Milk Science Vol. 60, No 原著論文 MRS 寒天培地と変法 LBS 寒天培地における乳酸菌の選択的単離能の比較木下英樹井本瞬須田義人石田光晴 ( 宮城大学食産業学部 ) Comparison of selectivity of MRS agar and

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たつぞうさどひら
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1 Milk Science Vol. 60, No 原著論文 MRS 寒天培地と変法 LBS 寒天培地における乳酸菌の選択的単離能の比較木下英樹井本瞬須田義人石田光晴 ( 宮城大学食産業学部 ) Comparison of selectivity of MRS agar and modiˆed LBS agar for isolation of lactobacilli Hideki Kinoshita, Shun Imoto, Yoshihito Suda, Mitsuharu Ishida (Department of Food Management, School of Food, Agricultural and Environmental Sciences, Miyagi University, Taihaku-ku, Sendai, Miyagi ) Abstract Members of the genus Lactobacillus are good candidates for probiotics. Methods are needed to select for these microorganisms. In this study, we isolated lactobacilli using two selective media, MRS agar and modiˆed LBS (mlbs) agar; and compared their selectivity for lactobacilli. The detection rate for lactobacilli was dišerent comparing MRS agar and mlbs agar, 59.4 and 75.0, respectively. A growth test showed Lb. plantarum, Lb. coryniformis, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. brevis, Lb. fermentum, Lb. alimentarius, Lb. paracasei and Lb. casei strains grew on mlbs agar; whereas the growth oflb. sakei was slight andno growth forlb. curvatus and Lb. rossiae. All strains isolated using mlbs agar could grow on MRS agar. The results suggest selectivity of mlbs agar was attributed to its acidity. 緒プロバイオティクスは, アンチバイオティクス ( 抗生物質 ) の対義語として作られた用語であり,1989 年, Fuller によって, 腸内菌叢のバランスを改善することにより宿主動物に有益に働く生菌添加物と定義された 1) 現在, プロバイオティクスは,WHO/FAO により適正量を摂取することにより宿主の健康に有益な作用をもたらす生きた微生物と定義されている 2) Lactobacillus 属乳酸菌は, プロバイオティクスの代表的な菌であり, 整腸作用 3), 血中コレステロール低減作用 4), 免疫賦活化作用 5) および抗腫瘍作用 6) など様々な生理効果が知られている我が国で市販されている機能性ヨーグルトには, ブルガリア菌 (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ) およびサーモフィルス菌 (Streptococcus thermophilus) 以外に,Lb. acidophilus グ連絡者木下英樹 ( きのしたひでき ) 宮城県仙台市太白区旗立 2 丁目 2 1 宮城大学食産業学部 ( 太白キャンパス ) フードビジネス学科 (Tel,Fax , kinoshih@myu.ac.jp) 2011 年 7 月 15 日受付 2011 年 11 月 14 日受理言ループ乳酸菌,Lb. casei, Lb. rhamnosus, Lb. reuteri, Bi- ˆdobacterium longum や B. breve などがプロバイオティクスとして添加され, その一部は特定保健用食品としての認可を得ているまた,Lactobacillus 属を含む乳酸菌は発酵乳, 日本酒, 漬物などを通じて古くから利用されており, このような菌群は GRAS (Generally Recognized As Safe) 7,8) と呼ばれ, 一般に安全と認められている最近では, 植物由来の乳酸菌が注目されるなど, 現在でも有用乳酸菌の単離は数多く行われており, 今後も益々増えてくると予測される MRS 寒天培地 (MRS agar: de Man, Rogosa, and Sharpe agar) は, 代表的な乳酸桿菌 (Lactobacillus 属 ) の選択培地であり, 現在, 多くの研究で使用されているしかしながら, その選択性は低く,Enterococcus 属, Streptococcus 属,Escherichia coli など乳酸桿菌以外の様々な菌がコロニーを形成する 9) 一方, 変法 LBS 寒天培地 (mlbs agar: modiˆed LBS agar) はビフィドバクテリウム属などが小さなコロニーを形成するが, 生育するコロニーのほとんどが Lactobacillus 属である 9) そのため, 乳酸桿菌を効率的に単離する際は, 非常に有用な培地であると言えるしかしながら, 選択性が強すぎるため,Lactobacillus 属も生育できない可能性があると考

2 えられたそこで本研究では,2 種の乳酸桿菌用選択培地を用いて菌を単離し, その選択性を比較検討することを目的とした実験方法. 乳酸菌の単離漬物やキムチなど様々な試料 (Table 1) に滅菌 PBS を加え良く懸濁し, 懸濁液 0.1 ml を MRS 寒天培地および変法 LBS 寒天培地に塗抹し,37 C で 2 日間, 嫌気培養したコロニー形成後, 各プレートからできるだけ形, 色, 大きさの異なるコロニーを 5 つまたは10ずつ釣菌し,MRS broth で培養し,30 グリセロール中に -80 C で保存した MRS 寒天培地は,MRS broth (Difco Laboratories, Detroit, MI, USA) に1.5 寒天 (Unipath Ltd, Basingstoke, Hampshire, UK) を添加し, 作製した (ph 6.5) 変法 LBS 寒天培地 ( 以下 mlbs 寒天培地 modiˆed LBS agar; ph 4.3) は,0.8 (w/v) Lab-lemco powder (Oxoid Ltd, Basingstoke, Hampshire, UK), 0.1M 酢酸ナトリウムおよび3.7 (v/v) 酢酸を LBS 寒天培地 (Becton Dickinson and Co., Sparks, MD, USA) 10) に添加し, 作製した MRS 寒天培地および mlbs 寒天培地の組成は Table 2 に示した. 単離菌の同定保存した菌を MRS 寒天培地で培養し, コロニー形成後,63f (5 CAGGCCTAACACATGCAAGTC 3 ) と 518r (5 ATTACCGCGGCTGCTGG 3 ) のプライマーセットを用い, コロニーダイレクトPCR により16S rdna( 約 450 bp) を増幅した塩基配列解読は,Big- Dye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, CA, USA) を用いたダイターミネーター法によって行ったプライマーは,63f を用い,Applied Biosystems 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, CA, USA) により配列を解析した配列解析後, DNA Data Bank of Japan (DDBJ,Mishima,Japan) の FASTA または BLAST プログラムにより, 相同性解析を行い, 簡易同定を行った. 各寒天培地での乳酸桿菌の生育性 MRS 寒天培地から単離された乳酸菌について, mlbs 寒天培地での生育性を検討した MRS 寒天培地から単離された乳酸菌を MRS broth で一晩培養し, 菌液をLBS 寒天培地に塗抹し,37 C で 2 日間嫌気培養し, その生育の有無を検討した同様に mlbs 寒天培地で単離した菌についても MRS 寒天培地での生育性を検討した第巻結果乳酸桿菌の単離同定結果を Table 1 に示した漬物やキムチなど主に植物由来の16サンプルから計 47 菌株の乳酸桿菌を単離することができたその他, 乳酸桿菌以外の菌も29 菌株単離した MRS 寒天培地からは全部で64 菌株の細菌を単離し, 乳酸桿菌はそのうち38 菌株で, 全体の59.4 だった乳酸桿菌以外では,Leuconostoc sp., Weissella cibaria, Pediococcus pentosaceus, Staphylococcus sp., Pantoea agglomerans, Enterobacter sp., Enterobacter sp./pantoea sp. および Escherichia coli が単離された一方,mLBS 寒天培地では全部で12 菌株を単離し, そのうち 9 菌株が乳酸桿菌と同定された ( 検出率 75 ) 乳酸桿菌以外の3 菌株は,Staphylococcus 属,Pediococcus 属およびEnterobacter 属がそれぞれ1 菌株ずつであったしかしながら,mLBS 寒天培地に生育したStaphylococcus 属,Pediococcus 属の生育性は悪く, 小さなコロニーだった ( データ未記載 ) Table 3には単離した乳酸桿菌を菌種別にまとめた単離された乳酸桿菌で最も多かった菌種は Lb. sakei で 13 菌株, 次いで Lb. plantarum が 5 菌株,Lb. coryniformis および Lb. rhamnosus が 4 菌株ずつとなったそれぞれの全体に対する検出率は27.7,10.6,8.5 および8.5 だったまた生育性試験において,Lb. plantarum, Lb. coryniformis, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. brevis, Lb. fermentum, Lb. alimentarius, Lb. paracasei および Lb. casei は, 単離した全ての菌株が mlbs 寒天培地に良好な生育をみせた ( 生育率 100 ) 一方で,13 菌株と最も多く単離された Lb. sakei は,mLBS 寒天培地では 1 菌株のみしか生育できなかった ( 生育率 8 ) また,Lb. curvatus および Lb. rossiae は,mLBS 寒天培地では全く生育することができなかった ( 生育率 0 ) mlbs 寒天培地で単離した12 菌株は, 全て MRS 寒天培地で良好な生育が見られた ( データ未記載 ) Table 4 には, 乳酸桿菌以外の単離菌をまとめた乳酸桿菌以外の乳酸菌としては,Leuconostoc sp. が 8 菌株, Weissella cibaria およびPediococcus pentosaceus が 1 菌株ずつの計 10 菌株が単離されたしかしながら, それらは MRS 寒天培地では生育性を示したが,mLBS 寒天培地で生育したのは P. pentosaceus,1 菌株のみだったまた, 乳酸菌以外の菌種は,Staphylococcus 属が12 菌株と最も多く検出された次いで,Pantoea agglomerans, Enterobacter sp. および Enterobacter sp./pantoea sp. が 2 菌株ずつ,Escherichia coli が 1 菌株単離されたこれらの中でmLBS 寒天培地に生育性を示した菌株は, Staphylococcus 属が 1 菌株 ( 生育率 8.3 ),Pantoea agglomerans が 1 菌株 ( 生育率 50 ),Enterobacter sp. が

3 第号 Table 1 Identiˆcation of lactobacilli from various materials. Strain number Species identiˆed Homology Isolated Source Isolated culture 1 Lb. gasseri 99.8 Takuan pickle 1 MRS 2 Lb. sakei 98.8 Takuan pickle 1 MRS 3 Lb. sakei 98.1 Takuan pickle 1 MRS 4 Lactobacillus sp Takuan pickle 1 MRS 5 Lb. gasseri 94.8 Takuan pickle 1 MRS 6 Lb. gasseri 99.8 Kimchi 2 MRS 7 Lb. curvatus 99.6 Kimchi 2 MRS 8 Lb. curvatus 99.8 Kimchi 2 MRS 9 Lb. sakei 99.1 Kimchi 2 MRS 10 Lb. paracasei Nozawana pickle 3 MRS 11 Lb. casei 98.3 Nozawana pickle 3 MRS 12 Lactobacillus sp Nozawana pickle 3 MRS 13 Lb. coryniformis 99.1 Kimchi 4 MRS 14 Lb. coryniformis 98.3 Kimchi 4 MRS 15 Lb. sakei 98.3 Kimchi 4 MRS 16 Lb. coryniformis 99.6 Kimchi 4 MRS 17 Lb. brevis 99.3 Kimchi 5 MRS 18 Lb. rhamnosus 99.8 Rice-bran paste 6 MRS 19 Lb. rhamnosus 99.8 Rice-bran paste 6 MRS 20 Lb. rhamnosus Rice-bran paste 6 MRS 21 Lactobacillus sp Rice-bran paste 6 MRS 22 Lb. rhamnosus Rice-bran paste 6 MRS 23 Lb. coryniformis 99.6 Japanese pickle 7 MRS 24 Lb. sakei Rice 8 MRS 25 Lb. sakei 99.0 Kimchi 9 MRS 26 Lb. sakei 99.0 Kimchi 9 MRS 27 Lb. sakei 99.0 Kimchi 9 MRS 28 Lb. sakei Amazake 10 MRS 29 Lb. sakei 99.4 Amazake 10 MRS 30 Lb. sakei 99.6 Amazake 10 MRS 31 Lb. sakei Amazake 10 MRS 32 Lb. plantarum 99.6 Chinese yam pickle 11 MRS 33 Lactobacillus sp Chinese yam pickle 11 MRS 34 Lactobacillus sp Chinese yam pickle 11 MRS 35 Lb. fermentum 99.8 Garbage 12 MRS 36 Lb. fermentum 99.8 Garbage 12 MRS 37 Lb. rossiae 96.6 Ginger pickle 13 MRS 38 Lactobacillus sp Ginger pickle 13 MRS 39 Lb. plantarum 99.8 Japanese pickle 14 mlbs 40 Lb. sakei 98.8 Rice-bran paste 15 mlbs 41 Lb. plantarum 99.6 Rice-bran paste 15 mlbs 42 Lb. brevis 99.6 Rice-bran paste 15 mlbs 43 Lactobacillus sp Leaf mustard pickle 16 mlbs 44 Lb. alimentarius 99.3 Leaf mustard pickle 16 mlbs 45 Lb. plantarum 99.6 Leaf mustard pickle 16 mlbs 46 Lb. plantarum Leaf mustard pickle 16 mlbs 47 Lb. alimentarius 99.8 Leaf mustard pickle 16 mlbs Not identiˆed 1 16 The same numbers indicate same samples. 2 菌株 ( 生育率 100 ) だったまた,mLBS 寒天培地では生育できなかった菌をランダムに選択し, 酢酸と Lab-lemco powder( 牛肉粉末 ) を添加していない市販の LBS 寒天培地での生育性を確認したところ,Lactobacillus 属は試験した10 菌株全てが良好な生育を示したまた,Leuconostoc 属は9 菌株中 7 菌株 ( 生育率

4 第巻 MRS agar Table 2 Components of MRS agar and mlbs agar. mlbs agar Components g/l Components g/l Proteose Peptone No Yeast Extract 5.0 Dextrose 20.0 Ammonium Citrate 2.0 Polysorbate Sodium Acetate 5.0 Magnesium Sulfate 0.10 Manganese Sulfate 0.05 Dipotassium Phosphate 2.0 Beef Extract 10.0 Agar 15.0 added component Pancreatic Digest of Casein 10.0 Yeast Extract 5.0 Dextrose 20.0 Ammonium Citrate 2.0 Polysorbate Sodium Acetate Hydrate 25.0 Magnesium Sulfate Manganese Sulfate 0.12 Monopotassium Phosphate 6.0 Ferrous Sulfate Agar 15.0 Lab-lemco powder 8.0 Sodium Acetate 9.0 added component Table 3 The number of detected lactobacilli and growth strain on mlbs agar. Species Number of detected strains Number of growth strain on mlbs agar (growth rate) Lb. sakei 13(27.7 ) 1( 8 ) Lb. plantarum 5(10.6 ) 5(100 ) Lb. coryniformis 4( 8.5 ) 4(100 ) Lb. rhamnosus 4( 8.5 ) 4(100 ) Lb. gasseri 3( 6.4 ) 3(100 ) Lb. curvatus 2( 4.3 ) 0( 0 ) Lb. brevis 2( 4.3 ) 2(100 ) Lb. fermentum 2( 4.3 ) 2(100 ) Lb. alimentarius 2( 4.3 ) 2(100 ) Lb. paracasei 1( 2.1 ) 1(100 ) Lb. casei 1( 2.1 ) 1(100 ) Lb. rossiae 1( 2.1 ) 0( 0 ) Lactobacillus sp. 7( 2.1 ) 5( 71 ) Total 47 30( 64 ) Not identiˆed Table 4 The number of detected other species without lactobacilli and growth strain on mlbs agar. Species Number of detected strains (detection rate) Number of growth strain on mlbs agar (growth rate) Leuconostoc sp. 8(27.6 ) 0( 0 ) Weissella cibaria 1( 3.4 ) 0( 0 ) Pediococcus pentosaceus 1( 3.4 ) 1( 100 ) Staphylococcus sp. 12(41.4 ) 1( 8.3 ) Pantoea agglomerans 2( 6.9 ) 1( 50 ) Enterobacter sp. 2( 6.9 ) 2( 100 ) Enterobacter sp./ Pantoea sp. 2( 6.9 ) 0( 0 ) Escherichia coli 1( 3.4 ) 0( 0 ) Total 29 5(17.2 ) 77.8 ),Weissella 属は 1 菌株中 1 菌株 ( 生育率 100 ), Staphylococcus 属は11 菌株中 6 菌株 ( 生育率 54.5 ), Escherichia coli は 1 菌株中 1 菌株 ( 生育率 100 ) という結果になった Pantoea agglomerans (1 菌株 ) および Enterobacter sp./pantoea sp. (2 菌株 ) は生育できなかった ( 生育率 0 ) 考察乳酸菌は, 宿主への健康保健効果に加え, バクテリオシンを利用した食品保存や抗生物質の代替品としての家畜への投与など様々な利用性があるため, 現在でも積極的に分離と利用が行われている中でも Lactobacillus 属は, プロバイオティクスの代表的な属であり, 積極的に利用されている本研究では, 様々な試料より MRS 寒天培地と mlbs 寒天培地の 2 種の乳酸桿菌用選択培地を用いて菌を単離し, その選択性を比較した単離試験の結果, 乳酸桿菌の検出率は,MRS 寒天培地では59.4,mLBS 寒天培地では75.0 であり, また, mlbs 寒天培地で検出された Staphylococcus 属,Pediococcus 属の生育性は悪く, 小さなコロニーだったまた, 筆者らが以前に行ったヒト腸管ムチンからの乳酸桿菌の単離試験においても,MRS 寒天培地では, 乳酸桿菌の検出率は僅か12 であり,Enterococcus 属,Streptococcus 属,Escherichia/Shigella 属および Staphylococcus 属の菌が多く検出されたが,mLBS 寒天培地では単離した菌全てが乳酸桿菌だった 9) 今回用いた漬物などの単離源は, 乳酸桿菌の存在比率が高いため,MRS 寒天培地を用いても乳酸桿菌の検出率は59.4 と比較的高かったが, 腸管や糞便のように多種多様の菌種がいる場合, MRS 寒天培地では乳酸桿菌を効率的に単離するのは難しいと考えられ, その場合, 選択性の高い mlbs 寒天

5 第号培地を用いる方が適切かも知れないまた, 菌種別で比較した場合,Lb. plantarum, Lb. coryniformis, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. brevis, Lb. fermentum, Lb. alimentarius, Lb. paracasei および Lb. casei は, 単離した全ての菌株が mlbs 寒天培地に良好な生育をみせた一方で,MRS 寒天培地で最も多く単離された Lb. sakei は,mLBS 寒天培地では 1 菌株のみしか生育できず,Lb. curvatus およびLb. rossiae は mlbs 寒天培地では全く生育できなかったこのことから,mLBS 寒天培地は選択性が高く乳酸桿菌でも生育できない菌があり, それは菌種によって異なると考えられたまた, 市販の LBS 寒天培地 ( 酢酸と Lab-lemco powder( 牛肉粉末 ) 無添加 ) では,Lactobacillus 属は試験した10 菌株全てが良好な生育を示した各培地の ph に注目してみると,MRS 寒天培地がpH 6.5, LBS 寒天培地が ph 5.8, そして mlbs 寒天培地が ph 4.3である Lactobacillus 属は LBS 寒天培地に良好な生育を示したことから ph 5.8では生育に影響がないと考えられたまた,MRS 寒天培地にも牛肉粉末が添加されていることから牛肉粉末の添加により生育が阻害されたとは考えにくく,mLBS 寒天培地に生育できないLac- tobacillus 属乳酸菌は, 酢酸添加により ph が4.3に低下したことで生育が阻害されたと考えられた実際に Lb. plantarum, Lb. acidophilus, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. fermentum, Lb. salivarius, Lb. casei, Lb. paracasei および Lb. oris などは, 胃酸耐性試験 (ph 2~3) でも生存可能な菌が多く報告されており, 耐酸性に優れていると考えられるが,Lb. sakei や Lb. ruminis などの菌種は比較的低 ph での生存性が低いことが報告されている 11~14) また,LBS 寒天培地と mlbs 寒天培地の比較から Lactobacillus 属に関しては, 牛肉粉末や過剰なミネラルは生育に必ずしも必要ではないと考えられたなお, Leuconostoc 属,Staphylococcus 属,Pantoea agglomerans および Enterobacter sp./pantoea sp. では MRS 寒天培地には生育するが LBS 寒天培地では生育しない菌株が存在したことから, これらの菌株は ph 5.8でも生育できないか, または牛肉粉末の成分を生育のため必要とする菌株であると考えられたまた, 乳酸菌の中では Lactobacillus 属以外にmLBS 寒天培地に生育できたのは Pediococcus 属 1 菌株だけあり, 同じ乳酸菌の中でも属の違いで培地による選択性に差異が見られた以上のことからターゲットが Lactobacillus 属である場合,mLBS 寒天培地の方が効率的に単離できると考えられた但し, Lactobacillus 属でもmLBS 寒天培地に生育できない種もいることを考慮に入れる必要があるだろう現在, 乳酸菌を効率的に単離するために炭酸カルシウムを含む MRS 寒天培地もよく使われている水に不溶性の炭酸カルシウムは, 乳酸が生産されると乳酸カルシウムになり水溶性に変化するため, 乳酸が産生されたコロニーの周りだけ透明なハローを形成するこの原理を利用して乳酸菌を効率的に単離可能となるが, 実際には炭酸カルシウムは酢酸やギ酸などの有機酸とも反応し, 水溶性の酢酸カルシウムやギ酸カルシウムなどへと変化するため, 乳酸菌だけを単離するのは困難であるまた, 本研究でも明らかなように Leuconostoc 属,Weissella 属および Pediococcus 属も MRS 寒天培地で生育するために Lactobacillus 属以外の乳酸菌も単離することになると考えられるまた,MRS broth に寒天とバンコマイシンを加え,pH を 5 に調整した LAMVAB 寒天培地も Lactobacillus 属を選択的に培養するためには有効であると考えられるが, 一部 Lactobacillus 属でも生育できない菌や Streptococcus gordonii など Lactobacillus 属以外で生育する菌も存在する 15) これらのことから酸耐性の強い乳酸桿菌を単離したい場合,Lactobacillus 属乳酸菌を効率よく単離したい場合, 様々な乳酸菌を単離したい場合など目的に応じて培地を使い分ける必要があると考えられる本研究では,Lactobacillus 属に焦点を絞って研究を行ったが, 最近では Lactobacillus 属以外の乳酸菌の利用もふえてきたことから, その他の乳酸菌についてもその特性を考慮して, より適切な培地を選択していく必要があるだろうそのためにも今後, 更に既知の細菌の属, 種, 株ごとの栄養要求性や ph 耐性などの特徴を把握することが重要だろう本実験において MRS 寒天培地と mlbs 寒天培地の乳酸桿菌の単離選択能の違いは, 両培地の ph の相違に起因していることが明らかとなったまた, 属や種によっても選択性に違いがみられたことから, 今後の更なる研究の発展により, ある特定の種だけを選択的に培養できるようになるかもしれない本研究が今後の乳酸菌利用の参考になれば幸いである要プロバイオティック乳酸菌の単離は現在でも積極的に行われており, 効率的な方法が望まれる本研究では MRS 寒天培地と mlbs 寒天培地を用いて乳酸桿菌を単離し, その選択性について比較した単離試験の結果, 乳酸桿菌の検出率は,MRS 寒天培地では59.4, mlbs 寒天培地では75.0 であったまた,MRS 寒天培地で最も多く単離された Lb. sakei は,mLBS 寒天培地では 1 菌株のみしか生育できず,Lb. curvatus および Lb. rossiae は mlbs 寒天培地では全く生育できなかった L. plantarum, Lb. coryniformis, Lb. rhamnosus, Lb. gasseri, Lb. brevis, Lb. fermentum, Lb. alimentarius, Lb. paracasei およびLb. casei は, 単離した全ての菌株が mlbs 寒天培地に良好な生育をみせた Lactobacillus 属約

6 以外の乳酸菌では,Leuconostoc 属,Weissella 属, Pediococcus 属が検出されたが,mLBS 寒天培地に生育できたのは Pediococcus 属だけだったこのように MRS 寒天培地は選択性が低く乳酸菌以外の様々な細菌も分離され,mLBS 寒天培地は選択性が高く乳酸桿菌でも生育できない菌株が存在することが明らかとなり, 目的に応じた培地の選択が必要であると考えられた謝本研究は, 日本学術振興会の科学研究費補助金 ( 若手 B) および社日本酪農乳業協会の平成 21 年度牛乳栄養学術研究委託事業のサポートにより, 実施いたしました記して御礼申し上げますまた, 本研究を遂行するにあたり, 東北大学大学院農学研究科の齋藤忠夫教授に多くのご助言をいただきましたことを深謝申し上げます辞引用文献 1) Fuller, R.: Probiotics in man and animals. J. Appl. Bacteriol., 66, (1989). 2) Joint FAO/WHO Working Group Report on Drafting Guidelines for the Evaluation of Probiotics in Food, L., Ontario, Canada. (2002). 3) Collins, EB. and Aramaki, K.: Production of Hydrogen peroxide by Lactobacillus acidophilus. J. Dairy Sci., 63, (1980). 4) Danielson, AD., Peo, ER., Jr., Shahani, KM., Lewis,AJ.,Whalen,PJ.,andAmer,MA.:Anticholesteremic property of Lactobacillus acidophilus yogurt fed to mature boars. J. Anim. Sci., 67, (1989). 5) Perdigáon, G., Maldonado Galdeano, C., Valdez, JC., and Medici, M.: Interaction of lactic acid bacteria with the gut immune system. Eur. J. Clin. Nutr., 56 Suppl. 4, S21 26 (2002). 6) Lim, BK., Mahendran, R., Lee, YK., and Bay, BH.: Chemopreventive ešect of Lactobacillus rhamnosus on growth of a subcutaneously implanted bladder cancer cell line in the mouse. Jpn. J. Cancer Res., 93,36 41 (2002). 第巻 7) Stiles, ME. and Holzapfel, WH.: Lactic acid bacteria of foods and their current taxonomy. Int. J. Food Microbiol., 36,1 29 (1997). 8) Feord, J.: Lactic acid bacteria in a changing legislative environment. Antonie Van Leeuwenhoek, 82, (2002). 9) Kinoshita, H., Uchida, H., Kawai, Y., Kitazawa, H.,Miura,K.,Shiiba,K.,Horii,A.,andSaito,T.: Quantitative evaluation of adhesion of lactobacilli isolated from human intestinal tissues to human colonic mucin using surface plasmon resonance (BIACORE assay). J. Appl. Microbiol., 102, (2007). 10) 光岡知足腸内細菌学, 朝倉書店, 東京,pp (1990). 11) Kãoll, P., Mäandar, R., Marcotte, H., Leibur, E., Mikelsaar, M., and Hammarsträom, L.: Characterization of oral lactobacilli as potential probiotics for oral health. Oral Microbiol. Immunol., 23, (2008). 12) Fernáandez, MF., Boris, S., and Barbáes, C.: Probiotic properties of human lactobacilli strains to be used in the gastrointestinal tract. J. Appl. Microbiol., 94, (2003). 13) Dunne, C., O'Mahony, L., Murphy, L., Thornton, G., Morrissey, D., O'Halloran, S., Feeney, M., Flynn, S., Fitzgerald, G., Daly, C., Kiely, B., O'Sullivan, GC., Shanahan, F., and Collins, JK.: In vitro selection criteria for probiotic bacteria of human origin: correlation with in vivo ˆndings. Am. J. Clin. Nutr., 73,386S 392S (2001). 14) Delgado, S., O'Sullivan, E., Fitzgerald, G., and Mayo, B.: Subtractive screening for probiotic properties of Lactobacillus species from the human gastrointestinal tract in the search for new probiotics. J. Food Sci., 72,M (2007). 15) Hartemink, R., Domenech, VR., and Rombouts, FM.: LAMVAB A new selective medium for the isolation of lactobacilli from faeces. J. Microbiol. Methods, 29,77 84 (1997).

抗アレルギー効果のあるKW乳酸菌の発見と活用

抗アレルギー効果のあるKW乳酸菌の発見と活用 KW3110 3 1 90 1983 6 1998 20 1989 Strachan BCG Lactobacillus Lactococcus Streptococcus Lactobacillus casei brevis johnsonii Th2 Th2 IL 4 B IgE IgE IgE IL-12 IL-12 Th1 Th1 Th2 Th2 Th1 Th2 KW 101 Th1/Th2

Milk Science Vol. 60, No 原著論文 MRS 寒天培地と変法 LBS 寒天培地における乳酸菌の選択的単離能の比較 木下英樹 井本瞬 須田義人 石田光晴 ( 宮城大学食産業学部 ) Comparison of selectivity of MRS agar and

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