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1 平成 26 年度くまもと農業アカデミー 6 次産業化 ( 農業加工 ) チャレンジコースフォローアップセミナー 信頼ある簡易培地のご紹介 シート培地 サニ太くん を利用した 微生物検査のご紹介 ファクトリー クリーンシステムバイオメジャー研究室上村賢吾 熊本県立農業大学校平成 26 年 11 月 28 日 ( 金 )

2 JNC ご紹介 JNC JNC の歴史と事業の広がり 1906 年曽木電気創業 水力発電 化成肥料 可塑剤 緩効性肥料 機能材料の研究開発 シリコーン 液晶等機能材料の成長 拡大 石油化学のダウンストリームへの展開 肥効調節型肥料 ファイバー バイオ関連素材 製品 エネルギー ( 電池材料 有機 EL 発電 ) 有機合成の力 生産技術の力 1900 年代 ~ 1960 年代 ~ 70 年代 80 年代 90 年代 2000 年代 ~ 主な事業 : 電気化学石油化学スペシャリティケミカル 曽木電気から 日本窒素肥料株式会社 新日本窒素肥料株式会社 チッソ株式会社と改称し 2011 年より JNC へ事業継承された

3 サニ太くんとは JNC 独自の発色技術により開発されたシート培地として 2000 年から発売を開始しております 見えない微生物 発色原理 培地に栄養分 35 48h 培養 ( 例 : 一般生菌用 ) 培養することにより 微生物が増殖し発色剤と反応して着色したスポット ( 集落 ) として検出されます サニ太くんとは 不織布を備えたシート状 乾燥 出来合いの検査培地製品ラインナップ 1 一般生菌用 2 一般生菌用迅速タイプ 3 大腸菌群用 4 黄色ブドウ球菌用 5 大腸菌 大腸菌群用 6 サルモネラ用 7 真菌用 8 水系細菌用をラインナップサニ太くんの持つ強み 手軽に正確に微生物検査が可能 少廃棄 省スペース 持ち運び便利 直ぐに検査できる 長期保存 あらゆる環境で検査が可能 AOAC:AOAC International は 世界約 90 カ国 5,000 名の分析科学者が協力して 食品 医薬品 肥飼料 化粧品の分析法 微生物検出 同定法に関わる新技術を検証する米国の非営利機関

4 サニ太くんとは AOAC RI PTM 認証取得 一般生菌用 大腸菌群用 大腸菌 大腸菌群用 AOAC RI 認証取得しています 世界 50 ヶ国以上で採用 AOAC:AOAC Internationalは 世界約 90カ国 5,000 名の分析科学者が協力して 食品 医薬品 肥飼料 化粧品の分析法 微生物検出 同定法に関わる新技術を検証する米国の非営利機関 他の製品につきまして認証取得に向けて準備中です 厚生労働省監修食品衛生検査指針収載 食品衛生検査指針微生物編 2004 簡易 迅速検査法の中で 乾式培地法として収載 一般生菌用 122 ページ 大腸菌 大腸菌群用 141 ページ 黄色ブドウ球菌用 238 ページ 東京都学校保健会推奨品

5 サニ太くんの用途 検査内容 器具対応表検査内容検査器具 培地 種類 検査 内容 器具 原料受け入れ 従業員の拭取り 空気中の落下菌 製造ライン拭取り 調理器具拭取り 製 品 拭取り検査キット 綿 棒 メンブランフィルターエサンプ ラー1 寒天培地 2 スタンプ培地 3 サニ太くん : 対応可能 : 組合せで対応可能一部対応可能 : 対応不可 サニ太くんは全ての検査に対応可能!

6 学校食品加工実習での微生物検査箇所 検査内容 器具対応表検査内容検査器具 培地 種類 検査 内容 器具 原料受け入れ 従業員の拭取り 空気中の落下菌 製造ライン拭取り 調理器具拭取り 製 品 拭取り検査キット 綿 棒 メンブランフィルターエサンプ ラー1 寒天培地 2 スタンプ培地 3 サニ太くん 上記青破線内の微生物検査を推奨させていただきます 全てを行う事が難しい場合は 以下を優先して実施して下さい 1 製品検査 加熱不足などで微生物が残っている可能性があります 主に一般生菌 大腸菌 大腸菌群 黄色ブドウ球菌 2 空気中の落下菌検査 冷却時に 2 次汚染の可能性があります 主に一般生菌 真菌 ( カビ 酵母 ) 3 生徒の拭取り ( 手 ) 手洗いの確認 生徒に検査の興味を持ってもらう 主に一般生菌 黄色ブドウ球菌

7 サニ太くんの使い方 検体数が多い食品工場では作業性を UP する必要があります そのコツの一つがこちらです 1 高さのある台の端にセット 2 右端から対角線上に開ける 3 半分開けたところで試料液を中心 1 箇所に添加

8 サニ太くんの使い方食材検査偏 1 試料希釈液を作ります 2 試料希釈液を サニ太くん に添加します ストマッカー袋に検体を入れます ストマッカー袋はフィルター付が便利です 固形物の入った液体 色の濃い液体も同様です 液体は検体によりメンブランフィルター法が有用です 滅菌済みはさみ等でストマッカー袋の試料液上部に切り口を入れます ( 試料液採取を容易にするため ) ストマッカー袋に滅菌希釈液を9 倍量入れます ( 例 10gの検体に対して90mlの希釈液 ) 市販の滅菌希釈液でなく自社作成品でもOKです 例滅菌生理食塩水 滅菌水 滅菌リン酸緩衝液生理食塩水 滅菌ペプトン水等 切り口のフィルター部分に滅菌スポイドを差込み試料希釈液を1ml 採取します サニ太くん の培地部分( 不織布部分 ) に試料希釈液を1ml 添加します 一定時間手でよくもみます 検体が内部まで潰れればOKです ( ストマッカーが便利です ) ストマッカー 培養器で培養します 重ねて入れれます ( 約 50 枚 )

9 サニ太くんの使い方スタンプ法偏 10 分以上静置しなじませます ワンポイント! スタンプ方法は毎回同じ方法で行って下さい 例 ) まな板 :1 枚のサニ太くんでスタンプ回数を同じにして下さい こするのではなく ペタンと押す感じでスタンプして下さい 検査実施例 厨房 調理器具製造ライン壁 床手 鼻前庭

10 サニ太くんの使い方落下菌偏 落下菌検査とは 工場施設内の空気中 環境中の浮遊菌数を測定する方法です 清掃区分により基準値が異なります 1 カバーフィルムを開け 閉じないように折り目を付け 滅菌水を添加せず 乾燥状態で 15 分以上放置します 2 滅菌水を添加します 滅菌水を後添加するのは 放置中に培地が乾燥するのを防ぐためです サニ太くんと標準寒天の培地面積と放置時間についてサニ太くん面積 : 20.3cm 2 (4.5cm 4.5cm) 標準寒天培地面積 : 63.6cm 2 ~78.5cm 2 ( 直径 9cm~10cm) 標準寒天培地の放置時間 : 約 5 分サニ太くんの培地面積は標準寒天培地面積の 1/3~1/4 です 培養器で培養します 重ねて入れれます

11 サニ太くん使用の必要器材 食品検査に必要器材 スタンプ検査に必要器材 ストマッカー袋 90ml 滅菌希釈水 滅菌水パック 滅菌簡易ピペット OR ピペット インキュベーター

12 サニ太くん使用の廃棄方法 培養により増菌されていますので加熱殺菌処理して廃棄します 本来はオートレーブ処理が必要ですが サニ太くんは煮沸殺菌でも廃棄可能です 1 使用済サニ太くんを 暴露防止のため袋に入れます 2 滅菌用の鍋を決めます 3 沸騰したらサニ太くんを入れます 廃棄分類について 産業廃棄物として廃棄していただくか 所在地域の自治体のルールに従って 廃棄処理して下さい 4 10 分以上煮沸します 圧力鍋がより効果的です 5 煮沸後廃棄します 一部の細菌が作る芽胞は極めて耐熱性が高く 100 で煮沸しても死なないため暴露しないようご注意下さい

13 サニ太くん保管方法保障期間

14 サニ太くん発色例 一般生菌用 一般生菌用迅速タイプ大腸菌群用大腸菌 大腸菌群用 黄色ブドウ球菌用サルモネラ用真菌用迅速タイプ 鮮明な青いコロニーがサルモネラ

15 検査結果計算方法例 1 検体につき 1 段階希釈 2n の場合 ( 全体が 300 スポット以下 ) 数えた数の合計を平均し 希釈倍率を掛けます 検査結果測定方法は 食品衛生検査指針に沿って算出し 基本的には 1 検体につき 2 枚 (2n) のサニ太くんを使用します 右記計算方法は食品衛生検査指針生菌数算出方法に沿い簡易に表した方法です サニ太くん1 サニ太くん2 10 倍希釈 226 個 203 個 1 検体につき2 段階希釈 2nの場合 ( 全体が300スポット以下 ) サニ太くん1 サニ太くん2 10 倍希釈 226 個 203 個 100 倍希釈 22 個 20 個 1 検体につき2 段階希釈 2nの場合 ( 全体 300スポット以上 ) サニ太くん1 サニ太くん2 100 倍希釈 TNTC TNTC 1000 倍希釈 320 個 390 個 300スポット以上の場合例 ( ) 2 10=2, cfu/g 数えた数を合計し 2.2 で割った後 低い希釈段階の希釈倍率を掛けます ( ) =2, cfu/g シート全体を数えられなかったとき 11~ 数マスをカウントします 2 スポット数 20/( 数えたマスの数 ) 希釈倍率を推定として計算します {( ) 2(20 2) 1,000=3,550,000 推定値 cfu/g サニ太くん1 サニ太くん2 10 倍希釈 TNTC TNTC 100 倍希釈 TNTC TNTC 1000 倍希釈 135 個 /2マス 152 個 /2マス cfu = colony form unit ( コロニー数 ) TNTC = too numerous to count( 測定不能多数 ) シート全体を数えられなかったとき 11~ 数マスをカウントします 2 スポット数 20/( 数えたマスの数 ) 希釈倍率を推定として計算します {( ) 2(20 2) 1,000=1,435,000 推定値 cfu/g

16 検査報告書作成例 製品検査報告 ( 例 ) 検査内容検査日時検査担当者検査時製品状況サンプル名 使用培地 : サニ太くん一般生菌用 大腸菌群用 ( 乾式培地 ) 2012 年 5 月 8 日 14:00 サニ太 品質管理部 : 品質花子消費期限一般生菌数大腸菌群数 番号 名称 数えたコロニー数 倍率 菌数 (cfu/g) 数えたコロニー数 倍率 菌数 (cfu/g) 1 商品名 不検出 2 商品名 不検出 3 商品名 不検出 4 商品名 不検出 5 商品名 不検出 6 商品名 不検出 7 商品名 不検出 8 商品名 不検出 9 商品名 商品名 0 10 不検出 0 10 不検出 11 商品名 , 商品名 , 数えたコロニー数とはサニ太くんで観察されたコロニーの数です 数えたコロニー数を10 倍して菌数 ( 単位 :cfu/cm2) とします ( 滅菌水で10 倍に薄めいているため ) 倍率欄は検査の倍率の応じて ~ へ変更して下さい 大腸菌群について通常有無を記入しますが コロニー数が多いときは菌数も記入して下さい コロニーが観察されないときは通常 10 以下または不検出と記入します

17 汚染基準目安 ( 食品 拭取り ) 食品 拭取り 真菌 ( カビ 酵母 ) は苦情 クレームの原因となる苦情菌です 食品 / 未加熱 / 大腸菌群は食材により基準が異なります 加熱未加熱洗浄後 一般生菌 ( 生菌数 ) 10 5 個 /g 以下 10 6 個 /g 以下 10 3 個 /g 以下 大腸菌群陰性 - 陰性 大腸菌陰性陰性陰性 黄色ブドウ球菌陰性陰性陰性 真菌 ( カビ 酵母 ) サルモネラ陰性陰性陰性 一般的には 10 5 個 /g(1000 万個 ) 以上の菌数で食中毒を起こす危険がありまます 上記規準は目安規準です 業界 団体 地域 サフ ライチェーンの規定規準が有る場合 規定規準に順じて下さい また 社内規準策定には上記規準より 1 桁厳しくする事を推奨します 一般的に 食中毒菌が存在しなければ生菌数が多くても食中毒事故は起こりませんが 多くの菌が存在するということは その中に食中毒菌も存在する危険があります 生菌数が少ないからといって安全であるとは限りません 生菌数は限られた栄養条件で好気的に培養するため 低温性細菌や嫌気性菌 腸炎ビブリオなどの好塩細菌は発育しないからです

18 汚染基準目安 ( 落下菌 ) 場所の範囲 食品の流れ 検収現場 原材料の保管場所 汚染区域 下処理現場 施設 作業場 製造現場 加工現場加熱処理現場放冷 調整現場包装現場 準清潔作業区域 清潔作業区域 非汚染作業区域 製品の保管現場 製品の搬出現場 ( 積み込み現場 ) 更衣 休憩現場 便所 製造管理にか関わる事務室等 < 食品工場施設施設内区画の清浄区分 ( 弁当 惣菜衛生規範 )> 清浄度区分 落下細菌数 落下真菌数 清潔作業区域 30 個以下 10 個以下 準清潔作業区域 50 個以下 - 汚染作業区域 100 個以下 -

19 汚染基準目安 ( サニ太くん使用 ) < 拭取りテスト判定基準例 ( 拭取り箇所の面積 )> 生育スポット数 /100cm 2 0~30 30~100 汚染程度 軽度 中程度 措置 対策 100 以上強度再洗浄 殺菌 < サニ太くんスタンプの場合 > 生育スポット数 /20cm 2 0~6 6~20 汚染程度 軽度 中程度 措置 対策 20 以上強度再洗浄 殺菌

20 食品衛生法および衛生規範における微生物規格基準 分類一般生菌数大腸菌群黄色ブドウ球菌 E.coli その他 生食用食肉 ( 牛肉 ) 牛乳 殺菌山羊乳 成分調整牛乳低脂肪牛乳 無脂肪牛乳 加工乳 加糖脱脂練乳 全粉乳 脱脂粉乳 クリームパウダーホエイパウダー たんぱく質濃縮ホエイパウダー ラクトアイスバターミルクパウダー 加糖粉乳 調整粉乳 アイスミルク クリーム 100,000CFU/ml 陰性 アイスクリーム 100,000CFU/g 陰性 発酵乳 乳酸菌飲料 ( 無脂固形分 3% 以上 ) 乳酸菌飲料 ( 無脂固形分 3% 未満 ) 清涼飲料水 100CFU/ml 陰性 氷雪融解水 100CFU/ml 陰性 氷菓融解水 10,000CFU/ml 陰性 腸内細菌科菌群陰性 /25g 魚肉ねり製品 陰性 生食用かき 50,000CFU/g 最確数 230/100g 腸炎ビブリオ最確数法 100/g 生食用鮮魚介類 腸炎ビブリオ最確数法 100/g ゆでだこ ゆでがに 腸炎ビブリオ陰性 冷凍ゆでだこ 冷凍ゆでがに 100,000CFU/g 陰性 食鳥卵 ( 殺菌液卵 ) サルモネラ属菌陰性 /25g 食鳥卵 ( 未殺菌液卵 ) 1,000,000CFU/g 乾燥食肉製品 陰性 特定加熱食肉製品 1,000CFU/g 100CFU/g サルモネラ属菌陰性 クロストリジウム属 1,000/g 加熱食肉製品 ( 容器包装に入れた後殺菌したもの ) 加熱食肉製品 ( 加熱殺菌後包装容器に入れたもの ) 惣菜類 ( サラダ 生野菜等 未加熱処理製品 ) 惣菜類 ( 卵焼き フライ等 加熱処理製品 ) 漬物 カビ陰性 ( 包装容器に充填後過熱殺菌したもの ) 酵母 1,000/g 一夜漬 ( 浅漬 ) 陰性 腸炎ビブリオ陰性 洋生菓子 100,000CFU/g 陰性 陰性 生めん 3,000,000CFU/g 陰性 陰性 ゆでめん 100,000CFU/g 陰性 陰性 具等 ( 天ぷら つゆ等加熱したもの ) 100,000CFU/g 陰性 陰性 具等 ( 野菜等非加熱のもの ) [ 食品衛生法 ] および [ 衛生規範 ] [ 厚生労働省通知 ] を参考にしています 基準値は上記の数値以下が設定されます 50,000CFU/ml 50,000CFU/g 1,000,000CFU/g 3,000,000CFU/g 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 100,000CFU/g 陰性陰性 乳酸菌又は酵母 10,000,000 以上 乳酸菌又は酵母 10,000,000 以上 クロストリジウム属 1,000/g 1,000CFU/g 陰性サルモネラ属陰性

21 一般生菌用 48h 培養 サニ太くん製品ラインナップ 大腸菌群用 24h 培養 真菌迅速用 48h-72h 培養 黄色ブドウ球菌用 24h 培養 大腸菌 大腸菌群用 24h 培養 サルモネラ用 24h 培養 一般生菌用迅速タイプ 24h 培養 水系細菌用 水系一般生菌 48h 培養 従属栄養細菌 72h 培養 -168h 培養 スタンプ検査に便利な滅菌水パック

22 最後に シート培地 サニ太くん を利用した食品微生物検査 衛生検査を実施し社会に出る前から高等学校教育において微生物検査の重要性 必要性を認識していただけると事を願っております 使用方法 判定方法においてご不明な点があればお気軽にJNC 及びファクトリー クリーン システムへお問合せ下さい ライフケミカル推進室 東京都千代田区大手町二丁目 2 番 1 号新大手町ビル TEL: FAX: サニ太くんホームページ : sanita-kun@jnc-corp.co.jp 株式会社ファクトリー クリーンシステム 熊本市中央区大江 TEL: FAX: info@factory-japan.co.jp 以上

目について以下の結果を得た 各社の加熱製品の自主基準は 衛生規範 と同じ一般生菌数 /g 以下 大腸菌 黄色ブドウ球菌はともに陰性 未加熱製品等の一般生菌数は /g 以下であった また 大腸菌群は大手スーパーの加熱製品については陰性 刺身などの未加熱製品については

目について以下の結果を得た 各社の加熱製品の自主基準は 衛生規範 と同じ一般生菌数 /g 以下 大腸菌 黄色ブドウ球菌はともに陰性 未加熱製品等の一般生菌数は /g 以下であった また 大腸菌群は大手スーパーの加熱製品については陰性 刺身などの未加熱製品については [ 食品科学部 ] 弁当 惣菜の衛生規範に関する調査研究 當間千夏 仲里尚子 上間優子加藤明子 金城なつみ 中川弘 1. はじめに現在 24 時間営業しているコンビニエンスストアーやスーパー等が多数見られるようになり いつでも容易に食品が手に入るようになった また 共働きの家庭が増えそれに伴い温めるだけ 盛り付けるだけといったすでに調理され手軽に食べることのできるいわゆる Ready to eat

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