Journal of Fisheries Technology,11(1), 15 19,2019 水産技術,11(1), 15 19,2019 短 報 小型容器を用いた市販クロレラ給餌による淡水種輪虫ツボワムシの耐久卵生産とその利用 新関晃司 *1 佐藤太津真 *2 泉茂彦 *2 Resting
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- ゆりな あかさか
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1 Journal of Fisheries Technology,11(1), 15 19,2019 水産技術,11(1), 15 19,2019 短 報 小型容器を用いた市販クロレラ給餌による淡水種輪虫ツボワムシの耐久卵生産とその利用 新関晃司 *1 佐藤太津真 泉茂彦 Resting egg production of the freshwater rotifer Brachionus calyciflorus using a smallscale culture equipment Kouji NIIZEKI, Tatsuma SATO and Shigehiko IZUMI A method for producing the resting eggs of freshwater rotifers was investigated using freshwater rotifers hatched from resting eggs as the parent generation for culture. The resting eggs preserved in a refrigerator for 16 months were hatched in one day in groundwater at 25 C (hatching rate 12.3%). Sub culture of these freshwater rotifers at transfer intervals of four and seven days induced higher incidence of bisexual reproduction in the four-day transfer interval group than in the seven-day transfer interval group. Culture of freshwater rotifers with a four-day transfer interval or without transfers for 32 days led to average population densities of 462 rotifers/ml and 260 rotifers/ml in the transfer group and non-transfer group, respectively; the transfer group exhibited a significantly higher population density. In the transfer group, population density was maintained at over 100 rotifers/ml for 32 days. These results suggest that using our simple method, it may be possible to culture freshwater rotifers using rotifers hatched from resting eggs as the parent generation for culture. キーワード : ツボワムシ, 耐久卵, 人工培養, 市販クロレラ 2016 年 2 月 24 日受付 2018 年 9 月 4 日受理 淡水産ワムシ類は, 淡水魚類の初期餌料として有効である (Sato 1950, 鈴木 1971) が, なかでも日本全国の湖沼に分布するツボワムシBrachionus calyciflorusは, ワムシ耐久卵が堆積している池に肥料を投入する施肥法 ( 千葉ら1970) によって培養され, 古くから餌料に利用されてきた しかしながら, 施肥法は培養密度が不安定で ( 中本ら2007), さらに, 動物プランクトン相をコントロールすることが困難であり ( 新関ら2014), 生産者の意図したとおりに培養できないことが多い このような課題を解決するためには, ツボワムシを集約的に安定培養する手法と, 元種としての耐久卵を採取 保管する技術の開発が必要である 管理下でのツボワムシの培養に関して, 田中 (1983) は20L 水槽を用い, 油脂酵母と自ら培養したクロレラ給餌による培養試験を実施し,9 日間の培養で最高密度 569 個体 /mlまで増殖したことを報告した さらに近年, 太田ら (2014) によって100 4,000L 規模水槽でのツボワムシ連続培養手法が報告され, 従来の施肥法の問題点を解決するのに有効な手法の示唆となったが, 用いたツボワムシ株は, 個体群増殖率を低下させる両性生殖が起こりにくい株で大量培養に適していた しかし, そのことは, 耐久卵が形成されないため周年にわたる継代培養が必要なことも意味している また, 餌料にクラミドモナスChlamydomonas sp. を用いるため, その培養に労力 *1 福島県水産事務所相馬駐在 福島県相馬市尾浜字追川 18-2 Fukushima Prefectural Fishery Office Soma Branch Office 18-2 Oikawa, Obama, Soma, Fukushima , Japan niizeki_kouji_01@pref.fukushima.lg.jp 福島県内水面水産試験場 15
2 を要する ツボワムシ培養に使用する容器に関して, 田中 (1983) は20L 水槽で実験した結果から, 小型容器の方が管理しやすく, 好適環境を維持しやすいと考察している そこで本研究では, 小型容器による, 市販の濃縮淡水クロレラを用いた, 耐久卵作成手法の検討を行った 今回, 野外から採取したツボワムシから耐久卵を得て, それからふ化したツボワムシを元種に培養試験を行った結果, ワムシ密度が100 個体 /ml 以上で32 日間にわたる培養が可能になった これらの手法および培養結果について報告する し, ツボワムシのみを約 3,000 個体分離した 分離後のツボワムシは以下の培養手法 ( 図 1) により培養した 培養は, 地下水を入れた計量カップ (5L 容, ポリプロピレン製 ) を,25 Cに調温した恒温器(MIR 152, SANYO) 内に置いて行った 恒温器内には LED 電球 ( 白色,7.2W,100V) を設置し, 照明は12L:12Dで調整した 通気はエアポンプ (APN 057R,REI SEA) で行 材料および方法 福島県内水面水産試験場内のコンクリート屋外池 (285m 3 ) の水をポリバケツで10L 採水し, プランクトンネットで濾過し, 動物プランクトンを採取した 採取した動物プランクトンは倒立顕微鏡 (CKX31,OLYMPUS) で検鏡しながら, ピペットで原生動物を出来る限り除去 図 1. ツボワムシ培養手法エアポンプ以外の器具は全て恒温器内に設置 写真 1. ツボワムシ雌個体および雄個体の形状 A: 未携卵雌 ( 後向棘が伸長した変異型 ),B: 雌卵携卵雌,C: 雄卵携卵雌,D: 耐久卵携卵雌,E: 雄実線のスケールは 0.1mm を示す 16
3 小型容器によるツボワムシ耐久卵生産と利用 い, 通気量は15mL/ 分とした 餌料には, 市販の濃縮淡水クロレラ ( 生クロレラV12, クロレラ工業, 以下, クロレラ ) を用い, 水道水で100 倍に希釈したものを3L 三角フラスコに入れ, 定量ポンプ (SJ 1211H,ATTO) で 0.2L/ 日量を連続給餌した なお, クロレラの沈殿防止のために, スターラー (MH 61,Yamato) で常時攪拌した 培養による沈殿物を除去して培養環境を維持するために, ツボワムシ個体を含む培養水を定期的に新しい容器に移し替えた ( 以下, 植替え ) 耐久卵の採取は, 屋外池の水から分離したツボワムシを5 日間培養したところ, 耐久卵が認められたため, 培養容器底面の沈殿物をプランクトンネット ( 目合い :58μm) で濾過して行った 耐久卵はビーカーに収容し, 水を加えた状態で冷蔵庫内 (4 C) に16ヶ月間保存した 培養試験は, 耐久卵 106 個を0.4Lの地下水を入れてふ化したものを用いて行った シオミズツボワムシBrachionus plicatilisでは, 両性生殖の誘導要因は飼育に伴って水中に蓄積する何らかの物質であることが, 換水率を高くすると両性生殖率が低下した実験結果から推察されている (Hino and Hirano 1977) 植替えによる環境維持と両性生殖誘導の両立が可能かを検討するため, 植替え間隔が7 日間と4 日間で試験を行った 各試験とも耐久卵からふ化させたワムシを用い, 試験 1では, ワムシ密度が10 個体 /ml 以上の培養水 0.5Lずつを培養容器に入れて11 日間培養した ( 試験区 : 植替えなし区, 植替えあり 1 区, 植替えあり2 区 ) 試験 2では, ワムシ密度が100 個体 /ml 以上の培養水 0.5L ずつを培養容器に入れて32 日間培養した ( 試験区 : 植替えなし区, 植替えあり区 ) 試験 2では, 溶存酸素濃度 (DO) および ph を水質測定器 (550A,YSI/Nanotech, HM 60V,TOA) を用いて測定した 培養期間中は, 毎日 9:00 11:00の間に培養水をピペットで1mL 採水し, 培養水中の雌個体 ( 未携卵, 雌卵携卵, 雄卵携卵, 耐久卵携卵 ) および雄個体を計数した ( 写真 1) 採水および計数は2 回行い, 個体密度を平均値で算出した その際, 計数値の総計に20% 以上の差があった場合, 採水からやり直した なお, 本稿で述べる個体密度は雌個体合計とする 雌個体については, 次式により比増殖率を求めた 比増殖率 (r)=ln(nt/n0)/t+d, ここで,t は培養日数,N0 は開始時の個体密度,Ntは t 日目の個体密度,Dは培養水の希釈率を示す さらに, 比増殖率を求めた上で, 次式により日間増殖率を求めた 日間増殖率 (%)=(e r 1) 100 雌卵携卵雌個体率は, 雌卵携卵雌個体密度を個体密度で除して求めた 結果耐久卵からふ化させたツボワムシを14 日間培養した結果の概要を図 2に示す ふ化ワムシは開始 1 日目には 13 個体 ( 個体密度 0.03 個体 /ml) が確認され, その後は個体密度を増やし12 日目には最大 657 個体 /mlに達したが, 以後減少した ( 図 2A) なお, 耐久卵からのふ化は1 日目で終了し, ふ化率は12.3% であった 雌卵携卵雌個体は開始 1 日目から認められ, 雌卵携卵雌個体率は 4 日目には最大 31% に達したが, その後徐々に減少し, 平均では17% であった ( 図 2G) 両性生殖に関連する雄卵携卵雌個体 ( 図 2C) および雄個体 ( 図 2E) は6 日目から, 耐久卵携卵雌個体 ( 図 2D) は8 日目からそれぞれ確認され, 共に一時的に増加したものの,13 日目からは認められなくなった 平均日間増殖率は,192% であった ( 図 2F) 植替え間隔が7 日間と4 日間での培養結果の概要を図 3 に示す 試験 1においては, 個体密度は植替えなし区が 4 日目に最大 524 個体 /mlとなり, その後減少した 7 図 2. 耐久卵からふ化したツボワムシ密度, 日間増殖率, 雌卵携卵雌個体率の推移 A: 個体密度 ( 雌個体の合計 ),B: 雌卵携卵雌,C: 雄卵携卵雌,D: 耐久卵携卵雌,E: 雄,F: 日間増殖率,G: 雌卵携卵雌個体率日間増殖率 (%)=(e r 1) 100 r: 比増殖率雌卵携卵雌個体率 (%)= 雌卵携卵雌個体密度 / 個体密度
4 図 3. 培養試験におけるツボワムシ密度, 日間増殖率, 雌卵携卵雌個体率の推移試験 1,A: 個体密度 ( 雌個体の合計 ),B: 雌卵携卵雌,C: 雄卵携卵雌,D: 耐久卵携卵雌,E: 雄, ; 植替えなし区, : 植替えあり 1 区, : 植替えあり 2 区試験 2,F: 個体密度 ( 雌個体の合計 ),G: 雌卵携卵雌,H: 雄卵携卵雌,I: 耐久卵携卵雌,J: 雄,K: 日間増殖率,L: 雌卵携卵雌個体率, : 植替えあり区, : 植替えなし区図中の矢印は試験 1 の植替えあり 1 区, 植替えあり 2 区および試験 2 の植替えあり区における植替え日を示す試験 2 の植替えなし区では 25 日目に容器が満水になったため,1L 分の培養水を廃棄日間増殖率 (%)=(e r 1) 100 r: 比増殖率雌卵携卵雌個体率 (%)= 雌卵携卵雌個体密度 / 個体密度 100 日目に植替えした植替えあり 1 区および 2 区では植替え 直後に密度は低下したが, その後は増殖し,11 日目に は共に 700 個体 /ml 以上となった ( 図 3A) 試験 2 において,DO および ph は, それぞれ植替えな し区が mg/L, , 植替えあり区が mg/L, の範囲であった 試験 2 に 18
5 小型容器によるツボワムシ耐久卵生産と利用 おける平均個体密度 ( 最小 最大 ) は植替えなし区の 260 個体 /ml(98 422) に対して, 植替えあり区では 462 個体 /ml( ) と有意に高かった (p<0.0001, Mann Whitney U test, 図 3F) 平均日間増殖率は, 植替えあり区が18.9 %, 植替えなし区が11.8 % であった ( 図 3K) 雄卵携卵雌個体( 図 3H) および雄個体 ( 図 3J) は, 植替えあり区では培養 14 日後以降に頻繁に出現したが, 植替えなし区における出現は少なかった 耐久卵携卵雌個体は, 両試験区ともに培養開始直後に多く出現し, 植替えあり区では培養後半にかけても出現した ( 図 3I) なお, 全ての培養において, ワムシ計数時に少数の原生動物が観察される場合があったが, 原生動物によりワムシの増殖や活性が阻害される状態は認められなかった 考察 Pourriot and Snell(1983) は, 若い個体ほど減数分裂を伴う両性生殖雌個体を産みやすいと報告している 培養試験において, 耐久卵の形成頻度が新規に培養を開始した直後に高かったことは, 培養直後の個体群組成に若齢個体が多く含まれていた可能性がある シオミズツボワムシの場合, 水温 25 C 以下で形成された耐久卵からふ化した系群は, 両性生殖頻度が高まることが報告されている (Hino and Hirano 1985, 日野 1997) 今回実施した複数の培養試験では, いずれにおいても耐久卵形成が確認された シオミズツボワムシの条件がツボワムシに直接当てはまるとは限らないが, 本手法は培養装置を 25 Cに調整しており, 両性生殖誘導に適した環境であった可能性がある 耐久卵の形成条件として, シオミズツボワムシの場合では, 耐久卵保存時の水温と光により, ふ化したクローンの両性生殖頻度が異なること (Hagiwara and Hino 1989), 耐久卵からふ化した個体は, 飢餓状態を経験すると, 以降の世代の両性生殖頻度が高まること (Hagiwara et al. 2005) が報告されている これらのことから, 耐久卵の形成には, 培養時と耐久卵保存時における, 水温や照明 ( 強度, 波長, 時間 ) 等の環境条件および餌料条件が大きく関与していると考えられる また, 試験 1および2の結果では, 植替えを4 日間隔で実施した方が7 日目に1 度植替えを実施するより両性生殖頻度が高くなっている 植替えすることで, 培養環境が良好な状態で維持され, かつ両性生殖誘導要因を阻害することなくツボワムシ活性が維持された可能性がある 今後, より集約的に耐久卵を収穫するため, 前述した環境条件, 餌料条件, 植替えの頻度を踏まえて, 詳細な検討を加える必要がある 本試験から, ツボワムシは耐久卵による保存が可能であり, 本手法を用いることで1ヶ月以上にわたりツボワムシを培養できることが明らかとなった 高密度で長期間の培養を維持するためには, 植替えを実施することが効果的であると考えられた 今後は, 本手法を基に, ツボワムシの培養および利用に関して多方面の展開が期待される 文献 千葉健治 栗原伸夫 富永正雄 (1970) 養魚講座第 1 巻鯉 ( 大島泰雄 稲葉伝三郎編 ). 緑書房, 東京, p Hagiwara A and Hino A (1989) Effect of incubation and preservation on resting egg hatching and mixis in the derived clones of the rotifer Brachionus plicatilis. Hydrobiologia, 186/187, Hagiwara A, Kadota Y, Hino A (2005) Maternal effect by stem females in Brachionus plicatilis: effect of starvation on mixis induction in offspring. Hydrobiologia, 546, Hino A and Hirano R (1977) Ecological studies on the mechanism of bisexual reproduction in the rotifer Brachionus plicatilis-ii effects of cumulative parthenogenetic generation on the frequency of bisexual reproduction. Nippon Suisan Gakkaishi, 43, Hino A and Hirano R (1985) Relationship between the temperature given at the time of fertilized egg formation and bisexual reproduction pattern in the deriving strain of the rotifer Brachionus plicatilis. Nippon Suisan Gakkaishi, 51, 日野明徳 (1997) ワムシ生活史の人為的制御. 月刊海洋号外, 12, 中本崇 稲田善和 牛嶋敏夫 萩原篤志 (2007) 通気装置の改良によるタマミジンコMoina macrocopaの高密度大量培養. 水産増殖, 55, 新関晃司 渡邉昌人 泉茂彦 (2014) 施肥法による動物プランクトン出現動向およびウグイ仔魚放養時期の検討. 水産増殖, 62, 太田滋規 幡野真隆 三枝仁 久米弘人 臼杵崇広 根本守仁 関慎介 礒田能年 (2014) 淡水ワムシ ( ツボワムシBrachionus calyciflorus PALLAS) 大量培養マニュアル. 滋賀水試研報, 55, Pourriot R and Snell T W (1983) Resting eggs in rotifers. Hydrobiologia, 104, Sato R (1950) On feeding habits of the larva of pond smelt, Hypomesus olidus (PALLAS). Tohoku Jour. Agri. Res., 1, 鈴木俊一 (1971) ドジョウの種苗生産に関する研究 V 天然初期餌料としてのツボワムシの効果. 滋賀水試研報, 23, 田中寿雄 (1983) 淡水産ツボワムシBrachionus calyciflorus, の大量培養の可能性. 水産増殖, 31,
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1) i) Barber, M. et al.: Brit. Med J, 2, 565, 19'49. ii) Barber, M.F.G. J. Hayhoe and J. E. M. Whithead: Lancet, 1120 `1125, 1949.-2) Bergey: Bergey's Manual of Determinative Bacteriology 7 th Ed: (1958).-3)
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馬ロタウイルス感染症 ( アジュバント加 ) 不活化ワクチン ( シード ) 平成 24 年 7 月 4 日 ( 告示第 1622 号 ) 新規追加 1 定義シードロット規格に適合した馬ロタウイルス (A 群 G3 型 ) を同規格に適合した株化細胞で増殖させて得たウイルス液を不活化し アジュバントを添加したワクチンである 2 製法 2.1 製造用株 2.1.1 名称馬ロタウイルス Ho-5MA 株又はこれと同等と認められた株
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11-19 2012 1 2 3 30 2 Key words acupuncture insulated needle cervical sympathetick trunk thermography blood flow of the nasal skin Received September 12, 2011; Accepted November 1, 2011 I 1 2 1954 3 564-0034
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平成１４年度 本態性多種化学物質過敏状態の調査研究 研究報告書
226 227 µ 228 Ω 229 230 0 ppb 2000ppb DG subthreshold (µa) 91 ± 59 86 ± 68 max stim. (µa) 755 ± 287 n=37 678 ± 300 max PS (mv) 8.7 ± 3.9 7.7 ± 4.3 n=61 CA1 subthreshold (µa) 36 ± 26 32 ± 13 max stim. (µa)
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32 2008 pp. 93 106 1 Received October 30, 2008 The purpose of this study is to examine the effects of aerobics training class on weight loss for female students in HOKURIKU UNIVERSITY. Seventy four female
Influences of mortality from main causes of death on life expectancy. \ An observation for the past 25 years, 1950-1975, in Japan \ Takao SHIGEMATSU* and Zenji NANJO** With the Keyfitz-Nanjo method an
2. 水管理に関連する障害 Q 軟化装置管理上の留意点ついて, 具体的な管理方法を教えてください イオン交換樹脂は球状で粒径は mm 程度, 複雑な網目状の三次元骨格構造を呈しており, 軟水採水量はイオン交換樹脂量と原水の硬度によって決まります イオン交換樹脂は一般的に1 年
Q 2.1.4 軟化装置管理上の留意点ついて, 具体的な管理方法を教えてください イオン交換樹脂は球状で粒径は0.4 0.6mm 程度, 複雑な網目状の三次元骨格構造を呈しており, 軟水採水量はイオン交換樹脂量と原水の硬度によって決まります イオン交換樹脂は一般的に1 年で10% 程度が割れ, 目詰まりなどによって, その効果が低減するといわれており, 採水量は年々低下すると考えてください 従って約
8 根本孝 根本隆夫 水によるかけ流しの流水下で 尾ずつ収容して行った 実験の開始前 日間いずれの区画も水温 でワカサギを馴致させた うち 区画は対照として実験期間中, 水温を で一定とした いずれの区画もわずかに配合飼料を投与した へい死魚の計数は 日 回午前 9 時に行い, あわせて所定の温度上
茨城内水試研報 7~ () 7 年夏季の霞ヶ浦におけるにおけるワカサギワカサギのへいのへい死の発生発生とワカサギの生存可能生存可能な上限水温上限水温の推定 根本孝 根本隆夫 Occurrence of dead pond smelt, Hypomesus nipponensis in Lake Kasumigaura in August and estimation of maximum survival
8 The Bulletin of Meiji University of Integrative Medicine API II 61 ASO X 11 7 X-4 6 X m 5 X-2 4 X 3 9 X 11 7 API 0.84 ASO X 1 1 MR-angio
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泡の主な原因は植物プランクトンたかやまあわじょう ~ 下流で発生した泡状物質の詳細な調査結果 ~ 平成 24 年 2 月 7 日 8 日 24 日淀川水系の淀川 木津川及び下流で泡状物質が確認されたため 簡易パックテスト及び水質試験を実施した結果 水質に異常は認められなかったこと また泡の発生原因は不明であるが 泡状物質については自然由来のものと考えられるという内容が 淀川水系水質汚濁防止連絡協議会から公表
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別冊 2 平成 25 年外海採苗調査報告書 平成 25 年 月 サロマ湖養殖漁業協同組合 (1) 外海採苗関係調査 Ⅰ 調査概要 1. 調査目的 概要採苗関係の調査及び採苗予報はサロマ湖におけるホタテガイの採苗事業を安定化することを目的として 大別して次の3 項目の調査を実施している イ ) 浮遊幼生調査産卵した浮遊幼生の出現個体数及び成長状況を確認して採苗器投入時期を予報する ロ ) 付着状況調査採苗器に付着したホタテ稚貝状況の確認
31608 要旨 ルミノール発光 3513 後藤唯花 3612 熊﨑なつみ 3617 新野彩乃 3619 鈴木梨那 私たちは ルミノール反応で起こる化学発光が強い光で長時間続く条件について興味をもち 研究を行った まず触媒の濃度に着目し 1~9% の値で実験を行ったところ触媒濃度が低いほど強い光で長
31608 要旨 ルミノール発光 3513 後藤唯花 3612 熊﨑なつみ 3617 新野彩乃 3619 鈴木梨那 私たちは ルミノール反応で起こる化学発光が強い光で長時間続く条件について興味をもち 研究を行った まず触媒の濃度に着目し 1~9% の値で実験を行ったところ触媒濃度が低いほど強い光で長時間発光した 次にルミノール溶液の液温に着目し 0 ~60 にて実験を行ったところ 温度が低いほど強く発光した