To elucidate the SCLC antigens that are recognized by Th7 cells, we examine surface molecules of SCLC cells and found that the floating SCLC cells express CD33, which is one of putative cancer stem cell (CSC) markers. Proteome analyses revealed DEAD/H (Asp-Glu-Ala-Asp/His) box polypeptide 3, X-linked (DDX3X) as a novel CSC-specific protein. An anti-ddx3x vaccination induced anti-csc effector T cells that mediated antitumor therapeutic efficacy. DDX3X was highly expressed in human CD33 + SCLC cells but not in normal epithelial cells. These results indicate that anti-ddx3x, immunotherapy to induce Th7 is a promising treatment option in the clinical setting. 8 9

Th7, T, T CDL low (Kagamu, H., et al., Cancer Res, 99)MHC classii CD + T (Kagamu, H., et al., J.Immunol, 998) CD CD T effector phase CD8 + T (Fujita, N., Kagamu, H., et al., J.Immunol,, Watanabe, S., Kagamu, H., et al., J.Immunol, 3) T CDT CDT T Treg (Hiura, T., Kagamu, H., et al., J.Immunol, ) C 898 CDL low CD + T CDL high CD + CD + Treg (ED) Treg CD + T (LD) CD + T Treg CD LD Treg CD LD CDL low CD + T (HV)ED IL-7 IFNγ IL-7 Th7 T Th7 Treg TGFβ Treg IL- Treg Th7 (Bettelli E, et al., Nature. ) LD-SCLC Treg CD + T

a. 87. S Diameter of Skin Tumor A (mm) CD33 DC/parental B DC/CD33 - DC/CD33 + Relative Number of Cells. % 3 Infused with LN T cells draining CD33- tumor cells. % B CD33 T cells of LNs draining DC/parental B T cells of LNs draining DC/CD33 - T cells of LNs draining DC/CD33 + 3 Infused with LN T cells draining parental tumor cells 3. % 3 Infused with LN T cells draining CD33+ tumor cells 3.3 % D 3 Log Fluorescence Intensity (FoxP3) 3

CSC 抗原によりプライミングされたエフ ェクターT 細胞を CD+と CD8+ T細胞に分 離して親株腫瘍を持つマウスに経静脈的 移入したところ この高い治療効果は 主 に CD+ T 細 胞 に よ り 担 わ れ て い た (Fig.3C) また CD33+腫瘍細胞接種によりプラ イムされた CD+ T 細胞は IL-7, IFNγ を特異的抗原刺激により分泌したが IL- の分泌は見られず Th7-Th 型に分 化 し て い る こ と が 明 ら か と な っ た (Fig.) (3) Th7 型抗腫瘍 T 細胞を誘導した抗原を同 定する目的で CD33+腫瘍細胞と CD33腫瘍細胞のタンパク質発現を二次元電気 泳動法により解析したところ CD33+腫 瘍細胞に高発現する４つのタンパク質を 同定することができた (Fig.) らかとなった (Fig.) Fig. Fig. CD33- B melanoma A CD33+ B melanoma SYPRO Ruby staining Fig. () 同定したタンパク質の一つである DDX3X は germ cell に強く発現することが知ら れている RNA helicase活性を持つ蛋白質 である この蛋白質に注目し 合成した DDX3X によるワクチンを行ったところ CD33+腫瘍細胞そのものによるワクチン よりも高い防御免疫を誘導することが明 C (mm). DDX3X /DC CD33+ /DC CD+ LN T cells draining CD33+ tumor antigen CD+ LN T cells draining DDX3X. IFN! 3. 8 DDX3X/DC OVA/DC IL-7 8.8. 3.. Figure 8 (-) (-) CD33+ CD33- DDX3X DC Stimulator CD33+ CD33- DDX3X DC Fig.8 Diameter of Skin Tumor CD+ LN T cells draining CD33- tumor antigen IFN! Diameter of Skin Tumor No Treatment IL-7 B Fig.7 さらに CD33+腫瘍細胞を特異的に認識 する CD+ T細胞は DDX3X を また DDX3X を特異的に認識する CD+ T細胞は CD33+ 腫瘍細胞を認識してサイトカイン分泌す ることが確認された (Fig.7) () immunoblotting により解析した結果 DDX3X はヒト正常細胞(NHEK, HMEC, NHBE) にはわずかにしか発現していないが 小 細胞肺癌 (87., S) 肺腺癌 (A9) 乳癌 (MCF7) 大腸癌 (HCT) におい て発現していること 癌幹細胞マーカー 陽性癌細胞(87., HCT, MCF7)にはさ らに高発現していることを明らかとした (Fig.8) (-) CD33+ CD33DC Stimulator

Hayashi, M., T. Koya, H. Kawakami, T. Sakagami, T. Hasegawa, H. Kagamu, T. Takada, Y. Sakai, E. Suzuki, E.W. Gelfand, and F. Gejyo.. A prostacyclin agonist with thromboxane inhibitory activity for airway allergic inflammation in mice. Clin Exp Allergy :37-3. Hayashi, Y., H. Kuriyama, H. Umezu, J. Tanaka, T. Yoshimasu, T. Furukawa, H. Tanaka, H. Kagamu, F. Gejyo, and H. Yoshizawa. 9. Class III beta-tubulin expression in tumor cells is correlated with resistance to docetaxel in patients with completely resected non-small-cell lung cancer. Intern Med 8:3-8. Koya, T., T. Hasegawa, J. Tanaka, H. Kawakami, M. Hayashi, H. Kagamu, I. Narita, M. Arakawa, and E. Suzuki. 9. Effect of ciclesonide on bronchial asthma in athletes. J Asthma :3-3. Koya, T., C. Tsubata, H. Kagamu, K. Koyama, M. Hayashi, K. Kuwabara, T. Itoh, Y. Tanabe, T. Takada, and F. Gejyo. 9. Anti-interferon-gamma autoantibody in a patient with disseminated Mycobacterium avium complex. J Infect Chemother :8-. Koyama, K., H. Kagamu, S. Miura, T. Hiura, T. Miyabayashi, R. Itoh, H. Kuriyama, H. Tanaka, J. Tanaka, H. Yoshizawa, K. Nakata, and F. Gejyo. 8. Reciprocal CD + T-cell balance of effector CDL low CD + and CDL high CD + CD + regulatory T cells in small cell lung cancer reflects disease stage. Clin Cancer Res :77-779. Miura, S., H. Kagamu, H. Tanaka, H. Yoshizawa, and F. Gejyo. 8. Appropriate timing of CD ligation for RNA-Pulsed DCs to induce antitumor immunity. Scand J Immunol 7:38-39. ECCO 3 th ESMO Multidisciplinary Congress, Takao Miyabayashi, Hiroshi Kagamu, Kenichi Koyama, Hideyuki Kuriyama, Junta Tanaka, Hiroshi Tanaka, Hirohisa Yoshizawa, Koh Nakata, Fumitake Gejyo, DEAD/H (Asp-Glu-Ala-Asp/His) box polypeptide 3, X-linked is a CD33 + tumor-specific protein and induces antitumor immunity., Berlin, - September 9 American Association for Cancer Research annual meeting, Takao Miyabayashi, Hiroshi Kagamu, Jun Koshio, Kosuke Ichikawa, Junko Baba, Satoshi Watanabe, Hiroshi Tanaka, Junta Tanaka, Hirohisa Yoshizawa, Koh Nakata, Ichiei Narita, Cancer stem cells express specific immunogenic proteins that induce Th7-dominant immunity resulting in regression of parental tumor in vivo., Washington DC, 7- April,