病理検査とコンパニオン診断 病理科部 荻野 哲朗 モーニングセミナー 平成2５年１０月７日

病理検査とコンパニオン診断 病理科部 荻野 哲朗 モーニングセミナー 平成2５年１０月７日

13,371 12.868 8,316 8,107 5,283 3,584 1,718 4,967 3,656 1,706

20,994 23,031 187 274 291 411 488 10,843 6268 13,839 6537 595

病理解剖 目 的 学問研究として 医療評価機能として 国民死亡原因の解明 病理解剖の実施 大学等の教授 助教授 死体解剖資格(厚生労働省認定 保健所長の許可による 遺族の承諾が必要 実施場所の制限

死体解剖資格 医師または歯科医師 適切な研修施設 大学の解剖学 病理 法医学 病院または研究室 年間１０体以上の剖検例 解剖に関する研究業務 ２年以上の解剖に関連する研究業務 ２０体以上について解剖業務 直近５年間 解剖補助５以上 主として解剖 １５体以上 医師または歯科医師以外 別途認定基準 死体解剖資格認定要領 改正 平成15年12月16日

病理解剖数の推移 解剖数 30 25 香川大学病院 香川県立中央病院 高松赤十字病院 高松市民病院 三豊総合病院 香川労災病院 20 15 10 5 0 2007年 2008年 2009年 2010年 2011年 日本病理剖検輯報より

コンパニオン診断 Companion diagnostics; CoDx or CDx Companion ある行動を共にし親密な関係にある仲間 (研究社 新英和中辞典 特異的な分子標的治療との組み合わせ 標的分子の有無 遺伝子多型 患者の層別化

/ DNA / / 2004;22(14 :1954-1959

シグナル経路 HER2ファミリー Cetuximab Panitumumab HER2 HER1 HER3 HER4 Ⅰ ⅣⅢ リガンド HER3 など Ⅱ HER2 Pertuzumab Trastuzumab 他のHER2ファミリー TK TK P TK P Gefitinib Eriotinib SrC TK Lapatinib GRB2 PIP3 P13K P JAK SOS PDK1 PTEN Ras Akt Rac Raf MDM2 BAD mtor GSK-3 eif4e bcl-2 アポトーシス 細胞の生存 MyC MEK JNK FoxO3 p53 MEKK Cyclin D1 ErK p70 S6K mrna 翻訳 転写 細胞回転 タンパク合成 STAT 増殖 核 病理と臨床 2011;29増 262 265

c-kit c-kit KRAS

病理コンパニオン診断の過程 診断/検査の分類 IHC検査 バイオマーカ プレアナリシス ーの種別 タンパク発現 検体採取 アナリシス ポストアナリシス IHC法 定性的評価 半定量的評価 計数的評価 FISH法 Bright-field ISH法 計数的評価 Direct sequence法 Scorpion-ARMS法 PNA-LNA PCR clamp法 PCR-Invader法 Cycleave PCR法 PCR-γSSO法 各判定基準によ る評価 保存 固定 ISH検査 遺伝子増幅 相互転座 体細胞遺伝子検査 遺伝子変異 ホルマリン固 定/切り出し パラフィン ブロック パラフィン切片 IHC Immunohistochemistry FISH, Fluorescence in situ hybridization

乳癌のコンパニオン診断 Estrogen receptor (ER) Immunohistochemistry (IHC) Progesterone receptor (PgR) Immunohistochemistry (IHC) HER2: Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 HER2 タンパク過剰発現 Immunohistochemistry (IHC) HER2 遺伝子増幅 Fluorescence in situ hybridization (FISH) Chromogenic in situ hybridization (CISH)

HER2検査フローチャート 乳癌組織 FISH法を最初に IHC法を最初に FISH法 IHC法 + 3+ ハーセプチン 適応あり ハーセプチン 適応にならない ハーセプチン 適応あり 2+ 1+/0 ハーセプチン 適応にならない HER2検査ガイド第３版 トラスツズマブ病理部会作成 2009年9月

FISH/CISH FISH HER2 DNA HER2 FISH pharmdx 1 170 103 14~18 16~20 2 32 27 RT 20 95 10 80 RT 10 37 10 :72 5 HER2 spectrum orange Texas red CEP17 spectrum green FITC HER2 FISH 107 over night 36 95~98 20 37 10 :85 5 rhodamine fluorescein CISH Dual ISH HER2

FISH 法の判定基準 判定 陽性 equivocal 陰性 内 容 HER2/CEP17比 2.2 または, HER2遺伝子コピー数の平均値が核１個あたり ６ HER2/CEP17比 1.8 2.2 または, HER2遺伝子コピー数の平均値が核１個あたり４ ６ HER2/CEP17比 1.8 または, HER2遺伝子コピー数の平均値が核１個あたり ４ 日本では 内の判定を用いるような体外診断用医薬品は承認されていない HER2検査ガイド第３版 トラスツズマブ病理部会作成 2009年9月

HER2 FISH p 17 cen 17 cen HER2 HER2 q HER2/17cen(CEP17) 1.0 HER2/17cen(CEP17) 5.0 2011;29 266 271 2

HER 2 (2005 2013 7 Score 3 Score 0 FISH Score 2 20% 2% 10% 14% Score 1 40% 13% 381 2005 2011 3 262 15% 41% 17% 8% 1% 21% 2011 4 2013 7 119 15% 40% 4% 16% 4% 22% Score 0 Score 1 Score 2 FISH Score 2 FISH Score 2 FISH Score 3 Score 2 25.9% 24.4% FISH 12.8% 20.8%

American Society of Clinical Oncology-College of American Pathologists Guideline Recommendations for Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 Testing in Breast Cancer American Society of Clinical Oncology-College of American Pathologists Guideline Recommendations for Immunohistochemical Testing of Estrogen and Progesterone Receptors in Breast Cancer

American Society of Clinical Oncology-College of American Pathologists Guideline Recommendations for Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 Testing in Breast Cancer American Society of Clinical Oncology-College of American Pathologists Guideline Recommendations for Immunohistochemical Testing of Estrogen and Progesterone Receptors in Breast Cancer

消化管のコンパニオン診断 胃 癌 HER2 タンパクの過剰発現 遺伝子の増幅 胃腸管間質腫瘍 GIST Gastrointestinal Stromal Tumor) c-kit タンパク 遺伝子変異 PDGFRA遺伝子変異 大腸癌 EGFRタンパクの発現 KRAS遺伝子変異 PDGFRA platelet-derived growth factor receptor, alpha

ToGA Score 3 373 19 354 94.9% Score 2 388 176 212 11.8% 11.4% 3,280 FISH 23.0 54.6% Score 1 610 18.6% 58.2% Score 0 1,909 514 96 1815 94 15.7% 4.9% Lancet 2010;376:687-697

2010 年 11 月 2013 年 8 月 3 1 Score 2 胃癌症例 37 例 ( 男性 25 例, 女性 12 例 ) 生検 :32 例 手術 : 5 例 Score 0, Score 1) 33 Score 3 Score 2 Score 1 Score 0 3 1 13 20 8.1% 2.7% 35.1% 62.5%

胃癌における使用抗体による反応性の違い 症例 107例 (手術検体 89例 生検 18例 SV2-61γ 86 3 5 13 Score 3 + Score 2/FISH陽性 14.0 HercepTest 62 13 12 20 Score 3 + Score 2/FISH陽性 29.9 4B5 49 21 16 21 Score 3 + Score 2/FISH陽性 22.4 Score 0 Score 1 Score 2 Score 3 癌と化学療法 2013 40 755 759

10 648648 1. HER2

GIST(胃腸管間質腫瘍) のコンパニオン診断 c-kit CD117 免疫組織化学 c-kit 遺伝子変異 ダイレクトシーケンス法 PDGFRA遺伝子変異 PDGFRA: platelet- derived growth factor receptorα gene (血小板由来増殖因子受容体α遺伝子

消化管の間葉系腫瘍 胃手術 胃生検 十二指腸 小 腸 GIST 平滑筋腫 広義の微小GIST 11 2 10 1 1 2 3 神経鞘腫 合計 23 2 2 3 大腸 合計 0 2 17 5 10 1 36 1 3 2008年10月 2013年8月

GIST HE SMA c-kit S100 Desmin CD34

GIST( ) HE GIST KIT CD34 GIST c-kit, PDGFRA Desmin S100 protein c-kit, PDGFRA GIST GIST

大腸癌のコンパニオン診断 EGFR タンパクの発現 免疫組織化学 IHC) KRAS 遺伝子変異 PCR-rSSO法 ダイレクトシーケンス法 ARMS(amplification refractory mutation system)-pcr法 EGFR 保険点数 690点 KRAS 保険点数 2,100点

抗EGFR抗体の投与を考慮している 治癒切除不能な進行 再発の大腸癌 EGFR免疫組織化学 KRAS 遺伝子検査 ダイレクトシークエンス法 Allele-specific PCR assay法 KRAS 変異型 KRAS 野生型 検査 検出 不能 投与対象 わずかでも 腫瘍細胞の細胞膜 上に陽性シグナル あり 全ての 腫瘍細胞の細胞膜 上に陽性シグナル なし 投与対象 (病理と臨床 2012 30 1328 1333 図２ 一部改変)

EGFR IHC EGFR KRAS 6 60% 35% 6% 7% 53 31 5 KRAS 83 93% 変異型 G12D * G12V G13D * G12C G12A G12S 延べ数 11 9 6 3 2 1 34% 28% 19% 9% 6% 3% :

肺癌のコンパニオン診断 Epidermal growth factor receptor EGFR ゲフェチニブ イレッサ エルロチニブ タルセバ Anaplastic large cell lymphoma kinase (ALK) クリゾチニブ ザーコリ 検査方法 免疫組織化学 野生型全長ALK遺伝子の発現腫瘍 弱陽性 陽性 大細胞神経内分泌癌 小細胞癌, 横紋筋肉腫 Fluorescent in situ hybridization (FISH)

再発 転移に対する治療方針 再発 転移に対する治療 扁平上皮癌 NCCNガイドライン 腺癌 大細胞癌 NSCLC, NOS ALK検査 EGFR検査 ファーストライン 標準治療 EGFR阻害剤 ファーストライン 標準治療 ALK阻害剤 NSCLC, NOS non-small cell lung cancer, not otherwise specified 病理と臨床 2012;30:1315 1320 図1 改変

EGFR 遺伝子検査に用いる検体 1 腫瘍部新鮮凍結材料 2 生検組織のパラフィン切片 3 手術検体のパラフィン切片 4 気管支洗浄液 胸水 心嚢液 5 経気管支擦過細胞 穿刺吸引細胞 リンパ節穿刺吸引 細胞 喀痰 6 血液 研究段階 検体の選択 提出医の判断 検査方法(検出系)の選択 PNA-LNA PCR Clamp法 腫瘍細胞の存在確認 提出医師の責任

EGFR 2008 2012 2013 1 2008 2013 32.1 35.4 37.0 0 30 60 90 120 150 130 2008 2012 2013 42.3% (11/26) 10% 58.3% ( 7/12) 27.3% (3/11) ( 15.4% ( 2/13) 25.0% (2/ 8) ( 38.1 (16/42) 27.8% (5/18)