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1 Med. Mycol. J. Vol. 真菌誌 57J, J 第 巻 J 147, 第 号 2016 年 J 141 ISSN 原 著 外用爪白癬治療薬の特性比較 島村剛 岩永知幸 宮前亜紀子 久保田信雄 今井絢美 澁谷和俊 平栁こず恵 株式会社ポーラファルマ医薬研究所 東邦大学医学部病院病理学講座 要 旨 近年, 外用爪白癬治療薬が次々に開発 上市され, 長年抗真菌薬の経口投与に限られていた爪白癬治療法に新たな選択肢が増えてきている. 本研究では, わが国で上市されている 5% ルリコナゾール外用液および 10% エフィナコナゾール外用液の特性把握のため, 薬剤塗布後の爪中薬物濃度および爪中薬物の抗真菌活性を比較した.In vitro ヒト爪薬物透過性試験では, 薬剤をヒト爪に単回投与後, 爪を表面から薄切したサンプルの薬物濃度を測定し, 爪中薬物濃度分布を算出した. また,in vitro ヒト爪スライス阻止円試験では, 薬剤を 1 日 1 回 14 日間投与し, 爪スライスを含菌培地にのせ, 阻止円の有無から阻止円形成率を算出した. その結果, ヒト爪薬物透過性試験では,5% ルリコナゾール外用液は,10% エフィナコナゾール外用液にくらべ, 爪全層において高い爪中薬物濃度を示し, 測定ポイントごとの比較では, 倍の濃度差が認められた. また, ヒト爪スライス阻止円試験における,5% ルリコナゾール外用液および 10% エフィナコナゾール外用液の平均阻止円形成率は, それぞれ 71.0% および 12.6% を示し, 両剤間で統計学的な有意差が検出された. 以上の結果から,2 つの外用爪白癬治療薬は特性が異なり,5% ルリコナゾール外用液は, 爪中への移行性および貯留性の良さが示されるとともに, 爪中のルリコナゾールが抗真菌活性を維持していることが確認された. Key words: 外用爪白癬治療薬, 爪白癬,5% ルリコナゾール外用液,10% エフィナコナゾール外用液 序文難治性疾患として知られている爪白癬の罹患率は, 海外 ( ヨーロッパ, 東アジア, 北米 ) では人口の約 20% に達し 1 3), 一方で国内では潜在罹患率が 10% と報告されている 4). また, 爪白癬は, 患者における生活の質 (quality of life:qol) 低下へ影響を与える 5) とともに, 肥厚した爪は歩行の際に痛みを生じ, 生活に支障を起こすこともある 6). 大多数の爪白癬症例では足白癬を併発していること 2, 7) から, 再感染や他者への感染を引き起こす可能性があり, 爪白癬および足白癬への治療は積極的に行われるべき 8) とされている. 爪白癬の治療には, 経口抗真菌薬が広く使用されている 9) が, 肝機能低下患者への副作用および薬物相互作用などの理由で経口抗真菌薬の投与が困難な症例も少なくない 10). そのため, 外用爪白癬治療薬に対する期待が高まっている. 海外では,5% アモロルフィンネイルラッカー (Loceryl nail lacquer) および 8% シクロピロックスネイルラッカー (Penlac nail lacquer) が治療に用い られているが, その完全治癒率 [ 感染面積 0% かつ真菌学的治癒の割合 ] 11) は, それぞれ 0.96% 12) および % 13) と報告され, より有効な外用爪白癬治療薬の開発が望まれている. 一方, 長年わが国では, 外用爪白癬製剤は開発されてこなかった. その最大の理由は, 硬ケラチンを主体とする爪の薬剤透過性が低く 14), 十分な薬物量を爪中に移行させることが困難であるため 15 17), と考えられている. したがって, 外用爪白癬治療薬の開発では, 効果の高い製剤を創出するために, 抗真菌薬原薬の特性を見極めつつ, その特性を最大限引き出す製剤化技術が肝要と考えられる. わが国においては,2015 年に 10% エフィナコナゾール外用液が,2016 年に 5% ルリコナゾール外用液が上市された.10% エフィナコナゾール外用液は, ケラチン結合率の低さと優れた爪透過性を特徴とした製剤 11) である. 一方 5% ルリコナゾール外用液は, 白癬菌に対する抗真菌活性の高い有効成分 18 20) を, 爪深部にまで高濃度で分布 21) させることが可能な製剤である. それぞれの第三相臨床試験における完全治癒率は,10% エフィナコナゾール外用液で 14.6%(48 週目 ) および 17.8%(52 別冊請求先 : 島村剛 神奈川県横浜市戸塚区柏尾町 560 株式会社ポーラファルマ医薬研究所 [ 受付 :2016 年 8 月 16 日, 受理 :2016 年 9 月 29 日 ] [email protected]

2 J 142 日本医真菌学会雑誌第 57 巻第 4 号平成 28 年 週目 ) 11),5% ルリコナゾール外用液で 14.9%(48 週目 ) 22) と, ほぼ同等の値を示した. 本研究では, 両剤の特性を明らかにすることを目的として,2 つの外用爪白癬治療薬を用いて,in vitro ヒト爪薬物透過性試験にて爪中薬物濃度測定 21) を行うとともに,in vitro ヒト爪スライス阻止円試験にて阻止円の観察による抗真菌活性 21) を評価した. 材料および方法 材料 5% ルリコナゾール外用液 ( ルコナック 爪外用液 5%) および 10% エフィナコナゾール外用液 ( クレナフィン 爪外用液 10%) は, 市販の製剤を用いた. 抗真菌薬の原薬であるルリコナゾールは, 日本農薬株式会社から入手し, エフィナコナゾールは,10% エフィナコナゾール外用液から抽出した ( 純度 :96.3%). 使用菌株 Trichophyton rubrum(nbrc 9185) を独立行政法人製品評価技術基盤機構から入手し,in vitro ヒト爪スライス阻止円試験に使用した.T. rubrum( 本研究で使用した NBRC 9185 を含む 14 菌株 ) に対する MIC90 (90% 最小発育阻止濃度 ) は, ルリコナゾールで μg/ml, エフィナコナゾールで 0.016μg/ml と報告されている 23). 菌液の調製凍結乾燥して保管されていた T. rubrum を 0.05% (w/v)tween80 含有滅菌生理食塩水に懸濁し, Sabouraud s dextrose agar(sda) 平板培地へ添加後,28 にて 2 週間培養した. 前培養後, 白金耳で菌体をかきとり,0.05%(w/v)Tween80 含有滅菌生理食塩水に懸濁させ, セルストレーナーでろ過後,Thoma 型血球計算盤を用いて, ろ液中の分生子数を計測し, 含菌平板培地用の分生子液とした. 培地作製 Fluid Sabouraud Medium および Bacto agar は, Difco Laboratories(Detroit, MI) から, シクロヘキシミド, シソマイシンおよびクロラムフェニコールは, 和光純薬工業株式会社 ( 大阪, 日本 ) から入手した. 培養用培地として SDA 平板培地 (1L 中に Fluid Sabouraud Medium 6 g,bacto agar 15 g) を作製した. また,SDA 平板培地に抗菌薬 (1L 中にシクロヘキシミド 500 mg, クロラムフェニコール 50 mg, シソマイシン 50mg) および分生子液を添加し,10 cm シャーレを用いて含菌平板培地 ( 培地中 T. rubrum 濃度 : conidia/ml) を作製した. ヒト爪サンプル 2007 年 4 月から 9 月にかけて, ボランティアから, 日常の手入れで切除した爪の遊離縁 ( ヒト爪サンプル : 縦に5mm 以上 ) の提供を受け, 試験に用いた. すべてのヒト爪サンプルはシリアル番号が付与され, 爪の由来 ( 指の名称 ), 採取日を記録し, 使用日までデシケーター内で 保管した. なお, ヒト爪サンプルの収集および実験については, ポーラ研究倫理委員会 ( 承認番号 : 倫 ) にて承認されている. In vitro ヒト爪薬物透過性試験既報 21) に従い試験を実施した.48 穴プレートに爪と滅菌水を入れ, 室温で 1 時間浸漬後, 綿棒で爪表面の付着物を除去し, 縦に 2 分割したものを爪試験サンプルとした. 爪試験サンプルを, 直径 2 mm の孔を有するテフロン板により甲側床側を保持し, フランツセルにセットした. 爪床側の穴を塞ぐように約 40 のアガロースゲル (1.5% Bacto agar,0.9% 塩化ナトリウム ) を流し込み, 室温で静置しゲルを固化させたあとにシールで密封した.5% ルリコナゾール外用液または 10% エフィナコナゾール外用液を各爪試験サンプルのテフロン板の穴から 0.5μl ずつ爪甲表面に塗布し,28, 湿度 50% に設定した恒温恒湿槽内に静置した. 約 24 時間後に塗布部位を蒸留水でふき取りを行い, 投与部位を 2mm 径のバイオプシーパンチにて爪を打ち抜き, 爪ディスクを作製した. つぎに, クライオスタットを用いて, 爪ディスクを10μm の厚さで連続的に薄切し, 爪スライスを作製した. 得られた爪スライスは 5 枚ずつ試験管に採取して測定用試料とし,LC-MS/MS にて薬物濃度を測定した. In vitro ヒト爪スライス阻止円試験既報 21) に従い試験を実施した. 爪を 70%(v/v) エタノール水溶液に約 1.5 時間浸漬後, 綿棒で付着物を目視で確認できなくなるまで除去し, 縦に 2 分割したものを爪試験サンプルとした.in vitro ヒト爪薬物透過性試験と同様の方法で, フランツセルにセットし,5% ルリコナゾール外用液または 10% エフィナコナゾール外用液 0.5 μl/ 日を1 日 1 回 14 日間投与し, 爪ディスクの作製を行った. なお, 投与部位は, 約 24 時間ごとに蒸留水でふき取りを行い, 実験期間中は,28, 湿度 50% に設定した恒温恒湿槽内に静置した. つぎに, クライオスタットを用いて, 爪ディスクを 25μm の厚さで連続的に薄切し, 爪スライスを作製した. 得られた爪スライスは 1 枚ずつ含菌培地のシャーレ中心部に置き,4 にて 72 時間の静置後に,28 にて 3 日間の培養を行った. 培養後に各シャーレについて, 爪スライスを中心に阻止円が観察されたものを+と規定し, 阻止円の有無 (+ / ) を確認した. 爪全層のうち, 抗真菌活性を有する薬物濃度を示す爪の層の割合を算出するために, 投与薬剤ごとに爪表面から連続して阻止円形成が認められたスライス数を基に, 平均阻止円形成率 (%) を算出した. 統計学的解析平均阻止円形成率について, 統計学的解析は Excel 2010( マイクロソフト社 ) を使用し,Student の t 検定で,p < 0.05 を有意と判定した. 結果 In vitro ヒト爪薬物透過性試験 5% ルリコナゾール外用液および 10% エフィナコナ

3 真菌誌第 57 巻第 4 号 2016 年 J Concentration of each test drug in nail plate (µg/cm 3 ) % Luliconazole 10% Efinaconazole Depth from nail surface (µm) (a) Drug concentration (µg/cm3) Test article Distance from nail surface (µm) % Luliconazole % Efinaconazole Ratio a (b) Fig. 1. Concentration of luliconazole and efinaconazole in nail plate after single treatment of two topical therapeutic agents. (a)drug concentration distribution of each antifungal agents in nail plate.(b)mean value of concentration of luliconazole and efinaconazole in nail plate. Data represents mean values(n = 6)and error bar represent SD. a, ratio = 5% Luliconazole / 10% Efinaconazole. 5% Luliconazole, 5% Luliconazole solution. 10% Efinaconazole, 10% Efinaconazole solution. ゾール外用液を単回投与後の爪中薬物濃度分布を Fig. 1a に, 各測定ポイントにおける平均薬物濃度値を Fig. 1b に示す. 爪全層において, 爪中ルリコナゾール濃度は, 爪中エフィナコナゾール濃度にくらべ, 高い値を示した. 特に, 最も爪床に近い部位 ( 表面から 350μm) では, 約 2.7 倍の高い薬物濃度が確認された. In vitro ヒト爪スライス阻止円試験 5% ルリコナゾール外用液および 10% エフィナコナゾール外用液を 14 日間投与したときの, 爪スライスごとの阻止円を観察した. 代表例を Fig. 2a に示す. 各薬剤の平均阻止円形成率は,5% ルリコナゾール外用液および 10% エフィナコナゾール外用液で, それぞれ 71.0% および 12.6% を示し, 両薬剤の比較において統計学的有意差が認められた (Fig. 2b). 考察爪の肥厚を伴い, 爪の伸長遅延を認める高齢患者は, 爪白癬治療の成功率が低い 24) ことから推察されるように, 爪白癬を含む, 表在性真菌症の治療は, 感染真菌の増殖を止め, 角層もしくは爪のターンオーバーにより完全に真菌を体外へ排出することが治療の基本と考えられている 25, 26). したがって, 爪白癬治療では, 爪中に存在する白癬菌の増殖を阻止する十分な薬物濃度を爪中に維持させることが, 治療の成否を左右する重要な因子であると推察される. そこでわれわれは, わが国で上市されている 2 つの外用爪白癬治療薬について, 爪への薬物移行性と爪中薬物の貯留性を明らかにするため,in vitro ヒト爪薬物透過性試験で爪中薬物濃度を測定した.5% ルリコナゾール外用液群は爪全層において,10% エフィ

4 J 144 日本医真菌学会雑誌第 57 巻第 4 号平成 28 年 (a) ** 80.0 Zone of inhibition (%) % Luliconazole 10% Efinaconazole (b) Fig. 2. Fungal growth inhibition after 14-day treatment of two topical therapeutic agents. (a)photo of representative examples of zone of inhibition test.(b)zone of inhibition rate(%)=(number of nail slices which confirmed zone of inhibition in a row / number of all nail slices) 100. Data represents mean values (n = 8) and error bar represents SE. 5% Luliconazole, 5% Luliconazole solution. 10% Efinaconazole, 10% Efinaconazole solution. **P < 0.01 ナコナゾール外用液群よりも高い爪中薬物濃度を示した.5% ヒト爪ケラチンを用いた親和性確認試験では, ルリコナゾールおよびエフィナコナゾールのケラチン非結合率は, それぞれ 2.9% および 24.9% と報告 27) されている. このケラチン非結合率を考慮して算出した in vitro ヒト爪薬物透過性試験における, 最も爪床に近い部位の非結合薬物量は, ルリコナゾールおよびエフィナコナゾールでそれぞれ 0.17μg/ml および 0.55μg/ml と算出され, 非結合の薬物量としては, エフィナコナゾールのほうが高い爪中濃度を示すと推察される. しかし, ルリコナゾールは,T. rubrum および Trichophyton mentagrophytes に対する MIC90 が, エフィナコナゾールよりも 倍低い 23) ため, 白癬症の治療に際して爪中における真菌増殖抑制効果はルリコナゾールが勝る可能性が高いと考える. 一方, 臨床での薬効を予測するためには, 原薬を評価するだけでなく, 臨床で使用される製剤で評価する必要性がある. たとえば, テルビナフィン塩酸塩を 1% 含有したクリーム (Lamisil Cream) およびゲル (Lamisil DermGel) を含菌培地の上に設置した膜状のケラチン ( ヒト毛髪由来もしくはウシ蹄由来 ) の上に投与し, 抗真菌活性を評価した試験では, 同量のテルビナフィン塩酸塩を含有するにもかかわらず, クリームよりもゲルのほうが強い抗真菌活性が示された 28). 過去の報告では, 外用爪白癬治療薬の治療ポテンシャルが, 原薬そのものの爪透過性やケラチン結合率にて評価されてきたが 27, 29), 剤型が異なるテルビナフィン製剤の結果 28) は, 最終製品 を用いた薬効評価の重要性を示唆するものと考えられる. われわれは,5% ルリコナゾール外用液および 10% エフィナコナゾール外用液を用いて, 爪中に移行した薬物の抗真菌活性を, ヒト爪スライス阻止円試験にて評価した. その結果,5% ルリコナゾール外用液は,10% エフィナコナゾール外用液とくらべ, 統計学的に有意に高い平均阻止円形成率を示したことから, 爪中薬物濃度のデータを裏付ける結果であると考えられた. 5% ルリコナゾール外用液の国内第一相臨床試験では, 爪白癬患者の第 1 趾爪に薬剤を塗布したときの爪中ルリコナゾール濃度の測定が行われた 22). 塗布開始 5 週後では,16,439μg/g を示し, 爪白癬患者においてもルリコナゾールの爪への移行性が確認された. さらに塗布終了後 4 週間経過したときの爪中ルリコナゾール濃度は, 2,248μg/g を示し, 薬物の爪中における貯留性が臨床試験においても確認されている. 爪白癬治療薬の治療効果予測として, 原薬の爪透過性とケラチン含有培地による MIC 値から算出した薬効係数 (Efficacy coefficient) の有用性が報告されている 27). 同係数によるエフィナコナゾール, シクロピロックスおよびアモロルフィンの薬効予測順位が, 爪白癬治療薬 ( 経口および外用 ) のネットワークメタアナリシス報告に記載されている治療薬ランク 30) と一致することから, 同係数は治療効果予測の有用な指標の一つであると考えられる. ルリコナゾールの同係数はシクロピロックスおよびアモロルフィンより高値を示すが, エフィナコナゾールとくらべて低値が示された 27) ことから, 原薬特性とし

5 真菌誌第 57 巻第 4 号 2016 年 J 145 て, ケラチン結合率が高く, 爪を透過しにくい性質と考えられた. しかし,5% ルリコナゾール外用液は,in vitro ヒト爪薬物透過性試験における最も爪床に近い部位の爪中ルリコナゾール量が, ケラチン非結合量 27) として,T. rubrum および T. mentagrophytes に対する MIC90 の 178 倍と算出され, 白癬菌に対する抗真菌活性を示す十分な量のルリコナゾールが爪深部で確認された. さらに in vitro ヒト爪スライス阻止円試験においても,5% ルリコナゾール外用液は,8% シクロピロックスネイルラッカー 21) および 10% エフィナコナゾール外用液と比較し, 統計学的に有意な平均阻止円形成率が示され, 爪中に存在するルリコナゾールは, 両剤とくらべ強い抗真菌活性を示すことが確認された. これらの結果から, ルリコナゾールの原薬特性は爪白癬治療薬として開発に不利となる高いケラチン結合性を有しているものの, 製剤化の工夫により,5% ルリコナゾール外用液は, 爪へ移行しやすく, 白癬菌に対する十分な爪中抗真菌活性を有する製剤特性を獲得したものと考えられた. また, 爪白癬患者に同剤を 5 週塗布した直後および 4 週休薬後の爪中ルリコナゾール量 ( ケラチン非結合量として 27) ) が,MIC90 の37 万倍 ( ただし, 爪の比重は ) として計算 ) および 5 万倍と算出され, 臨床データからも, この特性が裏づけられたと考える. 従前, 抗真菌薬の経口投与による爪白癬治療は, 外用剤治療よりも治療効果がよいといわれている. イトラコナゾール 400 mg/ 日のパルス療法では, 投与開始 12 週で MIC90 をこえ 32), テルビナフィン塩酸塩 125 mg/ 日では, 投与開始 4 週および 12 週で, それぞれ MIC の10 倍および 20 倍以上に達する 33) と報告されている. この場合, 血流によって運ばれた薬物が除々に爪床から爪中に移行することで, 抗真菌作用が生ずると理解されており, 爪中の抗真菌効果発現までに, 一定時間を要する. 一方,5% ルリコナゾール外用液は, 投与開始 1 週後にて, 爪中ルリコナゾール量 ( 非ケラチン結合量として 27) ) が MIC90 の28 万倍に達することから, 抗真菌効果を示す濃度に達するまでの時間差がほとんどなく, 経口爪白癬治療薬とくらべて著しく高い濃度の有効成分が爪中に移行するものと考えられた. この特性は, 治療開始時における爪患部から他部位への真菌感染拡大, もしくは他者への感染伝播を比較的早く食い止められる可能性を示唆するものと考えられた. わが国において,2 種類の外用爪白癬治療薬が上市されている.10% エフィナコナゾール外用液は, 原薬のケラチン結合率の低さを活かし, 爪への透過性に優れた製剤である 11, 27). 一方,5% ルリコナゾール外用液は, 白癬菌に対する抗真菌活性の高さを活かしつつ, 製剤工夫により爪全層にルリコナゾールを浸透させることに成功した製剤であり,10% エフィナコナゾール外用液とは, 特性が異なるものと考えられた. 条件が同一ではない臨床試験の結果を直接比較することはむずかしいが,Matsuda らの指摘 27) のように, 完全治癒率でくらべると, 国内で上市されている外用爪白癬治療薬は, 海外で使用 されている 5% アモロルフィンネイルラッカー 12) および 8% シクロピロックスネイルラッカー 13) よりも高く 22, 34), 臨床現場での活躍が期待される治療薬と考えられる. また, 特性が異なる製剤が存在することは, 治療選択の幅が増すことを意味し, 患者福祉に大きく寄与するものと考えられる. 今後, それぞれの特性を活かした病型や重症度での使い分けの検討により, 両製剤の位置づけが明確になるかもしれない. 以上から, わが国で開発された 5% ルリコナゾール外用液および 10% エフィナコナゾール外用液は, それぞれの特性が異なるものの, いずれも有用な治療薬であると考えられ, 爪白癬治療の躍進への一助となることが期待される. 文 献 1)Ghannoum MA, Hajjeh RA, Scher R, et al: A largescale North American study of fungal isolates from nails: the frequency of onychomycosis, fungal distribution, and antifungal susceptibility patterns. J Am Acad Dermatol 43: , )Ogasawara Y: Prevalence and patient s consciousness of tinea pedis and onychomycosis. Nihon Ishinkin Gakkai Zasshi 44: , )Haneke E, Roseeuw D: The scope of onychomycosis: epidemiology and clinical features. Int J Dermatol 38(Suppl 2): 7-12, ) 仲弥, 宮川俊一, 服部尚子, 畑康樹 : 足白癬 爪白癬の実態と潜在罹患率の大規模疫学調査 (Foot Check 2007). 日臨皮医誌 26:27-36, )Belyayeva E, Gregoriou S, Chalikias J, Kontochristopoulos G, Koumantaki E, Makris M, Koti I, Katoulis A, Katsambas A, Rigopoulos D: The impact of nail disorders on quality of life. Eur J Dermatol 23: , )Schein JR, Gause D, Stier DM, Lubeck DP, Bates MM, Fisk R: Onychomycosis. Baseline results of an observational study. J Am Podiatr Med Assoc 87: , )Pires CA, Cruz NF, Lobato AM, Sousa PO, Carneiro FR, Mendes AM: Clinical, epidemiological, and therapeutic profile of dermatophytosis. An Bras Dermatol 89: , ) 渡辺晋一, 西本勝太郎, 浅沼廣幸, 楠俊雄, 東禹彦, 古賀哲也, 原田昭太郎 : 本邦における足 爪白癬の疫学調査成績. 日皮会誌 111: , )Daniel RC: Onychomycosis: burden of disease and the role of topical antifungal treatment. J Drugs Dermatol 12: , )Elewski B, Tavakkol A: Safety and tolerability of oral antifungal agents in the treatment of fungal nail disease: a proven reality. Ther Clin Risk Manag 1: , )Tatsumi Y: Pharmacological characteristics and clinical results of efinaconazole (Clenafin Topical Solution 10%), a novel anti-onychomycosis drug. Nihon Yakurigaku Zasshi 145: , 2015.

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7 真菌誌第 57 巻第 4 号 2016 年 J 147 Comparison of Characteristics of Two Topical Therapeutic Agents for Onychomycosis Tsuyoshi Shimamura,Akiko Miyamae, Ami Imai, Kozue Hirayanagi, Tomoyuki Iwanaga, Nobuo Kubota and Kazutoshi Shibuya R&D Laboratories, POLA PHARMA INC. Department of Surgical Pathology, Toho University School of Medicine Two topical therapeutic agents were approved in Japan from 2015 to 2016, adding new options for onychomycosis therapy in the clinical field. In order to confirm the differences of formulation properties and nail pharmacokinetics between 5% luliconazole solution and 10% efinaconazole solution, drug concentration and antifungal activity in the nail were measured after topical treatment using human nail plates. In the in vitro permeation study, concentration of each drug was measured in the transversely sliced nail after single treatment with the two topical therapeutic agents. The results showed that concentration of luliconazole is higher than that of efinaconazole at all nail layers, differing by times at each measurement point. Next, we examined antifungal activities of each drug in sliced nail after 14-day topical treatment. Mean rates of formation of inhibition zones for 5% luliconazole solution and 10% efinaconazole solution were 71.0% and 12.6 %, respectively, and were statistically different. These results show that the two topical therapeutic agents have different properties, and suggest that 5% luliconazole solution has good nail permeation and retention characteristics. Moreover, luliconazole was found to retain enough antifungal activity in the nail plate against Trichophyton spp. after treatment with the topical agent.