1. Norovirus(NoV) NoV NoV NoV NoV NoV AM AM NoV 2. 1) S 2007 10 2007 11 12 1 2008 1 2 77 2) 77 1 AM AM n = 38 n = 39AM - 2.5mg/ml 37 2 RNA AM AM NoV genogroup(g) G PCR NoV 3) AM 1g NoV Mann-Whitney U 3. 1g NoV AM 5,432 3,707 G AM 4,519 3,195 G AM 913 512 Mann-Whitney U 2 NoV AM p=0.055gg 2 p<0.01 NoV 2 n NoV G G [/g] [/g] [/g] AM 38 39 5,432 3,707 4,519 3,195 913 512 U p- p = 0.055 p = 0.10 p < 0.01 NoV AM

[ (A ) 1 3 5 2 [ 6 10 5 20 100 CPE:cytopathic effect 2 0.5% CPE 3 2006-2007 AH 1 AH3 4 HI:hemagglutinin inhibition test HA(hemagglutinin) NA neuraminidase HA NA RT-PCR [] 100 7 1 9 1 CPE 3 HI HI 2006-2007 AH1 HI 10 AH3 AH3 4 HI 5 A/Hiroshima/52/2005 10 160A/NewYork/55/2004 40 160 HI 2003 AH 5 2004 RT-PCR 2 H3N2 2 HA 354bp 100% 2 3 95.8% HANA H5 2

(EHEC) 16 20 12 5 96 20 3 EHEC(O121 VT2) (PFGE) 3 97 VT2 (OUTHNM) O157 EHEC (O157 VT1,2) O157 O157 O157 PFGE 13 ( )2 1 100 O26 3 1 5 EHEC (O26 VT1) PFGE 90( 1) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 3 PFGE A B B B C D D D C EHEC EHEC PFGE EHEC PFGE EHEC

2003 1996 1999 1718 2030% 10% 2.1 18 5 19 10 78 24 10 112 18 56 19 56 2.2 25 10mECEEMBPW 1 2 BPW 3748 mec 5 SSDHLX-Sal XMG mec PCR VT inva NGKG harf-fraser 10 2 3 PALCAMOxford BBL API 3.1 112 10 7 10 8 cfug 10 4 10 8 cfug 3.2 112 11 13 O18 7 O136 2 O8O26O91O114 1 VTLTSTaggReaeAEAST 3.3 56 1 1 Staphylococcus aureus C 56 23 Bacillus cereus 1 Listeria ivanovii 16 8 O157

µ µ µ µ µ µ µ µ µ

7. オンライン固相抽出 -LC/MS/MS による残留動物用医薬品の一斉分析 生活化学部 遠藤美砂子佐藤勤 1. 目的平成 18 年度からポジティブリスト制が施行され, 動物用医薬品については約 250 医薬品に暫定基準等が設定された これにより迅速に多くの医薬品を検査することが必要になるとともに, 定量値を求めることが要求されるようになった 前回, オンライン固相抽出 -LC/MS/MS 分析を導入することで, 検査医薬品数を増加 (63 医薬品 ) させるとともに, 前処理の簡素化を図ることができた 1) 今回, さらなる検査医薬品数の増加 (110 医薬品 ) を図るとともに, 試料として魚介類, はちみつを追加して検討した結果について報告する 2. 方法試料は宮城県内で市販または生産されている鶏卵, 鶏肉, 豚肉, 牛肉, エビ, 銀鮭およびはちみつを用いた 試料前処理は, 鶏卵, 鶏肉, 豚肉, 牛肉, エビ, 銀鮭については, アセトニトリル / メタノール (4:1) による抽出法を, はちみつは水で 2 倍希釈した LC は Agilent 社製 1100 シリーズを用い, オンライン固相抽出カラムには Waters 社製 Oasis HLB(2.1 20 mm,25μm) を, 分析カラムには Agilent 社製 ZORBAX SB-Aq(2.1 50 mm,3.5μm) を用いた 試料注入量は 10μl, カラム温度は 40, 移動相は 0.1 % ギ酸とアセトニトリルのグラジェント溶出とした MS/MS は Applied Biosystems 社製 API3000 を用いた イオン化はエレクトロスプレーによるポジティブモード (POS) ならびにネガティブモード (NEG) で行い,multiple reaction monitoring 測定により定量した Dwell time の制限から,LC/MS/MS 分析は 3 系列 (POS 2 系列,NEG 1 系列 ) で行った 3. 結果検量線はほとんどの医薬品で,25~150 pg の範囲で直線性を示し, 相関係数は 0.9 以上であった また, 検出下限値 (S/N=3) は試料換算で,0.005~0.02ppm であった 添加回収試験の結果は表 1 に示した オラキンドックス, ホキシム, ロキサルソンは本分析法で分析することはできなかった また, マラカイトグリーンとロイコマラカイトグリーンは, 告示試験法の検出下限値 (0.002ppm) を得られなかった テトラサイクリン, クロルテトラサイクリン, オキシテトラサイクリンは, アセトニトリル / メタノール抽出法では, 十分な回収率が得られなかったが, 水で希釈するだけで測定することができるはちみつでは, 良好な回収率が得られた その他の化合物は, 試料の種類により異なるものの, おおむね良好な回収率が得られた スクリーニング分析による許容条件を回収率 60~140%, 相対標準偏差 20% 以内とした場合, 本法により 82~96 物質の残留動物用医薬品の検査を行うことが可能となった 市販試料 28 検体 ( 鶏卵 6, 鶏肉 6, 豚肉 5, 牛肉 5, エビ 1, 銀鮭 4, はちみつ 1) について本法による分析を行ったところ, 対象医薬品は検出されなかった 本分析条件のみで判定不能な疑似ピーク等も検出されなかった 1) 遠藤美砂子, 栁田則明 : 分析化学,56,317-326(2007)

185800 (595) 16 20 329 ( 356)276314 ( 60%140%) 11 () 70%120% 20 (n=1) 70%120% GC/MS 148226 LC/MS/MS191293 GC/MS (Mt) GC/MS/MS-MRM(Multiple Reaction Monitoring) 2.1 H19 2.2 GC/MSAgilent 6890/5973 inert GC/MS/MSVarian 1200,8400Autosampler 2.3 GC/MS/MS GC DB-5Ms(0.25mm i.d.30m 0.25m);70(2min)25/min 150(0)3/min200(0)8/min280(10) ;1.5mL/min;180 ;40psi;2L MS/MS GC/MS 263 ( )GC/MS/MS-MRM Dwell Time 1 2 2.4 20g STD200ng ( Carbograph+SAX/PSA 2mL GC/MS ) 5 GC/MS/MS 1/2Mt 0,10,20,50,100 ng/ml GC/MS-SCAN-TIC Mt GC/MS/MS-MRM GC/MS-SCAN-SIM (RT:21 25 )RT Mt GC/MS 28 GC/MS/MS 70120% (RT21 25 ) 7 5 GC/MS/MS-MRM 20ng/mL 10ng/mL RTGC/MS Mt GC/MS/MS-MRM 10ng/mL S/N>3 GC/MS/MS-MRM GC/MS 1/5 Mt 1/5 Mt GC/MS

14 PCDD/DF 4 PCB Co-PCB 14 PCDD/DF 209 PCB GC/MS 1) PCB KC-300600 1) 1518 8 1 5 28 16 N I PCB KC-300400500600 KC 2) 1) 25 8 1 PCB 35 PCB 2 PCB 13 Co-PCB Co-PCB I PCB N PCB 3 4I PCB5KC-400KC-500 25 p.142 (2007)

2003 2007 4 13 60L 3L1 10ml 1 C-18 3M Empore TM 2315(FF 2 1,500psi150 n- 10L n- 100ml 1 8L 15mm 5g n- n-10%/ n- 30%/n-60%/n- 100ml GC/MS 1 1 (ER) 7 3 2 3 GC/MS 4-1 ppt as E2 (-S9) mer her YTOX ppt as E2 ppt as E2 IC50(C.R.) 40.6 1.2 19.5 0.5 ND ND 83.9 1.6 86.2 (-S9) mer her mer her ppt as ppt as ppt as E2 E2 E2,n-Hex ND ND,n-Hex ND ND,10% ND ND,10% 3.7 ND,30% ND ND,30% ND ND,60% 16.8 0.7,60% 5.7 ND,DCM 21.9 0.8,DCM 1.6 ND,MeOH 1.2 ND,MeOH ND ND 1) 24 p26 2) 25 p12 3) 25, 98-102, 2007

O SPM NO SPM 59 17 22 SPM SPM SPM (1 1 1 ) () 90 10 80 14 30 14 22 553 124 37 7 39 31 (1)2(2)2 36 (7) 21 (4) 14 4 1011 7 (1) 10 4 20 22 8 (1) 1 (3) 2 2 1 3 4 30 (5) 7 9 7 (1) 2 77 (1)2 1 (2)2 18 (15) 7 (6) 14 4 1011 5 (4) 10 4 2023 (3) 2 2 20 (16) 1 7 9 5 7 9 500700m 10km 10m 7 9 7 22 11 30 2 3 8 17 14 4 1011 1 100m 4m SPM 10m SPM 1 2 6 2

PRTR (AIST-ADMER Ver.2) 100m 1/2 1/2 PRTR PRTR 100m IRIS 100m 0.5g/m 3 g/ 100m 6 510 ()610 () 3 1 2 (

1 PAHs [a] PAHs PAHs 40 PAHs PAHs PAHs PAHs PAHs PAHs PAHs 2 2.1 3 1 1 1 S K 2.2 19 8 1 2.3 QFFPUF ACF 100 L ACF PUF 3g GC PAHs 17 3 QFF PAHs PAHs PUF PAHs PAHs ACF PAHs PUF PAHs PAHs PAHs 94

13 18 3 LCA CO2,SOX,NOX, BOD(or COD) LCA CO2 CO2 S K DIP CO2 4.000 3.500 3.000 2.500 2.000 1.500 1.000 0.500 0.000 1 CO2 S K (*1) (*2) DIP(*2) 50% CO2 2 CO2 S 10% CO2 2 S ( (*3) 2006 S K CO2 LCA 1 3.4581 CO2 0.9751.871 2CO2 SOX,NOX,BOD,COD LCA LCA LCA CO2 HP

, 2007 7 2008 6 JJ kg J3

1. 19 3 2 5 6 2. 19 6 20 19 7 30 8 HBODATU-BODSS 3. (6/20)(7/30) No1 No2 No3 No3 No1No2 No1 No2 No3 A No5 BOD BOD No5 No4 No5 No5 No7 No3NoNo7 1.4km No7 HBOD SS No3 2 (6/20) 2 (7/30)

42 25 200m GPS GPS 10 8 a