チクングニヤウイルスと その病態、診断法

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1 チクングニヤウイルスと その病態 診断法 国立感染症研究所 ウイルス第一部 高崎智彦

2 遷延する関節痛より確定診断に至った チクングニヤ熱の本邦初症例 水野泰孝 1) 加藤康幸 1) 工藤宏一郎 1) 高崎智彦 2) 倉根一郎 2) 1) 国立国際医療センター国際疾病センター 2) 国立感染症研究所ウイルス第一部 < 症例 > 36 歳女性 主訴は遷延する膝関節痛および足関節痛 既往歴 家族歴に特記事項なし 平成 18 年 7 月 16 日より 12 月 10 日までスリランカ コロンボに帯同家族として滞在 平成 18 年 11 月 17 日に歩行困難な程度の左足関節痛と共に 40 の発熱 頭痛が出現 現地医療機関で白血球減少 血小板減少 臨床症状と迅速診断キットによりデング熱とチクングニヤ熱の混合感染と診断されたが 血清診断による確定診断はなされなかった 無治療にて 11 月 18 日には解熱し 11 月 19 日に両四肢に紅斑が出現した 関節痛はその後も持続し改善を認めないため 精査目的で 12 月 26 日に国際医療センターを受診した

3 < 来院時身体所見 > 意識清明 体温 37.2 脈拍 88 回 / 分 血圧 : 108/70mmHg 診察上特記すべき異常所見は認めなかった 起立時および歩行時の膝 足関節痛は残存していたが 疼痛部位の発赤 腫脹は認められなかった < 急性期の症状 > 関節痛の部位としては最初に足首の関節が痛み 腫脹を伴い歩けなくなった ( 腫脹をきたすと関節痛というより 関節炎と臨床診断される )

4 来院時検査所見 WBC; 9940/μl, RBC: /μl, Hb; 12.0 g/dl, Ht; 35.1%, Plt; /μl, GOT; 16 IU/l, GPT; 13 IU/l, LDH; 171 IU/l, ALP; 149 IU/l, γgtp; 20 IU/l, CPK; 53 IU/l, BUN; 14.1mg/dl, Cr; 0.68mg/dl, CRP; 0.24mg/dl, RF(-), ANA(-) Dengue virus PCR(-), IgM(-), IgG(-)

5 < 経過 > 日常生活に支障を来たすほどではない関節痛であったため無投薬にて経過観察としたが その後の血清診断の結果 抗チクングニヤウイルス IgM 抗体陽性 (Positive/Negative( ratio=7.04, P/N Ratio 2.0 以上を陽性 ) および抗チクングニヤウイルス中和抗体価 640 倍 (10( 倍以上を陽性 ) を確認した 患者は家族の都合により1 月初旬にスリランカへ戻ったため抗体価推移の検査は実施できなかった 次回帰国される際に再度抗体検査を実施する予定である

6 チクングニヤ熱日本人輸入症例確認の報道

7 チクングニヤ熱症例 ( 新潟県 ) 患者は 50 代 女性 日本在住の日本人女性 平成 18 年 1 1 月 27 日から 12 月 3 日まで スリランカに渡航 スリランカでは 渡航後まもなく 数ヶ所を蚊に刺された 帰国後の 12 月 4 日より全身倦怠感の増強あり 12 月 5 日に 40 度の発熱 関節痛を認め 日本国内の医療機関に受診し 入院した 入院中に鼻出血 皮疹の症状も出現した ( 皮疹に関しては CPFX による薬疹の可能性も考えられた ) 対症療法を行い 症状は改善して退院した 国立感染症研究所における抗体検査の結果 デングウイルス感染は否定された チクングニヤウイルス遺伝子の検出 同定 ウイルス分離及び同ウイルスに対する特異的 IgM 抗体陽性 中和抗体陽性であり チクングニヤ熱と確定診断した 患者は 退院後は軽度の全身倦怠感が残存していたが 現在は回復している

8 チクングニヤウイルス媒介蚊 Aedes Egipti Aedes Albopictus <CDC ホームページより > 吸血中のヒトスジシマカ

9 < 媒介蚊に関して > チクングニヤウイルスを媒介する蚊の種類はアフリカ インド 東南アジアで異なっているが 主にヤブカ類が主要な媒介蚊である ヤブカ類の中でもネッタイシマカとヒトスジシマカが重要な媒介蚊で 2005~2006 年にかけてのインド洋の島国におけるチクングニヤ熱の流行ではヒトスジシマカが主要な媒介蚊であった 実験室における感染実験においてもヒトスジシマカがネッタイシマカよりウイルスの増殖能力が高いとの報告も見られる (Turell et al., 1992) 今回 患者が確認された時点で 沖縄以外 我が国でのヒトスジシマカは卵のステージで越冬しており ヒト 蚊 ヒトの流行が起こる可能性はない しかし ヒトスジシマカが活動する夏期にチクングニヤの患者が確認された場合には デング熱と同様に媒介蚊対策を考慮する必要がある

10 世界のヒトスジシマカの分布拡大 Parola P.et al. Emerg. Infect. Dis. 12.p (2006) より

11 チクングニヤ熱分布地域 <CDC ホームページより >

12 < チクングンヤ熱 最近の流行 > 2005 年初頭にコモロ (Comoro) 諸島で流行が発生した その後 ウイルスはインド洋に位置する他の島国 ( モーリシャス :Mauritius, レユニオン :Reunion, セーシェル :Seychelles, マヨット :Mayotte) などに拡大し流行した レユニオン島では 2005 年の 3 月から 2006 年の 2 月までで 15 万人以上の患者が発生した 2006 にはインド西部 スリランカでも流行をみており 香港 台湾 米国 スイスなどからも輸入症例が報告されている

13 の西インド洋諸国での流行

14 < 臨床症状 > 発熱と関節痛は必発であり 発疹は 8 割程度に認められる 関節痛は四肢 ( 遠位 ) に強く対称性で 手首 足首 指趾 > 膝 > 肘 > 肩の順であり 関節の腫脹を伴う場合もある そのほか主要な症状としては 全身倦怠 頭痛 筋肉痛 リンパ節腫脹である また出血傾向 ( 鼻出血 歯肉出血 ) や悪心 嘔吐をきたすこともある < 血液所見 > リンパ球減少 血小板減少が認められる

15 臨床的特長 ( デング熱との比較 ) 関節痛だけでなく関節腫脹を伴う場合があり その場合 急性症状が治まっても痛みが続き遷延することがある 高いウイルス血症を示す (ex.3.3x10 9 copies/ml) しかし デング熱との鑑別は難しい 関節腫脹があれば チクングニヤの可能性が高い

16 Bone scintigraphy The wrists & hands showing an intense focus, particularly on the left side. Parola P.et al. Emerg. Infect. Dis. 12.p (2006) より

17 アルファウイルス 系統樹 CHKV ONNV

18 チクングニヤウイルス (AF 株 ) ( 感染研保有 ) AF AF Chikungunya virus strain Ross, complete genome. Length = Score = 557 bits (281), Expect = e-157 Identities = 287/289 (99%) Strand = Plus / Plus

19 チクングニヤウイルス (BaH306 株 ) ( 感染研保有 ) AY AY Chikungunya virus strain Nagpur (India) structural polyprotein gene, complete cds. Length = 5061 Score = 557 bits (281), Expect = e-157 Identities = 287/289 (99%) Strand = Plus / Plus

20 透過型電子顕微鏡像 Vero細胞 超薄切片法 チクングニヤウイルス Af株

21 透過型電子顕微鏡像 C6/36細胞 超薄切片法 チクングニヤウイルス Af株

22 チクングニヤウイルスのプラーク形成 チクングニヤウイルスのプラークは接種後 2.5 日で出現 ( 可視化 ) し始める 接種後 2.5 日目 接種後 4 日目

23 染色後のプラーク 接種後 3 日目 接種後 5 日目

24 IgM capture ELISA Substrate 2HRP-conjugated anti-mouse IgG 1 Anti-CHIKV polyclonal Antibody (mouse) Virus Antigen (CHIKV) Test Serum containing virus-specific specific IgM Antibody Goat anti-human IgM antibody Plastic Solid Phase

25 ー使用した 2 次抗体ー 1 Anti-CHIKV polyclonal Antibody Mouse immune i ascitic fluid ATCC VR- 1241(ATCC から輸入 ) 2HRP-conjugated anti-mouse IgG Peroxidase-conjugated Goat Affinity purified Ab to mouse IgG(Whole I Molecule) Cappel 社

26 使用した陽性コントロール血清 Dr. HERVE ZELLER National Reference Center for Arbovirus and Viral Hemorrhagic Fevers, PASTEUR INSTITUTE から1mLを供与していただいた

27 Results of IgM capture ELISA 96 Well Plate 1-Neg. 2-Sample 3-Positive A Chik(400x) Chik(400x) Chik(400x) B Chik(400x) Chik(400x) Chik(400x) C Chik(400x) Chik(400x) Chik(400x) D Chik(400x) Chik(400x) Chik(400x) E Chik(200x) Chik(200x) Chik(200x) F Chik(200x) Chik(200x) Chik(200x) G Chik(200x) Chik(200x) Chik(200x) H Chik(200x) Chik(200x) Chik(200x) POD 抗体濃度 1000x 2000x 1000x 2000x 1-Neg. 2- Sample 3- Positive POD 抗体濃度 AB x CD x EF x GH x

28 の西インド洋諸国での流行の特色 主媒介蚊はヒトスジシマカ (Asian tiger mosquito) である レユニオン島では 総人口 770,000のうち 264,000 人が感染し 237 人が死亡した 2005 年 Comoros 諸島で始まった流行は Reunion, Mayotte,Mauritius, Seychelles, Madagascarに拡大し 2006 年 4 月以降はインド スリランカで流行している

29 研究協力者 機関 国立感染症研究所ウイルス第一部小滝徹 伊藤美佳子 田島茂 林昌宏 倉根一郎 国立国際医療センター : 水野泰孝 工藤宏一郎 大阪医科大学微生物学教室 : 藤岡良彦 佐野浩一 厚生労働省成田空港検疫所 関西空港検疫所 中部空港検疫支所 福岡空港検疫支所

蚊を介した感染経路以外にも 性交渉によって男性から女性 男性から男性に感染したと思われる症例も報告されていますが 症例の大半は蚊の刺咬による感染例であり 性交渉による感染例は全体のうちの一部であると考えられています しかし 回復から 2 ヵ月経過した患者の精液からもジカウイルスが検出されたという報告

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