目次 1. はじめに 2. 由来と生産システム 3. 内容 4. 検査期間及び実施施設 (1) 検査期間 (2) 実施施設 5. 飼育条件 (1) ケージ (2) 床敷 (3) 飼料 (4) 給水 (5) 収容匹数 (6) 飼育室条件 6. 試験方法 (1) 使用動物数 (2) 評価週齢 (3) 体

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1 Crl:CD(SD CD(SD) SD ラット長期モニタリングデータ カスタマーサポートセンター ( 受注窓口 ) TEL: FAX: ( 東日本 ) TEL: FAX: ( 西日本 ) TEL: FAX: web_order@crl.com 年 3 月

2 目次 1. はじめに 2. 由来と生産システム 3. 内容 4. 検査期間及び実施施設 (1) 検査期間 (2) 実施施設 5. 飼育条件 (1) ケージ (2) 床敷 (3) 飼料 (4) 給水 (5) 収容匹数 (6) 飼育室条件 6. 試験方法 (1) 使用動物数 (2) 評価週齢 (3) 体重測定 (4) 摂餌量及び摂水量 (5) 尿量測定及び尿成分測定 (6) 血液学的検査 (7) 血液生化学的検査 (8) 臓器重量 (9) 生存率 (10) 病理組織学的検査 7. 結果 (1) 体重 (2) 摂餌量及び摂水量 (3) 尿検査 (4) 血液学的検査 (5) 血液生化学的検査 (6) 臓器重量 (7) 長期飼育生存率 (8) 病理組織学的検査 本データは 弊社にてデータ収集され まとめました - 1 -

3 1. はじめに Charles River Group が供給する Crl:CD(SD) ラットは 日米欧の 3 極にて 安全性試験分野を始めとし 炎症 免疫 癌 循環器 代謝 神経 老化などの幅広い分野で使用されている国際的なラットです 2. 由来と生産システム Crl:CD(SD) ラットは 日本および米国で維持されていた CD(SD) ラットのコロニーより選抜された親種をもとに 1992 年に作出され 1994 年に日本チャールス リバー に導入されました 現在 本系統は IGS(International Genetic Standard) 生産システムにて 生産されています チャールス リバーグループは新薬開発の国際化に対応するために 全世界で 可能な限りばらつきのない遺伝的に均一な特性を持つ動物を生産することを目的に IGS システムを採用し 動物生産を行っています 1 米国チャールス リバー社にFoundationコロニーを設置し ここから世界各国のチャールス リバーへ親種を供給します 2 近交化防止 循環方式 クローズドコロニーでは 遺伝的多様性が求められます IGSシステムでは Foundationコロニーを基礎コロニーとし 3 群循環方式 ( 生産コロニー ) を採用し 近交化を最小限に抑えています 3 生産コロニー間の遺伝的分岐を防ぐ 親種の相互移動 各生産コロニーは Foundationコロニーから定期的に親種の供給を受け またFoundationコロニーへ定期的に親種を送ることにより 遺伝的分岐を最小限に抑えています - 2 -

4 3. 内容 Crl:CD(SD) ラットの 6~97 週齢の生理学的及び病理組織学的検査 4. 検査期間及び実施施設 (1) 検査期間動物導入 :2005 年 6 月 8 日 ( 水 ) 試験終了 :2007 年 3 月 2 日 ( 金 ) (2) 実施施設技術センター 5. 飼育条件 (1) 飼育ケージプラスチック製 Lケージ ( 外寸 )+ステンレス製ケージトップ (2) 床敷ホワイトフレーク (3) 飼料 CRF-1( 分オートクレーブ処理済 ) を自由摂取 (4) 給水市水 (25μm 3μm のフィルター濾過 ) をラット用飲水ボトルにて 自由摂水 (5) 収容匹数 2~3 匹 / ケージ (6) 飼育室条件 ( 管理幅 ) 温度 :19~25 湿度 :40~70% 明暗 : 明 6:00~18:00 暗 18:00~6:00 6. 試験方法 (1) 使用動物数 Crl:CD(SD) ラット各 45 匹 (2) 評価週齢 5 週齢で導入し 1 週間馴化後の 6 週齢から試験に供した (3) 体重測定 10 週齢までは毎週 10~20 週齢までは隔週 20 週齢以降は 4 週間に一度の間隔で測定を行い 測定匹数は各 20 匹とした ( 図 1 及び表 1) (4) 摂餌量および摂水量 10, 20, 30, 40, 60, 80 および 96 週齢時に 各 5 匹を測定 代謝ケージを使用し 各個 - 3 -

5 体の 24 時間の摂食量および摂水量を測定した ( 図 2 表 2 図 3 表 3) (5) 尿量測定および尿成分測定 10, 20, 30, 40, 60, 80 および 96 週齢時に代謝ケージに動物を入れ 各個体の 24 時間の尿量を測定した また 採取した尿はマルティスティックス SG L( バイエルメディカル株式会社製 ) にて 白血球 ウロビリノーゲン 蛋白質 ph 潜血 比重 ケトン体 ビリルビン およびブドウ糖を各 5 匹測定した ( 図 4 表 4 表 5) (6) 血液学的検査約 16 時間の絶食をさせた動物に ペントバルビタールの腹腔内投与麻酔を施し 後大静脈より採血を実施 血液学的検査を行った EDTA2K 3K 処理済採血容器に約 1mL の血液を採取し 凝固系の検査には クエン酸を添加した 測定機器 ( 方法 ) および測定項目を以下に示した ( 表 6) ⅰ) セルタックα( 日本光電工業株式会社製 ) にて測定白血球数 (WBC) ( 10 2 /μl) 赤血球数 (RBC) ( 10 4 /μl) ヘモグロビン濃度 (HGB) (g/dl) ヘマトクリット値 (HCT) (%) 平均赤血球容積 (MCV) (fl) 平均赤血球色素量 (MCH) (pg) 平均赤血球血色素濃度 (MCHC) (g/dl) 血小板数 (PLT) ( 10 4 /μl) ⅱ)Sysmex CA-50( シスメックス株式会社製 ) にて測定 (30 60 週齢は株式会社エスアールエルに依頼 ) フィブリノーゲン濃度 (mg/dl) 活性化部分トロンボプラスチン時間 (APTT) (sec) プロトロンビン時間 (PT) (sec) ⅲ) 株式会社エスアールエルに依頼白血球百分率 (7) 血液生化学的検査全血を血清分離剤入り採血管に採取し 約 1~1.5 時間冷蔵後 4 3,000rpm 10 分間の遠心分離にて得られた血清を血液生化学的検査に使用した 富士ドライケム 7000( フジフィルムメディカル株式会社製 ) にて以下の項目を測定した ( 表 7) GOT (glutamic oxaloacetic transaminase) (U/L) GPT (glutamic pyruvic transaminase) (U/L) ALP (alkaline phosphatase) (U/L) - 4 -

6 TBIL (total bilirubin) (mg/dl) BUN (blood urea nitrogen) (mg/dl) CRE (creatinine) (mg/dl) TG (triglyceride) (mg/dl) TCHO (total cholesterol) (mg/dl) GLU (glucose) (mg/dl) TP (total protein) (g/dl) Alb (albumin) (g/dl) IP (inorganic phosphorus) (mg/dl) Ca (calcium) (mg/dl) Na (sodium) (meq/l) K (potassium) (meq/l) Cl (chloride) (meq/l) (8) 臓器重量 および 97 週齢時に各 10 匹を試験に供した 剖検時 採血した動物は腹大動脈切断による放血によって安楽死させ 直ちに各臓器の肉眼観察を行った 臓器所見を採取した後 脳 下垂体 甲状腺 胸腺 心臓 肺 肝臓 脾臓 副腎 腎臓 精巣 精巣上体 卵巣および子宮の重量を測定した ( 表 8 表 9) (9) 生存率各 25 匹 ( 各 45 匹中 30 週齢 60 週齢で剖検に供した計 20 匹を差し引いた匹数 ) で 試験期間中の動物生存率データを採取した 試験期間中に異常動物が発見された場合 動物福祉を考慮し 衰弱や行動性低下が著しい個体は安楽死させた これらの個体は 試験期間中に死亡したものとして扱った ( 図 5 表 10) (10) 病理組織学的検査 97 週齢の自然発生病変データの集積の為 各 10 匹について 脳 下垂体 甲状腺 心臓 肺 肝臓 脾臓 副腎 腎臓 精巣 精巣上体 胃 膵臓 精嚢 眼球 および子宮を 10% 中性緩衝ホルマリン溶液で固定し 病理組織学的検査を実施した ( 表 11 表 12) - 5 -

7 7. 結果 (1) 体重 体重 ( 単位 :g) 週齢 ( 平均 ±SD) 図 1 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験体重推移 表 1 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験体重推移 週齢 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 単位 :g - 6 -

8 (2) 摂餌量及び摂水量 g/24hr 週齢 ( 平均 ±SD) 図 2 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験 24 時間摂餌量 ml/24hr 週齢 ( 平均 ±SD) 図 3 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験 24 時間摂水量 表 2 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験 24 時間摂餌量表 3 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験 24 時間摂水量 週齢 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 単位 :g 週齢 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 単位 :g (3) 尿検査 ml/24hr 表 4 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験 24 時間後尿量 週齢 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 単位 :ml 0 図 週齢 ( 平均 ±SD) Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験 24 時間後尿量 - 7 -

9 表 5 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験尿検査 性別週齢 n 白血球 ± ウロヒ リノーケ ン 蛋白質 ± ph 潜血 ± 比重 ケトン体 ± ビリルビン ブドウ糖 ±

10 (4) 血液学的検査 表 6 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験血液学的検査 30 週齢 60 週齢 97 週齢平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n WBC ( 10 2 /μl) RBC ( 10 4 /μl) HGB (g/dl) HCT (%) MCV (fl) MCH (pg) MCHC (g/dl) PLT ( 10 4 /μl) 網状赤血球数 (/ml) フィブリノーゲン (mg/dl) APTT (sec) PT (sec) 好中球 (%) 好酸球 (%) 好塩基球 (%) 単球 (%) リンパ球 (%) 週齢 60 週齢 97 週齢平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n WBC ( 10 2 /μl) RBC ( 10 4 /μl) HGB (g/dl) HCT (%) MCV (fl) MCH (pg) MCHC (g/dl) PLT ( 10 4 /μl) 網状赤血球数 (/ml) フィブリノーゲン (mg/dl) APTT (sec) PT (sec) 好中球 (%) 好酸球 (%) 好塩基球 (%) 単球 (%) リンパ球 (%) (-) データ無し - 9 -

11 (5) 血液生化学的検査 表 7 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験血液学生化学的検査 30 週齢 60 週齢 97 週齢平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n GOT (U/L) GPT (U/L) ALP (U/L) TBIL (mg/dl) BUN (mg/dl) CRE (mg/dl) TG (mg/dl) TCHO (mg/dl) GLU (mg/dl) TP (g/dl) ALB (g/dl) IP (mg/dl) Ca (mg/dl) Na (meq/l) K (meq/l) Cl (meq/l) 週齢 60 週齢 97 週齢平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n GOT (U/L) GPT (U/L) ALP (U/L) TBIL (mg/dl) BUN (mg/dl) CRE (mg/dl) TG (mg/dl) TCHO (mg/dl) GLU (mg/dl) TP (g/dl) ALB (g/dl) IP (mg/dl) Ca (mg/dl) Na (meq/l) K (meq/l) Cl (meq/l)

12 (6) 臓器重量 表 8 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験臓器実重量 30 週齢 60 週齢 97 週齢平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 脳 下垂体 甲状腺 胸腺 心臓 肺 肝臓 脾臓 副腎 R 副腎 L 腎臓 R 腎臓 L 精巣 R 精巣 L 精巣上体 R 精巣上体 L 単位 :mg 30 週齢 60 週齢 97 週齢平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 脳 下垂体 甲状腺 胸腺 心臓 肺 肝臓 脾臓 副腎 R 副腎 L 腎臓 R 腎臓 L 卵巣 R 卵巣 L 子宮 単位 :mg

13 表 9 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験臓器相対重量 30 週齢 60 週齢 97 週齢平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 脳 下垂体 甲状腺 胸腺 心臓 肺 肝臓 脾臓 副腎 R 副腎 L 腎臓 R 腎臓 L 精巣 R 精巣 L 精巣上体 R 精巣上体 L 単位 :mg/100g BW 30 週齢 60 週齢 97 週齢平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 平均値標準偏差 n 脳 下垂体 甲状腺 胸腺 心臓 肺 肝臓 脾臓 副腎 R 副腎 L 腎臓 R 腎臓 L 卵巣 R 卵巣 L 子宮 単位 :mg/100g BW

14 (7) 長期飼育生存率 100% 80% 生存率 60% 40% 20% 0% 週齢 図 5 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験生存率 表 10 Crl:CD(SD) ラット長期飼育試験生存率 週齢 生存数 生存率 生存数 生存率 % % % % % % % % % % % % % % % % % 24 96% % 24 96% % 23 92% % 23 92% % 23 92% % 20 80% % 20 80% % 15 60% % 14 56% % 12 48% % 10 40% 動物福祉を考慮し 衰弱や行動性低下が著しい個体は安楽死させた これらの個体は 試験期間中に 死亡したものとして扱った

15 (8) 病理組織学的検査 表 11 Crl:CD(SD) ラット (96 週齢 ) 腫瘍性病変表 12 Crl:CD(SD) ラット (96 週齢 ) 非腫瘍性病変 器官 組織 所見 脾臓 : (10) (8) 線維肉腫 0 0 肺 : (10) (8) 気管支 肺胞腺腫 1 0 膵臓 : (10) (8) 腺房細胞腺腫 1 0 島細胞腺腫 2 0 精巣 : (10) - 間細胞腫 1 - 卵巣 : - (8) 顆粒膜細胞腫 - 1 子宮 : - (8) 内膜間質ポリープ - 0 下垂体 : (10) (7) 前葉腺腫 3 2 甲状腺 : (10) (8) C- 細胞腺腫 0 0 濾胞細胞腺腫 0 0 副腎 : (10) (8) 褐色細胞腫 1 0 注 ) 表の数字は発生例数 ( ) 内は検査例数 器官 組織 所見 心臓 : (10) (8) 心筋症 8 4 心筋の巣状変性 / 壊死 2 1 脾臓 : (10) (8) 髄外造血 1 0 ヘモジデリン沈着の増加 0 5 肺 : (10) (8) 泡沫細胞の集蔟巣 3 1 巣状性肺気腫 2 3 動脈壁の局所性鉱質沈着 4 2 胃 : (9) (8) 胃底腺の拡張 0 0 肝臓 : (10) (8) 好塩基性変異細胞巣 1 0 胆管の過形成 0 1 小肉芽腫 0 0 膵臓 : (10) (8) 腺房細胞の萎縮 1 0 腺房細胞の過形成 1 0 脂肪化 3 0 腎臓 : (10) (8) 尿細管上皮の好塩基性化巣 0 2 慢性進行性腎症 9 0 色素沈着 0 0 腎盂炎 2 4 精巣 : (10) - 精細管萎縮 0 - 間細胞過形成 1 - 結節性動脈炎 1 - 精巣上体 : (10) - 萎縮 0 - 精嚢 : (10) - 萎縮 0 - 下垂体 : (10) (7) 中間葉過形成 0 0 副腎 : (10) (8) 巣状過形成 皮質束状帯 5 0 巣状肥大 皮質束状帯 2 1 巣状肥大 皮質球状帯 2 4 血管拡張症 皮質 3 7 眼球 : (9) (8) 網膜の萎縮 2 2 白内障 2 0 注 ) 表の数字は発生例数 ( ) 内は検査例数

16 ラット ( クローズドコロニー ) CD SD 微生物グレード SPF/VAF SPF/VAF Crl:CD(SD) 週 齢 体重 (g) 出荷幅 ~ 13( 円 / 週 ) *1 退役動物 ( リタイア ) 退役動物 (8ヵ月齢指定( )) *2 退役動物 ( 妊娠マイナス ) 退役動物 ( 月齢指定妊娠マイナス ) 妊娠動物 交配日指定妊娠動物 哺育動物 1 哺育動物 2 哺育動物 1 片性のみ 哺育動物 2 片性のみ 同腹子動物 (3 週齢 ) 同腹子動物 (4 週齢 ) *1:13 週齢までの加算金額です 14 週齢以降の加算金額は 別途お問い合わせください *2: 月齢指定動物をご要望の際には 上記基本月齢にご希望の月齢までの飼育料が加算されますので ご了承ください CD:Caesarean Derived SD:Sprague Dawley の略称 Sprague Dawley :Harlan Laboratories 社の登録商標です SPF:Specific Pathogen Free VAF:Virus Antibody Free 比較的大型で発育が良い 繁殖性良好 おとなしく取り扱いやすい Albino 安全性 安全性薬理 1 ) 炎症 ( 潰瘍肝炎腎炎関節炎 ) 免疫 ( アレルギー ) がん ( 発がん性 ) 循環 ( 脳循環心循環 ) 代謝 ( 糖尿 ) 神経系 ( 中枢行動 ) 老化 1950 年に Sprague Dawley Inc からチャールス リバーに導入されました 1991 年に世界各国のチャールス リバー生産施設の従来 CD(SD) コロニーから選抜された親種をもとに IGS Foundation コロニーが設立され 1994 年には日本チャールス リバー ( 株 ) に導入されました その後 1997 年に Foundation コロニーはアイソレータ内に移されました IGS とはチャールス リバーにより開発された動物を生産 維持するシステムで International Genetic Standard を意味します 詳細につきましては 5 ページをご参照ください 1)Takuya Hirata et al. 1997, Life Science 61(16), 背景データ Biological Reference Data on CD(SD)Rats(CD(SD))IGS Study Group 1998 Biological Reference Data on CD(SD)Rats(CD(SD))IGS Study Group 1999 Biological Reference Data on CD(SD)Rats(CD(SD))IGS Study Group 2000 Biological Reference Data on CD (SD)Rats (CD(SD))IGS Study Group 2001 Biological Reference Data on CD (SD)Rats (CD(SD))IGS Study Group 価格には 消費税は含まれておりません 標準希望価格 ( 円 ) 6 ラット系統名 Crl:CD(SD)

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