サイト毎に出現する DNA タイプを整理するまたミトコンドリア DNA より変異性が高いとされるマイクロサテライト DNA 遺伝子座を探索しミトコンドリア DNA とマイクロサテライト DNA を併用することにより精度の高い在来非在来集団判別技術を開発するこれらを統合してイワナヤマメ

Size: px

Start display at page:

Download "サイト毎に出現する DNA タイプを整理するまたミトコンドリア DNA より変異性が高いとされるマイクロサテライト DNA 遺伝子座を探索しミトコンドリア DNA とマイクロサテライト DNA を併用することにより精度の高い在来非在来集団判別技術を開発するこれらを統合してイワナヤマメ"

れんかめいこ
5 years ago
Views:

1 遺伝子データベースの構築によるイワナヤマメアマゴ個体群の在来非在来判別技術の開発水産総合研究センター中央水産研究所要旨全国およびロシアの放流履歴のないイワナ集団 (189 集団 ) と全国および台湾からのサクラマス集団 (49 集団 ) から標本を収集しミトコンドリア DNA の部分塩基配列を指標とした遺伝子解析を行ったその結果イワナでは 54 種類のハプロタイプがサクラマス類では 53 種類のハプロタイプがそれぞれ確認され DNA データベースとして蓄積したまた日高川水系に生息するアマゴ 15 集団からサンプルを収集しミトコンドリア DNA とマイクロサテライト DNA を併用した遺伝子解析を実施しそれぞれの集団について在来非在来判別をおこなった本州各地の飼育施設 ( 養鱒場等 ) で継代飼育されているイワナのミトコンドリア DNA を調べたところ 13 箇所の施設から 14 種類のハプロタイプが確認され多様な系統が継代飼育に用いられている現状が明らかとされた緒言イワナヤマメアマゴなどの渓流魚は河川の上流部に生息するという生態特性から河川間での交流が少なく河川毎に独自の遺伝的構造をもつ場合が多いこのような集団ではそれぞれ独自の進化プロセスを経ていると考えられ進化的にも将来の遺伝資源としても貴重な存在といえるこれまでイワナについてはミトコンドリア DNA を指標とした遺伝子解析が各地で行われ河川毎の遺伝的特徴がある程度明らかにされている (Yamamoto et al. 2004; 北野他, 2006; Kubota et al. 2007; Kikko et al. 2008; 山本他, 2008; Sato et al. 2010) 1970 年代以降本州に生息するイワナヤマメアマゴ集団では増殖の目的から各地で種苗放流が進み在来集団のみが生息する河川は年々減少傾向にある天然集団を保全管理する目的からは現存する在来集団の遺伝的構造を科学的な調査に基づき識別し保全のための適切な地理的単位を急ぎ設定していく必要がある (Allendorf and Luikart 2007) このような保全単位は今後における保全管理施策の構築 ( たとえば集団間移殖種苗放流の可否など ) のための重要な指針になるものと考えられる本研究課題ではイワナヤマメアマゴ個体群の在来非在来判別技術を開発するこの目的のために聞き取り調査などで放流履歴のない集団からサンプルを収集しミトコンドリア DNA の塩基配列解析により河川毎河川内支流毎あるいは 1

2 サイト毎に出現する DNA タイプを整理するまたミトコンドリア DNA より変異性が高いとされるマイクロサテライト DNA 遺伝子座を探索しミトコンドリア DNA とマイクロサテライト DNA を併用することにより精度の高い在来非在来集団判別技術を開発するこれらを統合してイワナヤマメアマゴ集団について分布域を網羅する遺伝子データベースを構築し渓流魚の保全管理技術開発に資する保全の地理的単位を設計する本年度では以下の調査実験をおこなう 1 イワナサクラマスでは全国各地から放流履歴のないサンプルを収集しミトコンドリア DNA を指標とした解析をおこない DNA データベースに蓄積させる 2 アマゴ研究のモデル河川として設定している和歌山県日高川水系からサンプルを収集しマイクロサテライト DNA とミトコンドリア DNA を併用することにより水系内支流間レベルでの在来非在来判別技術を開発する 3 養鱒場等で継代飼育されているイワナのミトコンドリア DNA タイプを調べる材料と方法 Ⅰ ミトコンドリア DNA による遺伝子データベースの構築 (1) イワナ今年度新規に分析をおこなった集団は北海道二腰川阿武隈川水系 3 集団利根川水系湯西川 2 集団信濃川水系 2 集団木曽川水系 1 集団天竜川水系 1 集団富士川水系 12 集団相模川水系 3 集団であるすでにミトコンドリア DNA による分析がおこなわれている集団を併せると (Yamamoto et al. 2004; Kubota et al. 2007; 山本他, 2008) 本報告で扱った集団はロシアからの 17 集団北海道からの 57 集団本州からの 115 集団合計 189 集団 3113 検体となる ( 表 1) 標本からの DNA は 99% エタノールで固定した供試魚のアブラビレから GenElute Mammalian Genomic DNA kit (Sigma 社, USA) または QIAGEN DNeasy Blood & Tissue kit (Qiagen 社 ) を用いて抽出した PCR 反応には L15285(5 -CCCTAACCCGVTTCTTYGC-3 Inoue et al. 2000) および H15915(5 -ACCTCCGATCTYCGGATTACAAGAC-3 Aoyama et al. 2000) のプライマーセットを使用し ExTaq ポリメラーゼ ( タカラバイオ社東京 ) または AmpliTaq Gold 360 Master Mix (Applied Biosystem 社東京 ) を用いて 50 のアニーリング温度 40 サイクルの条件で増幅した PCR 産物の塩基配列の決定には ABI3100 Genetic Analyzer(Applied Biosystem 社 USA) を用いたなお検出された多くのハプロタイプは Yamamoto et al. (2004), Kubota et al. (2007), Kikko et al. (2008), 山本他 (2008) において既に報告されているためそれぞれのハプロタイプ名はこれらの文献に準じるようにした本研究で見出されたハプロタイプおよび既往文献により報告されているハプロタイプ 2

3 とを併せて,Arlequin ソフトウエア (Schneider et al. 2001) により最節約ネットワークを構築し日本およびロシア産イワナの遺伝的特徴を解析した 3

4 4

5 5

(2) サクラマスサクラマスについては本年度新たに北海道天塩川水系名寄川 1 集団北海道大釜谷川 1 集団青森県大畑川 1 集団宮城県伊里前川 1 集団鳥取県陸上川の 1 集団をサンプリングし合計 49 集団 1231 個体を分析した ( 表 2) なお大畑川産サクラマスと伊里前川産サクラマスは

6 (2) サクラマスサクラマスについては本年度新たに北海道天塩川水系名寄川 1 集団北海道大釜谷川 1 集団青森県大畑川 1 集団宮城県伊里前川 1 集団鳥取県陸上川の 1 集団をサンプリングし合計 49 集団 1231 個体を分析した ( 表 2) なお大畑川産サクラマスと伊里前川産サクラマスは青森県水産総合研究センターおよび宮城県水産技術総合センター内でそれぞれ継代飼育されている個体であるサクラマス類のミトコンドリア DNA 分析ではサイトクローム b 領域の部分塩基配列と ND-5 領域の部分塩基配列とを併せて解析をおこなったそれぞれのプライマーセットは下記のとおりである Cytochrome-b 領域 cyto-f(5 -RACACGATTTTTCGCCTTTC-3 山本未発表 ) H15915(5 -ACCTCCGATCTYCGGATTACAAGAC-3 Aoyama et al. 2000) ND-5 領域 ND5-1F(5 -TACCCCAATTGCCCTGTACG-3 Kitanishi et al. 2007) ND5-3R(5 -CTAACACGTGGGTTAGGTCG-3 Kitanishi et al. 2007) PCR 反応には ExTaq ポリメラーゼ ( タカラバイオ社東京 ) を用いて 55 のアニーリング温度 37 サイクルの条件で増幅した 6

Ⅱ アマゴモデル河川における在来非在来判別分析 2008,2009,2010 年に和歌山県日高川水系の 15 集団でサンプルを収集しミトコンドリア DNA とマイクロサテライト DNA を分析したミトコンドリア DNA についてはサイトクローム b 領域の部分塩基配列 557bp を分析しマイクロサテライト DNA では 12 集団について 9

7 Ⅱ アマゴモデル河川における在来非在来判別分析 2008,2009,2010 年に和歌山県日高川水系の 15 集団でサンプルを収集しミトコンドリア DNA とマイクロサテライト DNA を分析したミトコンドリア DNA についてはサイトクローム b 領域の部分塩基配列 557bp を分析しマイクロサテライト DNA では 12 集団について 9 遺伝子座を分析し各個体の遺伝子型を決定した今回アマゴで使用したマイクロサテライト DNA9 遺伝子座のプライマー配列を表 3 に示すマイクロサテライト DNA のデータについてはプログラム Arlequin ver 3.01(Schneider et al. 2001) を用いて遺伝子座毎集団毎に対立遺伝子数ヘテロ接合度ハーディーワインベルグ平衡の検定結果をまとめたまた個体の遺伝子型の情報に基づくグループ分けをプログラム STRUCTURE ver 2.0 (Prichard et al. 2000) 7

を用いて推定した解析ではマイクロサテライト DNA 遺伝子座に基づく対立遺伝子頻度によって特徴づけられる K 個の任意交配集団を仮定し個体を確率的に集団に割り当てていくときデータセットを最も良く説明する集団数 (K) を求めた K=1-10 に対してそれぞれマルコフ連鎖のモンテカルロシミュレーションを 10 回試行し分集団 K を与えたときの個体の遺伝子型が生じる対数尤度を求め

8 を用いて推定した解析ではマイクロサテライト DNA 遺伝子座に基づく対立遺伝子頻度によって特徴づけられる K 個の任意交配集団を仮定し個体を確率的に集団に割り当てていくときデータセットを最も良く説明する集団数 (K) を求めた K=1-10 に対してそれぞれマルコフ連鎖のモンテカルロシミュレーションを 10 回試行し分集団 K を与えたときの個体の遺伝子型が生じる対数尤度を求め Evanno et al. (2005) に従い連続する対数尤度の変化量 ΔK が最大となる K を求めた Ⅲ 各地で継代飼育されているイワナのミトコンドリア DNA 分析 Kubota et al. (2007) により報告された各地の飼育施設において継代飼育されているイワナのミトコンドリア DNA タイプを整理するとともに新たに山形県兵庫県の飼育施設にて飼育されているイワナをサンプルしミトコンドリア DNA サイトクローム b 領域の部分塩基配列 557bp を分析した結果および考察 Ⅰ ミトコンドリア DNA による遺伝子データベースの構築 (1) イワナ収集した 3113 検体のイワナサンプルから計 54 種類のハプロタイプが検出されたこれらのハプロタイプは 51 箇所の塩基置換によって識別され転位型置換が 43 箇所 8

Hap-37 Hap-38 Hap-42 Hap-43 Hap-44 Hap-45 の 12 種類であったロシア集団からは Hap-1 Hap-3 Hap-4 Hap-5 Hap-36 Hap-39 Hap-40 Hap-41

9 転換型置換が 8 箇所であった ( 図 1 表 1) これらのうち最も高い頻度で出現するハプロタイプは Hap-3 でありこの遺伝子型はロシアから本州南部に至る広域に出現するものであったまたハプロタイプネットワーク全体はこのハプロタイプを中心とする星状樹形を形成したこれら 54 種類のハプロタイプのうち北海道集団から見出されたハプロタイプは Hap-1 Hap-2 Hap-3 Hap-4 Hap-5 Hap-7 Hap-37 Hap-38 Hap-42 Hap-43 Hap-44 Hap-45 の 12 種類であったロシア集団からは Hap-1 Hap-3 Hap-4 Hap-5 Hap-36 Hap-39 Hap-40 Hap-41 Hap-46 Hap-47 Hap-48 Hap-49 Hap-50 の 13 種類のハプロタイプが見出されそのうち北海道集団と共通して出現するハプロタイプは Hap-1 Hap-3 Hap-4 Hap-5 の 4 種類であった本州の集団から確認されたハプロタイプは 9

10 Hap-1 Hap-3 Hap-5 Hap-6 Hap-7 Hap-8 Hap-9 Hap-10 Hap-11 Hap-12 Hap-13 Hap-14 Hap-15 Hap-16 Hap-17 Hap-18 Hap-19 Hap-20 Hap-21 Hap-22 Hap-23 Hap-24 Hap-25 Hap-26 Hap-27 Hap-28 Hap-29 Hap-30 Hap-35 Hap-45 Hap-51 Hap-52 Hap-55 Hap-new36 Hap-new39 Hap-new40 の 36 種類であり北海道ロシアを合わせたハプロタイプ数よりも多くの種類が確認されたまた本州集団と北海道集団で共通して出現するハプロタイプは Hap-1 Hap-3 Hap-5 Hap-7 Hap-45 の 5 種類であったハプロタイプネットワークにおける特徴的な DNA グループを挙げると琵琶湖集団および琵琶湖周辺河川集団は Hap-17,18,19 を持つことで特徴づけられ比較的高い遺伝的分化を遂げていたまた熊野川集団木曽川水系の各集団矢作川に分布するイワナは Hap を持つことで特徴づけられやはり大きな遺伝的分化を示した大井川に生息するイワナは Hap-23 Hap-24 Hap-25 Hap-26 をもちこれらのハプロタイプはこれまでのところ他河川から確認されていないまた宮城県相川沢のイワナ集団は Hap-12 をもちこのハプロタイプも他所からは確認されていない今年度新たに分析をおこなった集団において確認されたハプロタイプは二腰川から Hap-3,Hap-4,Hap-38 阿武隈川水系 3 集団から Hap-3,Hap-45 富士川水系の 12 集団から Hap-1,Hap-3,Hap-55 相模川水系 2 集団から Hap-55 信濃川水系から Hap-1 木曽川水系から Hap-28 天竜川水系から Hap-22 天神川水系から Hap-20 がそれぞれ確認された (2) サクラマス類収集した 1231 個体のサクラマスサンプルから計 53 種類のハプロタイプが検出された ( 図 2 表 2) 亜種毎にみていくとサクラマスからは Hap-1 Hap-2 Hap-3 Hap-4 Hap-5 Hap-6 Hap-7 Hap-8 Hap-9 Hap-10 Hap-11 Hap-12 Hap-13 Hap-14 Hap-15 Hap-16 Hap-25 Hap-26 Hap-27 Hap-29 Hap-32 Hap-33 Hap-36 Hap-37 Hap-39 Hap-40 Hap-42 Hap-43 Hap-44 Hap-45 Hap-46 Hap-51 Hap-53 Hap-55 Hap-64 の 35 種類アマゴからは Hap-1 Hap-2 Hap-7 Hap-11 Hap-22 Hap-27 Hap-28 Hap-30 Hap-31 Hap-34 Hap-35 Hap-38 Hap-29 Hap-47 Hap-49 の 15 種類ビワマスからは Hap-18 Hap-19 Hap-20 Hap-21 Hap-48 の 5 種類サラマオマスからは Hap-52 の 1 種類が確認された亜種間で重複して出現するハプロタイプはサクラマスアマゴ間で Hap-1 Hap-2 Hap-7 Hap-11 Hap-27 Hap-29 の 6 種類が確認されたビワマスから見出された 5 種類のハプロタイプはいずれも比較的近い遺伝的距離でグルーピングされるが最も遺伝的距離の近いアマゴのハプロタイプ (Hap-33) とは 5 つの塩基置換が存在することからこれらのハプロタイプはビワマス固有のハプ 10

11 ロタイプと考えられるサラマオマスから見出されたハプロタイプ (Hap-52) は現在のところ台湾からのみ認められるがアマゴサクラマスから見出される Hap-7 とは遺伝的距離が近いものであった今回新たにサンプルした天塩川水系名寄川からは Hap-2 Hap-7 Hap-9 Hap-11 Hap-17 Hap-53 Hap-55 Hap-64 大釜谷川からは Hap-2 Hap-3 Hap-7 Hap-9 大畑川からは Hap-3 伊里前川からは Hap-7 Hap-36 陸上川からは Hap-2 Hap-27 が確認されたこれまで Hap-27 Hap-28 Hap-30 Hap-31 Hap-34 Hap-49 を含むグループは天竜川から紀伊半島四国に生息するアマゴ集団からのみ確認されこれらのハプロタイプは西日本のアマゴを特徴づける DNA タイプであると考えられていた今回鳥取県の陸上川に生息するサクラマスから Hap-27 が新たに確認されたことからこのハプロタイプはサクラマスアマゴ域に共通して出現するハプロタイプである可能性が示されたただし現時点では移殖放流の可能性も否定できないため今後は陸上川近隣の河川集団も分析に加える必要がある 11

Ⅱ アマゴモデル河川における集団遺伝解析和歌山県日高川水系の 15 集団において収集した標本を用いてミトコンドリア DNA サイトクローム b 領域の分析をおこなったところこの水系では Hap-3 Hap-8 Hap-15 Hap-17 Hap-18 Hap-19 Hap-20 Hap-21 Hap-22 Hap-27 Hap-30 の 11 種類のハプロタイプが確認された ( 図 3 表

12 Ⅱ アマゴモデル河川における集団遺伝解析和歌山県日高川水系の 15 集団において収集した標本を用いてミトコンドリア DNA サイトクローム b 領域の分析をおこなったところこの水系では Hap-3 Hap-8 Hap-15 Hap-17 Hap-18 Hap-19 Hap-20 Hap-21 Hap-22 Hap-27 Hap-30 の 11 種類のハプロタイプが確認された ( 図 3 表 4) これらのうち最も優占するハプロタイプは Hap-3 であり寒川新行谷以外の全ての集団で認められた調査をおこなった集団のうち西ノ河では種苗放流がおこなわれた記録が残されており ( 和歌山県農林水産総合技術センター私信 ) ここでは 6 種類のハプロタイプが確認され多型的であったまた西ノ河で確認されたハプロタイプのうち Hap-15 Hap-20 Hap-22 は日高川水系の他の集団からは確認されておらず他水系由来の個体が移殖された可能性が考えられる 12

13 13

14 14

マイクロサテライト DNA9 遺伝子座を解析したところ平均対立遺伝子数の範囲は 2.3-6.9 となり新行谷で最も低く西ノ河で最も高かった ( 表 5) ヘテロ接合度の範囲は 0.32-0.

分集団数は K=3 で最も高いΔK が得られた ( 図 4) 各個体を事後確率の最も高いクラスターに割り当てたところ北又谷では緑色の遺伝的要素をもつ個体が優占し蟻合谷新行谷では青色の遺伝要素を持つ個体が優占することが示されたこれら 3

15 マイクロサテライト DNA9 遺伝子座を解析したところ平均対立遺伝子数の範囲はとなり新行谷で最も低く西ノ河で最も高かった ( 表 5) ヘテロ接合度の範囲はとなり新行谷で最も低く立花川で最も高かった西ノ河で対立遺伝子数が多いとする結果はミトコンドリア DNA の結果と整合するものであるプログラム STRUCTURE を用いて個体の遺伝情報を基に分集団数を推定したところ分集団数は K=3 で最も高いΔK が得られた ( 図 4) 各個体を事後確率の最も高いクラスターに割り当てたところ北又谷では緑色の遺伝的要素をもつ個体が優占し蟻合谷新行谷では青色の遺伝要素を持つ個体が優占することが示されたこれら 3 河川で見出されるミトコンドリア DNA ハプロタイプは北又谷では Hap-3 Hap-17 の 2 種類蟻合谷では Hap-3 の単型新行谷では Hap-21 の単型でありマイクロサテライト DNA の結果と同様に遺伝的変異が少ないしたがって聞き取り調査ミトコンドリア DNA 15

マイクロサテライト DNA の結果を併せてこれら 3 集団は放流履歴のない在来集団と判断される一方西ノ河集団では 3 つの遺伝的要素が混合するパターンが確認されたミトコンドリア DNA の結果とも併せて解釈するとこの集団に放流魚が混じる可能性はきわめて高いと考えられる同様に初湯川本流集団および古川本流集団はマイクロサテライト DNA により 3 つの遺伝的要素が確認されこれらの

16 マイクロサテライト DNA の結果を併せてこれら 3 集団は放流履歴のない在来集団と判断される一方西ノ河集団では 3 つの遺伝的要素が混合するパターンが確認されたミトコンドリア DNA の結果とも併せて解釈するとこの集団に放流魚が混じる可能性はきわめて高いと考えられる同様に初湯川本流集団および古川本流集団はマイクロサテライト DNA により 3 つの遺伝的要素が確認されこれらの 2 集団についても放流魚が含まれる可能性がある Ⅲ 養鱒場などで継代飼育されたイワナのミトコンドリア DNA タイプ本州の渓流魚飼育施設 13 箇所において継代飼育されているイワナのミトコンドリア DNA のタイプを表 6にまとめたハプロタイプの番号は表 1 図 1 と対応する 13 箇所の飼育施設から Hap-1 Hap-3 Hap-5 Hap-7 Hap-8 Hap-10 Hap-11 Hap-13 Hap-16 Hap-19 Hap-22 Hap-30 Hap-31 Hap-32 の 14 種類のハプロタイプが確認されたこれらのうち最も出現頻度の高いハプロタイプは Hap-7 であり調べた 13 箇所の施設のうち 11 箇所で確認された各飼育施設に多様なハプロタイプが確認され複数の系統が継代飼育に使用されている現状がうかがえた 16

17 要約イワナに関して北海道本州を網羅するサンプリングをおこない一部ロシアからの集団を加えて遺伝子解析をおこなったミトコンドリア DNA サイトクローム b 領域の塩基配列を分析した結果合計 54 種類の DNA タイプ ( ハプロタイプ ) を確認することができたこれらのうち本州集団から見出されたハプロタイプは 36 種類であり琵琶湖集団や熊野川木曽川集団などいくつか特徴的なハプロタイプをもつ集団が特定されたサクラマス類では北海道本州四国九州台湾からの 49 集団をミトコンドリア DNA サイトクローム b 領域と ND-5 領域で分析したその結果合計 53 種類のハプロタイプを確認することができたこれらのうちサクラマスとアマゴの 2 亜種間で共通して出現するハプロタイプが 6 種類確認されたビワマスからは 5 種類のハプロタイプが確認されたがいずれの遺伝子型もビワマス特異的なものであったまた西日本太平洋側の河川に生息するアマゴ集団はいくつか特徴的なハプロタイプによってグルーピングされることがわかった和歌山県日高川水系に生息するアマゴ 15 集団をミトコンドリア DNA と高感度マーカーであるマイクロサテライト DNA を用いて分析しそれぞれの集団について在来非在来の判別をおこなった本課題でおこなったミトコンドリア DNA とマイクロサテライト DNA を併用する在来非在来判別手法は今後移殖をおこなう際の意志決定や保全管理単位の設定などの遺伝的管理において応用が可能と考えられる引用文献 Allendorf FW. Luikart G. (2007) Conservation and the genetics of popualations. Blackwell Publishing, USA. Aoyama J. Watanabe S. Ishikawa S. Nishida M. Tsukamoto K. (2000) Are morphological characters distinctive enough to discriminate between two species of freshwater eels, Anguilla celebesensis and A. interior? Ichthyological Research 47: Inoue JG. Miya M. Tsukamoto K. Nishida M. (2000) Complete mitochondrial DNA sequence of the Japanese sardine Sardinops melanostictus. Fisheries Science 66: Kikko T. Kuwahara M. K. Iguchi K. Kurumi S. Yamamoto S. Kai Y. Nakayama (2008) Mitochondrial DNA population structure of white-spotted charr (Salvelinus leucomaenis) in the Lake Biwa water system. Zoological Science 25:

18 Kitanishi S. Edo K. Yamamoto T. Azuma N. Hasegawa O. Higashi S (2007) Genetic structure of masu salmon (Oncorhynchus masou) populations in Hokkaido, northernmost Japan, inferred from mitochondrial DNA variation. Journal of Fish Biology 71 (Supple. C): 北野聡岸元亮輔中村慎 (2006) 治山堰堤が設置された東信地域の小渓流における魚類および両生類の生息状況. 長野県環境保全研究所研究報告 2: Kubota H. Doi T. Yamamoto S. Watanabe S. (2007) Genetic identification of native populations of fluvial white-spotted charr Salvelinus leucomaenis in the upper Tone River drainage. Fisheries Science 73: 野口大毅池田実中嶋正道谷口順彦 (2003) サクラマス集団解析のためのマイクロサテライト DNA マーカーの開発とその特性について. 水産増殖 33: 野口大毅谷口順彦 (2007) マイクロサテライト DNA マーカーによるサクラマスの遺伝的多様性と集団の遺伝的分化. 水産増殖 55: Olsen JB. Wenburg JK. Bentzen P. (1996) Semiautomated multilocus genotyping of Pacific salmon (Oncorhynchus spp.) using microsatellites. Molecular Marine Biology and Biotechnology 5: Olsen J. B. Wilson S. L. Kretschmer E. J. Jones K. C. Seeb J. E. (2000) Characterization of 14 tetranucleotide microsatellite loci derived from sockeye salmon. Molecular Ecology 9: O Reilly PT. Hamilton LC. McConnell SK. Wright JM. (1996) Rapid analysis of genetic variation in Atlantic salmon (Salmo salar) by PCR multiplexing of dinucleotide and tetranucleotide microsatellites. Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences 53: Palti Y. Fincham R. Rexroad III C. E. (2002) Characterization of 38 polymorphic microsatellite markers for rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Molecular Ecology Notes 2: Pritchard JK. Stephens M. Donnelly P. (2000) Inference of population structure using multilocus genotype data. Genetics 155: Sato T. Demise T. Kubota H. Nagoshi M. Watanabe K. (2010) Hybridization, isolation, and low genetic diversity of Kirikuchi char, the southernmost populations of the genus Salvelinus. Transactions of the American Fisheries Society 139: Schneider S. Roessili D. Excoffier L.(2001) A Software for Population Genetics Data Analysis, ver Genetics and Biometry Laboratory, Department of 18

19 Anthropology, University of Geneva, Geneva. Yamamoto S. Morita S. Kitano S. Watanabe K. Koizumi I. Maekawa K. Takamura K. (2004) Phylogeography of white-spotted charr (Salevelinus leucomaenis) inferred from mitochondrial DNA sequences. Zoological Science 21: 山本祥一郎中村智幸久保田仁志土居隆秀北野聡長谷川功 (2008) ミトコンドリア DNA 分析に基づく関東地方産イワナの遺伝的集団構造. 日本水産学会誌 74:

来集団かどうかを判別するまた小集団化と隔離によって生じる近交弱勢と遺伝的多様性の低下に対処するため移植による遺伝的回復 (Genetic restoration)が様々な動植物種で行われ一部

来集団かどうかを判別するまた小集団化と隔離によって生じる近交弱勢と遺伝的多様性の低下に対処するため移植による遺伝的回復 (Genetic restoration)が様々な動植物種で行われ一部渓流魚における遺伝的多様性低下の影響の把握水産総合研究センター中央水産研究所内水面研究部栃木県水産試験場三重大学要旨渓流魚が生息しない沖縄県を除く全国の都道府県の水産試験場等を対象にアンケート調査を行いその結果と既往