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れいがたかひ
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1 Jan :59:14

2 非臨床概要毒性試験の目次毒性試験の概要文まとめ単回投与毒性試験反復投与毒性試験遺伝毒性試験がん原性試験生殖発生毒性試験局所刺激性試験その他の毒性試験考察および結論図表参考文献毒性試験概要表毒性試験 : 一覧表トキシコキネティクス : トキシコキネティクス試験の一覧... 項目 - 頁トキシコキネティクス : トキシコキネティクス試験成績の一覧 p 毒性試験 : 被験物質 ( バッチ毎 ) 一覧 p 単回投与毒性試験 p 反復投与毒性試験 : 重要な試験以外の試験 p 反復投与毒性試験 : 重要な試験 p In Vitro 遺伝毒性試験 p In Vivo 遺伝毒性試験 p がん原性試験 p 生殖発生毒性試験 : 重要な試験以外の試験 p 生殖発生毒性試験 : 受胎能および着床までの初期胚発生に関する試験 p 生殖発生毒性試験 : 胚胎児発生に関する試験 p 生殖発生毒性試験 : 出生前および出生後の発生ならびに母体の機能に関する試験新生児を用いた試験 p p p p p p p p p p p p p p p p p. 10 Jan :59:14

3 局所刺激性試験 p その他の毒性試験 p. 12 Jan :59:15

4 2.6.6 およびの略号等一覧略語 ( 略称 ) 内容 A/G 比 albumin/globulin ratio( アルブミン / グロブリン比 ) ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay( 酵素結合免疫吸着検定法 ) FDA Food and Drug Administration( 米国食品医薬品局 ) GLP Good Laboratory Practice( 医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施の基準に関する省令 ) IgG Immunoglobrin G( 免疫グロブリン G) PS6B Polysaccharide of Streptococcal pneumoniae serotype 6B( 肺炎球菌血清型 6B ポリサッカライド ) WHO World Health Organization( 世界保健機構 ) Feb :47:30

5 毒性試験の概要文まとめ 10Pn-PD-DiT ワクチン ( 本剤 ) の安全性を評価するためウサギを用いた単回筋肉内投与毒性および局所刺激性試験ならびに反復筋肉内投与毒性試験を実施した ( 表 ) 用量はいずれの試験においても予定臨床用量と同じ 0.5 mlとした本剤 0.5 mlにはアジュバントとしてリン酸アルミニウム ( アルミニウムとして 500 μg) が含まれている遺伝毒性およびがん原性試験については感染症予防ワクチンの非臨床試験に関する厚生労働省ガイドライン [ 厚生労働省, 平成 22 年 ] および WHO ガイドライン [WHO, 2005] に従い実施しなかった生殖発生毒性については接種対象者が乳幼児であり妊娠可能年齢に達する者が対象でないため実施しなかったなお雌雄生殖器に及ぼす影響については反復投与毒性試験において病理組織学的に評価したまたアジュバントとして用いたリン酸アルミニウムについては海外では多くのワクチンにアジュバントとして使用されており [Baylor, 2002] 本剤での使用量は WHO [WHO, 1990] および米国 [US. FDA, 2011] において許容されているワクチン 1 回接種時のアルミニウム量の上限である 1250 μgの半量以下であることからもヒトでの安全性に対する懸念はないことからリン酸アルミニウムの毒性を評価するための新たな毒性試験は必要ないと考え実施しなかった表毒性試験一覧表試験項目 / 投与期間投与経路動物種など被験物質単回投与毒性および局所刺激性単回筋肉内ウサギ 10Pn-PD-DiTワクチン反復投与毒性 5 回 (2 週間間隔初回投与後は 1 週間 ) 休薬期間 4 週間 5 回 (2 週間間隔 ) 休薬期間 12 週間筋肉内ウサギ 10Pn-PD-DiT ワクチン筋肉内ウサギ 10Pn-PD-DiT ワクチン単回投与毒性本剤の 0.5 mlを雌雄ウサギに単回筋肉内投与した結果ワクチン投与に関連する死亡はみられず全身および局所の臨床症状ならびに体重にワクチン投与による明らかな変化は認められなかった反復投与毒性本剤の 0.5 mlを雌雄ウサギに 5 回反復筋肉内投与し 4 または 12 週間までの休薬期間を設けて一般毒性および回復性を検討したその結果全身および局所の臨床症状体重摂餌量眼科学的検査直腸温ならびに器官重量に投与に関連すると考えられる変化は認められなかった投与部位に明らかな局所刺激性がみられ局所刺激に関連すると考えられる血液および血液生化学的変化 ( それぞれフィブリノゲン好中球数の高値および C 反応性タンパクの高値 /A/G 比の低値 ) が認められた血液および血液生化学的変化は最終投与 4 週間後には回復した投与部位の刺激性は最終投与 4 週間後においてもみられたがその程 Jan :42: p. 1

6 度は減弱しおもな変化は再生性の所見 ( 線維化 ) であった投与部位の変化は最終投与 8 週間後には明らかな回復性を示したなお雌雄生殖器を含め投与部位以外の器官組織にワクチン投与に関連した病理組織学的変化は観察されなかったまたワクチン群の抗肺炎球菌血清型 6Bポリサッカライド (Streptococcus pneumoniae type 6B polysaccharides: PS6B)IgG 抗体の血清抗体陽転率は雌雄ともに 100% であった局所刺激性本剤の 0.5 mlを雌雄ウサギに単回筋肉内投与して投与 3 日後の筋肉刺激性を肉眼的および組織学的に評価した結果ワクチン群では剖検で投与部位の白色変化がみられ組織学的検査では限局性の重度な炎症細胞浸潤壊死出血および浮腫が認められた単回投与毒性試験ウサギ本剤または生理食塩液の 0.5 mlを雌雄各 3 匹の New Zealand Whiteウサギの大腿筋または腓腹筋に単回筋肉内投与して急性毒性を評価した ( ) 投与部位の観察は投与約および 72 時間後に観察し一般状態の観察および体重測定を行った投与 3 日後に剖検して投与部位の組織学的検査を行った本試験において評価した局所刺激性 ( 投与部位の肉眼的および組織学的検査結果 ) についてはに記載した試験成績の概要をに示した本試験において死亡はみられず全身および局所の臨床症状ならびに体重にワクチン投与による明らかな変化は認められなかった反復投与毒性試験本剤の 0.5 mlを雌雄各 10 匹の New Zealand Whiteウサギに反復筋肉内投与して一般毒性および局所刺激性について検討した初めの試験では初回投与と 2 回目投与の間隔を 1 週間としその後は 2 週間間隔で計 5 回投与して最終投与後最長 4 週間の休薬期間を設けた ( ) 2 試験目では 2 週間間隔で 5 回投与し最終投与後最長 12 週間の休薬期間を設けた ( ) ウサギ 5 回反復投与試験および 4 週間回復性試験本剤または生理食塩液の 0.5 mlを雌雄各 10 匹の New Zealand Whiteウサギに 5 回反復筋肉内投与 ( 初回投与と 2 回目投与の間隔を 1 週間としその後は 2 週間間隔 ) して最終投与 3 日後 ( サブグループ 1) および 28 日後 ( サブグループ 2) に各群雌雄各 5 匹を屠殺した ( ) 初回および 4 回目投与は左後肢 ( ハムストリングス ) 2 回目投与は右後肢 ( ハムストリングス ) 3 回目投与は左後肢 ( 腓腹筋 ) および 5 回目投与は右後肢 ( 腓腹筋 ) に投与した対照群 ( 雌雄各 9~11 匹 ) には生理食塩液を同様に投与した一般状態観察眼科学的検査直腸温体重および摂餌量測定血液血液生化学的検査剖検器官重量測定ならびに病理組織学的検査を行ったまた投与開始前および各屠殺時に採血し抗 PS6B-IgG 抗体を ELISA で測定して血清抗体陽転率を算出した Jan :42: p. 2

7 試験成績の概要をに示した全身および局所の臨床症状眼科学的検査直腸温体重摂餌量および器官重量に明らかに投与に関連する変化は認められなかったワクチン群では初回および 5 回目投与後の血液学的検査でフィブリノゲン好中球数の高値がみられ血液生化学的検査で A/G 比の低値が認められたいずれの変化も一過性であり最終投与 28 日後には回復したワクチン群の最終投与 3 日後の剖検では投与部位の白色変化または黄色結節がワクチン群のほぼ全例にみられ最終投与 28 日後の剖検では白色変化または白色 / 黄色結節がワクチン群の雄のほぼ全例に認められたワクチン群の最終投与 3 日後 ( サブグループ 1) の病理組織学的検査では最終投与時の投与部位である右腓腹筋に軽度 ~ 重度の炎症細胞浸潤壊死出血浮腫および修復組織形成などを伴う急性炎症がほぼ全例に認められたワクチン群の最終投与 28 日後 ( サブグループ 2) の病理組織学的検査ではいずれの投与部位の炎症性変化の頻度または程度は概ね軽減しおもな変化は線維化および筋萎縮であった雌雄生殖器を含め投与部位以外の器官組織にワクチン投与に関連した病理組織学的変化は認められなかったまたワクチン群の抗 PS6B-IgG 抗体の血清抗体陽転率はいずれの屠殺時においても雌雄ともに 100% であった以上より本剤を 5 回反復筋肉内投与した結果投与部位の明らかな局所刺激性がみられ局所刺激に関連すると考えられる血液および血液生化学的変化が認められた投与部位の刺激性は最終投与 28 日後においてもみられたがその頻度 / 程度は減弱しおもな変化は再生性の所見であった投与 56 日後 ( 左後肢腓腹筋 :3 回目投与 ) で投与部位の変化に明らかな回復性が認められたウサギ 5 回反復投与試験および 12 週間回復性試験本剤または生理食塩液の 0.5 mlを雌雄各 20 匹の New Zealand Whiteウサギに 2 週間間隔で 5 回反復筋肉内投与して最終投与 3 日後 ( サブグループ 1) 29 日後 ( サブグループ 2) 58 日後 ( サブグループ 3) および 84 日後 ( サブグループ 4) に各群雌雄各 5 匹を屠殺した ( ) 初回投与(Day 0) は左後肢後部大腿筋 2 回目投与 (Day 14) は左後肢腓腹筋 3 回目投与 (Day 21) は右後肢腓腹筋 4 回目投与 (Day 42) は左後肢前部大腿筋および 5 回目投与 (Day 56) は右後肢前部大腿筋に投与した一般状態観察体重および摂餌量測定血液血液生化学的検査剖検器官重量測定および投与部位 ( 最終投与部位の右後肢前部大腿筋 ) の病理組織学的検査を行った試験成績の概要をに示した全身および局所の臨床症状体重摂餌量および器官重量に明らかに投与に関連する変化は認められなかったワクチン群では初回および 5 回目投与後の血液学的検査でフィブリノゲン好中球数の高値がみられ血液生化学的検査で C 反応性タンパクの高値が認められたいずれの変化も最終投与 29 日後には回復した Jan :42: p. 3

8 ワクチン群の最終投与 3 日後の剖検では投与部位の白色 / 黄色変化または結節が認められた最終投与 29 日以降の剖検でも白色 / 黄色変化または結節がみられたがその発現頻度は減少したワクチン群の最終投与 3 日後 ( サブグループ 1) の最終投与部位である右後肢前部大腿筋の病理組織学的検査では中等度 ~ 重度の炎症細胞 ( おもに小型および中型のマクロファージおよび顆粒球 ) 浸潤壊死および軽微 ~ 中等度の筋線維変性がほとんどの動物に認められたワクチン群の最終投与 29 日後 ( サブグループ 2) の最終投与部位のおもな組織学的所見は軽度 ~ 中等度の炎症細胞 ( おもに大型の淡色マクロファージ ) 浸潤壊死および軽微 ~ 軽度の筋線維変性であったがサブグループ 1 に比べその程度 / 頻度は軽減したさらに軽度 ~ 中等度の線維化がほとんどの動物に認められたワクチン群の最終投与 58 日後 ( サブグループ 3) の最終投与部位のおもな組織学的所見は軽微 ~ 中等度の単核細胞 ( おもに大型の淡色マクロファージ ) 浸潤であり壊死および筋線維変性は認められなかったサブグループ 2 に比べ線維化の発現頻度程度は軽減したワクチン群の最終投与 84 日後 ( サブグループ 4) の最終投与部位のおもな組織学的所見は軽度の単核細胞 ( ほとんどが大型の淡色マクロファージ ) 浸潤であり雌 1 例に軽微な線維化が認められた以上より本剤を 2 週間間隔で 5 回反復筋肉内投与した結果投与部位の明らかな局所刺激性がみられ局所刺激に関連すると考えられる血液および血液生化学的変化が認められた投与部位の刺激性は最終投与 29 日後においてもみられたがその頻度 / 程度は減弱し血液および血液生化学的変化も回復した最終投与 58 日後の投与部位では炎症像はほとんどみられずおもな所見は再生性の変化 ( 線維化 ) であり最終投与 84 日後にはほぼ消失したこれらの結果から投与部位の変化の明らかな回復性は最終投与 58 日後に認められた遺伝毒性試験厚生労働省および WHO ガイドラインに従い実施しなかったがん原性試験厚生労働省および WHO ガイドラインに従い実施しなかった生殖発生毒性試験接種対象者は乳幼児であり妊娠可能年齢に達する者が対象でないため実施しなかった局所刺激性試験本剤 (0.5 ml) を雌雄各 3 匹の New Zealand Whiteウサギの大腿筋または腓腹筋に単回筋肉内投与して急性毒性を評価した単回投与毒性試験 ( ) において投与 3 日後の筋肉刺激性を肉眼的および組織学的に評価した ( ) 投与部位 ( 大腿筋および腓腹筋 ) の肉眼的観察ではワクチン群の全例に白色変化が認められた Jan :42: p. 4

9 投与部位の組織学的検査では投与部位の違い ( 大腿筋および腓腹筋 ) による刺激性の明らかな差はみられず限局性の重度な炎症細胞浸潤および壊死がワクチン群の全例にみられ出血が雌 2/3 例の大腿筋に浮腫が雄全例の腓腹筋に認められた炎症細胞はおもに小型および中型マクロファージならびに顆粒球であったまた大腿筋および腓腹筋の投与部位にみられた炎症反応の型程度および範囲に差は認められなかったその他の毒性試験その他に実施した試験はない考察および結論 10Pn-PD-DiT ワクチンの予定臨床用量 (0.5 ml) を雌雄ウサギに単回および反復筋肉内投与して一般毒性および投与部位の局所刺激性を評価したその結果全身および局所の臨床症状ならびに特定標的臓器毒性は認められず良好な忍容性を示した本剤に起因した変化として可逆的な限局性の炎症反応 ( 壊死浮腫出血炎症細胞浸潤筋線維変性など ) が投与部位に観察され反復投与試験では局所刺激に関連すると考えられる血液学的変化 ( フィブリノゲンおよび好中球数の高値 ) および血液生化学的変化 (A/G 比の低値および C 反応性タンパクの高値 ) が認められた血液および血液生化学的変化は最終投与 4 週間後には回復した投与部位の刺激性は最終投与 4 週間後においてもみられたがその程度は減弱しおもな変化は再生性の所見 ( 線維化 ) であった投与部位の変化は最終投与 8 週間後には明らかな回復性を示した雌雄生殖器を含め投与部位以外の器官組織にワクチン投与に関連した病理組織学的変化は認められなかったなおワクチン群の抗 PS6B-IgG 抗体陽転率が 100% であったことからウサギは本ワクチンに対し生物学的作用に感受性を示す動物種であり毒性試験に用いる適切な動物種であることが確認された以上非臨床試験の結果よりアジュバントとしてリン酸アルミニウム ( アルミニウムとして 500 μg) を含む 10Pn-PD-DiTワクチンでは可逆的な投与部位の局所反応を示した以外に毒性変化はみられず良好な忍容性を示した図表図表は本文中に示した参考文献 Baylor NW, Egan W, Richman P. Aluminum salts in vaccines--us perspective. Vaccine. 2002;20 (Suppl 3):S US. FDA. CRF Code of Federal Regulations Title 21. Available at URL (Jan 2014): =Google2&utm_source=fdaSearch&utm_medium=website&utm_term=21CFR610.15&utm_content = ;21CFR610.15:. Jan :42: p. 5

10 WHO. Requirements for Diphtheria, Tetanus, Pertussis and combined vaccines. WHO Technical Report Series :. WHO. WHO guidelines on nonclinical evaluation of vaccines. WHO Technical Report Series No ;Annex 1:. 厚生労働省. 感染症予防ワクチンの非臨床試験ガイドライン. 薬食審査発 0527 第 1 号. 平成 22 年 ;5 月 27 日 :. Jan :42: p. 6

11 毒性試験概要表 p 毒性試験 : 一覧表 Type of Study Species and Strain Method of Administration Duration of Dosing Dose-volume (ml/dose) GLP Compliance Testing Facility Test Article: 10Pn-PD-DiT Study Location in Number CTD Single-Dose Toxicity NZW rabbit Intramuscular Single 0.5 Yes TNO V9912/ Repeat-Dose Toxicity NZW rabbit Intramuscular 5 doses at 2 week intervals Yes TNO V NZW rabbit Intramuscular 5 doses at 2 week intervals 0.5 Yes TNO V Genotoxicity ND Carcinogenicity ND Reproductive and ND Developmental Toxicity Local Tolerance NZW rabbit Intramuscular Single 0.5 Yes TNO V9912/ Other Studies ND NZW = New Zealand White. ND = Not determined. NA = Not applicable. 1: 1 week after first Testing Facility: TNO = TNO Triskelion (Netherlands) トキシコキネティクス : トキシコキネティクス試験の一覧トキシコキネティクスは実施しなかったトキシコキネティクス : トキシコキネティクス試験成績の一覧トキシコキネティクスは実施しなかった Feb :02:04

12 毒性試験 : 被験物質 ( バッチ毎 ) 一覧 Test Article: 10Pn-PD-DiT Batch No. Study Number Type of Study ASPNA007A V9912/02 Single-Dose Toxicity and Local Tolerance Study DSPNA020A V7841 Repeat-Dose Toxicity Study ASPNA101A V20046 Repeat-Dose Toxicity Study p. 2 Feb :02:04

13 単回投与毒性試験 Species/Strain Rabbit/New Zealand White Method of Administration Intramuscular; sacrifice 3 days after injection Vaccine formulation Saline Dose-volume; Injection site 0.5 ml; right anterior thigh muscle 0.5 ml; right calf muscle Gender and No. per Group M3 + F3 10Pn-PD-DiT 0.5 ml; right anterior thigh muscle M3 + F3 10Pn-PD-DiT 0.5 ml; right calf muscle M3 + F3 Test Article: 10Pn-PD-DiT Noteworthy Findings Location in CTD (Study Number) No distinct treatment-related changes were observed in general and local clinical signs and body weight of the treated animals (V9912/02) p. 3 Feb :02:04

14 反復投与毒性試験 : 重要な試験以外の試験該当する資料はない Feb :02: p. 4

15 p 反復投与毒性試験 : 重要な試験ウサギ 5 回反復投与試験および 4 週間回復性試験 Report Title: Repeated-dose toxicity study with Synflorix Vaccine (10Pn-PD-DiT) administered intramuscularly (five times) to Test Articles: 10Pn-PD-DiT male and female rabbits Species/Strain: Rabbit/New Zealand White Duration of Dosing: 5 times/2-wk interval (1 wk after first) Location in CTD: Initial Age: ca 12 weeks Duration of Postdose: 28-day post final injection Study No.: V7841 Date of First Dose: 8 January 2008 Method of Administration: intramuscular GLP Compliance: Yes Vehicle/Formulation: not applicable Controls: saline injections No Observed Adverse Effect Level: not applicable (vaccines) Special Features: non-glp serology included Dosing schedule/injection site: Day 0; left hind leg (left hamstring muscle), Day 7; right hind leg (right hamstring muscle), Day 21; left hind leg (left calf muscle), Day 35; left hind leg (left hamstring muscle), Day 49; right hind leg (right calf muscle) Treatment Saline; 5 injections 10Pn-PD-DiT Number of Animals Male Female Male Female Subgroup 1; sacrifice day 3 post final (Day 52) 6 a 4 a 5 5 Subgroup 2; sacrifice day 28 post final (Day 77) Died or Sacrificed Moribund Clinical Observation Body Weight, Food Consumption Ophthalmoscopy Hematology , 2 + 1, 2 Clinical Chemistry Organ Weights Gross Pathology Histopathology Serology (seroconversion rate in anti-ps6b ELISA) 0/10 0/10 10/10 10/10 PS6B = Streptococcus pneumoniae type 6B polysaccharides a: At necropsy, one control female appeared to be a male. 1: Increase of fibrinogen after the 1 st and 5 th injection. 2: Increase of neutrophils after 1 st and 5 th injection. 3: Decreased A/G ratios after the 1 st and 5 th injection. 4: Day 3 and Day 28 post final: white areas and yellow nodules at the injection sites. 5: Day 3 post final: a slight to severe mixed inflammatory cell infiltrate associated with necrosis, haemorrhage, oedema and the formation of repair tissue. Days 28/31/45 post injection: a slight to moderate mixed inflammatory cell infiltrate associated with the accumulation of large macrophages (most probably containing aluminum), fibrosis, fiber atrophy, necrosis and germinal centre development. Day 56 post injection: distinct reduction of lesions; slight accumulation of macrophages and fibrosis. Feb :02:05

16 ウサギ 5 回反復投与試験および 12 週間回復性試験 Report Title: Repeated-dose toxicity study with Synflorix and Infanrix Hexa Vaccines administered intramuscularly (five times) to Test Articles: 10Pn-PD-DiT male and female rabbits followed by a 12-week treatment free period Species/Strain: Rabbit/New Zealand White Duration of Dosing: 5 times/2-wk interval Location in CTD: Initial Age: ca 12 weeks Duration of Postdose: 12 weeks post final injection Study No.: V20046 Date of First Dose: 27/28 June 2011 Method of Administration: intramuscular GLP Compliance: Yes Vehicle/Formulation: not applicable Controls: saline injections No Observed Adverse Effect Level: not applicable (vaccines) Special Features: Non Dosing schedule/injection site: Day 0; left hind leg (left posterior thigh muscle), Day 14; left hind leg (left calf muscle), Day 21; right hind leg (right calf muscle), Day 42; left hind leg (left anterior thigh muscle), Day 56; right hind leg (right anterior thigh muscle) Data Collected: Clinical observations, Body weight, Food consumption, Hematology, Clinical chemistry, Organ weights, Necropsy, Histopathology (right anterior thigh muscle) p. 6 Treatment Saline; 5 injections 10Pn-PD-DiT Number of Animals Male Female Male Female Subgroup 1; sacrifice day 3 post 5 th injection (Day 59) Subgroup 2; sacrifice day 29 post 5 th injection (Day 85) Subgroup 3; sacrifice day 58 post 5 th injection (Day 114) Subgroup 4; sacrifice day 84 post 5 th injection (Day 140) Died or Sacrificed Moribund a 2 b Hematology Fibrinogen Day 1 post 1 st injection (Day 1) ± ± ± 85.8** ± 49.9** (mg/dl) Day 1 post 5 th injection (Day 57) ± ± ± 121.7* ± 61.1 Day 29 post 5 th injection (Day 85) ± ± Neutrophils Day 1 post 1 st injection (Day 1) 2.61 ± ± 0.52** - (10 9 /L) Day 1 post 5 th injection (Day 57) 1.91 ± ± 0.48** - Day 29 post 5 th injection (Day 85) 1.82 ± ± Mean ± SD, *: p<0.05, **: p<0.01 (Dunnett 2-side) a: No.58 (Day 85); a cause of death could not be found. b: No. 57 (Day 17); the moribund condition was caused by respiratory problems, No. 51 (Day 69); the paralysis was caused by a broken back, a condition which occasionally may occur when an animal makes sudden, fierce movements. Feb :02:05

17 p ウサギ 5 回反復投与試験および 12 週間回復性試験 ( 続き ) Treatment Saline; 5 injections 10Pn-PD-DiT Number of Animals Male Female Male Female Subgroup 1; sacrifice day 3 post 5 th injection (Day 59) Subgroup 2; sacrifice day 29 post 5 th injection (Day 85) Subgroup 3; sacrifice day 58 post 5 th injection (Day 114) Subgroup 4; sacrifice day 84 post 5 th injection (Day 140) Clinical Chemistry C-reactive protein Day 1 post 1 st injection (Day 1) 11.8 ± ± ± 69.6** 143 ± 70.0** (mg/l) Day 1 post 5 th injection (Day 57) 10.2 ± ± ± 33.5* 91.0 ± 37.7 Day 29 post 5 th injection (Day 85) 7.55 ± ± ± ± 11.3 Gross Pathology White/yellow area or nodules at the inoculation sites Day 3 post 5 th injection (Day 59) Right anterior thigh muscle Left anterior thigh muscle Right calf muscle Left calf muscle Day 29 post 5 th injection (Day 85) Right anterior thigh muscle Left calf muscle Day 58 post 5 th injection (Day 114) Right anterior thigh muscle Right calf muscle Day 84 post 5 th injection (Day 140) Mean ± SD, *: p<0.05, **: p<0.01 (Dunnett 2-side) Feb :02:05

18 p ウサギ 5 回反復投与試験および 12 週間回復性試験 ( 続き ) Treatment Saline; 5 injections 10Pn-PD-DiT Number of Animals Male Female Male Female Subgroup 1; sacrifice day 3 post 5 th injection (Day 59) Subgroup 2; sacrifice day 29 post 5 th injection (Day 85) Subgroup 3; sacrifice day 58 post 5 th injection (Day 114) Subgroup 4; sacrifice day 84 post 5 th injection (Day 140) Histopathology (Right anterior thigh muscle) 3 days post 5 th injection Mixed inflammatory-cell infiltration Moderate 0 2 Severe 4 2 Necrosis Muscle fiber degeneration Very slight 1 1 Slight 4 1 Moderate 0 1 Haemorrhage(s) days post 5 th injection Mixed inflammatory-cell infiltration Slight 2 1 Moderate 3 3 Necrosis Muscle fiber degeneration Very slight 2 Slight 1 Haemorrhage(s) Fibrosis Slight 5 3 Moderate 0 1 Feb :02:05

19 p ウサギ 5 回反復投与試験および 12 週間回復性試験 ( 続き ) Treatment Saline; 5 injections 10Pn-PD-DiT Number of Animals Male Female Male Female Subgroup 1; sacrifice day 3 post 5 th injection (Day 59) Subgroup 2; sacrifice day 29 post 5 th injection (Day 85) Subgroup 3; sacrifice day 58 post 5 th injection (Day 114) Subgroup 4; sacrifice day 84 post 5 th injection (Day 140) Histopathology (Right anterior thigh muscle) (continue) 58 days post 5 th injection Mixed inflammatory-cell infiltration Very slight 1 0 Slight 0 1 Moderate 0 1 Mononuclear cell infiltrate Very slight Slight Moderate Fibrosis Very slight 1 0 Slight days post 5 th injection Mixed inflammatory-cell infiltration Slight 2 Mononuclear cell infiltrate Very slight Slight Fibrosis Very slight 1 Feb :02:06

20 In Vitro 遺伝毒性試験該当する資料はない In Vivo 遺伝毒性試験該当する資料はないがん原性試験該当する資料はない p 生殖発生毒性試験 : 重要な試験以外の試験該当する資料はない生殖発生毒性試験 : 受胎能および着床までの初期胚発生に関する試験該当する資料はない生殖発生毒性試験 : 胚胎児発生に関する試験該当する資料はない生殖発生毒性試験 : 出生前および出生後の発生ならびに母体の機能に関する試験該当する資料はない新生児を用いた試験該当する資料はない Feb :02:06

21 p 局所刺激性試験単回筋肉内投与 Test Article: 10Pn-PD-DiT Species / Strain Rabbit / New Zealand White Method of Administration / No.of Injection Intramuscular / Single Location in CTD (Study Number) (V9912/02) Sex Male Female Treatment Saline 10Pn-PD-DiT Saline 10Pn-PD-DiT Injection site Right anterior Right anterior Right calf muscle Right anterior Right anterior Right calf muscle (Dose-volume: 0.5 ml/site) thigh muscle, Right calf muscle thigh muscle thigh muscle, Right calf muscle thigh muscle Number of Animals (Sacrifice 3 days after injection) Gross Pathology (Injection site) White area Histopathology ( Injection site) Right anterior thigh muscle Mixed inflammatory-cell infiltration Severe 3 3 Mononuclear cell infiltrate Very slight 0 3 Slight 1 0 Necrosis Haemorrhage(s) Right calf muscle Mixed inflammatory-cell infiltration Severe 3 3 Mononuclear cell infiltrate Very slight 2 3 Slight 1 0 Necrosis Oedema : Not applicable Feb :02:06

22 その他の毒性試験該当する資料はない Feb :02: p. 12

目次頁略号一覧表まとめ反復投与毒性試験ラットラット 7 日間経口投与試験及び 4 週間回復性試験 ( 試験番号 TX CTD ) 考察及び結論

目次頁略号一覧表まとめ反復投与毒性試験ラットラット 7 日間経口投与試験及び 4 週間回復性試験 ( 試験番号 TX CTD ) 考察及び結論ソホスブビル第 2 部 CTD の概要 2.6 非臨床試験の概要文及び概要表 2.6.6 毒性試験の概要文ギリアドサイエンシズ株式会社 1 目次頁略号一覧表... 4 1 まとめ... 6 2 反復投与毒性試験... 7 2.1 ラット... 7 2.1.1 ラット 7 日間経口投与試験及び 4 週間回復性試験 ( 試験番号 TX-334-2012 CTD 4.2.3.2.1)... 7 3