR Typing Set O-157 ベロ毒素 1 型 2 型遺伝子 PCR Typing Set Plus EHEC O antigens PCR Typing Kit QuickPrimer Shiga I 遺伝子 QuickPrimer Shiga II 遺伝子 腸管出血性大腸菌 VT1 遺伝子検出用 Primer Set EVT-1&2 腸管出血性大腸菌 VT2 遺伝子検出用 Primer Set EVS-1&2 腸管出血性大腸菌 VT 遺伝子検出用 Primer Set EVC-1&2 TaKaRa qpcr Norovirus GI/GII Typing Kit Legionella LC Medium Base 腸管三菌種 食 中 毒 検 査 1 食 中 毒 検 査 2 水 質 検 査 1 腸管出血性大腸菌 Viable Legionella Selection Kit for LC EMA-qPCR Viable Legionella Selection Kit for PCR Ver.2.0 LED Crosslinker 12 Lysis Buffer for Legionella CycleavePCR Legionella 16S rrna Detection Kit ノロウイルス 微生物推定解析 16S (V3-V4) Metagenomic Library Construction Kit for NGS Bacterial 16S rdna PCR Kit Bacterial 16S rdna PCR Kit Fast 800 Fungal rdna ITS1 PCR Kit Fast Fungal rdna D1/D2 PCR Kit Fast 価 格 税別 掲 載 ページ 100回 RR297A 128, 回 RR139A 150,000 8 細胞検査 TaKaRa Mycoplasma qpcr Detection Kit CycleavePCR Mycoplasma Detection Kit TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set Virus Test Kit HIV, HTLV, HCV, HBV, ParvoB19 Ver.2 Virus Test Kit EBV, CMV, WNV Ver.2 CY217A 52, 回 CY217B 96,000 CY222 69,000 20回 CY237 28,000 20回 CY238 28,000 20回 CY239 28,000 CY241 69,000 48回 RR102A 63,000 48回 RR106A 77, 回 RR120A 69, 回 RR105A 69, 回 RR122A 69,000 RR133A 77, 回 MR104 15, 回 MR105 15,000 各1,000 pmol S006 33,000 各1,000 pmol S007 33,000 各1,000 pmol S008 33,000 レジオネラ生 菌 遺 伝 子 検 査 容 量 検便検査 ノロウイルス プライマー RR250A 90,000 2 RR250B 360, ml ,500 25回 7730S 18, , 一式 EM 回 CY240S CY240 55, ,800 11,0 0 0 R161A 96,000 R161B 180,000 RR180A 42,000 RR182A 42,000 RR183A 42,000 RR184A 42,000 RR277A 384,000 CY232 57, 回 ,000 25テスト RR273A 250,000 25テスト RR274A 146, ,000 28, , 回 96テスト ページにも製品一覧 を掲載していますのでご確認ください 各製品の紹介ページに該当するライセンス情報の記号を付記しています 対応するライセンスの詳細は 70 ページをご覧ください 本カタログで紹介した製品は 研究用あるいは食品 環境分析用 または検便検査用として販売しております ヒト 動物への医療 臨床診断用には使用しないようご注意ください また 食品 化粧品 家庭用品等として使用しないでください タカラバイオの承認を得ずに製品の再販 譲渡 再販 譲渡のための改変 商用製品の製造に使用することは禁止されています 本カタログに記載された社名および製品名は 特に記載がなくても各社の商標または登録商標です 本カタログ記載の価格は 2018 年 5 月1日現在の希望小売価格です 価格に消費税は含まれておりません 東京支店 関西支店 TEL TEL FAX FAX テクニカルサポートライン 製品の技術的なご質問に専門の係がお応えします TEL Website FAX 年12 月修正 05K