平成 27 年度精度管理調査実施要綱 ( 輸血学的検査 ) はじめに 平成 27 年度神奈川県精度管理調査 ( 輸血検査 ) は 指定方法に従い指定試薬を使用して実施してください 指定方法 指定試薬は下記に記載していますので間違いのないよう実施してください 配布試料 試薬 輸血 N

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1 平成 27 年度精度管理調査実施要綱 ( 輸血学的検査 ) はじめに 平成 27 年度神奈川県精度管理調査 ( 輸血検査 ) は 指定方法に従い指定試薬を使用して実施してください 指定方法 指定試薬は下記に記載していますので間違いのないよう実施してください 配布試料 試薬 輸血 N % 血球浮遊液 血漿各 1 本輸血 N0.4 5 血漿各 1 本輸血 NO.6 血漿 1 本フォトサーベイ写真 4 枚 P1~P6 3% 血球浮遊液各 1 本 ( 不規則抗体検査用血球試薬 ) 抗体価指定血球 3% 血球浮遊液 ( 抗体価測定用血球試薬 ) 実施項目 方法 実施項目 試料番号 方法等 ABO 血液型,RhD 血液型 輸血 N0.1,2,3 オモテ検査 / ウラ検査 試験管法指定 不規則抗体 輸血 N0.4,5 血球試薬 方法指定 抗体価測定 輸血 N0.6 血球試薬 方法指定 カラム凝集法 ( フォト ) 輸血フォト 1,2,3 ビーズカラム凝集法フォト判定 反応態度 ( フォト ) 輸血フォト 4 試験管法フォト判定 1) ABO 血液型,RhD 血液型 輸血 N0.1,2,3 1 抗体試薬及び血球試薬は, 自施設で使用しているものを使用して下さい 2 方法は, 試験管法にて実施して下さい 3 反応態度を回答して下さい 4 各設問に回答して下さい 2) 不規則抗体 輸血 N0.4,5 1 自施設の血球試薬は使用せず, 配布した 3% 血球浮遊液 (P1~P6) を必ず使用して下さい. 2 添付した抗原組成表 ( 資料 3) を使用して下さい. 神臨技 HP より別途ダウンロードした H27 年度精度管理調査 ( 輸血部門 ) 抗原組成表 に入力してください 3 各試験管に, 試料 2 滴 (100μL)+ 各 3% 血球浮遊液 1 滴 (50μL) を分注して下さい ( 自己対照は未実施 ) 時間インキュベーション ( 反応増強剤は使用しない ) して下さい 5 生理食塩液で3 回洗浄し, 抗グロブリン試薬 ( 自施設 ) を滴下後 判定して下さい ( 抗グロブリン試薬の滴下数は, 各メーカーの使用方法に従って下さい ) 6 反応態度を回答して下さい 7 抗体陽性の場合 抗原組成表 ( 資料 3) より判定した抗体名を回答して下さい 8 各設問に回答して下さい 注 1)

2 接合体血球で否定して構わないものとします ( 消去法の表記手順 - 資料 2 参照 ) 注 2) 輸血試料 No4,5 は調整血漿ですので 自施設の血球試薬を使用した追加検査は実施できません 3) 抗体価 輸血 No.6 1No.6 血漿を生理食塩液で 2 倍連続希釈し 1~ 128 を試験管に各々 100μL 取ります 2 抗体価指定血球を各試験管に 50μL 加え 37 1 時間インキュベーション ( 反応増強剤は使用しない ) して下さい 3 生理食塩液で 3 回洗浄し 抗グロブリン試薬 ( 自施設 ) を滴下後 判定して下さい ( 抗グロブリン試薬の滴下数は 各メーカーの使用方法に従って下さい ) 4 各希釈倍数の反応態度と抗体価を回答して下さい 希釈法については日本臨床衛生検査技師会発行の 新輸血検査の実際 を参照してください 抗体価は 1+ 以上の凝集を示す最大希釈倍数とします 4) フォトサーベイ 1 フォト 1 とフォト 2 はビーズカラム凝集法の ABD カセットで ABO 血液型と RhD 血液型です ウェル 1( 左 ) からオモテ検査抗 A, 抗 B, 抗 D, コントロール, ウラ検査 A 1 血球,B 血球です 資料 4 を参照し 判定を回答してください 2 フォト 3 はビーズカラム凝集法の IgG カセットで間接抗グロブリン法による不規則抗体スクリーニングを 2 件実施したものです 3 種のスクリーニング血球試薬を使用しており 1~3 ウェルが検体 1 4~6 ウェルが検体 2 です 各ウェルの反応態度と 各検体の不規則抗体スクリーニング結果判定を回答してください 3 フォト 4 は試験管法の凝集像を示しています 試験管 1~6 の反応態度をそれぞれ回答してください その他 1. 判定は (4+) ( 3+) (2+) (1+) (w+) (0) の 6 段階および溶血 (H) 部分凝集(mf) で判定して下さい ( 凝集反応の見方 - 資料 1 参照 ) 2. 各項目にてその他を選択した場合 具体的内容をフリーコメント欄に記入してください 3. 報告は Web で入力してください 各項目をクリックすると回答が選択出来るようになっています 1 セル (1 枠 )1 回答でお願い致します ( 不規則抗体名は複数回答可能 ) 消去法については日臨技精度管理調査 Web からではなく神臨技 HP より別途 H27 年度精度管理調査 ( 輸血部門 ) 抗原組成表 をダウンロードして入力してください 入力後は下記送付先アドレスまでメールにて抗原組成表を送付してください 抗原組成表は メールタイトル及びファイル名に 日臨技施設番号 施設名 輸血抗原組成表 と入力し Excel 形式で送付してください Excel 形式での返信が困難な場合は 下記連絡先までご連絡ください 消去法は判定結果欄に陽性もしくは陰性を IAT 欄に反応態度を 抗原組成表の各抗原 (+) 上に 又は / 印を選択入力してください ダウンロード用神臨技 HP アドレス H27 年度精度管理調査 ( 輸血部門 ) 抗原組成表 送付先アドレス [email protected] **************************************** 不明な点は 下記までご連絡をお願いいたします 神奈川県立足柄上病院検査技術科田島正輝 TEL ( 代表 ) 内線 ;[email protected]

3 凝集反応の見方 ( 資料 1) ビューボックスまたは明るく白い背景で上清を観察し 溶血の有無を確認 次いで試験管を穏やかに振りながら血球沈渣を管壁からはがす この時 はがれ方についても観察する 凝集があってもフリーの血球が先に流れるようにはがれてきたり 凝集がはがれた後にフリーの血球が残っ ていたりすることがあるので注意深く観察する 反応の分類 1 個の大きな 数個の大きな 中程度の 多数の小さな 肉眼で観察できる 凝集も溶血も 完全溶血 部分凝集 特徴 非常に小さな凝集 認めない ( 部分溶血 ) 凝集赤血球と非凝集赤血球が 混在 背景 透明透明透明赤く濁る赤く濁る赤く濁る赤く透明 ( 濁る ) 赤く濁る 反応強度 W+ 0 H (PH) mf mf: mixed field agglutination H: hemolysis PH: partial hemolysis

4 消去法の表記手順 ( 資料 2) 陰性反応を示したパネル赤血球について 抗原組成表の各抗原 (+) 上に 又は / 印を記入する 1. はホモ接合の抗原 (+) 量的効果のない血液型の抗原 (+) の上に記入する 2. / は量的効果のある血液型において ヘテロ接合の抗原 (+) の上に記入する 3. が 1 つ以上あれば その抗原に対する抗体を否定し 抗原組成表上段に記載してある抗原名に を記入する 4. / のみの抗原に対する抗体については抗原名には何も記載しない 5. 最終的に 無印のまま残った抗原に対応する抗体は 可能性の高い抗体 と 否定できない抗体 になる / のみついた抗体は 否定できない抗体 になる 例 C c E e 反応 ここを見る ここを見る ここを見る C c E e 反応 可能性の高い抗体 : 抗 E 抗体 否定できない抗体 : 抗 c 抗体 量的効果 (dosage effect) いくつかの血液型システムでは 対立遺伝子 ( アリル ) がホモ接合の場合に へテロ接合より赤血球上の抗原が多い この抗原量の違いにより反応に強弱をみることがあり これを量的効果と呼ぶ Rh 系 MNS 式 Duffy 式 Kidd 式などの血液型抗原 *C と c E と e は対立遺伝子で 例えば (C+c-) はホモ接合となる (E+e+) はヘテロ接合になる 注 )Kell 式の K と Diego 式の Di a Lutheran 式の Lu a は市販のパネル血球では ホモ接合はまれである それにより K Di a Lu a は (K+k+) Di(a+b+) Lu(a+b+) で反応が陰性の場合でも否定する

5 不規則抗体検査抗原組成表 ( 資料 3) RBC-No Rh Kell Kidd Duffy Xg Lewis MNSs Lutheran P1 Special Antigen D C E c e K k Kp a Kp b Js a Js b Jk a Jk b Fy a Fy b Xg a Le a Le b S s M N Lu a Lu b P1 IAT P P P Di a (+) P P P

6 カラム凝集法の判定 ( 資料 4) Ortho Clinical Diagnostics 陽性 陰性 判定保留 * 部分凝集 ± MF *± と判定された場合 再検査を行い その結果に基づき判定してください 再度 ± の場合は 非常に弱い反応が検出されているものとみなし 陽性と判定してください 4+ ほとんど全ての血球がバンド状にカラム上面に残る また 極めて微量の血球がカラム底部に見られることがある ± MF 凝集した血球の多くは主としてカラム上半分に観察される また 少量の血球がカラム底部に見られることがある 凝集した血球がカラム全体に観察されると同時に おおむね半数の血球がカラム底部に見られる 多くの血球がカラム底部に見られ かつ比較的小さながカラム中に散見される ほとんど全ての血球はカラム底部にボタン状に沈殿しており カラム中にはは形成されていない ただし 極めて微粒の血球がカラム上面およびカラム中に痕跡程度に線上や点状に見られることもある 陽性と陰性の中間に分類される この場合 非常に弱い反応が検出されている可能性が考えられる 混合血球等の場合 強く凝集した血球がカラム上面にバンドを形成すると同時にカラム底部には凝集しない血球がボタン状に沈殿している