調査研究 胃腸炎ウイルスの疫学的研究 Real-time RT_PCR 法によるヒト C 群ロタウイルス検査法の開発 Studies on Viruses Causing Non-bacterial Gastroenteritis in Okayama Developme
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- みさき ふじがわ
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2 調査研究 胃腸炎ウイルスの疫学的研究 Real-time RT_PCR 法によるヒト C 群ロタウイルス検査法の開発 Studies on Viruses Causing Non-bacterial Gastroenteritis in Okayama Development of Real-Time Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction Method for the Detection of Human Group C Rotaviruses 葛谷光隆 濱野雅子 木田浩司 藤井理津志 ウイルス科 Mitsutaka Kuzuya, Masako Hamano, Kouji Kida, and Ritsushi Fujii 要 旨 Real-time RT_PCR 法によるヒト C 群ロタウイルス ヒト CRV の検査法について検討した 既報のプライマー及びプ ローブに一部改変を加えることで ほぼ全てのヒトCRV株を特異的かつ定量的に検出できる系を確立した 検証の結果 確立した方法はヒト CRV のみを特異的に検出できること 糞便中の非特異物質等の影響を受けないこと さらに良好 な定量性を示すことなどがわかった なお 検出限界はアッセイあたり 10 コピーであった 本法を用いて県内の下水 を調査したところ 11,000 4,146,000 コピー /L のヒト CRV が存在すること 及びウイルス量は 3 月下旬頃がピーク であることなどが今回初めて明らかになった 今回確立した Real-time RT_PCR 法は Conventional nested RT_PCR 法とほぼ同等の感度を有するのみならず 約 3 時間半程度で結果が判明すること 検体中のウイルスを定量的に検出で きるなど ヒト CRV 集団発生事例の感染経路究明等に大いに役立つものと期待される キーワード ヒト C 群ロタウイルス Real-time RT_PCR TaqMan MGB probe 定量的検出 流入下水 Key words human group C rotavirus, Real-time RT_PCR, TaqMan MGB probe, quantitative detection, influent sewage warter 1 はじめに 界各地に広く分布していることがわかっている 本ウイ ロタウイルスはレオウイルス科に属する 2 本鎖の ルスの検出頻度はさほど高くないものの しばしば食中 RNA を遺伝子として持つウイルスであり ヒトおよび 毒様の集団胃腸炎を引き起すため公衆衛生上問題視され 1 動物の重要な胃腸炎起因ウイルスとして知られている て い る 我 が 国 に お け る ヒ ト CRV 集 団 発 生 事 例 は ウイルス粒子は二重の殻 内殻および外殻 で構成され 1988 年に福井県で発生した大規模事例 有症者 675 名 ており 内殻蛋白の抗原性やウイルス遺伝子の違いによ 以降 2006 年までに計 19 例が報告されている 3 推定 り A G 群に分類されている これらのうち ヒトに病 感染経路については ヒト ヒト感染が大部分を占める 原性を有するのは A B および C 群である ものの 食品等が原因と思われるケースも散見される 1 ヒト A 群ロタウイルスは小児胃腸炎の主要な病原体で ヒト CRV の検査については 我々が開発した 4 逆受 あり 我が国における患者数は年間約 80 万人に及ぶと 身血球凝集反応法により迅速 簡便な検出が可能であり 推定されている ヒト B 群ロタウイルスは 1982 実際の事例においてその有効性が確認されている 年に中国で発生した集団胃腸炎の病原体として確認 しかしながら その検出感度は約 107 個 /ml であるため された後 インドやバングラディシュにおける胃腸炎例 推定原因食品や病日を経過した患者糞便 及び環境試料 からも散発的に検出されたものの それ以外の地域にお 中などに含まれる極微量のウイルスを検出することは困 ける検出例はない ヒト C 群ロタウイルス ヒト CRV 難である 6 一方ノロウイルス検査においては Real- は主に年長児 成人に胃腸炎を起こし 日本をはじめ世 time RT_PCR 法による特異的かつ高感度な検査法が既 2 93
3 に確立されており 8 患者の特定のみならず食品や環境 水中などの検査にも広く応用されている 9, 10 そこで Takara 社製 4μL Recombinant RNase inhibitor 40U/ μl Takara 社製 0.5μL Nuclease free water 2.5μL 及 ヒト CRV の特異的で高感度な検出を目的として Real- び SuperScript II reverse transcriptase Invitrogen 社 time RT_PCR 法に基づく検査法について検討を行った 製 1μL をそれぞれ加えて 20μL とし 分間逆転 写反応を行った後 分の加熱により酵素を失活 材料及び方法 させた 供試検体 2.4 Real-time RT_PCR 法 Real-time RT_PCR 法に使用したプライマー及びプ Real-time RT_PCR 法の特異性を確認するため ヒト CRV 陽 性 糞 便 3 検 体 検 体 番 号 N1217 OH1250 ローブは基本的に Logan ら 15 の報告に従ったが フォ OH1603 陰 性 糞 便 5 検 体 検 体 番 号 OH1517 ワードプライマーについては一部改変を加えた 表 1 OH1557 OH2213 OH2230 OH2334 及び動物由来 T a q M a n g e n e e x p r e s s i o n m a s t e r m i x L i f e CRV 株 3 検体 ブタ CRV Cowden 株 OS999 株 ウシ technologies社製 の反応液 18μL フォワード及びリバー CRV Shintoku 株 の培養上清をそれぞれ供試した ま スプライマー各 0.6μM TaqMan MGB プローブ 0.2μM た環境試料として 2009 年 1 月 2010 年 1 月に県内の を 含 む に 合 成 し た cdna 2μL を 加 え て 20μL と し A 下水処理場で採取された流入下水 23 検体を 片山ら StepOnePlus Life technologies 社製 を用いて増幅及び が報告している陰荷電膜濃縮法 検出を行った 反応条件は 50 2 分 分の後 により 1,250 倍に濃縮 11 熱変性 秒 及びアニール 伸長反応 60 1 分 したものを試料として用いた 2.2 コントロールプラスミド の サ イ ク ル を 45 回 繰 り 返 し た 解 析 は StepOne Real-time RT_PCR 法の検証及び定量用コントロール と し て ヒ ト CRV の 代 表 的 な 株 で あ る OK118 株 12 Software v2.1 Life technologies 社製 を用いた 2.5 Real-time PCR 法 と 従 来 法 に よ る RT_PCR 法 OK450 株及び K9304 株の外殻糖蛋白 VP7 遺伝子を それぞれプラスミド puc19 にクローニングして作成し た組み替えプラスミド , 14 Conventional RT_PCR 法 との一致性を検証するため 逆転写反応で合成した cdna について 既報の方法 6 に を使用した 逆転写反応による cdna の合成 従いnested PCR法 2 段階でPCRを行う高感度な検出法 市販の QIAamp Viral RNA mini kit Qiagen 社製 を 用いて検体からウイルスRNAを抽出し 既報の方法 Conventional RT_PCR 法 による検査を実施した 6, 13 結 に従って VP7 遺伝子の cdna を合成した すなわち 3 抽出した RNA 4μL に VP7 遺伝子の両端に相補的なプラ 3.1 果 Real-time RT_PCR 法の検討 イ マ ー 5'_GGC ATT TAA AAA AGA AGA AGC まず最初に Logan ら 15 の報告に従って作製したプ TGT_3' 及び 5'_AGC CAC ATG ATC TTG TTT ACG ライマー及びプローブを使用した検査系について 既知 C_3' 各 25μM 及び DMSO をそれぞれ 1μL ずつ添加し のコピー数に調整した OK118 株 OK450 株及び K 分間熱変成後 氷中で急冷した 次に 5 First- 株のコントロールプラスミドを用いて検証を行った そ strand buffer Invitrogen 社製 4μL 2.5mM dntps の結果 すべてのプラスミドで特異増幅が確認されたも 表1 94 Real-time RT_PCR 法のプライマー及びプローブ配列
4 の の OK450 株 プ ラ ス ミ ド の Ct 値 増 幅 曲 線 が 遺伝子配列とのマッチングを検討したところ OK450 Threshold line と交差した増幅サイクル数 が OK118 株に関してフォワードプライマーの 3' 端付近に 2 カ所の 及び K9304 株プラスミドの値に比べ同一コピー数にお ミスマッチが存在し これが感度低下の原因であると考 いて 8 サイクル程度多く 十分な検出感度が得られてい えられた そこで このミスマッチを回避すべく新たな ないことがわかった そこで プライマー及びプローブ プライマーを設計 合成し 表 1 同様に検証実験を行っ 配列について OK118 株 OK450 株及び K9304 株の VP7 たところ OK450 株プラスミドの感度低下は解消され た 3.2 Real-time RT_PCR 法の特異性及び検出感度 Real-time RT_PCR 法の特異性について ヒト CRV 陽 性糞便 3 検体及び陰性糞便 5 検体に加え ブタ CRV 2 株及びウシ CRV 1 株を用いて検討を行った その結果 ヒト CRV 陽性糞便のみで特異的増幅が認められ データ を示さず 本法がヒト CRV のみを特異的に検出できる こと 及び糞便中の非特異物質等の影響を受けないこと がわかった 次に Real-time RT_PCR 法の定量性及び検出感度を 調べるため OK118 株 OK450 株 及び K9304 株プラ スミドを 1 100,000copies/tube の範囲で 10 倍段階希 釈を行って測定した その結果 図 1 いずれのプラス ミドにおいても ,000copies/tube の範囲で プ ラスミド希釈の対数値と Ct 値との間に明確な比例関係 が認められ R2= またプラスミド濃度 が 10 倍濃くなるにしたがい Ct 値が ずつ低下 していた このことから本検査法は良好な定量性を有し ていることがわかった なお いずれのプラスミドでも 1copy/tube では増幅がみられなかったことから 本法 の検出感度はアッセイあたり 10 コピーであると考えら れた 3.3 流入下水の測定結果 環境試料中等に極微量存在するヒトCRVを検出できる のかについて検 討するため 流入下水 23 検体について Real-time RT_PCR 法 に よ る 定 量 検 査 と 同 時 に Conventional RT_PCR 法による検査を実施した 結果は 表 2 に示すように Real-time RT_PCR 法とConventional RT_PCR 法の結果はよく一致しており 両法はほぼ同等 の感度を有することがわかった 定量結果から 2009 年 1 月 7 月に採取された流入下水 1L あたり 11, ,000 コピーのウイルス遺伝子が存在することが明 らかとなり また 3 月下旬を定量値のピークとする検出 図1 コントロールプラスミドの測定結果 パターンが認められた 各プラスミドを 10 倍段階希釈し Real-time RT_PCR 法で測定した 95
5 表2 流入下水の遺伝子検査法による測定結果 法を開発してきた 4 本法の検出感度は 107 個 / ml とさほど高くないものの 集団発生時における 患者便からの CRV 検出には十分な感度を有するこ とがわかっている 5 7 しかしながら病日が経過 した患者便など ウイルス量が少ないと思われる 検体では陰性となるケースもあるため 6 推定原因 食品などの検査には用いることができない この ような場合には 高感度な 2 段階増幅法による Conventional RT_PCR 法による検査が必要とな るが 本法は結果判明までに最低でも 10 時間を 要し また定量的な検出は不可能である 6 今回 確立した Real-time RT_PCR 法は Conventional RT_PCR 法と同等の感度を有するのみならず 約 3 時間半程度で結果が判明すること 検体中 の ウ イ ル ス を 定 量 的 に 検 出 で き る な ど ヒ ト CRV 集団発生事例の感染経路究明等に大いに役 立つものと期待される さらに今回 流入下水 中のヒト CRV の検出も可能であったことから 飲料水などが感染源と疑われる事例の原因究明 等にも適用可能であるものと思われる ヒト CRV はその検出頻度が比較的低いにもか 4 考 察 Real-time RT_PCR 法に基づくヒト CRV の検出系は かわらず 住民の多くが本ウイルスに対する抗体を保有 している 17 など その流行実態については不明な点が これまでに Meleg ら 16 がサイバーグリーンを用いた系 多い Meleg ら 16 は 2005 年 2 月 12 月にかけて流入 を Logan ら 15 が TaqMan プローブを用いた系をそれ 下水中の CRV を定量的に検査し 下水中に多量のヒト ぞれ報告している しかしながら Meleg らの方法はヒ CRV が存在することを明らかにした さらに ウイル ト CRV のみを特異的に検出できず また Logan らの方 ス量のピークは 3 4 月であり 特に流域人口の多い処 法も 分離株や臨床検体等を用いた検証実験が行われて 理場の流入下水から最も多量のウイルスが検出されたこ いないなどの問題点がみられる 実際 今回の検討にお とを報告している しかしながらその一方で 調査期間 いて Logan らの報告したオリジナルの検査系では フォ 中にヒト CRV 感染者はわずか 1 名しか確認されず ヒ ワードプライマーにある 2 カ所のミスマッチのために ト CRV に感染しても明らかな症状を示さない人が多い OK450 株をうまく検出することができなかった そこ のではないかと考察している 我々も 県内下水処理場 で今回 プライマーに一部改変を加えることで ほぼ全 で採取した流入水中に 11,000 4,146,000 コピー /L とい てのヒト CRV 株を特異的かつ定量的に検出できる検査 う多量のヒト CRV が存在することを今回初めて明らか 系を確立することができた さらに検証実験の結果 今 にした さらに ウイルス量は 3 月下旬頃にピークとな 回の方法はヒト CRV のみを特異的に検出できること るなど Meleg らの報告と同様であり またこれは 我々 糞便中の非特異物質等の影響を受けないこと及び良好な が既に報告した我が国におけるヒト CRV の流行時期 12 定量性を示すことなどがわかった また 検出限界もアッ とも一致するものであった 今後さらに長期間にわたっ セイあたり 10 コピーと十分な感度を有していた て下水中のヒト CRV の動態を調べるとともに 感染者 我々はこれまでに ヒト CRV の迅速 簡便な検出法 としてモノクローナル抗体を用いた逆受身血球凝集反応 96 のサーベイランスも同時に行うことで 本ウイルス流行 実態の解明が進むものと思われる
6 文 献 Adenoviruses, and Torque Teno Viruses in the １ 小林宣道 浦沢正三 ロタウイルス ウイルス 50 Microbiol., 71, 2403_2411, _ ２ 中込とよ子 中込 Tamagawa River in Japan, Appl. Environ. 治 ロタウイルスワクチンの現 状と展望 病原微生物検出情報 26 14_ ３ 葛谷光隆 ロタウイルス感染症 公衆衛生 片山浩之 新たなウイルス濃縮方法の開発と水道水 および水道水源調査への適用 モダンメディア _ Kuzuya, M., Fujii, R., Hamano, M.,Nishijima, M., 991_ ４ Kuzuya, M., Fujii, R., Hamano, M., Nakabayashi, T., Ogura, H. Detection and molecular characteriza- Tsunemitsu, H., et al. Rapid detection of human tion of human group C rotaviruses in Okayama group C rotaviruses by reverse passive hemagglu- Prefecture, Japan, between 1986 and 2005, J. Med. tination and latex agglutination tests using mono- Virol., 79, 1219_1228, 2007 clonal antibodies, J. Clin. Microbiol., 31, 1308_1311, Yamada, M., et al. Molecular analysis of outer 1993 ５ 葛谷光隆 藤井理津志 濱野雅子 小倉 13 Kuzuya, M., Fujii, R., Hamano, M., Nakamura, J., 肇 中山 capsid glycoprotein VP7 genes from two isolates 俶槻ら 岡山県内で初めて確認されたヒト C 群ロタ of human group C rotavirus with different ウイルスによる集団胃腸炎事例 岡山県環境保健セ genome electropherotypes, J. Clin. Microbiol., 34, ンター年報 24 55_ _3189, 1996 ６ 葛谷光隆 藤井理津志 濱野雅子 小倉 肇 教育 14 Kuzuya, M., Fujii, R., Hamano, M., Yamada, M., 研修施設で発生したヒト C 群ロタウイルスによる集 Shinozaki, K., et al. Survey of human group C 団胃腸炎事例 感染症学雑誌 77 53_ rotaviruses in Japan during the winter of 1992 to ７ 葛谷光隆 濱野雅子 西島倫子 藤井理津志 小倉 肇ら 保健福祉施設で発生した C 群ロタウイルスに 1993, J. Clin. Microbiol., 36, 6_10, Logan, C., Oʼ Leary, J. J., Oʼ Sullivan N. Real-time よる集団胃腸炎事例 病原微生物検出情報 26 reverse transcription-pcr for detection of rotavi- 100_ rus and adenovirus as causative agents of acute ８ Kageyama, T., Kojima, S., Shinohara, M., Uchida, K., Fukushi, S. et al. Broadly reactive and highly viral gastroenteritis in children, J. Clin. Microbiol., 44, 3189_95, 2006 sensitive assay for Norwalk-like viruses based on 16 Meleg, E., Banyai, K., Martella, V., Jiang, B., Kocsis, Real-time quantitative reverse transcription-pcr, et al.. Detection and quantification of group C J. Clin. Microbiol _1557, 2003 rotaviruses in communal sewage, Appl. Environ. ９ Hamano, M., Kuzuya, M., Fujii, R., Ogura, H., Microbiol., 74, 3394_3399, 2008 Y a m a d a, M. E p i d e m i o l o g y o f A c u t e 17 Kuzuya, M., Fujii, R., Hamano, M., Ohata, R., Gastroenteritis Outbreaks Caused by Noroviruses Ogura, H., et al. Seroepidemiology of human in Okayama, Japan, J. Med. Virol., 77, 282_289, 2005 group C rotavirus in Japan based on a blocking 10 Haramoto, E., Katayama, H., Oguma, K., Ohgaki, enzyme-linked immunosorbent assay, Clin. Diagn. S. Application of cation-coated Filter Method to Lab. Immunol., 8, 161_165, 2001 Detection of Noroviruses, Enteroviruses, 97
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シーズンから シーズンまでに検出されたノロウイルス GⅡ の遺伝子型解析と流行状況の分析 藤井慶樹則常浩太八島加八山本美和子 松室信宏 石村勝之 シーズンから シーズンまでの間に, 広島市で発生した食中毒, 有症苦情及び散発の胃腸炎事例の患者便から検出されたノロウイルス (NoV)GⅡについて遺伝子型解析と流行状況の分析を行った 遺伝子型解析においては,ORF の RNA 依存性 RNA ポリメラーゼ領域から
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概念図 ウイルス指標による糞便汚染起源追跡 荒川プロジェクトの研究紹介 ウイルスも含めた 水の安全性評価とは 各動物種由来ウイルスによる評価 宿主 汚染 宿主特異性が 高いウイルス 河川水 海水 地下水 糞便 水中から各動物種に特異的なウイルスの検出 水質評価グループ 東京大学 片山 浩之 准教授 検出された動物由来 糞便汚染を正確に評価 病原微生物の感染リスク ヒト由来ウイルス 腸管系ウイルス ウシ由来ウイルス
H26_大和証券_研究業績_C本文_p indd
リアルタイム PCR 法と High Resolution Melt 解析法を用いた結核菌の迅速薬剤耐性検査法と分子疫学解析法についての検討 日本赤十字社長崎原爆諫早病院内科 検査部 医師久保亨 ( 共同研究者 ) 日本赤十字社長崎原爆諫早病院副院長福島喜代康日本赤十字社長崎原爆諫早病院内科部長松竹豊司日本赤十字社長崎原爆諫早病院医療技術部技師長相良俊則 はじめに結核は現在もなお我が国の公衆衛生上の大きな問題であり
PowerPoint プレゼンテーション
植物 DA の抽出と増幅 1 背景 植物種子から DA 抽出する際 有機溶媒や酵素を用いた処理 遠心分離装置を使った操作など 煩雑で時間のかかる工程が用いられてきた カ技ネ術カの 検体採取 簡易 DA 抽出キット version2( 抽出キット ) と高速増幅用 DA Polymerase ( 増幅キット ) を組合わせる事で 遺伝子検査時間を短縮可能! 抽出キット * 抽出 DA を 増幅キット
鳥インフルエンザA(H7N9)ウイルス検出マニュアル(第2版)公開用
鳥インフルエンザ A(H7N9) ウイルス 検出マニュアル ( 第 2 版 ) 1 目次 1 臨床検体またはウイルス培養液からの RNA の抽出 ( 参考 ) ---------- 3 2 リアルタイム RT-PCR(TaqMan Probe 法 ) による鳥インフルエンザ A(H7N9) ウイルスの検出方法 ---------- 4 3 Conventional RT-PCR 法よる鳥インフルエンザ
Microsoft Word - FMB_Text(PCR) _ver3.doc
2.PCR 法による DNA の増幅 現代の分子生物学において その進歩に最も貢献した実験法の1つが PCR(Polymerase chain reaction) 法である PCR 法は極めて微量の DNA サンプルから特定の DNA 断片を短時間に大量に増幅することができる方法であり 多大な時間と労力を要した遺伝子クローニングを過去のものとしてしまった また その操作の簡便さから 現在では基礎研究のみならず臨床遺伝子診断から食品衛生検査
遺伝子検査の基礎知識
リアルタイム PCR( インターカレーター法 ) 実験ガイドこの文書では インターカレーター法 (TB Green 検出 ) によるリアルタイム PCR について 蛍光検出の原理や実験操作の流れなどを解説します 実際の実験操作の詳細については 各製品の取扱説明書をご参照ください - 目次 - 1 蛍光検出の原理 2 実験に必要なもの 3 実験操作法 4 結果の解析 1 1 蛍光検出の原理 インターカレーターによる蛍光検出の原理
Microsoft Word - dcasdf003_dstd_ doc
一般的な食品検体からのウイルスの回収 濃縮法 1. 適用範囲 1) 対象ウイルス ノロウイルス, サポウイルス, A 型肝炎ウイルス等の食品媒介性ウイルス 2) 対象食品 食材および調理済の食品一般 3) 本プロトコールの範囲食品一般から洗滌液にて遊離させたウイルス粒子を, 抗原抗体複合体の形で黄色ブドウ球菌の表面に吸着させることによって回収し,RNA を抽出した後,RT-PCR の鋳型となる cdna
埼衛研所報第 52 号 2018 年 埼玉県におけるエンテロウイルス検出状況について ( 年度 ) 中川佳子篠原美千代富岡恭子鈴木典子峯岸俊貴小川泰卓青沼えり内田和江岸本剛 Enterovirus Isolated in Saitama Prefecture(April 2016-
埼玉県におけるエンテロウイルス検出状況について (2016-2017 年度 ) 中川佳子篠原美千代富岡恭子鈴木典子峯岸俊貴小川泰卓青沼えり内田和江岸本剛 Enterovirus Isolated in Saitama Prefecture(April 2016-March 2018) Keiko Nakagawa,Michiyo Shinohara,Kyoko Tomioka,Noriko Suzuki,Toshitaka
リアルタイムPCRの基礎知識
1. リアルタイム PCR の用途リアルタイム PCR 法は 遺伝子発現解析の他に SNPs タイピング 遺伝子組み換え食品の検査 ウイルスや病原菌の検出 導入遺伝子のコピー数の解析などさまざまな用途に応用されている 遺伝子発現解析のような定量解析は まさにリアルタイム PCR の得意とするところであるが プラス / マイナス判定だけの定性的な解析にもその威力を発揮する これは リアルタイム PCR
RT-PCR プロトコール.PDF
Real -Time RT-PCR icycler iq Bio Rad RT-PCR RT-PCR 1 icycler iq Bio Rad icycler iq 30 2 Ready-To-Go T-Primed First-Strand Kit (amersham pharmacia biotech) Ready-To-Go T-Primed First-Strand Kit QuantiTect
Microsoft Word - 【要旨】_かぜ症候群の原因ウイルス
かぜ症候群の原因ウイルス ~ サフォードウイルスもそのひとつ?~ 新潟県保健環境科学研究所ウイルス科主任研究員広川智香 1 はじめにかぜ症候群とは, 鼻やのど, 気管支や肺に急性の炎症をきたす疾患の総称で, その原因となる病原体は 80~90% がウイルスといわれています 主な原因ウイルスとしてはライノウイルス, コロナウイルス, パラインフルエンザウイルス,RS ウイルス, インフルエンザウイルスなどがあげられます
はじめてのリアルタイムPCR
はじめてのリアルタイム PCR 1. はじめにリアルタイム PCR 法は PCR 増幅産物の増加をリアルタイムでモニタリングし 解析する技術です エンドポイントで PCR 増幅産物を確認する従来の PCR 法に比べて 1DNA や RNA の正確な定量ができること 2 電気泳動が不要なので迅速かつ簡便に解析できコンタミネーションの危険性も小さいことなど多くの利点があります 今や 遺伝子発現解析や SNP
syoku10_10.indd
690 64 10 2010 I Pythium Pythium Pythium 1 2 Qualitative and Quantitative Detection of Plant Pathogens. Pythium By Koji KAGEYAMA PCR Pythium Pythium 2006 II PCR PCRPolymerase Chain ReactionDNA PCR 2005PCR
平間崇 PCR,RT-PCR,real-time PCR 1047 講 座 研究手法入門 : 生化学的 免疫学的実験法 PCR,RT-PCR,real-time PCR 平間 崇 要 旨 PCR は, 基礎研究や臨床検査などの幅広い分野において欠かせない手法として確立している PCR,RT-PCR,
平間崇 PCR,RT-PCR,real-time PCR 1047 講 座 研究手法入門 : 生化学的 免疫学的実験法 PCR,RT-PCR,real-time PCR 平間 崇 要 旨 PCR は, 基礎研究や臨床検査などの幅広い分野において欠かせない手法として確立している PCR,RT-PCR,real-time PCR の基本的原理は共通であり, いずれも DNA 複製を人工的に繰り返すことで,
TaKaRa PCR Human Papillomavirus Detection Set
研究用 TaKaRa PCR Human Papillomavirus Detection Set 説明書 v201703da 本製品は子宮頸癌において最も高頻度に検出される Human Papillomavirus(HPV)16 18 および 33 型をそれぞれ特異的に増幅し 検出するセットです HPV16 18 および 33 型の E6 を含む領域 (140 bp ただし HPV33 型は 141
PrimeScript® II 1st strand cDNA Synthesis Kit
研究用 PrimeScript II 1st strand cdna Synthesis Kit 説明書 v201208da 目次 I. 概要... 3 II. キットの内容... 4 III. 保存... 4 IV. 1st-strand cdna 合成反応... 5 V. RT-PCR を行う場合... 6 VI. RNA サンプルの調製について... 6 VII. 関連製品... 7 VIII.
DNA 抽出条件かき取った花粉 1~3 粒程度を 3 μl の抽出液 (10 mm Tris/HCl [ph8.0] 10 mm EDTA 0.01% SDS 0.2 mg/ml Proteinase K) に懸濁し 37 C 60 min そして 95 C 10 min の処理を行うことで DNA
![DNA 抽出条件かき取った花粉 1~3 粒程度を 3 μl の抽出液 (10 mm Tris/HCl [ph8.0] 10 mm EDTA 0.01% SDS 0.2 mg/ml Proteinase K) に懸濁し 37 C 60 min そして 95 C 10 min の処理を行うことで DNA](/thumbs/91/104738989.jpg "DNA 抽出条件かき取った花粉 1~3 粒程度を 3 μl の抽出液 (10 mm Tris/HCl [ph8.0] 10 mm EDTA 0.01% SDS 0.2 mg/ml Proteinase K) に懸濁し 37 C 60 min そして 95 C 10 min の処理を行うことで DNA")
組換えイネ花粉の飛散試験 交雑試験 1. 飛散試験 目的 隔離圃場内の試験区で栽培している組換えイネ S-C 系統 及び AS-D 系統の開花時における花粉の飛散状況を確認するため 方法 (1) H23 年度は 7 月末からの低温の影響を受け例年の開花時期よりも遅れ 試験に用いた組換えイネの開花が最初に確認されたのは S-C 系統 及び AS-D 系統ともに 8 月 13 日であった そこで予め準備しておいた花粉トラップ
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岡山県環境保健センター年報 41,77-82,2017 資料 日本紅斑熱リケッチアを特異的に検出する Real-timePCR 法に弱反応を示したリケッチア属菌の解析 Genomic Analysis of Rickettsia Reacted Weakly in Specific Real-time PCR Method for Rickettsia japonica 松岡保博, 木田浩司, 谷川徳行,
180126_TOO_ウイルス感染症研究者向け資料【最終】.indd
ウイルス 感染症研究 実験特集 不可能を可能にする NanoLuc テクノロジー NanoLuc テクノロジーをご利用のウイルス 感染症研究に携わるユーザー 4 名の方に最新の 研究成果についてご寄稿頂きました プロメガが開発した NanoLuc は 19 KDa の低分子の発光酵素であり 従来のホタルルシフェラーゼの 1/3 の分子量であるにもかかわらず 発 光レベルは 1 倍にも達します この
イルスが存在しており このウイルスの存在を確認することが診断につながります ウ イルス性発疹症 についての詳細は他稿を参照していただき 今回は 局所感染疾患 と 腫瘍性疾患 のウイルス感染検査と読み方について解説します 皮膚病変におけるウイルス感染検査 ( 図 2, 表 ) 表 皮膚病変におけるウイ
2012 年 12 月 13 日放送 第 111 回日本皮膚科学会総会 6 教育講演 26-3 皮膚病変におけるウイルス感染検査と読み方 川崎医科大学皮膚科 講師山本剛伸 はじめにウイルス性皮膚疾患は 臨床症状から視診のみで診断がつく例もありますが ウイルス感染検査が必要となる症例も日常多く遭遇します ウイルス感染検査法は多種類存在し それぞれに利点 欠点があります 今回は それぞれのウイルス感染検査について
広島市衛研年報 34, 37-43(2015) 2014/15 シーズンにおけるノロウイルス GⅡ/11 の流行 *1 藤井慶樹則常浩太加藤寛子 *1 瀧口由佳理 八島加八 山本美和子 京塚明美 石村勝之 *2 野田衛 2014/15 シーズンに広島市で発生した食中毒や有症苦情事例の患者便から検出さ
2014/15 シーズンにおけるノロウイルス GⅡ/11 の流行 *1 藤井慶樹則常浩太加藤寛子 *1 瀧口由佳理 八島加八 山本美和子 京塚明美 石村勝之 *2 野田衛 2014/15 シーズンに広島市で発生した食中毒や有症苦情事例の患者便から検出されたノロウイルス (NoV)GⅡの遺伝子型を解析した結果, 本市では過去に検出例のない NoV GⅡ/11 が多数を占めた また, 生カキから検出された
日本脳炎不活化ワクチン ( シード ) 平成 24 年 7 月 4 日 ( 告示第 1622 号 ) 新規追加 1 定義シードロット規格に適合した日本脳炎ウイルスを同規格に適合した株化細胞で増殖させて得たウイルス液を不活化したワクチンである 2 製法 2.1 製造用株 名称日本脳炎ウイル
日本脳炎不活化ワクチン ( シード ) 平成 24 年 7 月 4 日 ( 告示第 1622 号 ) 新規追加 1 定義シードロット規格に適合した日本脳炎ウイルスを同規格に適合した株化細胞で増殖させて得たウイルス液を不活化したワクチンである 2 製法 2.1 製造用株 2.1.1 名称日本脳炎ウイルス中山株薬検系又はこれと同等と認められた株 2.1.2 性状豚腎初代細胞で増殖し がちょう 鶏初生ひな及びはとの赤血球を凝集する
（別添）安全性未審査の組換えDNA技術応用食品の検査方法_NIHS 最終版_YF
コムギ (MON71200 MON71100/71300 MON71700 MON71800) の検査方法 コムギ穀粒又は粉砕加工食品を検査対象として 1 検体から 2 併行で DNA を抽出精製する 得られた各 DNA 試料液を用いて 2 ウェル併行で定性リアルタイム PCR を実施する 1. DNA 抽出精製 1.1. 試料の洗浄 粉砕 ( 穀粒の場合 ) コムギ穀粒を試料 ( 重量 ) あたり
取扱説明書
Realtime PCR Master Mix Realtime PCR Master Mix トラブルシューティング SYBR Green Realtime PCR Master Mix トラブルシューティングは p3 へ 1. 増幅がみられない 乱れる原因対策検出機器の設定などが蛍光色標識に用いられている蛍光色素の種類によって 検素に適合していない出機器の設定を変更する必要があります 設定を適正化して再解析してください
Probe qPCR Mix
研究用 Probe qpcr Mix 説明書 v201710da Probe qpcr Mix は プローブ検出 (5 - ヌクレアーゼ法 ) によるリアルタイム PCR(qPCR) 専用の試薬です 抗体を利用したホットスタート PCR 酵素とリアルタイム PCR 用バッファーをそれぞれ改良することにより PCR 阻害物質に対する高い抵抗性 特異性の高い増幅 高い増幅効率 高い検出感度を実現しました
The clinical characteristics of Mycoplasma pneumoniae pneumonia in children younger than 6 years old Nobue Takeda1,2),Tomomichi Kurosaki1),Naruhiko Ishiwada2),Yoichi Kohno2) 1)Department of Pediatrics,Chiba
HotStarTaq Plus PCRプロトコールとトラブルシューティング( /2008)
February 2008 HotStarTaq Plus PCR HotStarTaq Plus DNA Polymerase HotStarTaq Plus Master Mix Kit PCR HotStarTaq Plus DNA Polymerase PCR 2 HotStarTaq Plus DNA Polymerase Q-Solution PCR 6 HotStarTaq Plus
微生物学的検査 >> 6B. 培養同定検査 >> 6B615. 検体採取 患者の検査前準備検体採取のタイミング記号添加物 ( キャップ色等 ) 採取材料採取量測定材料リグアニジン塩酸塩尿 5 ml 検体ラベル ( 単項目オーダー時 ) ホンハ ンテスト 注 外 N60 ク
6083 6. 微生物学的検査 >> 6B. 培養同定検査 >> 6B615. nucleic acid detection (chlamydia trachomatis) 連絡先 : 3764 基本情報 6B615 核酸同定 ( 淋菌, クラミジア トラコマティス ) 分析物 JLAC10 診療報酬 識別材料 001 尿 ( 含むその他 ) 測定法 862 リアルタイムPCR 法 結果識別 第 2
Taro-kv12250.jtd
ニューカッスル病 マレック病 ( ニューカッスル病ウイルス由来 F 蛋白遺伝子導入マレック病ウイルス 1 型 ) 凍結生ワクチン 平成 22 年 8 月 12 日 ( 告示第 2288 号 ) 新規追加 ニューカッスル病ウイルスのF 蛋白をコードする遺伝子を弱毒マレック病ウイルス (1 型 ) に挿入して得られた組換え体ウイルスを培養細胞で増殖させて得た感染細胞浮遊液を凍結したワクチンである 1 小分製品の試験
4-4 in situ PCR 研究室 in situ PCR 標的菌種と遺伝子 ( 報告年 ) 応用 Dept. of Marine Sciences University of Georgia USA Escherichia coli O157slt II Escherichia coli 16SrDNA Ralstonia eutropha phl (1997,1998,1999,2002)
2
2 3 4 TTT TCT TAT TGT TTC TCC TAC TGC TTA TCA TAA TGA TTG TCG TAG TGG CTT CCT CAT CGT CTC CCC CAC CGC CTA CCA CAA CGA CTG CCG CAG CGG ATT ACT AAT AGT ATC ACC AAC AGC ATA ACA AAA AGA ATG ACG AAG AGG GTT
手順 ) 1) プライマーの設計 発注変異導入部位がプライマーのほぼ中央になるようにする 可能であれば 制限酵素サイトができるようにすると確認が容易になる プライマーは 25-45mer で TM 値が 78 以上になるようにする Tm= (%GC)-675/N-%mismatch
Mutagenesis 目的 ) 既存の遺伝子に PCR を利用して変異を導入する 1 点変異導入方法 ) Quik Change Site-Directed Mutagenesis Kit(Stratagene) のプロトコールを流用 http://www.stratagene.com/products/showproduct.aspx?pid=131 Kit 中では DNA polymerase
豚繁殖 呼吸障害症候群生ワクチン ( シード ) 平成 24 年 3 月 13 日 ( 告示第 675 号 ) 新規追加 1 定義シードロット規格に適合した弱毒豚繁殖 呼吸障害症候群ウイルスを同規格に適合した株化細胞で増殖させて得たウイルス液を凍結乾燥したワクチンである 2 製法 2.1 製造用株
豚繁殖 呼吸障害症候群生ワクチン ( シード ) 平成 24 年 3 月 13 日 ( 告示第 675 号 ) 新規追加 1 定義シードロット規格に適合した弱毒豚繁殖 呼吸障害症候群ウイルスを同規格に適合した株化細胞で増殖させて得たウイルス液を凍結乾燥したワクチンである 2 製法 2.1 製造用株 2.1.1 名称豚繁殖 呼吸障害症候群ウイルス JJ1882 株又はこれと同等と認められた株 2.1.2
医薬品タンパク質は 安全性の面からヒト型が常識です ではなぜ 肌につける化粧品用コラーゲンは ヒト型でなくても良いのでしょうか? アレルギーは皮膚から 最近の学説では 皮膚から侵入したアレルゲンが 食物アレルギー アトピー性皮膚炎 喘息 アレルギー性鼻炎などのアレルギー症状を引き起こすきっかけになる
化粧品用コラーゲンの原料 現在は 魚由来が中心 かつては ウシの皮膚由来がほとんど BSE 等病原体混入の危険 人に感染する病原体をもたない アレルギーの問題は未解決 ( むしろ問題は大きくなったかもしれない ) アレルギーを引き起こす可能性 医薬品タンパク質は 安全性の面からヒト型が常識です ではなぜ 肌につける化粧品用コラーゲンは ヒト型でなくても良いのでしょうか? アレルギーは皮膚から 最近の学説では
, , & 18
HBV と B 型肝炎 1970 142002 200234,637200334,089 5060 1991 142002 1612& 18 1 5 Q1 肝臓は どのような働きをしているのですか? Q2 B 型肝炎とはどのようなものですか? Q3 B 型肝炎ウイルスはどのようにして感染しますか? 34 Q4 B 型肝炎ウイルスは輸血 ( 血漿分画製剤を含む ) で感染しますか? 11199910:
は室温で 2 時間インキュベーションした後, 凝集活性を測定した. 2 hrbc を用いた NV 濃縮 hrbc または ghost を PBS で 10% に調整し, それぞれ 100 ml,1 ml ずつ希釈された NV 溶液 50mL に加え,4 で 2 時間インキュベーションした後,hRBC
ヒト赤血球を用いたノロウイルスの濃縮についての検討 1) 1) 1) 2) 3) 1) 門馬直太五十嵐郁美柏原尚子廣瀬昌子三川正秀大竹俊秀 1) 2) 3) 微生物課試験検査課前福島県衛生研究所 要 旨 ノロウイルスは感染性胃腸炎における主要な起因ウイルスであり, 食中毒の原因物質でもある. 今回我々はヒト糞便から抽出したノロウイルスがヒト赤血球に対する凝集活性を有している可能性, すなわちノロウイルスが血液型抗原を認識し,
リアルタイム PCR 用試薬 Luna Universal qpcr & RT-qPCR be INSPIRED drive DISCOVERY stay GENUINE
リアルタイム PCR 用試薬 Luna Universal qpcr & RT-qPCR be INSPIRED drive DISCOVERY stay GENUINE 用途に最適な qpcr 試薬を提供 -Step RT-qPCR 2-Step RT-qPCR RNA RNA 逆転写 cdna cdna 逆転写 & qpcr Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit
CycleavePCR® 呼吸器系感染症起因ウイルス検出キット Ver.2（製品コード CY216） 補足
CycleavePCR 呼吸器系感染症起因ウイルス検出キット Ver.2( 製品コード CY216) 補足 < Applied Biosystems StepOnePlus Real-Time PCR System の操作方法 > 詳細は 装置に付属の説明書をご確認ください (1)Experiment Properties 画面の設定を行う Experiment Type:Quantification-Standard
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2013 年 11 月 20 日 ( 水 ) バイオ情報解析演習 ウェブツールを活用した生物情報解析 (4) 遺伝子のクローニング設計 有用物質生産菌を合理的に作ろう! 設計 試作 ベンチテスト 完成 プラスミド 効率的な代謝経路を設計する 文献調査代謝パスウェイの探索代謝シミュレーション 実際に微生物に組み込む データベースから有用遺伝子を探索する遺伝子組換え技術 培養をして問題点を突き止める 培養代謝物量
酵素の性質を見るための最も簡単な実験です 1 酵素の基質特異性と反応特異性を調べるための実験 実験目的 様々な基質を用いて 未知の酵素の種類を調べる 酵素の基質特異性と反応特異性について理解を深める 実験準備 未知の酵素溶液 3 種類 酵素を緩衝液で約 10 倍に希釈してから使用すること 酵素溶液は
酵素実験 Ⅰ パート 1 酵素の特徴を理解するための実験 高田教員担当 アシスタント SAI 風間 寺井 大西 杉原 正箱 三野 (TA) 実験上の注意事項 白衣を着用すること 待ち時間は休憩時間ではない 生化学の教科書および酵素利用学のテキスト( 受講者のみ ) を持参すること あらかじめ実験書を熟読し分からないところを調べておくこと 手順をよく読んで よく考えて実験を進めること 冒険心と探究心を持って取り組むこと
免疫学的検査 >> 5E. 感染症 ( 非ウイルス ) 関連検査 >> 5E106. 検体採取 患者の検査前準備 検体採取のタイミング 記号 添加物 ( キャップ色等 ) 採取材料 採取量 測定材料 F 凝固促進剤 + 血清分離剤 ( 青 細 ) 血液 3 ml 血清 H 凝固促進剤
6102 5. 免疫学的検査 >> 5E. 感染症 ( 非ウイルス ) 関連検査 >> 5E106. mycoplasma pneumoniae antibody 連絡先 : 3764 基本情報 5E106 分析物 JLAC10 診療報酬 識別材料 023 血清 測定法 117 粒子凝集反応 結果識別 第 2 章 特掲診療料 D012 第 3 部 検査 第 1 節 検体検査料 第 1 款 検体検査実施料
[ ノート ] 兵庫県における A 群ロタウイルス検出状況と遺伝子解析の有用性 (2012/2013~2015/16 シーズン ) * 髙井伝仕 荻美貴押部智宏近平雅嗣 Prevalence and Molecular Characterization of Group A Rotavirus in
![[ ノート ] 兵庫県における A 群ロタウイルス検出状況と遺伝子解析の有用性 (2012/2013~2015/16 シーズン ) * 髙井伝仕 荻美貴押部智宏近平雅嗣 Prevalence and Molecular Characterization of Group A Rotavirus in](/thumbs/102/154806603.jpg "[ ノート ] 兵庫県における A 群ロタウイルス検出状況と遺伝子解析の有用性 (2012/2013~2015/16 シーズン ) * 髙井伝仕 荻美貴押部智宏近平雅嗣 Prevalence and Molecular Characterization of Group A Rotavirus in")
[ ノート ] 兵庫県における A 群ロタウイルス検出状況と遺伝子解析の有用性 (0/01~01/1 シーズン ) * 髙井伝仕 荻美貴押部智宏近平雅嗣 Prevalence and Molecular Characterization of Group A Rotavirus in Hyogo Prefecture (0/1-01/1 Epidemic Seasons) Denshi Takai*,
日本消化器外科学会雑誌第29巻第9号
Table 1 Oligonucleotide primers used for RT-PCR and internal probes used for Southern blot hybridization Cytokine Primer Sequence (5'-3') 5' 3' Internal probe s' 3' Internal probe 5' 3' Internal probe
Microsoft Word - KOD-201取説_14-03_.doc
14-03 取扱説明書 高正確性 PCR 酵素 KOD -Plus- Code No. KOD-201 Code No. KOD-201X5 Code No. KOD-201X10 保存温度 -20 KOD -Plus- は 鹿児島県小宝島の硫気孔より単離された超好熱始原菌 Thermococcus kodakaranesis KOD1 株由来の KOD DNA Polymerase 1,2) をベースに開発された高正確性
PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)
製品コード RR037A PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time) 説明書 本製品は リアルタイム RT-PCR に最適化された逆転写反応キットです 伸長性能に優れた PrimeScript RTase を使用し短時間の反応で効率良くリアルタイム PCR 用の鋳型 cdna を合成することができます 実験操作も簡単でハイスループットな解析にも適しています
< F2D915395B68CB48D BD816A2E6A7464>
豚インフルエンザウイルスの抗体保有状況と検査方法の検討 はじめに 奈良県家畜保健衛生所武平有理子 インフルエンザウイルスの動物種を超えた流行において 豚がカギとなっていることは広く知られている 豚の気道上皮細胞にはトリ型とヒト型のウイルスに対する両方のレセプターがあり 由来の異なるウイルスが同時に一つの細胞に感染すると文節型遺伝子が交雑したリアソータントを生み出し 大きな抗原変異が起きる そのため
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StepOnePlus /StepOne PCR PCR PCR StepOnePlus StepOne PCR PCR Features At A Glance StepOne StepOnePlus / 48 96 FAM /SYBR Green dyes VIC /JOE dyes ROX dyes 1. NED /TAMRA dyes VeriFlex Block StepOnePlus StepOne
検体採取 患者の検査前準備 検体採取のタイミング 記号 添加物 ( キャップ色等 ) 採取材料 採取量 測定材料 P EDTA-2Na( 薄紫 ) 血液 7 ml RNA 検体ラベル ( 単項目オーダー時 ) ホンハ ンテスト 注 外 N60 氷 MINテイリョウ. 採取容器について 0
0868010 8. その他の検体検査 >> 8C. 遺伝子関連検査 >> minor bcr-abl, mrna quantitative 連絡先 : 3664 基本情報 8C127 minor bcr-abl 分析物 JLAC10 診療報酬 識別 9962 mrna 定量 材料 019 全血 ( 添加物入り ) 測定法 875 リアルタイムRT-PCR 法 結果識別 第 2 章 特掲診療料 D006-2
論文題目 腸管分化に関わるmiRNAの探索とその発現制御解析
論文題目 腸管分化に関わる microrna の探索とその発現制御解析 氏名日野公洋 1. 序論 microrna(mirna) とは細胞内在性の 21 塩基程度の機能性 RNA のことであり 部分的相補的な塩基認識を介して標的 RNA の翻訳抑制や不安定化を引き起こすことが知られている mirna は細胞分化や増殖 ガン化やアポトーシスなどに関与していることが報告されており これら以外にも様々な細胞諸現象に関与していると考えられている
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平成 年 月 日 担 当 課 衛生環境研究所 ( 担当者 ) ( 高田 梁川 ) 電話 -- 鳥取県感染症流行情報 第 9 [ 平成 年 月 日 ( 月 ) ~ 月 9 日 ( 日 ) ] 疾 病 名 東 部 中 部 西 部 イ ン フ ル エ ン ザ 感 染 性 胃 腸 炎 水 痘 ( 水 ぼ う そ う ) 流行性耳下腺炎 ( おたふくかぜ ) 手 足 口 病 〇 〇 ヘ ル パ ン ギ ー ナ
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51. 手足口病患者からのウイルス分離及び遺伝子解析について 仲浩臣 寺杣文男 ( 和歌山県環境衛生研究センター ) 青木一人 ( 旧所属和歌山県環境衛生研究センター現所属和歌山県福祉保健部薬務課 ) はじめに 手足口病は 手掌 足底 口腔内等に生じる水疱性発疹を主症状とし 夏季に乳幼児を中心とした流行を起こす急性のウイルス感染症で 主要原因はコクサッキーウイルス A16 型 ( 以下 CA16)
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平成 年 月 日 担 当 課 衛生環境研究所 ( 担当者 ) ( 高田 梁川 ) 電話 -- 鳥取県感染症流行情報 第 [ 平成 年 月 日 ( 月 ) ~ 月 日 ( 日 ) ] 疾 病 名 東 部 中 部 西 部 イ ン フ ル エ ン ザ 感 染 性 胃 腸 炎 水 痘 ( 水 ぼ う そ う ) 〇 流行性耳下腺炎 ( おたふくかぜ ) 手 足 口 病 〇 〇 ヘ ル パ ン ギ ー ナ (
馬ロタウイルス感染症 ( アジュバント加 ) 不活化ワクチン ( シード ) 平成 24 年 7 月 4 日 ( 告示第 1622 号 ) 新規追加 1 定義シードロット規格に適合した馬ロタウイルス (A 群 G3 型 ) を同規格に適合した株化細胞で増殖させて得たウイルス液を不活化し アジュバント
馬ロタウイルス感染症 ( アジュバント加 ) 不活化ワクチン ( シード ) 平成 24 年 7 月 4 日 ( 告示第 1622 号 ) 新規追加 1 定義シードロット規格に適合した馬ロタウイルス (A 群 G3 型 ) を同規格に適合した株化細胞で増殖させて得たウイルス液を不活化し アジュバントを添加したワクチンである 2 製法 2.1 製造用株 2.1.1 名称馬ロタウイルス Ho-5MA 株又はこれと同等と認められた株
TaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set
研究用 TaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set 説明書 v201703da 本製品は さまざまなタイプの Human Papillomavirus(HPV) において塩基配列の相同性の高い領域に設定したプライマーを consensus primer として用いることにより HPV の E6 と E7 を含む領域 (228 ~ 268 bp) を共通に PCR
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平成 年 月 日 担 当 課 衛生環境研究所 ( 担当者 ) ( 高田 梁川 ) 電話 -- 鳥取県感染症流行情報 第 7 [ 平成 年 月 9 日 ( 月 ) ~ 月 日 ( 日 ) ] 疾 病 名 東 部 中 部 西 部 イ ン フ ル エ ン ザ 感 染 性 胃 腸 炎 〇 水 痘 ( 水 ぼ う そ う ) 流行性耳下腺炎 ( おたふくかぜ ) 手 足 口 病 〇 〇 〇 ヘ ル パ ン ギ
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平成 年 月 7 日 担 当 課 衛生環境研究所 ( 担当者 ) ( 高田 梁川 ) 電話 -- 鳥取県感染症流行情報 第 [ 平成 年 月 日 ( 月 ) ~ 月 日 ( 日 ) ] 疾 病 名 東 部 中 部 西 部 イ ン フ ル エ ン ザ 感 染 性 胃 腸 炎 〇 水 痘 ( 水 ぼ う そ う ) 〇 〇 流行性耳下腺炎 ( おたふくかぜ ) 手 足 口 病 〇 〇 ヘ ル パ ン ギ
ROCKY NOTE 結核に対する結核菌 LAMP 法の検査特性 (150226) 肺炎の治療の前に喀痰の検査を施行 これを機会に結核菌 LAMP 法の検査特性について調べ てみることにした 比較的新しい論文を
結核に対する結核菌 LAMP 法の検査特性 (150226) 肺炎の治療の前に喀痰の検査を施行 これを機会に結核菌 LAMP 法の検査特性について調べ てみることにした 比較的新しい論文を簡単に流し読みしてみることにした 文献 1 では感度が 98% 特異度が 78.3% と記載されている real-time fluorescence quantitative PCR (Q-PCR). の感度が 96.0%
DNA シークエンス解析受託サービスを効率よく利用して頂くために シークエンス解析は お持ち頂くサンプルの DNA テンプレートの精製度 量 性質によ って得られる結果が大きく左右されます サンプルを提出しても望み通りの結果が返っ てこない場合は 以下の点についてご検討下さい ( 基本編 ) 1.
DNA シークエンス解析受託サービスを効率よく利用して頂くために 目次 ( 基本編 ) 1. テンプレート DNA プライマーの濃度を確認する 2. テンプレート DNA の精製度を確認する 3. サンプル調製に用いるテンプレート DNA の濃度を上げる 4. プライマーが劣化していないか確認する 5. 溶液を水にかえる 6. アガロース電気泳動を用いて PCR 産物を精製 確認する 7. シークエンス用プライマーを用意するその1
1. 腸管出血性大腸菌 (EHEC) の系統解析 上村健人 1. はじめに近年 腸管出血性大腸菌 (EHEC) による食中毒事件が度々発生しており EHEC による食中毒はその症状の重篤さから大きな社会問題となっている EHEC による食中毒の主要な汚染源の一つとして指摘されているのが牛の糞便である
1. 腸管出血性大腸菌 (EHEC) の系統解析 上村健人 1. はじめに近年 腸管出血性大腸菌 (EHEC) による食中毒事件が度々発生しており EHEC による食中毒はその症状の重篤さから大きな社会問題となっている EHEC による食中毒の主要な汚染源の一つとして指摘されているのが牛の糞便である これまでの報告によれば EHEC を糞便中に保有する牛は 0.6~11.9% といわれており 牛枝肉汚染の機会となり得ると畜場における解体処理が公衆衛生上重要視されている
生物学に関する実験例 - 生化学 / 医療に関する実験例 ラジオアッセイ法によるホルモン測定 [ 目的 ] 本実習では, 放射免疫測定 (Radioimmunoassay,RIA) 法による血中インスリンとイムノラジオメトリックアッセイ ( 免疫放射定測定 Immunoradiometric ass
![生物学に関する実験例 - 生化学 / 医療に関する実験例 ラジオアッセイ法によるホルモン測定 [ 目的 ] 本実習では, 放射免疫測定 (Radioimmunoassay,RIA) 法による血中インスリンとイムノラジオメトリックアッセイ ( 免疫放射定測定 Immunoradiometric ass](/thumbs/104/163903931.jpg "生物学に関する実験例 - 生化学 / 医療に関する実験例 ラジオアッセイ法によるホルモン測定 [ 目的 ] 本実習では, 放射免疫測定 (Radioimmunoassay,RIA) 法による血中インスリンとイムノラジオメトリックアッセイ ( 免疫放射定測定 Immunoradiometric ass")
生物学に関する実験例 - 生化学 / 医療に関する実験例 ラジオアッセイ法によるホルモン測定 [ 目的 ] 本実習では, 放射免疫測定 (Radioimmunoassay,RIA) 法による血中インスリンとイムノラジオメトリックアッセイ ( 免疫放射定測定 Immunoradiometric assay, IRMA) 法による血清中のレニンを定量を通して 今日用いられている種々のインビトロ検査法の原理並びに両者の違い等を理解する
はじめに
LAMP 法を用いたウェルシュ菌エンテロトキシン遺伝子検出の検討 佐藤秀美 Development of detection of Clostridium perfringens enterotoxin gene using the LAMP assey Hidemi Sato はじめにウェルシュ菌による食中毒は, 大量に調理された食品を原因とすることが多く, しばしば大規模になるため, 原因物質の迅速な検出と判断が求められている.
無細胞タンパク質合成試薬キット Transdirect insect cell
発現プラスミドの構築 1. インサート DNA の調製開始コドンは出来るだけ 5'UTR に近い位置に挿入して下さい 経験的に ptd1 の EcoRV/KpnI サイトへのライゲーション効率が最も高いことを確認しています 本プロトコルに従うと インサートサイズにも依りますが 90% 以上のコロニーがインサートの挿入されたクローンとして得られます 可能な限り EcoRV/KpnI サイトへ挿入されるお奨めします
Multiplex PCR Assay Kit Ver. 2
研究用 Multiplex PCR Assay Kit Ver. 2 説明書 v201510da マルチプレックス PCR は 一つの PCR 反応系に複数のプライマー対を同時に使用することで 複数の遺伝子領域を同時に増幅する方法です マルチプレックス PCR を行うことで 試薬や機材の節約による経済性 同時検出による迅速性でのメリットに加え 貴重なサンプルの有効利用も可能です 本キットは高速にプライミングする酵素とプライマーのアニーリングの特異性を極限まで高めた反応液組成とを組み合わせたマルチプレックス
糖尿病診療における早期からの厳格な血糖コントロールの重要性
2018 年 10 月 31 日放送 成人 RS ウイルス感染症 坂総合病院副院長高橋洋はじめに RS ウイルスは小児科領域ではよく知られた重要な病原体ですが 成人例の病像に関しては未だ不明の点も多いのが現状です しかし近年のいくつかの報告を契機として この病原体の成人領域での疫学や臨床像 とくに高齢者における重要性が少しずつ明らかになってきています 今回は成人における RS ウイルス肺炎の病像を当施設の成績を踏まえてお話しさせていただきます
遺伝子検査の基礎知識
遺伝子検査の準備と注意事項 PCR はわずか 1 分子の鋳型 DNA でも検出可能であるため 反応液調製時に鋳型となりうる核酸等が混入しないように細心の注意が必要です この文書では 正確な遺伝子検査を行うために必要な実験器具類やコンタミネーション防止のための注意事項について解説します - 目次 - 1 実験環境の整備 2 必要な実験器具と装置 1 実験環境の整備 コンタミネーションの原因 PCR は非常に高感度な検出法であるため
スライド 1
ウエストナイルウイルス 特異的血清検査法 独立行政法人農業 食品産業技術総合研究機構 動物衛生研究所 動物疾病対策センター知的基盤管理室 清水眞也 West Nile Virus (WNV) WNV はフラビウイルス科フラビウイルス属に属する エンベロープを有する RNA ウイルスで 野鳥と蚊の間で維持および増幅される WNV 感染症は ヒト 産業動物および野生動物に被害をもたらす 世界的に重要な人獣共通感染症である
(2) (2) (3) (3) (4) ABI PRISM 7700 TaqMan (4) Roche LightCycler TM (5) BioFlux LineGene TaqMan (6) 1 RT-PCR (7) (9) (10) F. Hoffmann-La Roche Ltd. Roc
05-8 Realtime PCR Master Mix (Code No. QPK-101, QPK-101T) TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN A3313K (2) (2) (3) (3) (4) ABI PRISM 7700 TaqMan (4) Roche LightCycler TM (5) BioFlux LineGene
16S (V3-V4) Metagenomic Library Construction Kit for NGS
研究用 16S (V3-V4) Metagenomic Library Construction Kit for NGS 説明書 v201705da 本製品は イルミナ社 MiSeq で 16S rrna 細菌叢解析を行うための PCR 増幅キットです 細菌 16S rrna 遺伝子の V3-V4 領域を対象とし PCR 酵素に 多様な配列を効率よく増幅可能な Tks Gflex DNA Polymerase
計画研究 年度 定量的一塩基多型解析技術の開発と医療への応用 田平 知子 1) 久木田 洋児 2) 堀内 孝彦 3) 1) 九州大学生体防御医学研究所 林 健志 1) 2) 大阪府立成人病センター研究所 研究の目的と進め方 3) 九州大学病院 研究期間の成果 ポストシークエンシン
計画研究 2005 2009 年度 定量的一塩基多型解析技術の開発と医療への応用 田平 知子 1) 久木田 洋児 2) 堀内 孝彦 3) 1) 九州大学生体防御医学研究所 林 健志 1) 2) 大阪府立成人病センター研究所 研究の目的と進め方 3) 九州大学病院 研究期間の成果 ポストシークエンシング時代のゲノム科学研究では 多因子性 遺伝性疾患の関連解析による原因遺伝子探索が最重要課題であ 1.
リアルタイムRT-PCR実験法
1. 逆転写反応 ツーステップ RT-PCR とワンステップ RT-PCR RT-PCR による遺伝子発現解析では まず 逆転写反応により RNA から cdna を合成し この cdna を鋳型として PCR を行う これらの反応は ツーステップまたはワンステップで行う ツーステップ RT-PCR では ランダムプライマー オリゴ dt プライマーまたは遺伝子特異的プライマーを用いて逆転写反応を行い
様式 C-19 科学研究費助成事業 ( 科学研究費補助金 ) 研究成果報告書 平成 25 年 5 月 22 日現在 機関番号 :12601 研究種目 : 基盤研究 (C) 研究期間 :2010~2012 課題番号 :22590620 研究課題名 ( 和文 ) アジアにおけるウイルス性胃腸炎起因ウイルスの分子疫学的研究 研究課題名 ( 英文 ) Molecular epidemiological study
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StepOnePlus / StepOne PCR PCR Applied Biosystems StepOnePlus StepOne PCR 1 Features At A Glance StepOne StepOnePlus / 48 96 FAM/SYBR Green dyes VIC/JOE dyes ROX dyes NED/TAMRA dyes 1. VeriFlex Block StepOnePlus
48小児感染_一般演題リスト160909
10000 E-1-13 11/19( 土 ) 13:00~14:00 E 会場一般演題 ( 口演 ) マイコプラズマ 1 10001 D-1-7 11/19( 土 ) 10:00~11:10 D 会場一般演題 ( 口演 ) インフルエンザ 1 10002 D-1-8 11/19( 土 ) 10:00~11:10 D 会場一般演題 ( 口演 ) インフルエンザ 1 10003 D-1-9 11/19(
PrimerArray® Analysis Tool Ver.2.2
研究用 PrimerArray Analysis Tool Ver.2.2 説明書 v201801 PrimerArray Analysis Tool Ver.2.2 は PrimerArray( 製品コード PH001 ~ PH007 PH009 ~ PH015 PN001 ~ PN015) で得られたデータを解析するためのツールで コントロールサンプルと 1 種類の未知サンプル間の比較が可能です
Jpn J Electroph 1996; 40: 299
Jpn J Electroph 1996; 40: 299 Jpn J Electroph 図1. ミ ト コ ン ド リ ア3243位 3243位 がGに 変 異 (A G) 変 異 す る と, 制 限 酵 素ApaIに 1996; 40: 301 の 解 析. よ る認 識 サ イ トが 現 れ るの で, 酵 素 で 切 断 され, 137bpサ イ ズ が 検 出 され る. この 測
PrimeSTAR® Mutagenesis Basal Kit
PrimeSTAR Mutagenesis Basal Kit 説明書 v201107da 目次 I. キットの内容...3 II. 保存...3 III. 本システムの原理...3 IV. プライマー設計について...5 V. 操作...8 VI. 実験例...10 VII. トラブルシューティング...13 VIII. 関連製品...13 IX. 注意...13 2 PrimeSTAR Mutagenesis
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PCR StepOnePlus /StepOne PCR PCR PCR StepOnePlus StepOne PCR PCR Features At A Glance StepOne StepOnePlus / 48 96 FAM /SYBR Green dyes VIC /JOE dyes ROX dyes 1. NED /TAMRA dyes VeriFlex Block StepOnePlus
, , & 18
HCV と C 型肝炎 1970 142002 200234,637200334,089 5060 1991 142002 1612& 18 1 5 Q1 肝臓は どのような働きをしているのですか? Q2 C 型肝炎とはどのようなものですか? 70 Q3 C 型肝炎ウイルスはどのようにして感染しますか? Q4 C 型肝炎ウイルスは輸血 ( 血漿分画製剤を含む ) で感染しますか? 198911
解析法
1.Ct 値の算出方法 Ct 値の算出方法には 閾値と増幅曲線の交点を Ct 値とする方法 (Crossing Point 法 ) の他に 増幅曲線の 2 次導関数を求めてそれが最大となる点を Ct 値とする方法がある (2nd Derivative Maximum 法 ) 前者では 閾値を指数関数的増幅域の任意の位置に設定して解析するが その位置により Ct 値が変化するので実験間の誤差が大きくなりやすい