なお本試験は農林水産省の国庫補助である受精卵普及定着化事業 ( 技術高度化 ) による 10 県 ( 青森秋田宮城神奈川静岡奈良宮崎高知山口大分 ) の共同試験で実施した当所の 3 カ年にわたる成績である材料及び方法 1. 受卵牛所内で飼養している黒毛和種経産牛 13 頭未経

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としみにいだ
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1 神畜研研報 No 技術高度化に関する試験 (1) 牛のにおける hcg 投与が受胎率に与える影響坂上信忠秋山清田中嘉州橋村慎二仲澤慶紀岸井誠男 Effects of human Chorionic Gonadotropin (hcg) Administration on the Pregnancy Rates in bovine Embryo Transfer Recipient. Nobutada SAKAGAMI, Kiyoshi AKIYAMA, Yoshikuni TANAKA, Shinji HASHIMURA, Yoshinori NAKAZAWA and Yoshio KISHII 牛は家畜の改良速度を速める有効な技術の 1 つであるの普及促進のためには一層の受胎率向上が望まれるそこで受胎率を向上させる方法として受卵牛への胎盤性性腺刺激ホルモン (hcg) の投与について検討した発情日を day0 として前々日 (day5) に hcg1,500 単位を筋肉内投与した区を DAY5 区移植前日 (day6) に投与した区を DAY6 区移植日に投与した区を DAY7 区発情後 14 日目に投与した区を DAY14 区 hcg を投与しない無投与区を対照区とした移植後の受胎率は DAY5 区で 60.0 % DAY6 区で 54.5% DAY7 区で 70.0% DAY14 区で 38.1% 対照区で 41.9% であったまた血中プロジェステロン濃度は DAY6 区で発情後 14 日目において対照区に比べて有意に高くなったこのことから hcg は移植前に投与することで血中プロジェステロン濃度を高め受胎率を向上させる可能性があることが示唆されたキーワード : 牛受胎率 hcg プロジェステロン畜産業における育種改良を進める手法の 1 つとして技術が普及してきている日本におけるの実施頭数は昭和 45 年度に実施状況調査が行われて以来年々増加してきたしかし近年では受精卵の受胎率もここ数年 40~ 50% 程度で停滞しており移植の実施頭数も全国的に伸び悩んでいるこれは本県においても同様であり堂地 1) の示した経営的に必要な受胎率 50 ~60% 及び鈴木 2) の示した大幅な普及と定着化が期待できるとする 60~70% の受胎率には達していないこの受胎率の低迷が県内におけるが農家段階で普及しない最大の原因と考えられより一層の受胎率の向上が望まれる血中プロジェステロン濃度と受胎に関しては乳牛 3) や黒毛和種牛 4)5) においていくつか報告されており Nishigai et al. 4)5) は凍結受精卵の移植前日や移植日の血中プロジェステロン濃度が高くエストロジェン濃度が低い受卵牛において受胎率が高いと報告しているこれは血中プロジェステロン濃度が低い牛は負のフィードバック作用が不十分でLHパルスが抑制されず黄体と共存する卵胞が発育してエストロジェンが活発に分泌されていることにより受胎率が低いのではないかと考えられている 6) このようなことから人工授精やにおいて受胎率を向上させるためにプロジェステロン 7)8) 胎盤性性腺刺激ホルモン (hcg) 9)10) 11)12) GnRH 類縁物質 13)14) を移植前後に投与することが検討されているなかでもhCGは黄体ランクの低い牛でも黄体機能を向上させ受胎の可能性を高めることから受卵牛頭数の増加が図られ今後の技術の普及に貢献する可能性があるしかしその 15) 投与時期は移植前々日 ( 発情日をday0として 16) 17) day5) 移植前日移植時 day15 18) と様々な報告があるがもっとも効果的な投与時期を明確に示している報告は少ないそこで本試験では胎盤性性腺刺激ホルモン ( 以下 hcg) の投与時期と受胎率との関係について検討を行った - 1 -

2 なお本試験は農林水産省の国庫補助である受精卵普及定着化事業 ( 技術高度化 ) による 10 県 ( 青森秋田宮城神奈川静岡奈良宮崎高知山口大分 ) の共同試験で実施した当所の 3 カ年にわたる成績である材料及び方法 1. 受卵牛所内で飼養している黒毛和種経産牛 13 頭未経産牛 3 頭ホルスタイン種経産牛 15 頭未経産牛 2 頭と所外で飼養されているホルスタイン経産牛 60 頭未経産牛 2 頭の合計 93 頭を受卵牛とした産歴は 0~7 産で平均年齢 4.2 歳平均産次は 1.9 産であった受卵牛は品種年齢産歴分娩後日数ともに各区にほぼ偏りがないように配置した受卵牛の発情確認は所内飼養の牛ではスタンディング発情等発情兆候で所外のものは発情兆候や排血を示した牛を技術者が直腸検査により排卵確認して供試した 2. 受精卵の採取方法移植した受精卵は全て所内で採取したものでその方法としてまず黄体ホルモン製剤 (CIDR) 挿入後 10 日目にFSH 製剤 ( アントリン : 川崎三鷹製薬 ) により過剰排卵を行い ( 総量 20AUを3 日間漸減投与 ;5/5,3/3,2/2) FSH 投与開始後 48 時間目に PGF2αアナログとしてクロプロステノール ( エストラメイト TSA : 武田シェリングプラウアニマルヘルス )750μgを頸部筋肉内に投与したその後 14 日目夕方及び15 日目朝に人工授精した後 21 日目に非外科的に採取した後期桑実胚から拡張胚盤胞の受精卵を移植凍結に用いた 3. 供試した受精卵受精卵の品種別では黒毛和種が89 個ホルスタイン種が4 個であった新鮮卵及び凍結卵別では新鮮卵 10 個凍結卵 83 個であり凍結卵はダイレクトトランスファー法で凍結したものが59 個ガラス化保存法によるものが24 個であった品質ランクは家畜人工授精テキスト家畜受精 19) 卵移植編を参考として判定したAランクが7 個 A' ランクが13 個 Bランクが68 個 B' ランクが5 個であった発育ステージは後期桑実胚が4 個初期胚盤胞が18 個胚盤胞が69 個拡張胚盤胞が2 個であった 4. 移植技術者移植技術者は7 名で所内の技術者が4 名所外の技術者が3 名であった 5. 試験方法図 1に試験区分を示したは発情日をday0としてday7 又はday8に行い DAY5 区では hcg( 動物専用プペローゲン1,500 単位 : 三共エール薬品 ) を移植前々日 (day5) に DAY6 区では移植前日 (day6) に DAY7 区は移植日 (day7or day8) に DAY14 区はday14に頸部筋肉内に投与した対照区は hcgを含む一切のホルモン製剤を投与しない無投与としたなお試験は3カ年にわたり平成年度にDAY6 区 DAY14 区対照区平成 15 年度にDAY5 区 DAY7 区対照区を行った DAY5 区発情日 day0 day5 day7 day21 hcg 投与 day0 day6 day7 day21 DAY6 区 hcg 投与 day0 day7 day21 DAY7 区図 1 hcg 投与 day0 day7 day14 day21 DAY14 区対照区試験区分 hcg 投与 day0 day5 day6 day7 day14 day21 6. 調査項目及び方法発情時及び移植時の調査を家畜共済における臨床病理検査要領 20) を参考に調査し表 1 に示した経産牛のみ最終分娩日から移植までの日数を調査し各受卵牛とも発情所見その時の排卵所見を記録し移植時の卵巣所見として黄体の大きさは移植日に長径が 20mm 以上を 1 ( 大 ) 10mm 以上 20mm 未満を 2( 中 ) 10mm 未満を 3( 小 ) とし弾力性については A( 弾力有 ) B( 若干硬 ) C( 硬い ) の 3 段階としたさらに移植時における共存卵胞の有無子宮の状態形状収縮弾力肥厚とその他所見として移植の難易度移植時の出血の有無等を調査した - 2 -

3 表 1 調査項目と基準最終分娩日から移植までの日数経産牛のみ発情所見スタンディングの有無その他所見排卵所見移植日排血日排卵確認日及びその所見発情から移植までの日数試験区では投薬日黄体所見大きさについて 1( 長径 20mm 以上大 ) 2( 長径 10mm 以上 20mm 未満中 ) 3(10mm 未満小 ) の3 段階弾力性について A( 弾力有 ) B( 若干硬 ) C( 硬い ) の3 段階その他所見について突起が明瞭等共存卵胞有無大きさ位置等子宮所見太さについて移植者の指単位 (0.5 指単位 ) 形状について円半円楕円偏平で記録収縮性弾力性について - ± の5 段階肥厚について - ± の5 段階移植時所見難易度を難易で記録出血を有無で記録 7. 副黄体の形成状況平成 15 年度に行った DAY5 区,DAY7 区の所内の供試牛 9 頭については移植後 14 日目までの間に副黄体の形成状況を調査した 8. 妊娠診断妊娠鑑定は発情後約 60 日目にフィールドでは胎膜触診法で当所では超音波診断装置 ( 日立メディコ社製 ECHOPALⅡ;EUB-405B, リニア探触子 I 型 7.5MHz;EUP-033J) により行った 9. 血液の採取及び処理方法 hcg 投与による受卵牛の血中プロジェステロン (P4) 濃度及び血中エストラジオール 17β(E2) 濃度の変化を調べるため経時的に採血を行った血液は頸静脈からヘパリン入り真空採血管にて採血した採血した静脈血は直ちに破砕氷中のクーラーボックスに保冷し速やかに 0 3,000 回転 60 分の条件で冷却遠心し血漿を -40 で凍結保存した凍結保存した血漿は P4 については二抗体法酵素免疫測定法 21) により E2 濃度については RIA 法 22) により測定を行った 10. 統計処理統計処理はコンピューターソフト SPSS 23) を用い受胎性については Pearson のカイ二乗検定もしくは Fisher の直接確率計算法をまた血中ステロイドホルモン濃度の比較は一元配置の分散分析後に Tukey 法により多重検定を行い危険率 5%(P<0.05) 未満を有意差ありと判定した結果 1. 受胎成績と受卵牛の状況表 2 図 2に移植後の受胎成績を示したそれぞれの受胎率は DAY5 区が60.0% DAY6 区が 54.5% DAY7 区が70.0% DAY14 区が38.1% 対照区が41.9% となっており各区に有意差はないが DAY5 区 DAY6 区 DAY7 区がDAY14 区や対照区と比較して受胎率は高い数値であった試験区 hcg 投与受胎状況 (%) DAY5 区移植前々日 6 / 10 注 (60.0) DAY6 区移植前日 12 / 22 (54.5) DAY7 区移植日 7 / 10 (70.0) DAY14 区発情日から14 日目 8 / 21 (38.1) 対照区無投与 13 / 31 (41.9) 注 1: 受胎頭数 / 移植頭数 ( 受胎率 :%) 受胎率 (%) 図試験区分別受胎率 DAY5 区 DAY6 区 DAY7 区 DAY14 区対照区試験区表 3 に受卵牛移植前の黄体の弾力性及び大きさ別の受胎状況を示した特に黄体の弾力性や大きさによる受胎率の差は見られなかった - 3 -

4 表 3 黄体の弾力性及び大きさ別受胎数表 4 hcg 投与区における 1cm 以上の卵胞と副黄体の形成別受胎状況試験区 A B C 注 1 DAY5 区 3/5 7/15 2/2 5/9 6/12 1/1 DAY6 区 2/4 6/15 0/1 3/7 5/11 0/3 DAY7 区 0/0 5/9 0/0 3/4 1/3 1/2 DAY14 区 1/1 5/8 1/1 1/2 4/6 2/2 対照区 4/5 7/21 2/5 5/14 7/15 1/2 注 1: 受胎頭数 / 該当頭数注 2:A( 弾力有 ) B( やや硬 ) C( 硬い ) 注 3:1( 大 ) 2( 中 ) 3( 小 ) 注 2 注 3 表 4 に平成 15 年度に行った DAY5 区及び DAY7 区の所内で移植した 9 頭の投与時における 1cm 以上の卵胞の有無と発情後 14 日までの副黄体の形成別の受胎状況を示した 9 頭中 4 頭に副黄体の形成が見られ 1cm 以下の卵胞も hcg 投与後に排卵し副黄体が形成されていたが副黄体の有無による受胎率の差は見られなかった共存 1cm 以上の卵胞の有無副黄体形成注 1有無計有 1/2 (50.0) 1/2 (50.0) 2/4 (50.0) 無 2/2 (100.0) 2/3 (66.7) 4/5 (80.0) 全体 3/4 (75.0) 3/5 (60.0) 6/9 (66.7) 注 1: 受胎頭数 / 移植頭数 ( 受胎率 :%) 2. 血中 P4 濃度の測定結果表 5 図 3 に受卵牛の血中 P4 濃度の推移を示した DAY6 区で 14 日目の血中 P4 濃度が対照区と比べて有意に上昇した表 6 図 4 に受卵牛の血中 E2 濃度の推移を示した各試験区間における有意差は認めれらなかったが DAY5 区で 14 日目に対照区と比較して低い傾向が認められた (p=0.053) 表 5 hcg 投与による血中 P4 濃度の推移 (H14~15) 試験区例数 day5 day6 day7 day8 day14 day15 day21 DAY5 区 ± ± ± ± ± 2.17ab 7.83 ± 2.21 DAY6 区 ± ± ± 0.87 b 6.79 ± 9.31 DAY7 区 ± ± ± ± ± 3.53ab 6.90 ± 1.49 DAY14 区 ± ± ± 1.42 a 6.32 ± ± 2.78 注 3 対照区 3~ ± ± ± ± ± 0.72 a 6.34 ± ± 3.03 注 1: 平均値 ± 標準偏差 ( 単位 :ng/ml) 注 2: 同列異符号間に有意差有り a-b(p<0.05) 注 3: 対照区の例数は n=3 が day5, day8, day15 で n=6 が day6, day7, day14, day21 である 14 DAY5 区血中 P4 濃度 (ng/ml) DAY5 区 DAY6 区 DAY7 区 DAY14 区対照区発情日からの経過日数測定日図 3 hcg 投与による血中 P4 濃度の推移は対照区 DAY14 区と比較して有意差あり (p<0.05) - 4 -

5 表 6 hcg 投与による血中 E2 濃度の推移 (H14~15) 試験区例数 day5 day6 day7 day8 day14 day15 day21 DAY5 区 ± ± ± ± ± ± 0.41 DAY6 区 ± ± ± ± ± 5.68 DAY7 区 ± ± ± ± ± ± 1.23 DAY14 区 ± ± ± ± ± 4.39 注 3 対照区 3~ ± ± ± ± ± ± ± 5.23 注 1: 平均値 ± 標準偏差 ( 単位 :pg/ml) 注 2: 同列異符号間の危険率は5.3%(a-b:p=0.053) 注 3: 対照区の例数は n=3がday5, day8, day14, day15で n=6がday6, day7, day21である DAY5 血中 E2 濃度 (pg/ml) DAY5 DAY6 DAY7 DAY14 Cont 2 図発情日からの経過日数 P hcg 投与による血中 E2 濃度の推移考察本試験では hcgを移植前々日 (DAY5 区 ) 前日 (DAY6 区 ) 移植日 (DAY7 区 ) に投与したところ有意の差は認められていないがそれぞれの受胎率は 60.0% 54.5% 70.0% と対照区 (41.9%) より高い受胎率を得られた斉藤ら 9) は発情後 5 日目で59.3% Nishigai et al. 16) は6 日目投与で67.5% といずれも対照区より高い受胎率であったと報告しており本研究はこれらの既報と同様の結果であった梅木ら 24) は hcgを5 日目投与した区及び移植時に投与した区は有意に対照区と比較して受胎率が向上しており ( 対照区 39.8%:n=108 に対してそれぞれ53.5%, 55.4%:n= 99, 112) これらのことからも5~7 日目のhCG 投与は受胎率向上効果があると示唆された Price and Webb 25) は発情日から4~7 日目及び14~18 日目にhCGを投与することで黄体の反応がよく効果的であると報告しているが本試験では DAY14 区の受胎率は対照区と同程度の受胎率であった 14 日目の投与については Macmillan et al. 12) がGnRH 類縁物質を投与することで共存している卵胞の排卵を促し 10~13% 受胎率が向上したとしているしかし逆に Rajamahendran and Sianangama 26) は人工授精において日目に hcg を投与したところそれぞれの受胎率は 50% 78% 44% で 14 日目投与の効果は見られず 7 日目投与で副黄体が形成されることで早期胚死滅の発生を抑えると報告している 14 日目の投与効果としてはその時期に存在する直径 8mm 以上の卵胞の排卵を促し E2 濃度を低下させることで受胎率を向上させると考えられる本試験では DAY14 区の投与時に卵胞を確認していないので推論であるが投与翌日の E2 の低下が見られなかったことから 14 日目に hcg に反応する卵胞がない牛が多かったのではないかと考えられたもう 1 つの本試験の目的として受卵牛頭数の増加をねらう効果として黄体所見でランクの低い牛でも hcg 投与効果が認められるか検討したが黄体所見別の受胎率では各試験区間で差は見られなかった平泉ら 27) は移植時に黄体の小さい牛でも hcg の投与で受胎率が有意に上昇したと報告しているが本試験では同様の結果は得られなかった副黄体の形成による影響については平成 15 年度に試験を行った当所内の 9 頭でのみその形成状況を調査したが特に副黄体の有無による受胎率の差は見られなかった Price and Webb 25) によると hcg は発情 4~7 日の卵胞顆粒細胞にある - 5 -

6 LH レセプターに作用し排卵を誘発して新たな黄体 ( 副黄体 ) を形成するとしている Santos-Valadez et al. 18) は外科的に移植した未経産牛に hcg5,000 単位を投与した区で副黄体と血中 P4 濃度を調べているが対照区と比較して投与区では血中 P4 濃度の上昇は認められるが投与区内では副黄体があってもなくても血中 P4 濃度に差はないと報告しているしかし Nishigai et al. 15) は hcg 投与後に既存黄体が発育し副黄体が形成されその両方の効果で血中 P4 濃度が上昇したと報告しており血中 P4 濃度が上昇するのは副黄体が形成されることによってなのか既存黄体への LH 様の作用によってなのかは明確ではない本試験では採血頭数が少ないため副黄体の有無別に血中 P4 濃度を調査できなかった今後さらに検討が必要と考えられる hcg 投与後の血中 P4 濃度をみると DAY5 6 7 区において 14 日目の血中 P4 濃度の値が対照区と比較して高い数字を示した Nishigai et al. 15) も発情後 5 日目に hcg1,500 単位を投与することにより黄体機能の増強と血中 P4 濃度の上昇及び E2 濃度の低下を認め受胎率向上に対する効果を報告しているまた田中ら 10) も人工授精において受胎率向上のために人工授精後 5 日の卵巣所見で黄体形成不全の症例に対し hcg 1,500 ~3,000 単位の筋肉内投与を施し 12 日目の血中 P4 濃度の明らかな上昇と受胎率の改善を認めているこれらのことからも hcg を黄体初期 (day5 ~7) に投与することで既存黄体の機能を増強し共存している卵胞が排卵して副黄体を形成しこれが 5 日程たって機能し始め双方の効果で血中 P4 濃度が上昇し受胎率が向上したのではないかと考えられたさらに血中 P4 だけでなく E2 濃度も受胎に対する影響はあると Mann et al. 13) は報告しており人工授精後 12 日目の GnRH 投与により受胎牛において E2 の有意な低下があり受胎率向上に影響を与えたとしている本試験においても 14 日目の E2 濃度は hcg を投与した全ての区において対照区より低い数値となっていたが有意差は認められず E2 濃度と受胎との関連については不明であった Nishigai et al. 4)5) も hcg 投与翌日から 3 日目までの血中 E2 濃度の下降を認めているが本試験では全ての試験区において投与後の血中 E2 の下降効果は認められずこれらの報告とは異なる結果であった受精卵の致死率は発情日から 8~16 日目の間で 30% に及ぶと言われ 28) この前に hcg を投与し黄体機能を増強させることが受胎率の向上につながると考えられる本試験では DAY5 6 7 区で血中 P4 濃度の 14 日目の上昇が認められ hcg を移植 0~2 日前に投与することで副黄体の形成もしくは既存黄体への LH 様の効果により 14 日目の P4 濃度の上昇がおこり受胎と関係したことが示唆されたこれは母胎が胚を認識する 14 日目前後に血中 P4 濃度が高く推移することで子宮環境が整えられたためと考えられる以上のことから受卵牛に対する発情後日目の hcg の投与は発情後 14 日目の血中 P4 濃度を上昇させ受胎率を向上させる可能性があることが示唆された特に移植時における投与でも移植前々日及び前日と同程度の効果が期待されることから普及性が高い手法であると考えられたしかし hcg は分子量が大きいため抗ホルモン抗体の産生により効果が減ずることがあるとされており同一牛への反復投与には注意が必要と思われる謝辞本試験においてフィールド試験にご協力頂いた有限会社川口動物病院の川口晃弘先生及びプロジェステロンの測定に際しご協力をいただいた独立行政法人家畜改良センター技術第一課の米内美晴課長ならびに同課の皆様独立行政法人農業技術研究機構東北農業研究センター畜産草地部育種繁殖研究室竹之内直樹室長ならびに同研究室の皆様エストロジェン濃度の測定に際しご協力いただいた岩手大学農学部獣医学科臨床獣医学講座獣医臨床繁殖学研究室大澤健司先生ならびに同研究室の皆様に対して深く感謝の意を表しますまた供試牛の適切な管理をして頂いた神奈川県畜産研究所畜産工学部大家畜グループの技能技師及び技能員の方々にも重ねて感謝の意を表します引用文献 1) 堂地修. 胚移植の受胎率を考える.LIA J NEWS,69: ) 鈴木修. 和子牛生産におけるET 技術の利用と今後の方向. 臨床獣医,14: )Bulman DC, Lamming GE. Milk progesterone levels in relation to conception, repeat breeding and factors influencing acyclicity in dairy cows. J. Reprod. Fertil, 54: )Nishigai M, Kamomae H, Tanaka T, Kaneda Y. Pregnancy rate and blood progesterone concentration on the previous day and the day of frozen embryo transfer in parous recipient cows of Japanese Black. J. Reprod. Dev, 44:

7 5)Nishigai M, Kamomae H, Tanaka T, Kaneda Y. The relationship of blood progesterone and estrogen concentrations on the day before and the day of frozen-thawed embryo transfer to pregnancy rate in Japanese black beef cattle. J. Reprod. Dev, 46: ) 金田義宏. 牛の発情周期における卵胞波. 家畜診療,46: )Robinson NA, Leslie KE, Walton JS. Effect of treatment with progesterone on pregnancy rate and plasma concentrations of progesterone in Holstein cows. J. Dairy. Sci, 72: )Tribulo R, Nigro M, Burry E, Caccia M, Tribuli H, Bo GA. Pregnancy rates in recipients receiving CIDR-B devices immediately following embryo transfer. Theriogenology, 47: (Abstract) 9) 斉藤康倫長谷川隆清野宏星欽彌. 乳牛の人工授精後 5 日目の黄体形成とhCG 剤治療について. 家畜診療,342: ) 田中秀和近藤寧子矢光潤吉浦尚子斉藤康倫見学一宏. 乳牛の黄体形成不全に対する人工授精後のhCG 剤投与量の検討. 家畜診療, 408: ) Wiltbank JN, Rothlisberger JA, Zimmerman DR. Effect of human chorionic gonadotropin on maintenance of the corpus luteum and embryonic survival in the cow. J. Anim. Sci, 20: ) Macmillan KL, Taufa VK, Day AM. Effects of an agonist of gonadotrophin releasing hormone(buserelin) in cattle.Ⅲ.pregnancy rates after a post-insemination injection during metoestrus or estrus. Anim. Reprod. Sci, 11: )Mann GE, Lamming GE, Fray MD. Plasma oestradiol and progesterone during early pregnancy in the cow and the effects of treatment with buserelin. Anim. Reprod. Sci, 37: )Peters AR, Martinez TA,Cook AJC. A meta-analysis of studies of the effect of GnRH days after insemination on pregnancy rates in cattle. Theriogenology, 54: )Nishigai M, Takamura A, Kamomae H, Tanaka T, Kaneda Y. The effect of human chorionic gonadotropin on the development and function of bovine corpus luteum. J. Reprod. Dev, 47: ) Nishigai M, Kamomae H, Tanaka T, Kaneda Y. Improvement of pregnancy rate in Japanese black cows by administration of hcg to recipients of transferred frozen-thawed embryos. Theriogenology, 58: )Loony CR, Oden AJ, Massey JM, Johnson CA, Godke RA. Pregnancy rates following hcg adm inis trat ion at the ti me of transfer in embryo-recipient cattle. Theriogenology, 21: (Abstract) 18)Santos-Valadez S, Seidel GE Jr, Elsden RP. Effect of hcg on the pregnancy rates in bovine embryo transfer recipient. Theriogenology, 17: (Abst) 19) 社団法人日本家畜人工授精師協会編. 家畜人工授精講習会テキスト ( 家畜編 ) 社団法人日本家畜人工授精師協会. 東京 ) 農林水産省経済局編. 家畜共済における臨床病理検査要領. 平成 9 年改定全国農業共済協会. 東京 ) 竹之内直樹居在家義昭大島一修島田和宏高橋政義. 牛血漿中プロジェステロンの酵素免疫測定法. 中国農試研報,12: ) 田谷一善渡辺元笹本修司. 125 I 標識ホルモンを用いたプロジェステロンテストステロンおよびエストラジオール17βのラジオイムノアッセイについて. 家畜繁殖誌, 31: )SPSS Software Package. SPSS 11.5J Brief Guide. 11.5J SPSS Inc. Tokyo ) 梅木英伸志村英明藤田達男久々宮公二志賀一穂. 受胎率向上のための前後処置法の検討. 平成 15 年度大分県試験成績報告書, 33: )Price CA. Webb R. Ovarian response to hcg treatment during the oestrous cycle in heifers. J. Reprod. Fertil, 86: )Rajamahendran R, Sianangama PC. Effect of human chorionic gonadotrophin on dominant follicles in cows: formation of accessory corpora lutea, progesterone production and pregnancy rates. J. Reprod. Fertil. 95: ) 平泉慎吾千田惣浩高田直和坂上信忠三宅晃次億正樹田頭明子山崎慎一郎梅木英伸谷口岳的場理子竹之内直樹大澤健司. ウシ胚移植における移植前後のhCGおよび GnRH 投与の効果. 日本畜産学会第 103 回大会講演要旨, : )Diskin MG, Sreenan JM. Fertilization and embryonic mortality rates in beef heifers after artificial insemination. J. Reprod. Fertil. 59:

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材料及び方法 1. 方法発情および発情直後を避けてプロジェステロンとエストロジェン徐放剤 (PRID TEIZO: あすか製薬株式会社 ) を挿入した (0 日目とする ) 4 日目に生理食塩水 ( 大塚生食注 : 大塚製薬株式会社 )50ml を溶媒とした FSH( アントリン R10: 共立製

材料及び方法 1. 方法発情および発情直後を避けてプロジェステロンとエストロジェン徐放剤 (PRID TEIZO: あすか製薬株式会社 ) を挿入した (0 日目とする ) 4 日目に生理食塩水 ( 大塚生食注 : 大塚製薬株式会社 )50ml を溶媒とした FSH( アントリン R10: 共立製 ecg を併用した FSH 皮下 1 回投与による過剰排卵処理の検討第 2 報 ecg 投与時期の検討研究開発第二課倉田佳洋松田浩典西野治朝倉康夫現奈良県家畜保健衛生所現奈良県食肉公社要約黒毛和種への卵胞刺激ホルモン ( 以下 FSH とする ) 皮下 1 回投与による過剰排卵成績の向上のために妊馬血清性性腺刺激ホルモン ( 以下 ecg とする ) を併用する際の投与時期の検討を目的として