J UOEH( 産業医科大学雑誌 )40( 1 ): 45-52(2018) 45 [ 原著 ] 男子尿道炎からの Mycoplasma genitalium 検出のためのキットの検討 1, 濵砂良一 2 *, 松本正広 2, レティファン 2, 藤本直浩 2 2, 松本哲朗 1 国家公務員共済組合
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- まいえ いのら
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1 J UOEH( 産業医科大学雑誌 )40( 1 ): 45-52(2018) 45 [ 原著 ] 男子尿道炎からの Mycoplasma genitalium 検出のためのキットの検討 1, 濵砂良一 2 *, 松本正広 2, レティファン 2, 藤本直浩 2 2, 松本哲朗 1 国家公務員共済組合連合会新小倉病院泌尿器科 2 産業医科大学医学部泌尿器科学教室 要旨 :Mycoplasma genitalium は性感染症である男子尿道炎の原因微生物である 我が国では非淋菌性尿道炎患者の15-25% の尿から検出される 世界的にマクロライド耐性, キノロン耐性 M. genitalium の出現が, 尿道炎治療を行う上で問題となっている しかし, わが国では M. genitalium を検出するための保険適用を有する検査キットがない 今回, Seegene 社の性感染症関連微生物 7 種同時検出キット (Anyplex TM II STI-7 Detection; Neisseria gonorrhoeae,chlamydia trachomatis,m. genitalium,mycoplasma hominis,ureaplasma urealyticum,ureaplasma parvum,trichomonas vaginalis を検出 ) を用いて,M. genitalium の検出に関する検討を行った 本キットの検出限界を検討するため, 保存する M. genitalium 17 株を用いた SP4 mycoplasma medium で増殖した M. genitalium 培養液から,M. genitalium のDNA を抽出し,M. genitalium のDNA コピー数を測定した M. genitalium のDNA 抽出液を 10 1 ~10 8 倍に希釈した希釈液を作成した それぞれの希釈液を Anyplex TM II STI-7 Detection で反応させ, もっとも希釈した液で M. genitalium が検出されたものを検出限界とした 17 株中 14 株で, 希釈限界における DNA コピー数は 10 genome equivalent (geq)/reaction 未満で,3 株で10 geq/reaction 以上であった その中でもっとも高い DNA コピー数は 48.4 geq/reaction であり, 約 50 geq/reaction がAnyplex TM II STI-7 Detection により保証される M. genitalium のDNA コピー数と考えられた また, 保存する尿検体から DNA を抽出し,MgPa gene の一部を増幅させる PCR 法とAnyplex TM II STI-7 Detection とで,M. genitalium の検出率を比較した 両方法での陽性一致率は 96.4% (27/28), 陰性一致率は 98.6% (71/72) であった 両方法との間に 1 例ずつの不一致があったものの, 陽性, 陰性一致率とも高かった Seegene 社の性感染症関連微生物 7 種同時検出キット,Anyplex TM II STI-7 Detection を培養液, 尿検体の面から検証し,M. genitalium 検出に関して有用性が高いことが分かった キーワード :Mycoplasma genitalium,anyplex TM II STI-7 Detection, 検出限界, 尿検体, 尿道炎 (2018 年 1 月 12 日受付,2018 年 2 月 2 日受理 ) はじめに尿道炎は男性の性感染症のなかで, もっとも頻度の高い疾患である [1] 尿道炎は古典的に, 淋菌の有無により淋菌性尿道炎と非淋菌性尿道炎 (non-gonococcal urethritis: NGU) に分類されてきた [1] NGU には数多くの微生物が関与している可能性が高いが, このなかでもっとも頻度高く分離される微生物が Chlamydia trachomatis である おおよそ 50% の NGU 症例の尿検体からC. trachomatisが検出され, この尿道炎をクラミ ジア性尿道炎 (chlamydial urethritis) と呼んでいる [1] これら以外の尿道炎, すなわち淋菌も C. trachomatisも分離されない尿道炎は非クラミジア性非淋菌性尿道炎 (non-chlamydial NGU: NCNGU) と呼ばれるようになった [1] NCNGU 症例の尿検体からは, さまざまな微生物が分離されることが明らかになっており [2], このなかでもっとも研究が進み, その病原性が明らかとなっているものが Mycoplasma genitaliumである M. genitalium は Mollicutes 綱に属する微生物である Mollicutes 綱には多くの菌種が属し, ヒトを含む脊椎 * 対応著者 : 濵砂良一, 国家公務員共済組合連合会新小倉病院泌尿器科, 北九州市小倉北区金田 1 丁目 3 番 1 号,Tel: ,Fax: , hamaryo@med.uoeh-u.ac.jp
2 46 濵砂良一, 他 生物, 昆虫, 植物, 下水や土壌の一般環境からも検出される ヒトからは Mycoplasma 属と Ureaplasma 属に含まれる種が分離され, その一部はヒトに対して病原性をもつ このなかでマイコプラズマ肺炎の原因となる M. pneumoniae がもっとも知られているが, その極めて近縁の種である M. genitaliumは性器感染症の原因となる [3] M. genitalium は 1980 年に Taylor-Robinson と Tully らによりはじめて分離された [4] その後 Taylor- Robinson が以下の変法コッホの原則 (modified Henle- Koch postulates) を提唱し [5], その病原性に対する研究が行われた すなわち,1) 症状のある患者からは症状のないものと比較すると高頻度で M. genitalium が検出されること,2) 何らかの方法で M. genitalium の抗体の産生が確認されること,3)M. genitaliumに薬剤感受性のある抗菌薬が臨床的に有効であること,4)m. genitaliumを動物に感染させた時,m. genitaliumが再度動物から検出されること, さらにヒトと同様な病態を起こすことであり, 基礎的, 臨床的な研究をもとに, 現在では男性の尿道炎のほか, 子宮頸管炎や骨盤内臓器感染症において, その病原性が確認されている [3] しかし,1980 年に M. genitaliumの標準株であるg37 T と M30 が分離されて以降, 新たな M. genitalium 株は分離されなかった 当初の予想に反して, その臨床検体からのM. genitaliumの培養は極めて困難であったからである 1996 年に Jensen らが Vero 細胞を使用した培養法を開発し [6], 現在までに 50 数株の M. genitalium 株が確立しているにすぎない [7-9] 我々の経験では, 臨床検体からのM. genitalium の分離培養成功率は約 1% 前後であり, 株の確立までに最低 6ヶ月を要する [8,9] 従って,M. genitaliumの検出には, 培養法以外の方法が必要であり, 現在, 核酸増幅法 (nucleic acid amplification test: NAAT) を用いた検出法が一般的である 1991 年に最初のM. genitaliumの NAAT が報告された [10,11] しかし, その後,M. genitalium の検出キットが世界的に広まったわけではない [3] M. genitalium に対してマクロライド, キノロン系抗菌薬は高い抗菌活性を有していたため,NGU を治療する際,C. trachomatis を標的にこれらの抗菌薬による治療を行えば, 同時に M. genitalium も治療できていたのである しかし, 近年, azithromycin(azm) による治療失敗例が多数報告され, その検体からマクロライド耐性 M. genitaliumが分離培養された [12] 加えて, マクロライド耐性 M. genitalium に有効であるmoxifloxacin (MFLX) による治療失敗例が報告されるようになり [13],M. genitaliumの検出が NGU を治療するにあたってひじょうに重要となってきたのである 我が国においても同様にマクロライ ドの治療失敗例が報告され [9], マクロライド耐性 M. genitalium 株は, 世界的に蔓延している 我が国では, 旧三菱化学メディエンス株式会社 ( 現株式会社 LSI メディエンス ) が開発した multiplex PCR 法 (M. genitalium, Ureaplasma parvum, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum を同時検出 ) が使用可能であるが [14], 残念ながら保険適用がなく, その他の検出法は実験室レベルである 今回, 我々は世界数ヶ国で発売されている Seegene 社の性感染症関連微生物 7 種 (Neisseria gonorrhoeae, C. trachomatis, M. genitalium, M. hominis, U. urealyticum, U. parvum, Trichomonas vaginalis) 同時検出キットを用いて,M. genitaliumの検出を行い, そのキットの性能および臨床的有用性を検討した 方法 Seegene 社 (Seoul, Korea) の性感染症関連微生物 7 種同時検出キットを用いた 本製品は韓国 Seegene 社が開発したキット (Anyplex TM II STI-7 Detection)[15,16] で, エーディア株式会社 ( 東京 ) との共同研究にて本研究を行った Seegene 社製のキットは,real-time PCRと融解曲線解析を組み合わせ, 本キットの試薬で 1 本のチューブを用いて 7 種類の微生物 (N. gonorrhoeae, C. trachomatis, M. genitalium, M. hominis, U. urealyticum, U. parvum, T. vaginalis) の検出が可能となる M. genitalium の検出のための標的遺伝子は gyrase gene である 使用したキット製品は, エーディア株式会社 ( 東京 ) より供与を受けた 供与された内容は,Anyplex TM II STI-7 Detectionによる測定のための測定試薬 Anyplex TM II STI-7 Detection キット (Seegene, Seoul, Korea) および測定機器の CFX96 TM Real-Time PCR Detection System (Bio-rad, Ca, USA) である 7 培養液における性感染症関連微生物 7 種同時検出キットの検出限界 ( 測定保証 DNAコピー数 ) を測定するため, 産業医科大学泌尿器科で保有する M. genitalium 17 株を用いた 実験は, 産業医科大学泌尿器科の実験室 (P2) にて行った 用いた株は標準株の G37 T, 日本由来 4 株 (M6282,M6283,M6284,M6287), デンマーク由来 4 株 (M2282,M2300,M2321,M2341), スウェーデン由来 6 株 (M6257,M6280,M6285,M6286,M6328, M6489), フランス由来 2 株 (M6090,M6151) である [7, 8] これらの株は -80 C にて保存されており融解後,
3 男子尿道炎の Mycoplasma genitalium 検出キットの検討 47 液体培地である SP4 mycoplasma medium[17] に接種後 37 C,5% CO 2 存在下で培養した 増殖は,pH の変化によりSP4 mycoplasma medium の培地色が赤から黄色になることにより確認した 増殖した M. genitaliumを含むsp4 mycoplasma medium より,3 種類の DNA 抽出キット,GeneAll Ribospin TM vrd (GeneAll Biotechnology Co. Ltd, Seoul, Korea),QIAamp DNA Mini Kit ( 株式会社キアゲン, 東京, 日本 ),Chelex 100 Resin (Bio-rad, Ca, USA) により M. genitalium の DNAを抽出した Ge- neall Ribospin TM vrdと QIAamp DNA Mini Kit による DNA 抽出法は, それぞれの製品マニュアルに準じた Chelex 100 Resin による DNA 抽出法は,Jensen らの報告 [18] に準じた M. genitalium の DNAコピー数は, MgPa gene の一部を増幅する real-time PCR 法 (MgPa gene PCR 法 )[18] により測定した MgPa gene PCR 法における最終反応容量は,30 μl に調整した さらに, それぞれの方法で抽出した DNA 抽出液を DNA bufferにより10 倍希釈し, その希釈液を作成し (10 1 ~10 8 倍希釈まで ), それぞれの希釈液を,Anyplex TM II STI-7 Detection の製品マニュアル (Choe らが行った方法 [19] と同様の方法 ) に準じて検査し,M. genitaliumの検出の有無を調べた それぞれの株において,M. genitalium が検出された最大希釈液を検出限界とし, 希釈していない DNA コピー数より計算して, 検出限界である希釈列に M. genitalium のDNAが何コピー存在するかを計算した DNA コピー数は genome equivalent (geq)/reactionとして表記した [18] 倫理審査本研究は産業医科大学倫理委員会で審査され, その実施内容は同委員会にて承認された ( 第 H 号 ) 結果 7 M. genitalium 17 株の M. genitalium が増殖したそれぞれの培養液から,3 方法により M. genitaliumの DNAを抽出した 17 株すべてについて,3 方法により抽出した DNA 抽出液から,Anyplex TM II STI-7 Detectionにより M. genitalium は検出可能であった さらにそれぞれの DNA 抽出液の希釈列について,Anyplex TM II STI-7 Detectionにより M. genitalium を検出した Table 1に GeneAll Ribospin TM vrd(anyplex TM II STI-7 Detectionにおける推奨 DNA 抽出法 ) にて抽出した 17 株それぞれの M. genitalium の DNAコピー数と, 希釈列における Anyplex TM II STI-7 Detectionによる M. genitaliumの検出の有無を示す 希釈限界における M. genitalium の DNAコピー数は,17 株中 14 株では 10 geq/reaction 未満であったが,3 株で10 geq/reaction 以上であり,M6286 株では 48.4 geq/reaction であった 従って,GeneAll 法により DNA 抽出を行った場合, 約 50 geq/reactionが Anyplex TM II STI-7 Detection により保証される M. genitaliumの DNAコピー数と考えられた Takahashi らの臨床研究 [20] に使用され,-80 C に保存された尿検体を用いて, 性感染症関連微生物 7 種同時検出キットによる M. genitaliumの検出の有用性を検討した 検体はすべて保存し微生物の遺伝子研究に使用することに各個人の同意を得ている さらにすでに個人が特定できないように匿名化されており, 保存検体には検体番号のみが記載され保存されている これらの尿検体からランダムに 100 検体を抽出した 尿検体からはGeneAll Ribospin TM vrd (GeneAll Biotechnology Co. Ltd, Seoul, Korea) により DNAを抽出した DNA の抽出法は製品マニュアルに準じた これらの DNA サンプルを用いて,MgPa gene PCR 法と Anyplex TM II STI-7 Detectionの 2 法により M. genitaliumを検出した結果を比較検討した M. genitalium ランダムに検出した100 検体中のAnyplex TM II STI-7 Detection による測定では,N. gonorrhoeae,c. trachomatis, M. genitalium,u. urealyticum の陽性率は, それぞれ17%, 52%,28%,24% であった M. genitalium の検出における Anyplex TM II STI-7 Detection とMgPa gene PCR 法との比較をTable 2に示す 陽性一致率 96.4%(27/28), 陰性一致率 98.6%(71/72) と, 両方法との間に1 例ずつの不一致があったものの, 陽性, 陰性一致率とも高かった 考察男子尿道炎からのM. genitaliumの検出頻度は, 我が国ではおおよそ15-25% 程度である [20-22] 約 50% の患者からはC. trachomatisが検出され,n. gonorrhoeae が約 30% の患者から検出される しかし, ヨーロッパではM. genitaliumの検出率が高く,c. trachomatisの分離頻度とほぼ同じでそれぞれ40% 程度である [3] し
4 48 濵砂良一, 他 Table 1. M. genitalium DNA copy number and reaction of diluted DNA samples to detect M. genitalium by Anyplex TM II STI-7 Detection Strain name DNA copy number (geq/reaction) Diluted DNA samples DNA number as the detection limit (geq/reaction) G37 T P P P P P P P N 3.08 M P P P P P P P N 2.12 M P P P P P P N N 17.8 M P P P P P P P P < 0.30 M P P P P P P P N 1.66 M P P P P P P P N 2.49 M P P P P P P P N 1.05 M P P P P P P P N 1.34 M P P P P P N N N 48.4 M P P P P P P P N 10.7 M P P P P P P P N 0.88 M P P P P P P P N 1.44 M P P P P P P N N 6.00 M P P P P P P P N 0.86 M P P P P P P P N 1.85 M P P P P P P P N 1.47 M P P P P P P P N 1.29 geq: genome equivalent, P: positive reaction, N: negative reaction Table 2. The comparison to detect M. genitalium between by Anyplex II STI-7 Detection and MgPa gene PCR MgPa gene PCR Positive Negative Total Concordant rate Anyplex TM II STI-7 Detection Positive Positive concordant rate 96.4% (27/28) Negative Negative concordant rate 98.6% (71/72) Total たがって, ヨーロッパにおいては, 我が国よりM. genitaliumの重要性が高く, すでにいくつかのM. genitalium の検出キットが発売されている その多くは multiplex PCR であり,Bio-rad 法 (N. gonorrhoeae,c. trachomatis,m. genitaliumの同時検出 )[23] や,Amplisens 法 (N. gonorrhoeae,c. trachomatis,m. genitalium,t. vaginalis の同時検出 )[24] が使用されている Seegene 社のAnyplex TM II STI-7 Detectionもすでにヨーロッパでは使用されているキットである C. trachomatis に対しては,AZM および doxycycline (DOXY) はほぼ同様に有効であることが示されている [25] M. genitalium に対しても AZM と DOXYを使用 した多くの randomized control studyが行われ,azm の有効性が高いことが示されてきた [3,9] したがって, NGUに対しての治療は, 世界的にも AZMの使用が高かった 我が国ではキノロン薬を第一選択薬に使用することがあり [1], 世界的な指針とは異なっている しかし,2006 年にオーストラリアより, マクロライド無効症例が報告された Bradshaw らは M. genitalium が検出された 34 名 ( 尿道炎患者 31 名と無症状男性 3 名 ) を AZM 1 gにより単回治療を行った [26] しかし,9 名 (9/32: 28%,2 例は drop out) では M. genitalium は除菌されず, さらに 3 名に AZMを 3 回追加投与するも無効であった これらの症例から AZM 耐性株が検出され,
5 男子尿道炎の Mycoplasma genitalium 検出キットの検討 49 我々はマクロライド耐性がマクロライドの標的部位である23S rrna の domain Vの point mutationと関連があることを報告した [12] 本変異は, マクロライド耐性 M. pneumoniaeで指摘されている変異と同様である [27] この遺伝子変異を持つ M. genitalium 遺伝子は世界各国から報告されており, オーストラリア, デンマーク, 我が国の検討ではほぼ 50% に達していることより [28-31],M. genitaliumの検出の意義は高まったと考えてよい つまり,AZM に感受性の高い C. trachomatis のみをターゲットにした NGUの治療は困難になったということである オーストラリアでは M. genitaliumが検出され, さらにマクロライド耐性遺伝子も検出されるキットが発売されており, マクロライド耐性 M. genitalium に有効なキノロン薬, 特に MFLXを選択する際に有用であると言われている [31] しかし, 近年 MFLX 治療無効症例が増加しており [13], さらに治療が困難になると考えられる 我が国では sitafloxacin (STFX) がマクロライド耐性 M. genitalium に有効であり,M. genitalium 検出キットが保険適用となれば, さらにNGU の治療効果は向上すると考えられる 性感染症関連微生物 7 種同時検出キット,Anyplex TM II STI-7 DetectionのM. genitaliumの検出限界は, 製品マニュアルによると 50 copies/reaction とされており, NAAT としては高いほうではない しかし, 他の検出キットでは, 本検討のように複数の分離株を使用しているわけではなく, 標準株であるG37 T のみの検出限界が示されているにすぎない また, 検出限界を示していないキットもある 本検討により, 本キットのG37 T の検出限界は 3 geq/reaction と考えられ, 他の微生物に対するNAAT と比較しても遜色ないものである 臨床検体における検出率も, 世界的に標準であると考えられる 尿検体からの検討でも MgPa gene PCR 法と比較して検出感度はほぼ同等であると考えてよく,Anyplex TM II STI-7 Detectionは, 男性の尿道炎のM. genitaliumの検出に十分に使用しうるキットと考えられる 本キットの問題点は multiplex PCRであるという点である 本キットは7 種類の微生物を検出可能である このなかで N. gonorrhoeae,c. trachomatis,m. genitalium の尿道炎に対する病原性は確立されている T. vaginalis は男子尿道炎を引き起こすことは明らかであるが, 無症状の症例が多いこと, 男性尿道からの T. vaginalis の分離頻度が低いことより臨床上有用であるかは不明である [32] U. urealyticum は尿道炎の原因となりうる病原体であるが [33], 健常男性からも高い頻度で分離されることが知られており, その病原性はいまだ確立されていない [34] また,U. parvum,m. hominis は男性の尿 道炎の病原体ではない U. parvumは新生児に色々な疾患を引き起こすとされるが [35], いまだ明らかとなっておらず, 母体膣からのコンタミネーションである可能性もある M. hominis は女性性器の手術後に周術期感染症を起こすことがあるが, 尿道炎は起こさない [35,36] これら病原性のない病原体を同時に検出した場合, その微生物の病原性に関わらず治療される可能性がある 実際, これらの微生物が検出されたばかりに, 患者が治療を求め, 不要と考えられる治療が行われていることが報告されている 我が国で病原性のない微生物の検出が, 保険適用となる可能性は低いため, 今後, 検出する微生物を制限したキットの開発が待たれる 理想的には M. genitaliumのみを検出するキットが必要であると考えられるが, コストや流通の面からの考慮が必要であると考える さらに, 男性のみでなく, 女性の性感染症への適用も考慮すべきであり, 今後も十分な検討が必要である 結語 Seegene 社の性感染症関連微生物 7 種同時検出キット,Anyplex TM II STI-7 Detectionの有効性を培養液, 尿検体の面から考察し,M. genitalium 検出に関して有用性が高いことが分かった 利益相反本論文に関して, 利益相反関係にあるのは, 産業医科大学と株式会社エーディアの間に締結された共同研究 (M. genitalium を含む性感染症検出キット評価に関する研究, 第 25 共 17 号, 第 26 共 19 号, 第 27 共 10 号, 第 28 共 17 号 ) である 引用文献 1. 日本性感染症学会 (2016): 性感染症診断 治療ガイドライン 2016 日本性感染症学会誌 27(Suppl. 1): You C, Hamasuna R, Ogawa M, Fukuda K, Hachisuga T, Matsumoto T & Taniguchi H (2016): The first report: An analysis of bacterial flora of the first voided urine specimens of patients with male urethritis using the 16S ribosomal RNA gene-based clone library method. Microb Pathog 95: Taylor-Robinson D & Jensen JS (2011): Mycoplasma genitalium: from Chrysalis to multicolored butterfly.
6 50 濵砂良一, 他 Clin Microbiol Rev 24: Tully JG, Taylor-Robinson D, Cole RM & Rose DL (1981): A newly discovered mycoplasma in the human urogenital tract. Lancet 1(8233): Taylor-Robinson D (1983): The role of mycoplasmas in non-gonococcal urethritis: a review. Yale J Biol Med 56: Jensen JS, Hansen HT & Lind K (1996): Isolation of Mycoplasma genitalium strains from the male urethra. J Clin Microbiol 34: Jensen JS, Fernandes P & Unemo M (2014): In vitro activity of the new fluoroketolide solithromycin (CEM-101) against macrolide-resistant and -susceptible Mycoplasma genitalium strains. Antimicrob Agents Chemother 58: Hamasuna R, Osada Y & Jensen JS (2007): Isolation of Mycoplasma genitalium from first-void urine specimens by coculture with Vero cells. J Clin Microbiol 45: Hamasuna R (2013): Identification of treatment strategies for Mycoplasma genitalium-related urethritis in male patients by culturing and antimicrobial susceptibility testing. J Infect Chemother 19: Jensen JS, Uldum SA, Sondergard-Andersen J, Vuust J & Lind K (1991): Polymerase chain reaction for detection of Mycoplasma genitalium in clinical samples. J Clin Microbiol 29: Palmer HM, Gilroy CB, Furr PM & Taylor-Robinson D (1991): Development and evaluation of the polymerase chain reaction to detect Mycoplasma genitalium. FEMS Microbiol Lett 61: Jensen JS, Bradshaw CS, Tabrizi SN, Fairley CK & Hamasuna R (2008): Azithromycin treatment failure in Mycoplasma genitalium-positive patients with nongonococcal urethritis is associated with induced macrolide resistance. Clin Infect Dis 47: Tagg KA, Jeoffreys NJ, Couldwell DL, Donald JA & Gilbert GL (2013): Fluoroquinolone and macrolide resistance-associated mutations in Mycoplasma genitalium. J Clin Microbiol 51: Yoshida T, Ishiko H, Yasuda M, Takahashi Y, Nomura Y, Kubota Y, Tamaki M, Maeda S & Deguchi T (2005): Polymerase chain reaction-based subtyping of ureaplasma parvum and ureaplasma urealyticum in firstpass urine samples from men with or without urethritis. Sex Transm Dis 32: Lee SJ, Park DC, Lee DS, Choe HS & Cho YH (2012): Evaluation of Seeplex STD6 ACE Detection kit for the diagnosis of six bacterial sexually transmitted infections. J Infect Chemother 18: Bercot B, Amarsy R, Goubard A et al (2015): Assessment of coinfection of sexually transmitted pathogen microbes by use of the anyplex II STI-7 molecular kit. J Clin Microbiol 53: Tully JG, Whitcomb RF, Clark HF & Williamson DL (1977): Pathogenic mycoplasmas: cultivation and vertebrate pathogenicity of a new spiroplasma. Science 195(4281): Jensen JS, Bjornelius E, Dohn B & Lidbrink P (2004): Use of TaqMan 5ʼ nuclease real-time PCR for quantitative detection of Mycoplasma genitalium DNA in males with and without urethritis who were attendees at a sexually transmitted disease clinic. J Clin Microbiol 42: Choe HS, Lee DS, Lee SJ, Hong SH, Park DC, Lee MK, Kim TH & Cho YH (2013): Performance of Anyplex II multiplex real-time PCR for the diagnosis of seven sexually transmitted infections: comparison with currently available methods. Int J Infect Dis 17: e1134 -e Takahashi S, Hamasuna R, Yasuda M et al (2013): Clinical efficacy of sitafloxacin 100 mg twice daily for 7 days for patients with non-gonococcal urethritis. J Infect Chemother 19: Ito S, Yasuda M, Seike K, Sugawara T, Tsuchiya T, Yokoi S, Nakano M & Deguchi T (2012): Clinical and microbiological outcomes in treatment of men with non-gonococcal urethritis with a 100-mg twice-daily dose regimen of sitafloxacin. J Infect Chemother 18: Hamasuna R, Takahashi S, Kiyota H, Yasuda M, Hayami H, Arakawa S, Tomono K & Matsumoto T (2011): Effect of gatifloxacin against Mycoplasma genitaliumrelated urethritis: an open clinical trial. Sex Transm Infect 87: Le Roy C, Le Hen I, Clerc M, Arfel V, Normandin F, Bebear C & de Barbeyrac B (2012): The first performance report for the Bio-Rad Dx CT/NG/MG assay for simultaneous detection of Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae and Mycoplasma genitalium in urogenital samples. J Microbiol Methods 89: Gaydos CA (2017): Mycoplasma genitalium: Accurate
7 男子尿道炎の Mycoplasma genitalium 検出キットの検討 51 Diagnosis Is Necessary for Adequate Treatment. J Infect Dis 216(Suppl.2): S406-S Lau CY & Qureshi AK (2002): Azithromycin versus doxycycline for genital chlamydial infections: a metaanalysis of randomized clinical trials. Sex Transm Dis 29: Bradshaw CS, Jensen JS, Tabrizi SN, Read TR, Garland SM, Hopkins CA, Moss LM & Fairley CK (2006): Azithromycin failure in Mycoplasma genitalium urethritis. Emerg Infect Dis 12: Morozumi M, Hasegawa K, Kobayashi R et al (2005): Emergence of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae with a 23S rrna gene mutation. Antimicrob Agents Chemother 49: Kikuchi M, Ito S, Yasuda M, Tsuchiya T, Hatazaki K, Takanashi M, Ezaki T & Deguchi T (2014): Remarkable increase in fluoroquinolone-resistant Mycoplasma genitalium in Japan. J Antimicrob Chemother 69: Uno M, Deguchi T, Komeda H, Yasuda M, Tamaki M, Maeda S, Saito I & Kawada Y (1996): Prevalence of Mycoplasma genitalium in men with gonococcal urethritis. Int J STD AIDS 7: Murray GL, Bradshaw CS, Bissessor M, Danielewski J, Garland SM, Jensen JS, Fairley CK & Tabrizi SN (2017): Increasing Macrolide and Fluoroquinolone Resistance in Mycoplasma genitalium. Emerg Infect Dis 23: Tabrizi SN, Tan LY, Walker S et al (2016): Multiplex Assay for Simultaneous Detection of Mycoplasma genitalium and Macrolide Resistance Using PlexZyme and PlexPrime Technology. PLoS One 11: e Schwebke JR & Hook EW 3rd (2003): High rates of Trichomonas vaginalis among men attending a sexually transmitted diseases clinic: implications for screening and urethritis management. J Infect Dis 188: Deguchi T, Yoshida T, Miyazawa T, Yasuda M, Tamaki M, Ishiko H & Maeda S (2004): Association of Ureaplasma urealyticum (biovar 2) with nongonococcal urethritis. Sex Transm Dis 31: Wetmore CM, Manhart LE, Lowens MS, Golden MR, Jensen NL, Astete SG, Whittington WL & Totten PA (2011): Ureaplasma urealyticum is associated with nongonococcal urethritis among men with fewer lifetime sexual partners: a case-control study. J Infect Dis 204: Larsen B & Hwang J (2010): Mycoplasma, Ureaplasma, and adverse pregnancy outcomes: A fresh look. Infect Dis Obstet Gynecol 2010; 2010: Koshiba H, Koshiba A, Daimon Y, Noguchi T, Iwasaku K & Kitawaki J (2011): Hematoma and abscess formation caused by Mycoplasma hominis following cesarean section. Int J Womens Health 3: 15-18
8 52 濵砂良一, 他 Validation of the Kit for Detecting Mycoplasma Genitalium from the Male Urethritis Ryoichi Hamasuna 1,2, Masahiro Matsumoto 2, Phuong Thi Le 2, Naohiro Fujimoto 2 and Tetsuro Matsumoto 2 1 Department of Urology, Federation of National Public Services and Affiliated Personal Mutal Associations, Shin-Kokura Hospital. Kokurakita-ku, Kitakyushu , Japan 2 Department of Urology, School of Medicine, University of Occupational and Environmental Health, Japan. Yahatanishi-ku, Kitakyushu , Japan Abstract : Mycoplasma genitalium is one of the pathogenic microorganisms in male urethritis as a sexually transmitted infection (STI). M. genitalium is detected in the urine specimens of 15-25% male patients with urethritis. The emergence of macrolide- or fluoroquinolone-resistant M. genitalium has become a serious problem in the treatment of male urethritis worldwide, but there is no commercial-based detecting kits accepted by the national insurance in Japan. In this study, we tested the validity of a molecular kit for detecting seven microorganisms related to STI (Anyplex TM II STI-7 Detection which detects Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, M. genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Trichomonas vaginalis) produced by Seegene company in Korea. Seventeen M. genitalium strains were used to determine the detection limit of M. genitalium. M. genitalium DNA samples were extracted from M. genitalium strains and the diluted DNA samples were reacted to detect M. genitalium by the Anyplex TM II STI-7 Detection. The detection limit was determined as the maximum dilution of DNA samples and the number of M. genitalium DNA copies calculated. In this study, the minimum DNA copies to detect M. genitalium by the Anyplex TM II STI-7 Detection was determined to be around 50 per reaction. The detection rates of M. genitalium in urine specimens were compared between MgPa gene PCR and the Anyplex TM II STI-7 Detection. The positive and negative concordant rates were high as 96.4% (27/28) and 98.6% (71/72), respectively. The validity of the kit for detecting seven microorganisms related to STI (Anyplex TM II STI-7 Detection) was high and thought to be useful for clinical uses. Key words: Mycoplasma genitalium, Anyplex TM II STI-7 Detection, detection limit, urine specimen, urethritis. J UOEH 40(1):45-52(2018)
日本化学療法学会雑誌第66巻第2号
173 Table 1.Detection rates of Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum, Haemophilus influenzae and adenovirus from male urethritis in Urethritis No.
400 46 THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS 65 6 Dec. 2012 LVFX 100 mg 3 / 7 150 mg 2 / 7 2 2006 2008 9 LVFX PK PD 2009 7 100 mg 1 3 500 mg 1 1 AUC/MIC
Dec. 2012 THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS 65 6 399 45 2012 11 5 LVFX 500 mg 1 1 20 Chlamydia trachomatis C. trachomatismycoplasma genitalium M. genitalium LVFX 1 500 mg 1 1 7 22 22 C. trachomatis 17
Fig. 1 Chemical structure of TE-031 Code number: TE-031 Chemical name: (-) (3R, 4S, 5S, 6R, 7R, 9R, 11R, 12R, 13S, 14R)-4-[(2, 6-dideoxy-3-C-methyl-3-
Fig. 1 Chemical structure of TE-031 Code number: TE-031 Chemical name: (-) (3R, 4S, 5S, 6R, 7R, 9R, 11R, 12R, 13S, 14R)-4-[(2, 6-dideoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-a-L-ribo-hexopyranosyl) oxy]-14-ethyl-12,
染症であり ついで淋菌感染症となります 病状としては外尿道口からの排膿や排尿時痛を呈する尿道炎が最も多く 病名としてはクラミジア性尿道炎 淋菌性尿道炎となります また 淋菌もクラミジアも検出されない尿道炎 ( 非クラミジア性非淋菌性尿道炎とよびます ) が その次に頻度の高い疾患ということになります
2015 年 3 月 4 日放送 淋菌 クラミジア感染症の現状と問題点 産業医科大学泌尿器科講師濵砂良一主な性感染症淋菌感染症およびクラミジア感染症は 性感染症の一つであり 性感染症のなかで最も頻度の高い疾患です 性感染症とは 主に性的な行為によって病原体が感染する疾患であり この淋菌 クラミジア感染症の他に 梅毒 性器ヘルペス 尖圭コンジローマ HIV 感染症など数多くの疾患が含まれます これらの疾患の一部は
48 皮 膚 第29巻 第1号 昭 和62年2月 第1-b図 第1-a図 第1図Micro Trak法 アッ 皮 細 胞 中あ るいは細 pin point sizeの による 胞 外に,アッ 粒子と 直 接 塗 抹 標本から プル グ リ ー ン に光 プル し てelelnentary る 粒子
Chlamydia trachomatis-syphilis-micro Trak Mariko SEISHIMA, M. D., Satoshi OKUMURA, M. D. and Michihiro OHTANI, M. D. Megumi WATANABE, Ph. D., Ryo MATSUMOTO, Ph. D., Masayoshi TSUTSUMI, Ph. D. and Kazumasa
CHEMOTHERAPY
CHEMOTHERAPY VOL.41 S-2 Laboratory and clinical evaluation of teicoplanin CHEMOTHERAPY AUG. 1993 VOL.41 S-2 Laboratory and clinical evaluation of teicoplanin Table 1. Comparative in vitro activity of teicoplanin
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E Societe de Pathologie Infectieuse de Langue Francaise (, 1991) E Spanish Thoracic Society (1992) E American Thoracic Society (ATS : 1993. ü ù2001 ) E British Thoracic Society (1993, ü è2001 ) E Canadian
Key words : R-plasmid, Urinary tract infection, E. coli Fig. 1. MIC distribution against E. coli isolated from urinary tract (366 strains) and isolation - frequencies of drug-resistant strains Table 1.
微生物学的検査 >> 6B. 培養同定検査 >> 6B615. 検体採取 患者の検査前準備検体採取のタイミング記号添加物 ( キャップ色等 ) 採取材料採取量測定材料リグアニジン塩酸塩尿 5 ml 検体ラベル ( 単項目オーダー時 ) ホンハ ンテスト 注 外 N60 ク
6083 6. 微生物学的検査 >> 6B. 培養同定検査 >> 6B615. nucleic acid detection (chlamydia trachomatis) 連絡先 : 3764 基本情報 6B615 核酸同定 ( 淋菌, クラミジア トラコマティス ) 分析物 JLAC10 診療報酬 識別材料 001 尿 ( 含むその他 ) 測定法 862 リアルタイムPCR 法 結果識別 第 2
semen quality or those without WBC in semen. In the patients with azoospermia and normal FSH levels (normogonadotropic azzospermia), the antibody (IgG
CLINICAL STUDIES OF UROGENITAL INFECTIONS WITH CHLAMYDIA TRACHOMA TIS Report 2. The Epidemiology of Chlamydial Infections in Okayama District in Japan and Detection of Antibodies to Chlamydiae in the Sera
366 12 THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS 65 6 Dec. 2012 1 8 DNA 2,3 16 12 20 171 2008 12 2010 11 2 3,558 4.44% 1.65% 1.17% 90% 9 Escherichia coli -
Dec. 2012 THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS 65 6 365 11 sita oxacin 1 1 1 1 1 1 2 2 3 3 1 1 1 2 3 2012 9 14 sita oxacin STFX 50 mg 10% 2008 1 2008 12 2010 11 2 STFX 1,452 91.4% 1,235/1,351 95.9% 466/486
1) Kojima H: Culture of ejaculate for Neisseria gonorrhoeae, 1st Serually Transmitted Diseases World Congress, San Juan, 11. 19, 1981. 9) Kojima H, Mori C: Clinical studies on Conococcal and Chlamydial
The clinical characteristics of Mycoplasma pneumoniae pneumonia in children younger than 6 years old Nobue Takeda1,2),Tomomichi Kurosaki1),Naruhiko Ishiwada2),Yoichi Kohno2) 1)Department of Pediatrics,Chiba
1272 CHEMOTHERAPY MAR. 1975
1272 CHEMOTHERAPY MAR. 1975 VOL. 23 NO. 3 CHEMOTHERAPY 1273 Fig. 2 Minimal inhibitory concentration of aminoglycosides against 50 strains of Klebsiella Fig. 1 Minimal inhibitory concentration of aminoglycosides
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Table 1.Resistance criteria Fig.1.The resistance rates of piperacillin,ceftazidime, cefsulodin,imipenem,aztreonam,gentamicin,tobramycin,amikacin,isepamicin,fosfomycin and ofloxacin against 2,793 strains
coccus aureus Corynebacterium sp, Haemophilus parainfluenzae Klebsiella pneumoniae Pseudornonas aeruginosa Pseudomonas sp., Xanthomonas maltophilia, F
VOL.43 S-1 coccus aureus Corynebacterium sp, Haemophilus parainfluenzae Klebsiella pneumoniae Pseudornonas aeruginosa Pseudomonas sp., Xanthomonas maltophilia, Flavobacter- Table 1. Concentration of grepafloxacin
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2 The Bulletin of Meiji University of Integrative Medicine 3, Yamashita 10 11
1-122013 1 2 1 2 20 2,000 2009 12 1 2 1,362 68.1 2009 1 1 9.5 1 2.2 3.6 0.82.9 1.0 0.2 2 4 3 1 2 4 3 Key words acupuncture and moxibustion Treatment with acupuncture, moxibustion and Anma-Massage-Shiatsu
Table 1.Quality control of MICs for reference strains Table 2.Antimicrobial activity of gatifloxacin against aerobic bacteria Table 4.Antimicrobial activity of gatifloxacin and other quinolones against
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Key words : 7432-S, Oral cephem, Urinary tract infection Fig. 1. Chemical structure of 7432-S. Table 1. Clinical summary of acute uncomplicated cystitis patients treated with 7432-S UTI : Criteria by the
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VOL.51 NO.6 JUNE 2003 JUNE 2003 9) Niederman MS et al: Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy and prevention.
202
201 Presenteeism 202 203 204 Table 1. Name Elements of Work Productivity Targeted Populations Measurement items of Presenteeism (Number of Items) Reliability Validity α α 205 α ä 206 Table 2. Factors of
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Table 1 Survival rates of infected mice given antibiotic doses producing peak serum a) S. aurcus Smith Challenge dose :7 ~10 (5% mucin) CFU/mouse. LD50: 1 ~103 (5% mucin) CFU/mouse. Table 2 Survival rates
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/‚“1/ŒxŒ{‚×›î’æ’¶
60 1 pp.3-8 2010 1. H1N1 1) 2) 3) 4) ERATO 2009 H1N1 21 H1N1 HA PB2 2009 3 Pandemic H1N1 2009 WHO 6 11 21 2009 11 2010 4 21 H1N1 H1N1 2009 4 15 CDC 108-8639 4-6-1 TEL: 03-5449-5281 FAX: 03-5449-5408 E-mail:
Table 1.Concentration of gatifloxacin (Middle-ear) Table 2.Concentration of gatifloxacin (Paranasal sinuses) Table 3.Concentration of gatifloxacin (Tonsil) Table 4.No.of patients studied Table 5.Background
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313 委員会報告 JAID/JSC 感染症治療ガイドライン 2018 男性尿道炎とその関連疾患 一般社団法人日本感染症学会 公益社団法人日本化学療法学会 JAID/JSC 感染症治療ガイド ガイドライン作成委員会性感染症ワーキンググループ 1) 2) 3) 4) 濵砂良一, 安田満, 高橋聡, 上原慎也 5) 6) 7)** 8 )* 河合泰宏, 宮入烈, 荒川創一, 清田浩 所属 1. 産業医科大学泌尿器科
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1) i) Barber, M. et al.: Brit. Med J, 2, 565, 19'49. ii) Barber, M.F.G. J. Hayhoe and J. E. M. Whithead: Lancet, 1120 `1125, 1949.-2) Bergey: Bergey's Manual of Determinative Bacteriology 7 th Ed: (1958).-3)
CHEMOTHERAPY JUN Citrobacter freundii 27, Enterobacter aerogenes 26, Enterobacter cloacae 27, Proteus rettgeri 7, Proteus inconstans 20, Proteus
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ン (LVFX) 耐性で シタフロキサシン (STFX) 耐性は1% 以下です また セフカペン (CFPN) およびセフジニル (CFDN) 耐性は 約 6% と耐性率は低い結果でした K. pneumoniae については 全ての薬剤に耐性はほとんどありませんが 腸球菌に対して 第 3 世代セフ
2012 年 12 月 5 日放送 尿路感染症 産業医科大学泌尿器科学教授松本哲朗はじめに感染症の分野では 抗菌薬に対する耐性菌の話題が大きな問題点であり 耐性菌を増やさないための感染制御と適正な抗菌薬の使用が必要です 抗菌薬は 使用すれば必ず耐性菌が出現し 増加していきます 新規抗菌薬の開発と耐性菌の増加は 永遠に続く いたちごっこ でしょう しかし 近年 抗菌薬の開発は世界的に鈍化していますので
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よる感染症は これまでは多くの有効な抗菌薬がありましたが ESBL 産生菌による場合はカルバペネム系薬でないと治療困難という状況になっています CLSI 標準法さて このような薬剤耐性菌を患者検体から検出するには 微生物検査という臨床検査が不可欠です 微生物検査は 患者検体から感染症の原因となる起炎
2014 年 7 月 9 日放送 薬剤耐性菌の動向と最近の CLSI 標準法の変更点 順天堂大学 臨床検査部係長 三澤 成毅 薬剤耐性菌の動向まず 薬剤耐性菌の動向についてお話しします 薬剤耐性菌の歴史は 1940 年代に抗菌薬の第一号としてペニシリンが臨床応用された頃から始まったと言えます 以来 新しい抗菌薬の開発 導入と これに対する薬剤耐性菌の出現が繰り返され 今日に至っています 薬剤耐性菌の近年の特徴は
JJRM5005／04.短報.責了.indd
Jpn J Rehabil Med 2013 ; : 319.327 1 2 3 4 5 6 Survey of the Electronic Medical Recoding System Used in Kaifukuki Rehabilitation Wards Hidekazu SUGAWARA, 1 Tetsutaro YAHATA, 2 Hideto OKAZAKI, 3 Mitsuhiro
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ROCKY NOTE 結核に対する結核菌 LAMP 法の検査特性 (150226) 肺炎の治療の前に喀痰の検査を施行 これを機会に結核菌 LAMP 法の検査特性について調べ てみることにした 比較的新しい論文を
結核に対する結核菌 LAMP 法の検査特性 (150226) 肺炎の治療の前に喀痰の検査を施行 これを機会に結核菌 LAMP 法の検査特性について調べ てみることにした 比較的新しい論文を簡単に流し読みしてみることにした 文献 1 では感度が 98% 特異度が 78.3% と記載されている real-time fluorescence quantitative PCR (Q-PCR). の感度が 96.0%
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1988 2000 2002 2004 2006 2008 IFN Lamivudine Adefovir Entecavir 1 Total number 560 Sex (male/female) 424/136 Age (years)* 38 (15-68) Duration of treatment (weeks)* 26 (1-592) Follow-up time (years) 75(05-21
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The Journal of the Japan Academy of Nursing Administration and Policies Vol 9, No 2, pp 3140, 2006 原著 看護師の内服与薬業務における 確認エラー に関する検討 Study of Confirmation Errors for Internal Use by Nurses 濱田康代 1) 田口大介 2)
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2011 Vol.60 No.2 p.138 147 Performance of the Japanese long-term care benefit: An International comparison based on OECD health data Mie MORIKAWA[1] Takako TSUTSUI[2] [1]National Institute of Public Health,
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2 10 The Bulletin of Meiji University of Integrative Medicine 1,2 II 1 Web PubMed elbow pain baseball elbow little leaguer s elbow acupun
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220 28;29) 30 35) 26;27) % 8.0% 9 36) 8) 14) 37) O O 13 2 E S % % 2 6 1fl 2fl 3fl 3 4
Vol. 12 No. 2 2002 219 239 Λ1 Λ1 729 1 2 29 4 3 4 5 1) 2) 3) 4 6) 7 27) Λ1 701-0193 288 219 220 28;29) 30 35) 26;27) 0 6 7 12 13 18 59.9% 8.0% 9 36) 8) 14) 37) 1 1 1 13 6 7 O O 13 2 E S 1 1 17 0 6 1 585
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1) Garner J. S.: The Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, CDC, Guidelines for Isolation Precautions in Hospitals, 1996. http://wonder.cdc.gov/wonder/prevguid/ p0000419/p0000419.asp.
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1 見出し1，12ポ，日本語ゴシック，英語Arial，段落後は6ポの設定です
8. Page1 8. B 1 5) 6) 2099 2370 50 400 mg 19 (1) 1) (a) 78.9% 30/38 4 3 35.7% 5/14 71.4% 10/1485.7% 12/142 1 83.3% 5/63 2 1 1 1 8. Page2 (b) 2099 1897 82.4% 1562/1897 2 84.0% 1298/1545 3 2 80.4% 472/58779.0%
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16_.....E...._.I.v2006
55 1 18 Bull. Nara Univ. Educ., Vol. 55, No.1 (Cult. & Soc.), 2006 165 2002 * 18 Collaboration Between a School Athletic Club and a Community Sports Club A Case Study of SOLESTRELLA NARA 2002 Rie TAKAMURA
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