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あゆみなぐも
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1 FCM gating Problems of Flow cytometric gating for hematopoietic cell analysis in clinical test. Kazuto Tsuruda, Tetsuya Usui, Kozue Yoshii, Mihoko Murai, Yusuke Mori, Tomohiro Tsuji, Shinichiro Oguni, Toshihiro Mizukami, Sunao Atogami, Sachiko Matsumoto, Youko Kasada, Yasuaki Yamada, Shimeru Kamihira Department of Laboratory Medicine Nagasaki University School of Medicine Flow cytometric analysis is indespensable for identifying immunophenotypically hematopoietic cells. In such analysis, it is the most important issue how to choose flow-cytometrically target cells, namely gating. To differentiate target cells from the other cells, three gating approaches are generally known; morphological gating derived from the SSC/FSC cytogram, specific gating of the Leuko-gate(BD) using CD45 and CD14 measurement, and two-color gating using two CD antibodies relevant to target cells. In this paper, we reviewed our experiences of the problematic issues and relevance of gating in flow cytometric analysis as a routine hematological test. Key words Flow cytometry, Gating, Cytogram, Leuko-GATE TM, SSC/FSC, CD45/CD14, Two-color gating. 39

2 Figure.1 40

3 Figure.2 Figure.3 41

4 Table.1 42

5 Figure.4 43

6 Table.2 44

Cytometry Research 12(1) : 39 48 2002 Figure.5 Leukemic cell gating in the SSC/FSC cytogram and analysis by the two-color cytogram using the gating cells within the circle.

7 Cytometry Research 12(1) : Figure.5 Leukemic cell gating in the SSC/FSC cytogram and analysis by the two-color cytogram using the gating cells within the circle. (a)malignant Lymphoma (Follicular type) (b)adult T-cell leukemia (c)acute myelomonocytic leukemia どの比較検討 AMMoL の症例でCD13 CD33 HLA-DRが陽性で骨髄系示しかつCD14 CD15 CD64の一部に陽性結果と考察 Ⅲ a 腫瘍細胞測定においても基本的には光学形態情報によるSSC/FSC cytogramからのgatingを行うのポピュレーションがあり単球系細胞の混在が認められる次に未熟型腫瘍細胞の g a t i n g は S S C / C D 4 5 この場合どの集団が腫瘍細胞かの判定は正常の cytogramがしばしば応用される芽球はCD45弱陽性 cytogramにはない集団を選択するかまたは量的を示すのでこれにSSCを組み合わせることで広い芽に変化している集団を標的にすることが多い実際的球エリアが形成され blast gating 成熟細胞との分離には Fig.5a, b, cの様に細胞系統や成熟分化度によっが可能となるて特有なcytogramを呈することが知られている例 cytogramとssc/cd45 cytogramとの細胞位置関係を示えば Fig.5aはB細胞性の悪性リンパ腫 Follicular lym- した Fig.6bには急性リンパ性白血病 ALL の再発症 phoma の症例で正常リンパ球領域に分布しCD10 例 Fig.6c には分化型急性骨髄芽球性白血病 CD19 CD20 CD22 Igκ陽性である Fig.5bはATL AML,M2 を示した Fig.6b, c症例で示すように 5) 6) 7) Fig.6aに正常骨髄の SSC/FSC の症例でリンパ球領域から単球領域に分布しCD2 SSC/CD45gatingでの芽球抽出の有用性が認められた CD4 CD5 CD25が陽性で CD7が陰性 CD3は2 しかし ALL症例の一部には CD45陰性の芽球症例つのポピュレーションが認められる正常細胞の場合が認められることもあるので注意を要するはCD2 CD3 CD5 CD7の汎T細胞マーカーはほぼ更に標的とする腫瘍に特徴的な1ないし複数の抗均一性を示すが腫瘍細胞ではこの様に不均一とな体を用いたcytogramや抗体とSSCとの組み合わせでることがある F i g. 5 c は急性骨髄単球性白血病構成されるcytogramからのオーダーメイドのgatingを 45

8 Figure.7 Figure.6 46

Cytometry Research 12(1) : 39 48 2002 Figure.8 Blast-gating efficacy in the three different gate screening using the same sample.

9 Cytometry Research 12(1) : Figure.8 Blast-gating efficacy in the three different gate screening using the same sample. (a)the gating in the SSC/FSC cytogram and its development to the other cytogram. (b)the gating in the SSC/CD45 cytogram and its development to the other cytogram. (c)the gating in the CD117/CD34 cytogram and its development to the other cytogram. た上でその他のcytogramを有効に利用することによりより正確な分析が可能となる 2 日本臨床検査標準協議会血液検査標準化検討委員会フローサイトメトリーワーキンググループフローサイトメトリーによる末梢血リンパ球表面抗原検査に関するガイドライン. JCCLS H1-P V NCCLS Clinical application of flow cytometry ; quality assurance and immunophenotyping of 日本臨床検査標準協議会誌13(4):3-16, 巽典之ほか JCCLSとNCCLSのフローサイトメ peripheral blood lymphocytes.( NCCLS : H-42-A), トリー標準の比較. CYTOMETRY RESEARCH (1): 23-26,

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-. -. CD Threshold Noise Discrimination CD CDbight+ CDdim CD は

-. -. CD Threshold Noise Discrimination CD CDbight+ CDdim CD は CD34 JCCLS H3-P V1.0 Report of the Hematology Standardization Committee Guidelines for CD34+ Cell Determination by Flow CytometryJCCLS H3-P V1.0 日本臨床検査標準協議会血液検査標準化検討委員会フローサイトメトリーワーキンググループ Japanese Committee